本发明涉及声光成像造影剂技术领域，尤其涉及一种金纳米刺及其制备方法和应用。
背景技术：
金纳米粒子是研究较早的一种纳米材料，目前已经在催化，光电子，生物医学等领域得到广泛的应用，金纳米粒子的性质往往与其尺寸及形貌相关，通过发展不同的合成方法已经得到纳米球，纳米立方体，纳米四面体，六方体，纳米盘，金字塔型纳米粒子，纳米棒，纳米线，纳米笼，纳米壳，纳米星等多种结构。金纳米粒子的性质也受其表面吸附的分子结构的影响，例如表面拉曼效应就与金纳米粒子的尺寸，形状及表面分子均有关系。
目前报道的金纳米刺的合成方法很少，金纳米星是类似金纳米刺的一种较为复杂的结构，通常复杂的金纳米结构都是通过模板法合成，十六烷基三甲基溴化铵，简称ctba，是较常用的模板，常用来合成纳米棒，纳米线，以及各种其他的纳米形态金粒子，单独使用ctba为模板合成的金纳米粒子形貌常常不单一，会混有其他结构的纳米粒子，例如合成金纳米棒时会混合其他球形或立方结构的粒子。这种情况在合成金纳米星等复杂结构也有体现，表现为形貌不单一、结构缺陷或缺失，很难控制反应得到均匀的纳米结构。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种金纳米刺及其制备方法和应用，本发明通过使用聚合物模板分子与ctba共同模板的方法制得的金纳米刺形貌单一，颗粒均匀。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
一种金纳米刺的制备方法，包括以下制备步骤：
1)将高氯酸金、ctba、硼氢化钠与水混合发生还原反应，得到ctba-金纳米种溶液；
2)将高氯酸金、聚合物模板分子和水混合，得到配合物溶液；
3)将所述步骤2)得到的配合物溶液、硝酸银、所述步骤1)得到的ctba-金纳米种溶液和水混合进行自组装，得到自组装后的溶液；
4)将所述步骤3)得到的自组装后的溶液与抗坏血酸混合进行还原反应，得到金纳米刺；
所述步骤1)和步骤2)没有先后顺序；
所述步骤1)中聚合物模板分子为多齿巯基交替硫辛酸-聚乙二醇或梳型聚丙烯酸-巯基-聚乙二醇聚合物；
所述多齿巯基交替硫辛酸-聚乙二醇具有式i所示结构：
所述n为40～50的整数；
所述梳型聚丙烯酸-巯基-聚乙二醇聚合物具有式ii所示结构：
所述n为40～50的整数。
优选地，所述步骤1)中高氯酸金、ctba和硼氢化钠的物质的量之比为1：200～400：2～3。
优选地，所述步骤1)中ctba-金纳米种溶液的浓度以ctba计为0.08～0.1mol/l。
优选地，所述步骤2)中高氯酸金与聚合物模板分子的物质的量之比为30～40：1。
优选地，所述步骤2)中配合物溶液的浓度以聚合物模板分子计为7～10mg/ml。
优选地，所述步骤3)中配合物溶液中的聚合物模板分子、硝酸银、ctba-金纳米种中ctba的物质的量之比为1：3：14～70。
优选地，所述步骤4)中抗坏血酸与与制备所述自组装溶液的配合物溶液用高氯酸金的物质的量之比为1：1～2：1。
优选地，所述多齿巯基交替硫辛酸-聚乙二醇的制备方法包括以下步骤：
1)将具有式iii所示结构的化合物与2-氨基-1，3丙二醇进行偶联反应，得到具有式iv所示结构的化合物；
2)将具有式iv结构的化合物与丁二酸进行酯化反应，得到具有式v所示结构的化合物；
3)将具有式v所示结构的化合物与具有式vi所示结构的聚合物进行缩聚反应，得到具有式vii所示结构的聚合物；
所述式vi中n为40～50的整数；
4)将具有式vii所示的化合物与硼氢化钠进行还原反应，得到具有式i所示的多齿巯基交替硫辛酸-聚乙二醇。
优选地，所述多齿巯基交替硫辛酸-聚乙二醇的制备方法包括以下步骤：
1)将具有式viii所示结构的聚合物与具有式ix结构的化合物和具有式xi所示的化合物进行缩聚反应，得到具有式x所示结构的聚合物；
所示式viii中m为20～30的整数。
2)将具有式x所示结构的聚合物与硼氢化钠进行还原反应，得到具有式ii所示的结构梳型聚丙烯酸-巯基-聚乙二醇聚合物。
本发明还提供了上述技术方案所述制备方法制备得到的金纳米刺，所述金纳米刺的形貌为球形刺状，所述近纳米刺的粒径为50nm～200nm。
本发明还提供了所述的金纳米刺在光声成像造影剂中的应用。
本发明提供了一种金纳米刺及其制备方法和应用，本发明通过使用聚合物模板分子与ctba-共同模板的方法制得的金纳米刺形貌单一，颗粒均匀
本发明通过调整使用的聚合物模板的分子结构以及ctba浓度可以得到具有不同尺寸的金纳米刺，从而调整其光学性质，吸收光谱最大值从550纳米到1100纳米；调整ctba在反应中的物质的量从4.5×10～3mmol至22.5×10～3mmol可以得到从50纳米至250纳米的金纳米刺粒子。
调整金纳米种在反应溶液中的浓度能够明显调整得到的金纳米刺的尺寸及光学性质。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1为实施例1中得到的金纳米刺粒子的电镜扫描图；
图2为实施例2中得到的金纳米刺粒子的电镜扫描图；
图3为实施例3中得到的金纳米刺粒子的电镜扫描图；
图4为实施例4中得到的金纳米刺粒子的电镜扫描图；
图5为实施例5中得到的金纳米刺粒子的电镜扫描图；
图6为实施例1～6中得到的金纳米刺粒子的吸收光谱；
图7为实施例1中金纳米帮和金纳米刺作为造影剂在小鼠肿瘤部位的光声成像图；
上图为金纳米棒的造影效果，下图为金纳米刺的造影效果；
图左至右分别为注射金纳米刺前的成像，注射纳米刺后15分钟，1小时，3小时，20小时及48小时的成像图。
图8为实施例6中得到的金纳米刺粒子的电镜扫描图；
图9为实施例7中得到的金纳米刺粒子的电镜扫描图；
图10为实施例8中得到的金纳米刺粒子的电镜扫描图；
图11为实施例9中得到的金纳米刺粒子的电镜扫描图；
图12为实施例10中得到的金纳米刺粒子的电镜扫描图；
图13为实施例6～10中得到的金纳米刺粒子的吸收光谱；
图14为实施例6中金纳米帮和金纳米刺作为造影剂在小鼠肿瘤部位的光声成像图；
上图为金纳米棒的造影效果，下图为金纳米刺的造影效果；
图左至右分别为注射金纳米刺前的成像，注射纳米刺后15分钟，1小时，3小时，20小时及48小时的成像图。
具体实施方式
本发明提供了一种金纳米刺的制备方法，包括以下制备步骤：
1)将高氯酸金、ctba、硼氢化钠与水混合发生还原反应，得到ctba-金纳米种溶液；
2)将高氯酸金、聚合物模板分子和水混合，得到配合物溶液；
3)将所述步骤2)得到的配合物溶液、硝酸银、所述步骤1)得到的ctba-金纳米种溶液和水混合进行自组装，得到自组装后的溶液；
4)将所述步骤3)得到的自组装后的溶液与抗坏血酸混合进行还原反应，得到金纳米刺；
所述步骤1)和步骤2)没有先后顺序；
所述步骤1)中聚合物模板分子为多齿巯基交替硫辛酸-聚乙二醇或梳型聚丙烯酸-巯基-聚乙二醇聚合物；
所述多齿巯基交替硫辛酸-聚乙二醇具有式i所示结构：
所述n为40～50的整数；
所述梳型聚丙烯酸-巯基-聚乙二醇聚合物具有式ii所示结构：
所述n为40～50的整数。
本发明将高氯酸金、ctba、硼氢化钠与水混合发生还原反应，得到ctba-金纳米种溶液。在本发明中，所述高氯酸金、ctba和硼氢化钠的物质的量之比优选为1：200～400：2～3，更优选为1：300：2.4。
在本发明中，所述ctba-金纳米种溶液的浓度以ctba计优选为0.08～0.1mol/l，更优选为0.09mol/l。
本发明优选将高氯酸金、ctba和水混合后得到ctba-金离子配合物水溶液，然后再将ctba-金离子配合物水溶液与硼氢化钠水溶液混合后搅拌，发生还原反应，室温下静置得到ctba-金纳米种溶液。
在本发明中，所述硼氢化钠水溶液的温度优选为0～4℃，更优选为0℃。
在本发明中，所述搅拌的速率优选为300～600转/分，更优选为400转/分；所述搅拌的时间优选为2～3分钟，更优选为2min。
在本发明中，所述静置的时间优选为20～30分钟，更优选为30分钟。
本发明将高氯酸金、聚合物模板分子和水混合，得到配合物溶液。在本发明中，所述高氯酸金与聚合物模板分子的物质的量之比优选为30～40：1，更优选为30：1。在本发明中，所述高氯酸金中的金离子与聚合物模板分子形成配合物。
在本发明中，所述配合物溶液的浓度以聚合物模板分子计优选为7～10mg/ml，更优选为7.8mg/ml。
本发明对高氯酸金、聚合物模板分子和水混合的方法没有特殊限定，选用本领域技术人员熟知的混合方法即可。
在本发明中，所述多齿巯基交替硫辛酸-聚乙二醇的制备方法优选包括以下步骤：
1)将具有式iii所示结构的化合物与2-氨基-1，3丙二醇进行偶联反应，得到具有式iv所示结构的化合物；
2)将具有式iv结构的化合物与丁二酸进行酯化反应，得到具有式v所示结构的化合物；
3)将具有式v所示结构的化合物与具有式vi所示结构的聚合物进行缩聚反应，得到具有式vii所示结构的聚合物；
所述式vi中n为40～50的整数；
4)将具有式vii所示的聚合物与硼氢化钠进行还原反应，得到具有式i所示的多齿巯基交替硫辛酸-聚乙二醇。
本发明将具有式iii所示结构的化合物与2～氨基～1,3丙二醇进行偶联反应，得到具有式iv所示结构的化合物。
在本发明中，所述偶联反应的温度优选为2～6℃，更优选为4℃；所述偶联反应的时间优选为10～16h，更优选为12h。
在本发明中，所述具有式iii所示结构的化合物与2～氨基～1,3丙二醇的物质的量之比优选为1：1～1：1.5，更优选为1：1.2。
在本发明中，所述偶联反应的溶剂优选为dmf的水溶液或dmf，更优选为dmf的水溶液；所述dmf水溶液的浓度优选为40～60％，更优选为50％。
在本发明中，所述还原反应的还原剂优选为硼氢化钠。
在本发明中，所述偶联反应完成后，本发明优选将偶联反应产物依次进行过滤后取滤液、萃取、干燥、层析提纯得到具有式iv所示结构的化合物。
在本发明中，所述萃取的萃取液优选为氯仿。
本发明对过滤、萃取、干燥和层析提纯的方法没有特殊限定，选用本领域技术人员熟知的方法即可；在本发明中所述柱层析使用硅胶为载体，以含10％甲醇的二氯甲烷作为流动相。
得到具有式iv所示结构的化合物后，本发明将具有式iv所示结构的化合物与丁二酸进行酯化反应，得到具有式v所示结构的化合物。
在本发明中，所述酯化反应的温度优选为40～50℃，所述酯化反应的时间优选2.5～3.5天，更优选为3天。
在本发明中，所述酯化反应的溶剂优选为无水氯仿或吡啶，更优选为吡啶。
在本发明中，所述具有式iv所示结构的化合物与丁二酸酐进行酯化反应的物质的量之比优选为1：2～1：3，更优选为1：2.2。
在本发明中，所述酯化反应完成后，本发明优选将酯化反应产物依次真空除去溶剂、水洗、干燥、层析提纯得到具有具有式v所示结构的化合物。
在本发明中，所述水洗优选将真空去除溶剂后的产物溶解在氯仿中进行水洗。本发明对水洗的次数没有特殊限定，选用本领域技术人员熟知的水洗次数即可。
本发明对所述干燥、层析提纯的方法没有特殊限定，选用本领域技术人员熟知的干燥、层析提纯的方法即可。
得到具有具有式v所示结构的化合物后，本发明将具有式v所示结构的化合物与具有式vi所示结构的聚合物进行缩聚反应，得到具有式vii所示结构的聚合物。
在本发明中，所述缩聚反应的溶剂优选为氯仿或二氯甲烷，更优选为氯仿。
在本发明中，所述具有式v所示结构的化合物与具有式vi所示结构的聚合物的物质的量之比优选为1：1.01～1：1.05，更优选为1：1.05。
在本发明中，所述缩聚反应的温度优选为20～30℃，更优选为25℃，所述缩聚反应的时间优选为12～24小时，更优选为16小时。
在本发明中，所述缩聚反应的羧基活化反应物优选为羰基二咪唑(cdi)。
在本发明中，所述缩聚反应后，本发明优选包括将缩聚反应产物依次进行水洗、干燥、体积排除色谱纯化后得到具有式vii所示结构的聚合物。
本发明对水洗、干燥和体积排除色谱纯化的方法没有特殊限制，选用本领域技术人员熟知的方法即可。
得到具有式vii所示结构的聚合物后，本发明将所述具有式vii所示的聚合物与硼氢化钠进行还原反应，得到具有式i所示的多齿巯基交替硫辛酸-聚乙二醇。
在本发明中，所述还反应的溶剂优选为乙醇或水，更优选为乙醇。
在本发明中，所述还原反应的温度优选为4℃或室温，更优选为4℃。
在本发明中，所述具有式vii所示的聚合物中的双硫键与硼氢化钠的物质的量之比为1：2。
本发明对还原反应的时间没有特殊限定，反应液由白色变为紫色或蓝色后还原反应结束。
在本发明中，还原反应完成后，优选将还原反应产物进行透析分离提纯，得到具有式i所示的多齿巯基交替硫辛酸-聚乙二醇。本发明对透析分离提纯的方法没有特殊限制，选用本领域技术人员熟知的方法即可；所述透析用透析膜的截留分子量为1000。
在本发明中，所述多齿巯基交替硫辛酸-聚乙二醇的制备原理如下式所示：
在本发明中，所述梳型聚丙烯酸-巯基-聚乙二醇聚合物的制备方法优选包括以下步骤：
1)将具有式viii所示结构的聚合物与具有式ix结构的化合物和具有式xi所示的化合物进行缩聚反应，得到具有式x所示结构的聚合物；
所述式viii中m为20～30的整数；
2)将具有式x所示结构的聚合物与硼氢化钠进行还原反应，得到具有式ii所示的结构梳型聚丙烯酸-巯基-聚乙二醇聚合物。
本发明将具有式viii所示结构的聚合物与具有式ix结构的化合物和具有式xi所示的化合物进行缩聚反应，得到具有式x所示结构的聚合物。在本发明中，所述缩聚反应的溶剂优选为二甲亚砜或dmf，更优选为二甲亚砜。
在本发明中，所述具有式viii所示结构的聚合物与具有式ix结构的化合物和具有式xi所示的化合物的物质的量之比优选为1：12～13：12～13，更优选为1：12.5：12.5。
本发明对具有式viii所示结构的聚合物的来源没有特殊限定，选用市售商品即可。
在本发明中，所述缩聚反应的温度优选为室温；所述缩聚反应的时间选为10～16h，更优选为12～14h。
所述缩聚反应完成后，本发明优选将缩聚反应产物进行透析分离提纯，得到具有式x所示结构的聚合物。本发明对所述透析分离提纯的方法没有特殊限定，选用本领域技术人员熟知的分离提纯的方法即可；所述透析膜的截留分子量优选为10000。
得到具有式x所示结构的聚合物后，本发明对具有式x所示结构的聚合物与硼氢化钠进行还原反应，得到具有式ii所示的结构梳型聚丙烯酸-巯基-聚乙二醇聚合物。
在本发明中，所述还原反应的溶剂优选为乙醇或乙醇水溶液，更优选为乙醇水溶液，所述乙醇水溶液乙醇与水的体积比优选为1：1。
在本发明中，所述具有式x所示结构的聚合物中双硫键与硼氢化钠的物质的量之比优选为1：2或1：3，更优选为1：2。
在本发明中，所述还原反应的温度优选为室温，所述还原反应的时间优选为3～5h，更优选为4h。
在本发明中，还原反应完成后，优选包括将还原反应产物进行透析分离提纯得到具有式ii所示的结构梳型聚丙烯酸-巯基-聚乙二醇聚合物；所述透析时的截留分子量优选为10000。
在本发明中，所述梳型聚丙烯酸-巯基-聚乙二醇聚合物的制备原理如下式所示：
得到配合物溶液和ctba-金纳米种溶液后，本发明将所述配合物溶液、硝酸银、所述ctba-金纳米种溶液和水混合进行自组装，得到自组装后的溶液。
在本发明中，所述配合物溶液中的聚合物模板分子、硝酸银、ctba-金纳米种中ctba的物质的量之比优选为1：3：14～70；更优选为1：3：14或1：3：28或1：3：42或1：3：56或1：3：70。
本发明对配合物溶液、硝酸银、ctba-金纳米种溶液和水的混合方法没有特殊限定，选用本领域技术人员熟知的混合方法即可。
得到自组装后的溶液后，本发明将得到的自组装后的溶液与抗坏血酸混合进行还原反应，得到金纳米刺。
在本发明中，所述抗坏血酸与所制备所述自组装溶液的配合物溶液用高氯酸金的物质的量之比优选为1：1～2：1，更优选为1.6：1：1。
在本发明中，所述还原反应的温度优选为20～40℃，更优选25℃；所述还原反应的时间优选为20分钟～1小时，更优选为30分钟。
本发明还提供了所述制备方法制备得到的金纳米刺，所述金纳米刺的形貌为球形刺状，所述金纳米刺的粒径为50nm～200nm。
本发明还提供了所述的金纳米刺在光声成像造影剂中的应用。
金纳米刺粒子在生理盐水中稀释(溶液浓度0.1微摩尔/升，使用量10～50皮摩)，采用尾静脉注射方法注入小鼠体内，小鼠麻醉后在不同的时间段对其肿瘤部位进行光声成像(itheramsotinvision128光声成像仪，德国)，扫描步进1mm，激发光680～900nm，多光谱成像通过270°弧形阵列转化器得到，图谱由仪器自带软件分析，明亮部分为金纳米刺或金纳米棒粒子光声信号。
下面结合实施例对本发明提供的金纳米刺及其制备方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
聚合物模板分子的合成
1)向2-氨基-2-甲基-1,3丙二醇(0.74g，7.0mmol)及硼氢化钠(0.58g，6.9mmol)在dmf/水(10ml/10ml)的混合溶液中滴加具有式iii所示结构的硫辛酸-nhs(1.77g,5.8mmol)的dmf(3ml)溶液，反应溶液温度保持在4℃左右，室温下搅拌过夜。反应混合物过滤后用氯仿萃取，合并有机相后水洗干燥，粗产物由柱层析法(硅胶为固定相，含10％甲醇的二氯甲烷为流动相)分离提纯得到具有式iv所示结构的化合物。
将得到的具有式iv所示结构的化合物(0.35g,1.2mmol)，丁二酸酐(0.3g,3mmol)及4-二甲基氨基吡啶(23mg,0.19mmol)溶于无水吡啶(5ml)中，反应混合物在45度条件下搅拌反应3天。反应结束后真空除去吡啶，反应混合物溶于氯仿中水洗三次。合并有机相后干燥，粗产物由柱层析法分离提纯得到具有式v所示结构的化合物。
具有式v结构的化合物(0.2g,0.5mmol)溶于无水氯仿(20ml)中的溶液加入cdi(0.25g,1.5mmol)，反应过夜后加入具有式vi结构的二胺基聚乙二醇(1.02g,0.5mmol)的无水氯仿溶液。反应过夜。有机相水洗三次后干燥。粗产物用体积排除色谱纯化后得到的黄色产物为具有式vii所示结构的聚合物。
将具有式vii所示结构的聚合物溶于乙醇及水的混合溶剂中加入硼氢化钠还原，产物透析分离提纯得到具有式i所示结构的化合物。
2)向聚丙烯酸(paa)(100mg,5.5×10～2mmol)在无水二甲亚枫(3ml)中的溶液中加入edc(392mg,2.0mmol)及nhs(192mg,1.7mmol)，室温下搅拌反应过夜。氨基硫辛酸(150mg,0.6mmol)，氨基甲氧基聚乙二醇(0.83g,0.4mmol)加到上述活化后的聚丙烯酸反应溶液中，室温下反应过夜。得到的粗产物经透析分离提纯。提纯过的聚合物溶液(1.4g,4.7×10～2mmol)加入硼氢化钠(37mg,1.0mmol)还原，室温下反应4小时，透析除去未反应的硼氢化钠得到具有式ii所示结构的化合物得到具有式ii所示结构的化合物。
金纳米刺的合成
1)高氯酸金在高纯水(0.01摩尔/升)中的溶液(0.25ml)，加入一定量的ctba(0.1摩尔/升，7.5ml)，金离子与ctba-形成配合物(溶液颜色变成淡黄褐色)后加入冰冷的硼氢化钠水溶液(0.01摩尔/升，0.6ml)，迅速搅拌2分钟后在25摄氏度下静置得到ctba-金纳米种溶液，得到的纳米金种子溶液马上用于金纳米刺的模板合成。
2)高氯酸金在高纯水的溶液(0.01摩尔/升，1毫升)加入具有式i结构的聚合物模板分子(0.15ml，9mg)，溶液由黄变红，然后又变回黄色(二氢化硫辛酸分子与金离子形成配合物)得到配合物溶液。
3)得到的配合物溶液在室温下搅拌5分钟加入硝酸银的水溶液(0.1ml，0.01摩尔/升)，ctba金纳米种溶液0.05ml加入上述混合物中搅拌十分钟。反应溶液的颜色由黄变橙，并且由澄清透明变成牛奶状，这说明聚合物～金离子与ctba-金纳米种自组装形成微米尺度的结构。
4)向上述自组装后的溶液中溶液中加入抗坏血酸溶液(0.16ml，0.1mol/l)还原三价金离子，反应溶液颜色变白，将反应溶液静置(停止搅拌)半小时后颜色变成紫色或蓝色，得到金纳米刺粒子。
得到的纳米金刺粒子电镜扫描图如图1所示，由图1可知，实施例1中得到的纳米金刺粒子形貌单一，粒径大小均匀，为30nm左右。
得到的金纳米刺作为造影剂在小鼠肿瘤部位的光声成像如图7下图(第二排)所示，上图(第一排为金纳米棒的造影图)，图左至右分别为注射金纳米刺前的成像，注射纳米刺后15分钟，1小时，3小时，20小时及48小时的成像。由图7可知从图中可见金纳米刺在肿瘤部位具有明显延长的保留时间。
得到的金纳米刺的吸收光谱图如图6中曲线a所示。
实施例2
ctba金纳米种溶液为0.10ml，其它与实施例1完全相同。
得到的纳米金刺粒子电镜扫描图如图2所示，由图2可知，实施例2中得到的纳米金刺粒子形貌单一，粒径大小均匀，为50nm。
得到的金纳米刺的吸收光谱图如图6中曲线b所示。
实施例3
ctba金纳米种溶液为0.15ml，其它与实施例1完全相同。
得到的纳米金刺粒子电镜扫描图如图3所示，由图3可知，实施例3中得到的纳米金刺粒子形貌单一，粒径大小均匀，为100nm。
得到的金纳米刺的吸收光谱图如图6中曲线c所示。
实施例4
ctba金纳米种溶液为0.20ml，其它与实施例1完全相同。
得到的纳米金刺粒子电镜扫描图如图4所示，由图4可知，实施例4中得到的纳米金刺粒子形貌单一，粒径大小均匀，为150nm。
得到的金纳米刺的吸收光谱图如图6中曲线d所示。
实施例5
ctba金纳米种溶液为0.25ml，其它与实施例1完全相同。
得到的纳米金刺粒子电镜扫描图如图5所示，由图5可知，实施例5中得到的纳米金刺粒子形貌单一，粒径大小均匀，为200nm。
得到的金纳米刺的吸收光谱图如图6中曲线e所示。
由图6中各曲线对比可知，随着反应液中ctba模板分子用量的增加，得到的金纳米刺粒子的吸收光谱逐渐红移。
实施例6
将聚合物模板分子由式i所示的聚合物替换为式ii所示的聚合物，其余ctba金纳米种溶液为0.05ml，其它与实施例1完全相同。
得到的纳米金刺粒子电镜扫描图如图8所示。由图8可知，实施例1中得到的纳米金刺粒子形貌单一，粒径大小均匀，为25～30纳米左右。
得到的金纳米刺作为造影剂在小鼠肿瘤部位的光声成像如图14下图(第二排)所示，上图(第一排为金纳米棒的造影图)，图左至右分别为注射金纳米刺前的成像，注射纳米刺后15分钟，1小时，3小时，20小时及48小时的成像。由图7可知从图中可见金纳米刺在肿瘤部位具有明显延长的保留时间。
得到的金纳米刺的吸收光谱图如图13中曲线a所示。
实施例7
ctba金纳米种溶液为0.1ml，其它与实施例6完全相同。
得到的纳米金刺粒子电镜扫描图如图9所示，由图9可知，实施例7中得到的纳米金刺粒子形貌单一，粒径大小均匀，为40～50纳米。
得到的金纳米刺的吸收光谱图如图13中曲线b所示。
实施例8
ctba金纳米种溶液为0.15ml，其它与实施例6完全相同。
得到的纳米金刺粒子电镜扫描图如图10所示。由图10可知，实施例8中得到的纳米金刺粒子形貌单一，粒径大小均匀，为70～80纳米。
得到的金纳米刺的吸收光谱图如图13中曲线c所示。
实施例9
ctba金纳米种溶液为0.2ml，其它与实施例6完全相同。
得到的纳米金刺粒子电镜扫描图如图11所示。由图11可知，实施例9中得到的纳米金刺粒子形貌单一，粒径大小均匀，为100～150纳米左右。
得到的金纳米刺的吸收光谱图如图13中曲线d所示。
实施例10
ctba金纳米种溶液为0.25ml，其它与实施例6完全相同。
得到的纳米金刺粒子电镜扫描图如图12所示。由图11可知，实施例10中得到的纳米金刺粒子形貌单一，粒径大小均匀，为200纳米左右。
得到的金纳米刺的吸收光谱图如图13中曲线e所示。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。