一种地黄根部膨大专用型微生物菌肥的制备方法与流程

本发明属于微生物菌肥的制备技术领域，具体涉及一种地黄根部膨大专用型生物菌肥的制备方法。

背景技术：

地黄在我国具有悠久的栽培历史，其块根是一味名贵中药，具有重要的经济价值。已有的记载表明，经不同方法炮制的地黄在清热、凉血、润燥、养阴等方面具有不同的应用价值。现代的研究将地黄的药用价值已扩展到抗炎、抗肿瘤、预防失眠等方面。地黄的质量受到很强的地域性限制，河南省焦作市自古以来被认为具备种植地黄的最佳环境气候条件，其产出的地黄质量也最好。但是，地黄种植面临着非常严重的连作障碍，即在同一块土地上，8-10年内只能种植一次地黄，否则将出现地黄根部膨大困难、病虫害频发等一系列问题，并最终导致地黄质量和产量的双重下降。

为了刺激地黄根部膨大，提高地黄的产量和质量，多种方法如增大施肥量、调整土壤ph等已被使用，但效果并不显著。虽然近年来一些商家已生产出能够刺激植物根部膨大的产品，但这些产品大多属于化学合成产品，存在潜在的环境安全性问题。在这样的背景下，清洁无污染的高效微生物菌肥日益受到人们的关注。微生物菌肥是指包含一种或多种微生物的生物制品，能借助微生物在物质转化等方面的天然能力，增强植物的营养吸收、抗病性等，最终促进植物生长，提高植物产量。但是，到目前为止，市场上专门用于刺激地黄根部膨大的微生物菌肥类产品仍较为少见。立足于此，本发明提供了一种地黄根部膨大专用型微生物菌肥的制备方法。

技术实现要素：

本发明解决的技术问题是提供了一种工艺简单、成本低廉且效果显著的地黄根部膨大专用型生物菌肥的制备方法。

本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案，一种地黄根部膨大专用型生物菌肥的制备方法，其特征在于具体步骤为：

（1）从地黄根际土壤中分离获得地衣芽孢杆菌菌株、毕赤酵母菌菌株和哈茨木霉，将地衣芽孢杆菌菌株接种于lb液体培养基中，在37℃、180rpm的条件下培养48h，其中lb液体培养基的成分以g/l计为：氯化钠10、酵母粉5、蛋白胨10，其余成分为水，ph7.0，121℃灭菌20min；将毕赤酵母菌菌株接种于ypd液体培养基中，在28℃、180rpm的条件下培养48h，其中ypd液体培养基的成分以g/l计为：葡萄糖20、蛋白胨10、酵母膏5，其余成分为水，ph自然，115℃灭菌30min；将哈茨木霉用pda培养基活化后采用麸皮培养基，培养7d后用无菌水涮洗培养基，过滤，取得孢子，其中pda培养基的成分以g/l计为：马铃薯200、葡萄糖20，其余成分为水，ph自然，115℃灭菌30min；最后将三种微生物培养物按照质量比1:1:1的比例进行混合制得种子液；

（2）根据牛粪与秸秆的碳氮比调整二者的比例，使混合后的碳氮比在20-25之间，含水率控制在50%-60%，将制得的种子液施加到牛粪与秸秆的混合物中，接种量为1wt%，混匀后堆成条形垛，并用塑料薄膜覆盖进行发酵，期间进行翻堆，发酵35d堆制微生物菌肥，该微生物菌肥有效刺激地黄根部膨大，减少化肥的使用，实现牛粪秸秆的资源再利用。

本发明采用实验室特有的菌种与秸秆和牛粪复配并堆制微生物菌肥，所得产品能够有效刺激地黄根部膨大。

附图说明

图1是施加微生物菌肥的地黄根部图；

图2是未施加微生物菌肥的地黄根部图。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发明的范围。

实施例

（1）种子液的制备：从地黄根际土壤中分离获得地衣芽孢杆菌菌株、毕赤酵母菌菌株和哈茨木霉，将地衣芽孢杆菌菌株接种于lb液体培养基中，在37℃、180rpm的条件下培养48h，其中lb液体培养基的成分以g/l计为：氯化钠10、酵母粉5、蛋白胨10，其余成分为水，ph7.0，121℃灭菌20min；将毕赤酵母菌菌株接种于ypd液体培养基中，在28℃、180rpm的条件下培养48h，其中ypd液体培养基的成分以g/l计为：葡萄糖20、蛋白胨10、酵母膏5，其余成分为水，ph自然，115℃灭菌30min；将哈茨木霉用pda培养基活化后采用麸皮培养基，培养7d后用无菌水涮洗培养基，过滤，取得孢子，其中pda培养基的成分以g/l计为：马铃薯200、葡萄糖20，其余成分为水，ph自然，115℃灭菌30min；最后将三种微生物培养物按照质量比1:1:1的比例进行混合制得种子液。

（2）牛粪与秸秆含水率的测定：分别取一定量秸秆与牛粪，称其重量分别为m1、m2，放置于烘箱中待其质量不发生改变时重量分别为m3、m4，则其含水率分别为(m3-m1)/m1*100%、(m4-m2)/m2*100%。

（3）牛粪与秸秆碳氮比测定：用半微量开式法测定全氮，重铬酸钾容量法-稀释热法测定有机碳，计算出碳氮比。

（4）根据牛粪与秸秆的碳氮比调整二者的比例，使混合后的碳氮比在20-25之间，含水率控制在50%-60%，有利于发酵的进行，将制得的种子液施加到牛粪与秸秆的混合物中，接种量为1wt%，混匀后堆成条形垛，以相同的牛粪和秸秆做为空白对照，用塑料薄膜覆盖进行发酵，期间进行翻堆。

（5）发酵35d后，物料底物变得松软，按照（3）的方法测定35d后堆肥的碳氮比，用物料浸提液进行种子发芽率试验，取5g风干堆肥样品研磨彻充分后置于250ml的锥形瓶，加入100ml去离子水，在摇床上200rpm震荡30min，过滤后的滤液即为样品浸提液。取5ml滤液，加到铺有干净滤纸的培养皿内，每个培养皿放10粒上海青种子，每个样品做三个重复，以去离子水为空白对照。暗箱培养2d后统计发芽的种子数并测量长度，求得发芽指数gi，gi=(样品种子发芽数*样品根长度)/(对照种子发芽数*对照根长度)。

（6）大田实验：种植怀地黄品种：85-5，分为对照组和施加微生物菌堆肥组，每组各三个重复（每亩地施加50kg），分别在种植前（4月份）及膨大期（7月份）各施加一次。与空白对照相比，施加微生物菌肥有效刺激地黄根部的膨大（如附图1-2所示），施加微生物菌肥的地黄平均单株块根重量比对照组地黄增加2.3倍。

本发明利用微生物菌种与牛粪及秸秆复配并堆制获得微生物菌肥，该微生物菌肥能够有效刺激地黄根部膨大，减少化肥的使用，实现牛粪秸秆的资源再利用，因此，本发明为提高地黄的产量和质量提供了一种很好的微生物菌肥。

以上实施例描述了本发明的基本原理、主要特征及优点，本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明原理的范围下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进均落入本发明保护的范围内。

技术特征：

技术总结
本发明公开了一种地黄根部膨大专用型生物菌肥的制备方法，属于微生物菌肥的制备技术领域。本发明的技术方案要点为：从地黄根际土壤中分离获得地衣芽孢杆菌菌株、毕赤酵母菌菌株和哈茨木霉，将三种微生物培养物按照质量比1:1:1的比例进行混合制得种子液；根据牛粪与秸秆的碳氮比调整二者的比例，使混合后的碳氮比在20‑25之间，含水率控制在50%‑60%，将制得的种子液施加到牛粪与秸秆的混合物中，接种量为1wt%，混匀后堆成条形垛，并用塑料薄膜覆盖进行发酵，期间进行翻堆，发酵35d堆制微生物菌肥，该微生物菌肥有效刺激地黄根部膨大，减少化肥的使用，实现牛粪秸秆的资源再利用。

技术研发人员：杨清香;王瑞飞;康春晓;王妍;李明军
受保护的技术使用者：河南师范大学
技术研发日：2017.08.30
技术公布日：2017.12.22