处理纤维素材料的新颖蛋白的制作方法
【专利摘要】本发明公开了新颖多肽和包含它们的酶制剂，所述多肽和酶制剂即使在升高的温度下也增强纤维素降解的效率。所述多肽通过重组技术制造，并且描述了它们的制备的方法。新颖多肽在处理生物质、和在生物燃料、淀粉、纺织品、清洁剂、纸浆和纸、食物、饲料或饮料工业中是有用的。它们也可以用在例如清洁洗碗机机器的内部或用于生物整理或生物打磨。新颖多肽在动物饲料中也是有用的。
DSM25498
20111215
DSM25499
20111215
DSM25497
20111215
DSM25496
20111215
DSM25494
20111215
CBS116240
20040920
CBS132099
20120302
DSM25495
20111215
【专利说明】处理纤维轰材料的新颖蛋白
[0001] 导致本发明的工作已经收到来自欧盟第走框架计划FP7/2007-2-13在授予协议 号码239341下提供的资金。
【技术领域】
[0002] 本发明涉及新颖多肤和包含它们的酶制剂，所述多肤和酶制剂即使在升高的温度 下也增强纤维素降解的效率。本发明也涉及多核巧酸、载体和包含所述多核巧酸的宿主细 胞W及制造所述多肤的方法。另外，本发明涉及用所述新颖多肤或酶制剂处理纤维素材料 的方法，其中纤维素材料的水解得到增强。所述新颖多肤在处理纤维素材料中是有用的。此 夕F，所述新颖多肤可用在清洁剂组合物中、用在机器洗碗应用中或用于改进动物饲料的质 量。
【背景技术】
[0003] 矿物燃料的有限资源和从它们释放的增加的C02的量和引起温室现象已经提出 了使用生物质作为可再生的和清洁的能量源的需要。生物质资源可大体上分为基于农业的 或基于林业的，包括来源于农业和木材工业的二级来源、废物来源和城市固体废物。一种有 前途的可选技术是从木质纤维素材料生成生物燃料即（生物）己醇。
[0004] 在植物中的多数碳水化合物是木质纤维素的形式，木质纤维素基本上由纤维素、 半纤维素和木质素组成。木质纤维素可W通过水解为可发酵的糖然后发酵而转化为生物己 醇和其他的化学产物。在传统的木质纤维素到己醇的方法中，木质纤维素材料首先化学地 或物理地进行预处理W制造更加易于水解的纤维素级分。所述纤维素级分然后被水解W得 到糖，所述糖可被酵母菌或其他发酵微生物发酵成己醇，并且蒸觸W得到纯的己醇。木质素 作为主要的共产物获得，可用作固体燃料。
[0005] 从纤维素生物质和木质纤维素生物质制造生物燃料的一个障碍是细胞壁的坚固 性和糖单体W难W接近的聚合物的形式存在，该需要大量的处理W使得糖单体能够被通常 用于通过发酵制造己醇的微生物所利用。酶水解被认为是用于将纤维素生物质转化成可发 酵的糖的最有前途的技术。但是，酶水解仅仅用到在工业规模的有限的量，并且尤其当使 用强木质化的材料例如木材或农业废物时该技术不尽理想。酶催化步骤的成本是该方法 的一个主要的经济学因素。已经做出努力W改进纤维素材料的酶催化水解的效率炬adger 2002)O
[0006] 除了改进关于各个纤维素水解酶的性质外，通过影响纤维素酶对木质纤维素的活 性W改进纤维素材料的酶催化降解也是有利的。优化纤维素酶混合物中组分和补充其他的 协同性作用的酶将改进水解效率。
[0007]W02005074647 和W02011035027 公开 了从太瑞斯梭抱壳霉（Thielavia terrestris)分离的具有纤维素水解增强活性的多肤和其多核巧酸。W02005074656公开 了从金黄色嗜热子囊菌（Thermoascusaurantiacus)分离的具有纤维素水解增强活性的 多肤及其多核巧酸。W02007089290公开了从里氏木霉（Trichodermareesei)分离的具有 纤维素水解增强活性的多肤和其多核巧酸。W02008140749涉及用纤维素水解酶组合物降 解或转化含纤维素的材料的组合物和方法，所述纤维素水解酶组合物包括具有纤维素水解 增强活性的里氏木霉多肤和选自具有内切葡聚糖酶活性或纤维二糖水解酶活性的CEL7、 CEL12和CEL45多肤的一或多种组分。W02009085868涉及从嗜热毁丝霉（Myceliophthora thermo地ila)分离的具有纤维素水解增强活性的多肤和其多核巧酸。W02009033071涉 及来自QiiTsosporiumlucknowense(现在重新鉴定为嗜热毁丝霉（Myceliophthora thermo地ile) ;Visser等2011)的真菌酶，和涉及在多种其他过程中使用该酶和该样的酶 的组合物的方法，所述过程包括洗衣服、清洁过程、生物精炼、脱墨和纸和纸浆的生物漂白、 和废物流的处理。
[0008] 然而，仍然存在对降解纤维素底物尤其是木质纤维素底物的新的有效的方法、和 对能相当地改进纤维素酶混合物的水解效率并降低需要的酶剂量的新的纤维素酶增强因 子的不断需要。也存在对多用途的和能给出更多灵活的方法构造的设计的方法的需要。此 夕F，存在对既能在中等温度运作又能在高温运作的方法的需要，高温运作因此增加了反应 速率并且使高的生物质一致性的使用能够产生高的糖和己醇浓度。该个方法在能量和投资 花费上可产生显著的节省。高温也降低了在水解期间污染的风险。本发明旨在满足该些需 要的至少部分。
【发明内容】
[0009] 本发明的目标是提供新颖多肤和包含它们的酶制剂，所述多肤和酶制剂即使在升 高的温度下也增强纤维素降解的效率。本发明的目标尤其是提供多肤W改进木质纤维素底 物的水解W制造己醇。本发明的另一个目标是提供处理纤维素材料的方法，其中纤维素材 料的水解得到增强，并且其中多用途的方法构造在各种条件下是可能的。
[0010] 本发明的目标由从嗜热枝顶抱菌（Acremonium thermo地ilium)或白马兰诺菌 (Melanoca巧US a化omyces)获得的GH家族61的新颖多肤实现。
[OOU] 本发明提供了G册1多肤，所述多肤包含与SEQIDN0:23具有至少75%序列同 一性的氨基酸序列、与SEQIDN0:24具有至少78%序列同一性的氨基酸序列或与SEQID N0:25具有至少79%序列同一性的氨基酸序列、或其能够增强纤维素材料水解的片段或变 体。
[0012] 本发明也涉及选自如下的分离的多核巧酸：
[001引a)包括如在SEQIDNO:20、21或22所示的编码序列的多核巧酸；
[0014]b)编码权利要求1的多肤的多核巧酸；
[0015] C)编码由a)或b)的多核巧酸编码的多肤的片段的多核巧酸，其中所述片段能够 增强纤维素材料的水解；和
[0016]d)包含与a)或b)的多核巧酸的核巧酸序列简并的核巧酸序列的多核巧酸；
[0017] 或者该样的多核巧酸的互补链。
[0018] 本发明也涉及载体，所述载体包含所述多核巧酸和包含所述载体的宿主细胞。具 有保藏编号DSM25497、DSM25495和DSM25499的大肠杆菌巧scherichiacoli)菌株也 包括在本发明内。
[0019] 本发明的另一目标是提供制造所述G册1多肤的方法，所述方法包括步骤；用编码 所述多肤的表达载体转化宿主细胞，和在允许所述多肤表达的条件下培养所述宿主细胞， 和任选地回收和纯化所述多肤。
[0020] 本发明的其他目标是包含至少一种新颖多肤的酶制剂和所述酶制剂和多肤用于 生物质加工的用途、和在生物燃料、淀粉、纺织品、清洁剂、纸浆和纸、食物、饲料或饮料工业 中的用途。在本发明的一个方面，所述多肤和包含所述多肤的酶制剂用于清洁洗碗机的内 部。在另一个方面，本发明提供包含所述新颖多肤的动物饲料。
[0021] 本发明也提供了用G册1多肤或包含所述多肤的酶制剂处理纤维素材料的方法， 其中所述方法包括将纤维的材料/纤维素材料与所述多肤或包含所述多肤酶制剂反应。在 本发明的优选方面，本发明的方法包括清洁洗碗机的内部。
[0022] 本发明也提供了包含G册1多肤的清洁剂组合物。本发明还涉及用于改进清洁剂 组合物的织物护理性质或纺织品清洁效果的方法，所述方法包括在清洁剂组合物中添加本 发明的多肤。
[0023] 本发明的特定的实施方案在从属权利要求中阐述。从接下来的附图、详细的描述 和实施例中，本发明的其他目标、细节和优点将变得显而易见。
[0024] 本发明的发明人发现所述新颖GH61多肤和本发明的方法提供了相当大的潜能W增加纤维素酶混合物的总的性能并且降低实现有效的木质纤维素底物水解所需要的蛋白 装载。所述新颖GH61多肤可用于水解不同的纤维素材料，尤其与用于各种纤维素材料或木 质纤维素材料的水解的酶组合使用。
[0025] 本发明的发明人也发现所述新颖G册1多肤在宽广的温度范围是非常有效的，并 且尽管它们在标准水解温度下具有高的纤维素水解增强活性，但它们在高温下也是非常有 效的。该使它们对于在传统温度和升高的温度下实施的变化的纤维素底物水解方法是极其 适合的。在传统的分步水解发酵法（SH巧中，酶水解的温度通常高于发酵的温度。在水解 中使用热稳定酶提供了潜在的好处，例如在升高的温度下的较高的反应速率、由于酶的高 的特异活性和稳定性而导致的酶装载的降低、关于方法构造的增加的灵活性和降低的污染 风险。与嗜常温的酶相比，热稳定酶通常的稳健性也增加了工业方法中酶的可回收性。
[0026] 另外，本发明的发明人梅讶地发现本发明的新颖G册1多肤在减少通常于洗碗机 的过滤器中发现的纤维性纤维/纤维素纤维是有效的。
【专利附图】
【附图说明】
[0027] 接下来本发明将通过优选的实施方案参照附图更详细地加W描述。
[0028] 图1示意性地显示了在里氏木霉中用于表达cel61基因的盒。cel61基因受里氏 木霉cbhl/cel7A启动子（cbhl启动子）控制并且通过使用里氏木霉cbhl/cel7A终止子序 列（Cbhl终止子）保证转录的终止。amdS基因作为转化标记物被包含在里面。
[0029] 图2显示了蒸气爆破的硬木用包含本发明的G册1蛋白的酶混合物进行水解的结 果。具有12%干物质的硬木底物在37C、45C、5(TC和55C下用不同的酶混合物在2mg蛋 白每克总固体的剂量进行水解。使用了包含G册1蛋白太瑞斯梭抱壳霉Tt_GTOlE(混合物 1_TT)、嗜热枝顶抱菌At_GTOl(混合物1_AT)和白马兰诺菌Ma_GTOlA(混合物1_MA)的酶 混合物。酶混合物混合物1的详细的组成和包含测试的G册1蛋白的组合物在实施例5中 加W描述。水解72小时后，从副本试管中采样并且通过HPLC定量，其中确定了葡萄糖的浓 度。
[0030] 图3显示了研磨的苹果/橘子/小麦纤维混合物用包含本发明的G册I蛋白的酶 混合物进行水解的结果。测试在稀释的PH4.0的巧樣酸缓冲液中进行，所述巧樣酸缓冲液 包含约0.5% (w/w)的丙二醇和等量的每一种纤维，具有4g每升的最终固体浓度。在25mg 蛋白每克总固体的剂量添加酶到500ml的摇瓶中。基础的里氏木霉纤维素酶混合物（Roal Oy)用作对照。空白没有包含任何添加的酶。对于对照、含有72% (w/w)的里氏木霉纤维 素酶混合物和28% (w/w)的G册1蛋白At_GTOl或Ma_GTOlA的混合物，展示它们在5(TC水 解60分钟后的纤维素重量的百分比。在图内包含了标准偏差。
[0031] 序列表
[003引SEQIDNO: 1来自嗜热枝顶抱菌ALK04245At_GTOl蛋白的膜蛋白酶肤1669, 824的 序列。
[003引SEQIDN0:2来自嗜热枝顶抱菌ALK04245At_G册l蛋白的膜蛋白酶肤1763,938的 序列。
[0034]SEQIDN0:3来自嗜热枝顶抱菌ALK04245At_GTOl蛋白的膜蛋白酶肤431. 7752的 序列。
[003引 SEQIDN0:4来自嗜热枝顶抱菌ALK04245At_G册l蛋白的膜蛋白酶肤882.9711 的 序列。
[0036]SEQIDN0:5来自嗜热枝顶抱菌ALK04245At_GTOl蛋白的膜蛋白酶肤855. 9166的 序列。
[0037]SEQIDN0:6来自白马兰诺菌ALK04237Ma_GTOlB蛋白的氨基末端肤#4349的序 列。
[0038]SEQIDN0:7来自白马兰诺菌ALK04237Ma_GWlB蛋白的膜蛋白酶肤2130, 813的 序列。
[0039]SEQIDN0:8来自白马兰诺菌ALK04237Ma_GWlB蛋白的膜蛋白酶肤1283, 527的 序列。
[0040]SEQIDN0:9来自白马兰诺菌ALK04237Ma_GWlB蛋白的膜蛋白酶肤2131，948的 序列。
[0041] SEQIDN0:10来自白马兰诺菌ALK04237Ma_G册lB蛋白的膜蛋白酶肤4466，106的 序列。
[0042]SEQIDNO: 11衍生自肤SEQIDNO: 5的寡核巧酸引物FIB54的序列。
[004引 SEQIDNO: 12衍生自肤SEQIDNO: 1的寡核巧酸引物FIB57的序列。
[0044]SEQIDNO: 13衍生自肤SEQIDNO:6的寡核巧酸引物FIB99的序列。
[0045]SEQIDNO: 14衍生自肤SEQIDN0:9的寡核巧酸引物FIBlOl的序列。
[004引 SEQIDNO: 15寡核巧酸引物FIB35的序列。
[0047]SEQIDNO: 16寡核巧酸引物FIB38的序列。
[0048] 569 10側：17使用引物尸1854669 10側：11)和尸1857(569 10側：12)和嗜热枝 顶抱菌ALK04245基因组DNA作为模板获得的PCR片段的序列。
[0049] 569 10側：18使用引物尸1899 669 10側：13)和尸18101669 10側：14)和白马 兰诺菌ALK04237基因组DNA作为模板获得的PCR片段的序列。
[0050] 569 10側：19使用引物尸1835 669 10側：15)和尸1838 669 10側：16)和白马兰 诺菌ALK04237基因组DNA作为模板获得的PCR片段的序列。
[0051]SEQIDN0:20全长嗜热枝顶抱菌ALK04245cel61基因At_cel61的核巧酸序列。
[0052]SEQIDN0:21全长白马兰诺菌ALK04237cel61基因Ma_cel61a的核巧酸序列。
[0053]SEQIDN0:22全长白马兰诺菌ALK04237cel61基因Ma_cel6化的核巧酸序列。
[0054] 569 10^:23从全长嗜热枝顶抱菌4〇(042456册1蛋白（41_6册1)推导的氨基酸 序列，包括从Metl到Gln328的氨基酸。
[00巧]SEQIDN0:24从全长白马兰诺菌ALK04237G册l蛋白（Ma_G册lA)推导的氨基酸序 列，包括从Metl到切S246的氨基酸。
[0056] SEQIDN0:25从全长白马兰诺菌ALK04237G册l蛋白（Ma_G册lB)推导的氨基酸序 列，包括从Metl到切S225的氨基酸。保藏
[0057] 嗜热枝顶抱菌ALK04245于2004年9月20号保藏在化salalaan8， 3584CT,化recht,Netherlands的荷兰微生物菌种保藏中也（Centraa化ureauVoor Schimmelcultures)并且指定保藏编号CBS116240。
[0058]白马兰诺菌ALK04237 于 2012 年 3 月 2 号保藏在化salalaan8,3584CT，化recht, Netherlands的荷兰微生物菌种保藏中也并且指定保藏编号CBS132099。ALK04237菌株之 前于1995年也已经保藏在Oosterstraat1, 3740AGBAARN,Netherlands的荷兰微生物菌 种保藏中也，保藏编号CBS685. 95。
[0059] 包含质粒PALK2992的大肠杆菌菌株RF9002于2011年12月15号保藏在Inho ffenstrasse7B,D-38124化aunschweig,Germany的德国微生物菌种保藏中也值eutsche SsmmlungvonMikroorganismenundZeHkulturenGmbh(DSMZ))并且指定保藏编号 DSM25494。
[0060] 包含质粒PALK2993的大肠杆菌菌株RF9091于2011年12月15号保藏在Inhoffe nstrasse7B,D-38124化aunschweig,Germany的德国微生物菌种保藏中也值SMZ)并且指定 保藏编号DSM25495。
[0061] 包含质粒PALK3374的大肠杆菌菌株RF9150于2011年12月15号保藏在Inhoffe nstrasse7B,D-38124E5raunschweig,Germany的德国微生物菌种保藏中也值SMZ)并且指定 保藏编号DSM25496。
[0062] 包含质粒PALK3375的大肠杆菌菌株RF9319于2011年12月15号保藏在Inhoffe nstrasse7B,D-38124化aunschweig,Germany的德国微生物菌种保藏中也值SMZ)并且指定 保藏编号DSM25497。
[0063] 包含质粒PALK3378的大肠杆菌菌株RF9537于2011年12月15号保藏在Inhoffe nstrasse7B,D-38124E5raunschweig,Germany的德国微生物菌种保藏中也值SMZ)并且指定 保藏编号DSM25498。
[0064] 包含质粒PALK3379的大肠杆菌菌株RF9696于2011年12月15号保藏在Inhoffe nstrasse7B,D-38124化aunschweig,Germany的德国微生物菌种保藏中也值SMZ)并且指定 保藏编号DSM25499。
[0065] 本发明的详细描述
[0066] 纤维素是高等植物的主要结构成分。它为植物细胞提供了高抗张强度，帮助它们 抵抗机械压力和渗透压。纤维素是目-1，4-葡聚糖，由通过目-1，4-糖巧键连接的萄萄糖 残基的线性链组成。纤维二糖是纤维素的最小重复单元。纤维素在细胞壁中堆叠成不同方 向的片层，其嵌入纤维素和木质素的基体中。半纤维素是碳水化合物聚合物的异质性类型， 其主要包含不同的葡聚糖、木聚糖和甘露聚糖。半纤维素由线性骨架组成，其中目-1,4-连 接残基被通常包含己醜基、葡萄糖酵酸基、阿拉伯糖基及半乳糖基的短侧链取代。半纤维素 可W与木质素化学交联。木质素是各种取代的对轻苯基丙焼单位的复杂交联聚合物，其为 细胞壁提供强度W承受机械压力，同时可保护纤维素不受酶水解。
[0067] 在此使用的"纤维素"或"纤维素材料"涉及包含纤维素、半纤维素和/或木质纤 维素作为显著组分的任何材料。纤维素通常例如在植物的茎、叶、壳、芙、穗或树木的叶、分 枝和木材中发现。纤维素材料可W是但不限于草本材料、农业残渣、林业残渣、城市固体废 物、废纸、和纸浆和纸厂残渣。纤维素材料的实例包括来自例如棉、亚麻、大麻、黄麻的纺织 纤维和人造纺织纤维如莫代尔纤维、纤维胶和莱赛尔纤维。纤维素材料的实例也包括纤维 性或纤维质类型的残渣如在自动洗碗机的过滤器中发现的±。
[0068]"木质纤维素"是纤维素、半纤维素和木质素的组合。其物理性质坚硬、致密且不 易受影响，是生物圈最丰富的生物化学材料。"木质纤维素材料"指包含木质纤维素的任何 材料。该样的材料是例如；硬木和软木屑、木浆、银末、及林业和木业废物；农业生物质如谷 草、甜菜渣、玉米纤维、玉米枯杆和穗、甘藏渣、茎、叶、壳、芙等；废品如城市固体废物、报纸 和办公室废纸、例如谷物的研磨废物；专用能源作物（例如杨柳、杨树、柳枝稷或草芦等）。 优选实例是玉米纤维、玉米枯杆、柳枝稷、谷草、甘藏渣和木材衍生材料。
[0069]纤维素材料在自然界被很多不同的生物体包括细菌和真菌降解，所述细菌和真菌 制造能够水解碳水化合物聚合物的酶。降解通常需要不同的纤维素酶按顺序作用或同时作 用。包含底物的更复杂的纤维素的降解需要广泛的各种酶。对于降解过程，纤维素材料可 W被直接使用或经过预处理之后，使用本领域已知的常规方法进行。
[0070]"纤维素水解酶"或"纤维素酶"是具有"纤维素水解活性"的酶，该表示它们能够 将有纤维质的底物或其衍生物水解为较小的糖。因此纤维素水解酶包括纤维素酶和半纤维 素酶二者。半纤维素酶如木聚糖酶和甘露聚糖酶是水解半纤维素的酶。在此使用的纤维素 酶包括（1)切割内部的目-1，4-糖巧键的内切葡聚糖酶巧G、EC3. 2. 1. 4) ; (2)从结晶的纤 维素聚合物链的还原端或非还原端切割二糖纤维二糖的外切葡聚糖酶或纤维二糖水解酶 (CBH、EC3. 2. 1. 176,EC3. 2. 1. 91) ; (3)将纤维二糖和其他短的纤维低聚糖水解为葡萄糖 的目-1，4-葡萄糖巧酶炬G、EC3. 2. 1. 21)。CAZY(碳水化合物活性酶）分类系统根据已经 显示反映共同结构特征的序列相似性将糖基水解酶（GH)酶整理成家族。除此之外，纤维素 酶可W根据它们的一级序列分类到不同的糖基水解酶家族，该通过分析家族的一些成员的 H维结构而得到支持化enrissat1991，Henrissat和Bairoch1993,1996)。
[0071]G册1多肤具有纤维素水解增强活性，指它们通过具有纤维素水解活性的酶的 催化而"增强纤维素材料的水解"。换而言之，在G册1多肤存在下用纤维素水解酶糖化 纤维素材料与在仅仅纤维素水解酶存在下相比，增加了纤维素材料的降解。纤维素材料 可W是包含纤维素的任何材料。术语"家族61糖巧水解酶"或"家族G册1"或"G册1多 肤"指根据HenrissatB., 1991,Biochem.J. 280:309-316,和HenrissatB.,和Bairoch A.，1996,Biochem.J. 316:695-696落在糖巧水解酶家族6UEC3. 2. 1. 4)的多肤。G册1蛋白 也指作CEL61蛋白。
[0072] G册1蛋白包含不具有传统糖巧水解酶活性位点的核也结构域。此外，G册1蛋白可 包含糖类结合模块/结构域，也称作纤维素结合结构域（CBM/CBD)，其可W位于核也结构域 的N-或C-端。一般来讲，CBM介导了蛋白与晶体纤维素的结合，但是对功能活性具有很少 影响或不具有影响。该两个结构域通常通过柔初的和高度糖巧化的连接区连接。
[0073] 本发明基于试图发现新颖GH61家族多肤的研究，所述多肤能增强纤维质底物的 水解效率，并且所述多肤即使在升高的温度下也能够用于多用途的应用。得到了指作At_ G册l、Ma_GTOlA和Ma_GTOlB的H种新颖的細61家族多肤（表1)。
[0074] 表1.本发明的G册1基因和多肤
[00巧]
【权利要求】
1. GH61多肽，其包含与SEQIDN0:23具有至少75%序列同一性的氨基酸序列、与SEQ IDNO:24具有至少78%序列同一性的氨基酸序列、或与SEQIDNO:25具有至少79%序列 同一性的氨基酸序列、或其能够增强纤维素材料水解的片段或变体。
2. 权利要求1的GH61多肽，其中所述多肽与SEQIDN0:23、SEQIDN0:24或SEQID NO: 25或其能够增强纤维素材料水解的片段具有至少90%同一性、优选地具有至少95%同 一性、更加优选地具有至少98%同一性。
3. 权利要求1的GH61多肽，其中所述多肽能够从嗜热枝顶孢菌（Acremonium thermophilum)或白马兰诺菌（Melanocarpusalbomyces)获得、优选地能够从嗜热枝顶孢 菌CBS116240或白马兰诺菌CBS132099获得。
4. 分离的多核苷酸，其选自： a) 包含如在SEQIDNO:20、21或22中所示的编码序列的多核苷酸； b) 编码权利要求1的多肽的多核苷酸； c) 编码由a)或b)的多核苷酸编码的多肽的片段的多核苷酸，其中所述片段能增强纤 维素材料的水解；和 d) 包含与a)或b)的多核苷酸序列的核苷酸序列简并的核苷酸序列的多核苷酸； 或这样的多核苷酸的互补链。
5. 权利要求4的多核苷酸，其包含在具有选自DSM25497、DSM25495和DSM25499的 保藏编号的微生物中所含有的基因。
6. 载体，其包含权利要求4或5的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接到能够指导权 利要求1的GH61多肽表达的调控序列上。
7. 包含权利要求6的载体的宿主细胞。
8. 制备权利要求1的GH61多肽的方法，所述方法包括步骤： 用编码所述多肽的表达载体转化宿主细胞， 在允许所述多肽表达的条件下培养宿主细胞，和 任选地回收和纯化所述多肽。
9. 包含权利要求1至3任一项的GH61多肽的酶制剂。
10. 权利要求9的酶制剂，其还包括至少一种酶，所述酶选自：纤维二糖水解酶；内切葡 聚糖酶；3 -葡糖苷酶；3 -葡聚糖酶；木葡聚糖酶；木聚糖酶；3 -木糖苷酶；纤维二糖脱氢 酶；甘露聚糖酶邛_甘露糖苷酶；a_葡糖苷酸酶；乙酰木聚糖酯酶；a_阿拉伯呋喃糖苷 酶；a-半乳糖苷酶；果胶酶；包括内切和外切-a-L-阿拉伯糖酶、内切和外切-半乳糖醛 酶、内切果胶酶、果胶酸裂解酶、和果胶酯酶；酚酯酶；包括木质素过氧化物酶的木质素酶； 锰依赖性过氧化物酶；过氧化氢生成酶；昆布多糖酶；壳聚糖酶；阿魏酸酯酶和具有或不具 有介体的漆酶。
11. 处理纤维素材料的方法，其中所述方法包括将纤维素材料与权利要求1至3任一项 的GH61多肽或权利要求9或10的酶制剂反应。
12. 权利要求11的方法，其中所述方法包括通过用权利要求1至3任一项的多肽或权 利要求9或10的酶制剂与洗碗机内部的至少部分接触而清洁洗碗机的内部。
13. 权利要求11的方法，其中所述纤维素材料是纺织材料、在动物饲料中使用的植物、 或来自木材的纸浆或二级纤维。
14. 权利要求1至3任一项的多肽或权利要求9或10的酶制剂用于处理生物质、和在 生物燃料、淀粉、纺织品、清洁剂、纸浆和纸、食物、饲料或饮料工业中的应用。
15. 权利要求14的应用，用于纺织材料例如织物或衣服或纱线的生物整理。
16. 权利要求14的应用，用于牛仔布的生物打磨。
17. 权利要求14的应用，用于清洁洗碗机机器的内部。
18. 具有保藏编号 DSM 25497、DSM 25495 或 DSM 25499 的大肠杆菌（Escherichia coli)菌株。
19. 清洁剂组合物，所述组合物包括权利要求1至3任一项的多肽或权利要求9或10 的酶制剂。
20. 权利要求19的清洁剂组合物，其中所述组合物是清洁洗碗机机器的组合物。
21. 用于改进清洁剂组合物的织物护理性质或纺织品清洁效果的方法，所述方法包括 在所述清洁剂组合物中添加权利要求1至3任一项的多肽或权利要求9或10的酶制剂。
22. 动物饲料，其包括权利要求1至3任一项的多肽或权利要求9或10的酶制剂。
【文档编号】C11D3/386GK104379736SQ201380029931
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2013年5月24日 优先权日:2012年6月7日
【发明者】苏珊娜·梅基宁, 卡里·云图宁, 亚历山大·科曼德, 基姆·朗费尔德, 亚里·韦赫曼佩雷, 泰尔希·普拉宁 申请人:罗尔公司