专利名称：一种从沉淀组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中回收白蛋白的方法
技术领域：
本发明涉及一种从制备人血浆蛋白的废弃沉淀中回收残留白蛋白的工艺。
背景技术：
白蛋白是人血浆中含量最高的蛋白质，白蛋白作为治疗及营养补充剂在国内外已经大量应用。从人血浆中分离纯化白蛋白经典方法是E.J.Cohn教授创立的低温乙醇分级沉淀技术。该技术通过有效控制蛋白质沉淀的五个因素pH值、温度、蛋白浓度、离子强度、乙醇浓度来逐级沉淀血浆中的不同蛋白质，一般步骤是首先沉淀组分I、II、III，然后沉淀组分IV，最后沉淀组分V即白蛋白粗制品。也可一步反应沉淀出组分I、II、III、IV，然后沉淀组分V得到白蛋白粗制品。
然而由于白蛋白的分离沉淀影响因素多，血浆中的白蛋白往往在分级沉淀的过程中有大量损失，损失率一般在40％，部分白蛋白夹带在组分沉淀I、II、III中，还有部颁白蛋白夹带在组分沉淀IV中，采用一步反应沉淀组分I、II、III、IV的白蛋白损失更多。
因此从组分沉淀中回收白蛋白是一项具有实际意义的工作。传统的白蛋白回收一般采用改变沉淀条件结合柱层析的方法，从组分沉淀中选择性吸附白蛋白从而达到回收的目的。
发明内容
为解决上述问题，本发明的目的是提供一种从沉淀组分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其克服了传统回收工艺中层析柱处理量小、离心分离固液投资大、能耗高的缺点。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是一种从沉淀组分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤①用生理盐水溶解沉淀组分I、II、III、IV配制成蛋白液；②加入稳定剂，加热处理使蛋白液中的杂蛋白变性；③通过加压过滤使固液分离；④将上清液超滤浓缩得到白蛋白粗制品；⑤进一步提纯，除去杂蛋白，制成白蛋白成品。
本发明通过调整蛋白液的pH值、温度、蛋白浓度、离子强度、乙醇浓度，采用热处理除掉杂蛋白结合加压过滤分离技术，使残留在组分I、II、III、IV中的白蛋白能有效回收，回收量约为0.4-0.8千克白蛋白/吨血浆。采用本方法克服传统回收工艺中层析柱处理量小、离心分离固液投资大、能耗高的缺点，能有效提高白蛋白的总收得率，降低了生产成本，提高了生产利润。
具体实施例方式
以下通过详细的白蛋白回收步骤进一步阐述本发明的技术方案，包括以下顺序步骤(按照吨血浆产生的组分沉淀I、II、III、IV计算)首先，将组分沉淀I、II、III、IV用10-12倍重量的生理盐水溶解，配制成蛋白含量3-4％的蛋白液，要保证足够的时间使白蛋白充分溶解。
向上述蛋白液按照每吨血浆添加600-750克稳定剂的比例添加稳定剂，稳定剂可选用辛酸钠，调节pH6.2-6.6，添加乙醇到溶液的百分比含量的6-10％。
然后，将蛋白液加入恒温水箱热处理40-60min，恒温温度控制在63±1.5℃。热处理结束后快速冷却到10-18℃，搅拌一小时以上，调节pH4.0-4.4。
然后进行压滤。压滤前压滤机用含硅藻土的洗液预处理，洗液用蒸馏水300升，酒精28±3升，氯化钠3000克配制成，温度10-18℃。向待压滤的蛋白液中按照每千克血浆添加50克助滤剂硅藻土，然后将其泵入压滤机中过滤，收集滤出液。过滤完毕按照每吨血浆600升洗液的比例用洗液冲洗压滤机，洗出液和滤出液合并。
滤液调节pH7.0-7.2，用规格为NMWL10000的超滤机浓缩到蛋白含量10％即回收白蛋白的粗制品。
最后调整参数进一步除去杂蛋白提高白蛋白的纯度，制成白蛋白的最终成品。
权利要求
1.一种从沉淀组分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤①用生理盐水溶解沉淀组分I、II、III、IV配制成蛋白液；②加入稳定剂，加热处理使蛋白液中的杂蛋白变性；③通过加压过滤使固液分离；④将上清液超滤浓缩得到白蛋白粗制品；⑤进一步提纯，除去杂蛋白，制成白蛋白成品。
2.根据权利要求1所述的一种从沉淀组分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特征在于所述步骤①配制成的蛋白液的蛋白含量为3-4％。
3.根据权利要求1所述的一种从沉淀组分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特征在于所述步骤②中的稳定剂为辛酸钠。
4.根据权利要求1所述的一种从沉淀组分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特征在于所述步骤②中在加热处理前，蛋白液pH调节至6.2～6.6，并添加乙醇到百分比含量的6～10％。
5.根据权利要求1所述的一种从沉淀组分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特征在于所述步骤②中的加热处理，加热温度为63±1.5℃，加热时间为40～60分钟。
6.根据权利要求1所述的一种从沉淀组分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特征在于所述步骤②中加热处理后，快速冷却蛋白液至10～18℃，搅拌1小时以上，并调节pH至4.0～4.4。
7.根据权利要求1所述的一种从沉淀组分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特征在于所述步骤③中，向蛋白液中按照每千克血浆添加50克助滤剂硅藻土后，泵入压滤机中过滤，收集滤出液。
8.根据权利要求1所述的一种从沉淀组分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特征在于所述步骤③中，压滤前的压滤机先用含硅藻土的洗液进行预处理。
9.根据权利要求8所述的一种从沉淀组分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特征在于所述的洗液配比为每1000升蒸馏水加入90±10升乙醇，10000克氯化钠。
10.根据权利要求1所述的一种从沉淀组分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，其特征在于所述步骤④中进行超滤浓缩的溶液pH调节至7～7.2。
全文摘要
本发明公开了一种从沉淀组分I、II、III、IV中回收白蛋白的方法，首先用生理盐水溶解沉淀组分I、II、III、IV配制成蛋白液，然后加热处理使蛋白液中的杂蛋白变性，再通过加压过滤使固液分离，将上清液超滤浓缩得到白蛋白粗制品。本发明通过调整蛋白液的pH值、温度、蛋白浓度、离子强度、乙醇浓度，采用热处理除掉杂蛋白结合加压过滤分离技术，使残留在沉淀组分中的白蛋白能有效回收，回收量约为0.4－0.8千克白蛋白/吨血浆。采用本方法克服传统回收工艺中层析柱处理量小、离心分离固液投资大、能耗高的缺点，能有效提高白蛋白的总收得率，降低了生产成本，提高了生产利润。
文档编号C07K1/00GK1660903SQ20041007749
公开日2005年8月31日 申请日期2004年12月22日 优先权日2004年12月22日
发明者朱光祖, 梅伟伶 申请人:三九集团湛江开发区双林药业有限公司