一种以废弃枣树枝条为营养基质的高效促生菌肥的制备方法与流程

本发明涉及菌肥生产领域，具体涉及一种以废弃枣树枝条为营养基质的高效促生菌肥的制备方法。
背景技术：
：目前能够应用于盐碱土的微生物菌剂较少，其原因一个是盐碱土环境的特殊性，造成某些产酸菌很难在其中生长，另外一个是盐碱土属于极端环境，目前的分离方法还没有能够分离出足够多的有效菌株。而研究出来的少数的菌剂由于盐碱土本身存在的差异，只能在极小的范围内应用。技术实现要素：为解决上述问题，本发明提供了一种以废弃枣树枝条为营养基质的高效促生菌肥的制备方法。为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种以废弃枣树枝条为营养基质的高效促生菌肥的制备方法，包括如下步骤：s1、将从根际土壤中分离纯化到的促生菌mx26菌株、kdz12菌株、lzj3菌株、lzj12菌株（mx26和lzj12菌株为芽孢杆菌bacillussubtilis，kdz12菌株为芽孢杆菌bacilluscereus，lzj3菌株为假单胞菌pseudomonassyringae）活化后分别接种至液体培养基中，在28℃，150r/min摇床震荡培养12h，得ⅰ级种液，按4%的量取ⅰ级种液转接至细菌基本培养基中扩大培养，在28℃，150r/min摇床震荡培养15h后，通过调整菌液od600，使菌量达1.5×108cfu/ml，得ⅱ级种液；将各ⅱ级种液按体积比1：1：1：1混匀即得菌群；s2、以粉碎的枣树枝条为营养源制作发酵培养基，按15%的接种量接种所述菌群，置于28℃恒温静止培养5-6d，即得微生物菌肥。进一步地，所述发酵培养基的料水比1：1.5，其料由以下质量百分比的原料制备而成：麸皮5%；mgso4·7h2o0.05%；k2hpo4·3h2o0.3%；cacl20.01%；（nh4）2so40.1%；naci0.08%；枣树枝条粉94.46%。进一步地，所述发酵培养基的料水比1：1.5，其料由以下质量百分比的原料制备而成：麸皮10%；mgso4·7h2o0.1%；k2hpo4·3h2o0.5%；cacl20.008%；（nh4）2so40.5%；naci0.065%；枣树枝条粉88.832%。进一步地，所述发酵培养基的ph为7.2。进一步地，所述步骤s2中每间隔12h扣料一次，使菌群均匀生长。本发明具有以下有益效果：微生物肥料中的有益微生物在其生命活动过程中，能产生大量有机酸,不断释放出土壤中的迟效态氮、磷、钾，有效改善盐碱土壤的理化性质和土壤结构，提高土壤肥力，对利用植被恢复改良盐碱地起到积极的作用，而且微生物肥料成本低，没有二次污染。因此研究利用微生物肥料改良利用盐碱地具有重要的意义。但依据生态学原理，特定生长环境、特定种类的植物根际生存着特定的pgpr菌株，所以从原习居地取样分离、筛选pgpr菌株，不仅能够满足不同植物的宿主专一性，往往也能够获得成功。开展微生物肥料的研制和菌种开发工作，这是一项开辟肥源而保护生态环境的有效措施，对促进盐碱地的修复和改良具有重要的推动作用。本方法制备的微生物菌肥对缓解宁夏地区盐渍化土壤的微生物肥料供给问题，提高耐盐植物的改良效果，加速盐碱地改良的进程具有积极的推动作用。附图说明图1为培养基中麸皮的添加量为5%时培养基中复合菌数随时间的变化。图2为培养基中麸皮的添加量为10%时培养基中复合菌数随时间的变化。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。实施例1.菌株来源菌株分离自耐盐植物根际土壤。2促生特性测定及高效促生菌的筛选将分离纯化到的菌株，定性和定量筛选具有促生能力的pgpr。表1：单个菌株促生能力的测定注：以a/ar作定量指标，比值越小,反映铁载体的产量越大。一般参考标准为:a/ar:0-0.2+++++；0.2-0.4++++；0.4-0.6+++；0.6-0.8++；0.8-1.0+。3高效根际促生菌拮抗反应实验采用滤纸片法对选取的促生活性高的不同菌株进行拮抗实验，获得了11株彼此不拮抗的菌株，进行后期菌群的构建。表2：拮抗试验结果mx31mx32gq2gq4gq11gq13kdz12jjc11lzj3lzj12mx26－－＋－－＋－－－－mx31－＋＋－－＋＋＋＋－＋mx32－－－＋－－－gq2－－－－－－－gq4－－＋－－－gq11－＋－＋＋＋gq13－＋－＋kdz12－－－jjc11－－lzj3＋注：“+”表示拮抗的程度；“—”表示不拮抗。4高效pgpr菌群构建通过拮抗反应实验，以及促生能力的测定，筛选出促生能力强且不拮抗的菌株，进行高效pgpr菌群构建，每4株菌株为一组，共9组，见表4，然后定量测定菌群的促生性能，选取最好的8号组合（mx26+kdz12+lzj3+lzj12）进行枣树枝条发酵实验。表3：组合8各种促生能力测定结果表4：复合菌群的促生能力测定5枣树枝条发酵实验将保存的4株菌平板划线活化菌种，接种环接种至液体培养基中，在28℃，150r/min摇床震荡培养12h，为ⅰ级种液，按4%的量取ⅰ级种液转接至细菌基本培养基中扩大培养15h，为ⅱ级种液，培养后通过调整菌液od600，确定菌量达1.5×108cfu/ml左右，将各ⅱ级种液按体积比1：1：1：1混匀即得菌群。以粉碎的枣树枝条为营养源，按表5所示的配方制备固体发酵培养基，该基本固体发酵培养基中ph自然、料水比1：1.5，将构建的菌群按15%接种量接种，置于28℃恒温静止发酵培养8d，每间隔12h扣料一次，使其均匀生长，采用平板菌落计数法统计复合菌在固体发酵中的生长情况，每个梯度设3个重复，其中，平板计数培养基采用lb培养基，结果见图1和图2。表5：枣树枝条发酵培养基配方编号麸皮mgso4·7h2ok2hpo4·3h2ocacl2（nh4）2so4naci枣树枝条15%0.05%0.3%0.01%0.1%0.08%94.46%210%0.1%0.5%0.008%0.5%0.06588.832%如图1-图2所示，所述复合菌群能够很好地利用枣树枝条为营养业进行生长繁殖，发酵培养5-6天菌数达到最高。以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变化或修改，这并不影响本发明的实质内容。在不冲突的情况下，本申请的实施例和实施例中的特征可以任意相互组合。当前第1页12