本发明涉及生物肥料领域，尤其涉及一种具有防治烟草土传病害功能的生物有机肥及其制备方法。
背景技术：
：在农业生产过程中，植物病原真菌和细菌很易感染植物，每年因此而造成数千万元的经济损失，如何控制疾病、维持植物的正常生长一直是科研工作者研究的热点。化学农药可以有效的控制真菌和细菌病害，在植病防治上发挥了巨大的作用。但是随着人们对一化学农药更多的认识，比如它引起土壤、水体和大气的污染，农副产品中农药残留增加，直接危害了人类的健康及生存，以及病原菌的抗药性等问题，致使许多农药的使用受到了限制，由此加速了人们去寻求新的安全有效的植物病害防治途径。利用自然环境中的拮抗微生物防止植物病原的侵袭，也就是常说的生物防治，这样不仅可以避免像化学农药引起的抗药性问题，而且对环境和人类健康都是安全的。生防菌是指可以用来杀灭或压低病原生物数量以控制植物病害发生、发展的一类有益微生物，有益微生物亦称拮抗微生物或生防菌。经研究发现，生防菌的活性在防治植物病害的发生，减少环境污染等方面起关键作用，要获得较好的治疗效果，生防菌必需达到一定的数量。但是，由于生防菌的活菌期时间短，在加工和贮藏过程中保证生物活性是其产品面临的巨大挑战。技术实现要素：本发明的目的在于针对现有技术的不足而提供一种具有防治烟草土传病害功能的生物有机肥及其制备方法，为了解决上述问题，提高生产效率与产品质量，本申请采用有机肥作为生防菌的有效载体，利用有机质作为菌种的营养物质，使生防菌的活性得以长期保持，并与菌种起到互相促进的作用，从而在生物防治的过程中达到良好的效果，在施用基肥的同时对土传病害进行防控，有效替代化学农药的使用，减少环境污染，提高作物安全性。为达到上述目的，本发明通过以下技术方案来实现。一种具有防治烟草土传病害功能的生物有机肥，它包括功能菌种发酵液和生物有机肥，所述功能菌种发酵液的添加比例为总重量份数的0.1％～0.3％；所述功能菌种发酵液由贝莱斯芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌发酵液组成，所述贝莱斯芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌发酵液的体积比为：0.5～1.5:0.5～1.5；所述贝莱斯芽孢杆菌的保藏登记号为cgmccno.19513；所述解淀粉芽孢杆菌的保藏登记号为cgmccno.19514。生物有机肥的制备方法包括以下步骤，步骤一，将生物有机肥发酵腐熟；步骤二，功能菌种的添加，生物有机肥发酵完成后，将功能菌种发酵液添加到肥料中，混合均匀，备用；步骤三，将步骤二中混合物筛分、包装后，即得生物有机肥成品。进一步的，所述步骤一中的生物有机肥的发酵腐熟的工艺包括以下步骤：第一步，有机肥料的发酵，按照重量份数计，称取粉状或片状的菜籽枯750-1000份、菊花渣0-100份、活化腐植酸0-150份、腐熟剂2-5份均匀混合后，发酵物料的c/n为25-30:1，调节物料水份为45％-55％之间，ph为6.5-7.5之间，将物料堆码发酵，发酵温度至55℃开始翻堆，控制发酵温度为55-65℃，发酵时间为15-18天，即得发酵好的有机肥料；第二步，有机肥料的后熟，将第一步中发酵好的有机肥料转移到后熟车间，在通风静置的条件下进行10-15天的后熟。进一步的，所述步骤二中的功能菌种发酵液的制备方法包括以下步骤，第一步，菌种活化，将-80℃下保存的贝莱斯芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌在lb固体培养基上分别进行活化，采用划线培养的方式，于34～37℃条件下培养24～48h，挑取单菌落在lb固体培养基上继续进行划线培养，在34～37℃条件下培养24～48h，得活化的菌株；第二步，种子液制备，用无菌接种环刮取一环第一步中活化的菌株分别接种到50mllb液体培养基中，在温度为35℃、转速为160rpm条件下培养24h，得两株菌株的种子液；第三步，发酵液制备，按照菌种种子液、培养液体积比为1：120的比例将第二步所得的种子液接入到车间发酵料培养基中，在温度为36.5℃～37.5℃，转速为120rpm/min条件下分别培养25～30h，得发酵液，步骤四，复合菌剂制备，将第三步中所得的发酵液中按照贝莱斯芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌体积比为0.5～1.5:0.5～1.5的比例进行混配，得到功能菌种发酵液。进一步的，所述第二步中lb液体培养基的组成成分及其配比为：细菌学蛋白胨10g，酵母提取粉5g，氯化钠10g，水1l，即得液体培养基。进一步的，所述第一步中lb固体培养基的组成成分及其配比为：细菌学蛋白胨10g，酵母提取粉5g，氯化钠10g，水1l，琼脂粉7.5g。进一步的，所述第三步中车间发酵培养基的组成成分及其重量百分比为：黄豆粉1.0～1.6％、蔗糖0.1～0.5％、蛋白胨0.2～0.6％、玉米粉0.2～0.6％、碳酸钙0.3～0.9％、鱼粉0.1～0.3％、硫酸铵0.01～0.08％、硫酸镁0.02～0.05％、磷酸二氢钾0.01～0.04％、磷酸氢二钾0.02～0.05％、硫酸锰0.01～0.04％、氢氧化钠0.01～0.04％、氯化钠0.02～0.03％、消泡剂0.5～1.5％，所述车间发酵培养基用盐酸、氢氧化钠调节ph至6.8～7.5。进一步的，所述步骤四中功能菌种发酵液的有效活菌数大于2.0×1010cfu/ml。上述贝莱斯芽孢杆菌(bacillusvelezensis),保藏编号cgmccno.19513,保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2020年3月26日。编号：ywf2019-1。上述解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens),保藏编号cgmccno.19514,保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2020年3月26日。编号：ywf2019-2。本发明与现有技术比较具有以下优点：1、防效优良本发明中的复合菌剂对于青枯病、黑胫病等烟草土传病害具有优良的防控效果，采用添加了复合菌剂的生物有机肥在烟草种植前期进行病害预防，通过微生物的竞争占位作用和拮抗作用，对青枯病和黑胫病等病害形成防控。2、使用方便本发明中的生物有机肥在烟草移栽前作为基肥施用，可采用塘施、穴施、条施、环施的施肥方式，使用方便，只需一次使用，即可形成有效防护，节约大量人工和时间。3、安全环保本发明中的功能菌种ywf2019-1和ywf2019-2是由自然界中筛选分离得到，未进行基因改造，田间使用不具有风险，对作物、动物和人体均不产生危害，可实现田间、作物、水源无污染、无残留，与常规农药相比安全性大大提高，有利于有机农业的发展。具体实施方式下面结合实施例对本发明做进一步说明，但不局限于说明书上的内容。一种具有防治烟草土传病害功能的生物有机肥，它包括功能菌种发酵液和生物有机肥，功能菌种发酵液的添加比例为总重量份数的0.1％～0.3％；功能菌种为一种芽孢杆菌复合菌剂，由一株贝莱斯芽孢杆菌和一株解淀粉芽孢杆菌组成，其中贝莱斯芽孢杆菌编号为ywf2019-1，其保藏登记号为cgmccno.19513，解淀粉芽孢杆菌编号为ywf2019-2，其保藏登记号为cgmccno.19514，由云南省微生物发酵工程研究中心有限公司进行保藏。芽孢杆菌复合菌剂的制备方法：步骤一，将有机肥料发酵腐熟；有机肥料发酵腐熟的工艺符合ny525-2012的技术标准；步骤二，功能菌种的添加，有机肥料发酵完成后，将功能菌种发酵液添加到肥料中，混合均匀，功能菌种发酵液的添加比例为总重量份数的0.1％～0.3％；步骤三，将步骤二中混合物，过20目筛分，取筛下物，包装后，即得生物有机肥成品。有机肥料发酵腐熟的工艺步骤包括：步骤一，有机肥料的发酵，按照重量份数计，称取粉状或片状的菜籽枯750-1000份、菊花渣0-100份、活化腐植酸0-150份、腐熟剂2-5份均匀混合后，发酵物料的c/n为25-30:1。调节物料水份为45％-55％之间，ph为6.5-7.5之间，将物料堆码发酵，发酵温度至55℃开始翻堆，每天翻堆一至两次，控制发酵温度为55-65℃，发酵时间为15-18天，即得发酵好的有机肥料；步骤二，有机肥料的后熟，将发酵好的有机肥料转移到后熟车间，在通风静置的条件下进行10-15天的后熟，以保障腐熟过程的完全，避免肥料二次发热。复合菌剂发酵液的制备步骤包括：步骤一，菌种活化：将-80℃下保存的芽孢杆菌菌株ywf2019-1和ywf2019-2在lb固体培养基上分别进行活化，采用划线培养的方式，于34～37℃条件下培养24～48h，挑取单菌落在lb固体培养基上继续进行划线培养，在34～37℃条件下培养24～48h，得活化的菌株；步骤二，种子液制备：用无菌接种环刮取一环第一步中活化的菌株分别接种到50mllb液体培养基中，在温度为35℃、转速为160rpm条件下培养24h，得两株菌株的种子液；步骤三，发酵液制备：按照菌种种子液、培养液体积比为1：120的比例将步骤(2)所得的种子液接入到车间发酵料培养基中，在温度为36.5℃～37.5℃，转速为120rpm/min条件下分别培养25～30h，得发酵液，两株菌株均为芽孢杆菌，活性相似，所得发酵液的有效活菌数均大于2.0×1010cfu/ml；步骤四，复合菌剂制备：将第步骤三中所得的菌液中按照ywf2019-1：ywf2019-2＝0.5～1.5:0.5～1.5的体积比进行混配，得到复合菌剂。lb液体培养基的组成成分及其配比为：细菌学蛋白胨10g，酵母提取粉5g，氯化钠10g，水1l，即得液体培养基。lb固体培养基的组成成分及其配比为：细菌学蛋白胨10g，酵母提取粉5g，氯化钠10g，水1l，琼脂粉7.5g。车间发酵培养基的组成成分及其重量百分比为：黄豆粉1.0～1.6％、蔗糖0.1～0.5％、蛋白胨0.2～0.6％、玉米粉0.2～0.6％、碳酸钙0.3～0.9％、鱼粉0.1～0.3％、硫酸铵0.01～0.08％、硫酸镁0.02～0.05％、磷酸二氢钾0.01～0.04％、磷酸氢二钾0.02～0.05％、硫酸锰0.01～0.04％、氢氧化钠0.01～0.04％、氯化钠0.02～0.03％、消泡剂0.5～1.5％。两株菌株采用相同的培养基进行培养。车间发酵培养基用盐酸、氢氧化钠调节ph至6.8～7.5。下面以具体实施例来说明。实施例1：一种具有防治烟草土传病害功能的生物有机肥，它包括功能菌种发酵液和生物有机肥，功能菌种发酵液的添加比例为总重量份数的0.1％；一种具有防治烟草土传病害功能的生物有机肥的制备方法，它包括以下步骤：步骤一，将有机肥料发酵腐熟；步骤二，功能菌种的添加，有机肥料发酵完成后，将功能菌种发酵液添加到肥料中，混合均匀，功能菌种发酵液的添加比例为总重量份数的0.1％；步骤三，将步骤二中混合物筛分、包装后，即得生物有机肥成品。有机肥料发酵腐熟的工艺步骤包括：步骤一，有机肥料的发酵，按照重量份数计，称取粉状或片状的菜籽枯750份、菊花渣100份、活化腐植酸150份、腐熟剂5份均匀混合后，发酵物料的c/n为25:1。调节物料水份为45％，ph为6.5，将物料堆码发酵，发酵温度至55℃开始翻堆，控制发酵温度为55-65℃，发酵时间为15-18天，即得发酵好的有机肥料；步骤二，有机肥料的后熟，将发酵好的有机肥料转移到后熟车间，在通风静置的条件下进行10-15天的后熟，以保障腐熟过程的完全，避免肥料二次发热。复合菌剂发酵液的制备步骤包括：步骤一，菌种活化：将-80℃下保存的芽孢杆菌菌株ywf2019-1和ywf2019-2在lb固体培养基上分别进行活化，采用划线培养的方式，于34℃条件下培养48h，挑取单菌落在lb固体培养基上继续进行划线培养，在34℃条件下培养48h，得活化的菌株；步骤二，种子液制备：用无菌接种环刮取一环第一步中活化的菌株分别接种到50mllb液体培养基中，在温度为35℃、转速为160rpm条件下培养24h，得两株菌株的种子液；步骤三，发酵液制备：按照菌种种子液、培养液体积比为1：120的比例将步骤(2)所得的种子液接入到车间发酵料培养基中，在温度为36.5℃，转速为120rpm/min条件下分别培养30h，得发酵液，两株菌株均为芽孢杆菌，活性相似，所得发酵液的有效活菌数均大于2.0×1010cfu/ml；步骤四，复合菌剂制备：将第三步中所得的菌液中按照ywf2019-1：ywf2019-2＝0.5:1.5的体积比进行混配，得到复合菌剂。lb液体培养基的组成成分及其配比为：细菌学蛋白胨10g，酵母提取粉5g，氯化钠10g，水1l，即得液体培养基。lb固体培养基的组成成分及其配比为：细菌学蛋白胨10g，酵母提取粉5g，氯化钠10g，水1l，琼脂粉7.5g。车间发酵培养基的组成成分及其重量百分比为：黄豆粉1.0％、蔗糖0.5％、蛋白胨0.2％、玉米粉0.6％、碳酸钙0.3、鱼粉0.3％、硫酸铵0.01％、硫酸镁0.05％、磷酸二氢钾0.01％、磷酸氢二钾0.05％、硫酸锰0.01％、氢氧化钠0.04％、氯化钠0.02％、消泡剂1.5％。两株菌株采用相同的培养基进行培养。车间发酵培养基用盐酸、氢氧化钠调节ph至6.8。实施例2：一种具有防治烟草土传病害功能的生物有机肥，它包括功能菌种发酵液和生物有机肥，功能菌种发酵液的添加比例为总重量份数的0.3％；一种具有防治烟草土传病害功能的生物有机肥的制备方法，它包括以下步骤：步骤一，将有机肥料发酵腐熟；步骤二，功能菌种的添加，有机肥料发酵完成后，将功能菌种发酵液添加到肥料中，混合均匀，功能菌种发酵液的添加比例为总重量份数的0.3％；步骤三，将步骤二中混合物筛分、包装后，即得生物有机肥成品。进一步的，所述有机肥料发酵腐熟的工艺步骤包括：步骤一，有机肥料的发酵，按照重量份数计，称取粉状或片状的菜籽枯1000份、腐熟剂2份均匀混合后，发酵物料的c/n为30:1。调节物料水份为55％，ph为7.5，将物料堆码发酵，发酵温度至55℃开始翻堆，控制发酵温度为55-65℃，发酵时间为15-18天，即得发酵好的有机肥料；步骤二，有机肥料的后熟，将发酵好的有机肥料转移到后熟车间，在通风静置的条件下进行10-15天的后熟，以保障腐熟过程的完全，避免肥料二次发热。复合菌剂发酵液的制备步骤包括：步骤一，菌种活化：将-80℃下保存的芽孢杆菌菌株ywf2019-1和ywf2019-2在lb固体培养基上分别进行活化，采用划线培养的方式，于37℃条件下培养24h，挑取单菌落在lb固体培养基上继续进行划线培养，在37℃条件下培养24h，得活化的菌株；步骤二，种子液制备：用无菌接种环刮取一环第一步中活化的菌株分别接种到50mllb液体培养基中，在温度为35℃、转速为160rpm条件下培养24h，得两株菌株的种子液；步骤三，发酵液制备：按照菌种种子液、培养液体积比为1：120的比例将步骤(2)所得的种子液接入到车间发酵料培养基中，在温度为37.5℃，转速为120rpm/min条件下分别培养25h，得发酵液，两株菌株均为芽孢杆菌，活性相似，所得发酵液的有效活菌数均大于2.0×1010cfu/ml；步骤四，复合菌剂制备：将第三步中所得的菌液中按照ywf2019-1：ywf2019-2＝1.5:0.5的体积比进行混配，得到复合菌剂。lb液体培养基的组成成分及其配比为：细菌学蛋白胨10g，酵母提取粉5g，氯化钠10g，水1l，即得液体培养基。lb固体培养基的组成成分及其配比为：细菌学蛋白胨10g，酵母提取粉5g，氯化钠10g，水1l，琼脂粉7.5g。车间发酵培养基的组成成分及其重量百分比为：黄豆粉1.6％、蔗糖0.1％、蛋白胨0.6％、玉米粉0.2％、碳酸钙0.9％、鱼粉0.1％、硫酸铵0.08％、硫酸镁0.02％、磷酸二氢钾0.04％、磷酸氢二钾0.02％、硫酸锰0.04％、氢氧化钠0.01％、氯化钠0.03％、消泡剂0.5％。两株菌株采用相同的培养基进行培养。车间发酵培养基用盐酸、氢氧化钠调节ph至7.5。实施例3：一种具有防治烟草土传病害功能的生物有机肥，它包括功能菌种发酵液和生物有机肥，功能菌种发酵液的添加比例为总重量份数的0.2％；一种具有防治烟草土传病害功能的生物有机肥的制备方法，它包括以下步骤：步骤一，将有机肥料发酵腐熟；步骤二，功能菌种的添加，有机肥料发酵完成后，将功能菌种发酵液添加到肥料中，混合均匀，功能菌种发酵液的添加比例为总重量份数的0.2％；步骤三，将步骤二中混合物筛分、包装后，即得生物有机肥成品。有机肥料发酵腐熟的工艺步骤包括：步骤一，有机肥料的发酵，按照重量份数计，称取粉状或片状的菜籽枯850份、菊花渣50份、活化腐植酸100份、腐熟剂3份均匀混合后，发酵物料的c/n为28:1。调节物料水份为50％，ph为7，将物料堆码发酵，发酵温度至55℃开始翻堆，控制发酵温度为55-65℃，发酵时间为15-18天，即得发酵好的有机肥料；步骤二，有机肥料的后熟，将发酵好的有机肥料转移到后熟车间，在通风静置的条件下进行10-15天的后熟，以保障腐熟过程的完全，避免肥料二次发热。复合菌剂发酵液的制备步骤包括：第一步，菌种活化：将-80℃下保存的芽孢杆菌菌株ywf2019-1和ywf2019-2在lb固体培养基上分别进行活化，采用划线培养的方式，于35℃条件下培养36h，挑取单菌落在lb固体培养基上继续进行划线培养，在35℃条件下培养36h，得活化的菌株；第二步，种子液制备：用无菌接种环刮取一环第一步中活化的菌株分别接种到50mllb液体培养基中，在温度为35℃、转速为160rpm条件下培养24h，得两株菌株的种子液；第三步，发酵液制备：按照菌种种子液、培养液体积比为1：120的比例将步骤(2)所得的种子液接入到车间发酵料培养基中，在温度为37℃，转速为120rpm/min条件下分别培养28h，得发酵液，两株菌株均为芽孢杆菌，活性相似，所得发酵液的有效活菌数均大于2.0×1010cfu/ml；第四步，复合菌剂制备：将第三步中所得的菌液中按照ywf2019-1：ywf2019-2＝1:1的体积比进行混配，得到复合菌剂。lb液体培养基的组成成分及其配比为：细菌学蛋白胨10g，酵母提取粉5g，氯化钠10g，水1l，即得液体培养基。lb固体培养基的组成成分及其配比为：细菌学蛋白胨10g，酵母提取粉5g，氯化钠10g，水1l，琼脂粉7.5g。车间发酵培养基的组成成分及其重量百分比为：黄豆粉1.3％、蔗糖0.3％、蛋白胨0.3％、玉米粉0.4％、碳酸钙0.5％、鱼粉0.2％、硫酸铵0.05％、硫酸镁0.03％、磷酸二氢钾0.02％、磷酸氢二钾0.04％、硫酸锰0.02％、氢氧化钠0.03％、氯化钠0.02％、消泡剂1.2％。两株菌株采用相同的培养基进行培养。车间发酵培养基用盐酸、氢氧化钠调节ph至7.2。效果验证：生物有机肥对土传病害田间防效及根际土壤微生物的影响1试验材料供试肥料：生物有机肥为抗烟草黑胫病、青枯病生物有机肥。供试烟草品种：k326。2试验地点云南省保山市腾冲市界头镇示范区。试验地选取连作青枯病/黑胫病高发地块。3试验方法3.1试验设计本试验设4个处理，每处理设3次重复，共计12个小区，每小区面积约40m2,每小区栽烟66株，随机区组排列，行距为1.2m，株距为0.5m，四周设保护行，除保护行外，试验地面积为480m2。小区布置如下所示。试验除按方案要求的施用生物有机肥外，其他管理措施同一般烟田生产。处理1：实施例1配方的生物有机肥50kg/亩处理2：实施例2配方的生物有机肥50kg/亩处理3：实施例3配方的生物有机肥50kg/亩对照：有机肥料50kg/亩3.2田间试验病害调查烟草病害发生情况按gb/23222-2008《烟草病虫害分级及调查方法》国家标准调查。结合当地的病害发生特点，主要对青枯病和黑胫病进行系统调查，调查每个小区的发病株数及发病级数，计算发病率。病害调查可与测定烟草农艺性状同步进行。根据青枯病或黑胫病的发生情况，在旺长初期开始调查，每处理固定3点调查，每点调查5株，共15株。每隔5天调查一次，连续调查5次。病情统计方法：发病率(％)＝100×发病株数/调查总株数；病情指数＝100×(σ各级病株数×该病级值)/(调查总株数×最高级值)；相对防效(％)＝100×(对照区病情指数－处理区病情指数)/对照区病情指数4结果与分析田间防治效果如表1和表2所示，处理3对青枯病的防治效果高达100％，对黑胫病的防治效果达到99.29％，处理1和处理2的防治效果不稍差，但对于对照来说起到了明显的防控作用。表1不同处理对青枯病的防治效果处理发病率(％)病情指数防效(％)对照6.674.69-14.443.4426.6523.342.5745.20300100表2不同处理对黑胫病的防治效果处理发病率(％)病情指数防效(％)对照8.725.67-13.153.0146.9122.261.9865.0830.120.0499.29结果表明采用防治青枯病、两黑病的生物有机肥作为基肥，可以有效减少烟草土传病害的发生。本发明的一种具有防治烟草土传病害功能的生物有机肥及其制备方法，在施用基肥的同时对烟草土传病害进行防控，有效替代化学农药的使用，减少环境污染，提高作物安全性。显然，本发明的上述实施方式仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。当前第1页12