Parp抑制剂的制作方法

专利名称：Parp抑制剂的制作方法
专利说明PARP抑制剂 本发明涉及琥珀酰亚胺衍生物和它们作为药物的用途。确切而言，本发明涉及这些化合物抑制聚(ADP-核糖)聚合酶活性的用途，该酶也称作聚(ADP-核糖)合成酶和聚ADP-核糖基转移酶，通常被称为PARP。
哺乳动物酶PARP(一种113kDa的多结构域蛋白质)通过其识别和迅速结合DNA单链或双链断裂的能力而在DNA损伤的信号传输中有牵连(D′Amours等人，Biochem.J.，342，249-268(1999))。
若干观察结果已经得出结论，PARP参与多种DNA-相关功能，包括基因扩增、细胞分裂、分化、细胞程序死亡、DNA碱基切除修复，以及影响端粒长度和染色体稳定性(d′Adda di Fagagna等人，Nature Gen.，23(1)，76-80(1999))。
对PARP调控DNA修复和其他过程的机理研究已经确认它在细胞核内聚(ADP-核糖)链生成中的重要性(Althaus，F.R.和Richter，C.，“ADP-Ribosylation of ProteinsEnzymology and Biological Significance”，Springer-Verlag，Berlin(1987))。与DNA结合的活化的PARP利用NAD在多种核靶蛋白质上合成聚(ADP-核糖)，包括拓扑异构酶、组蛋白和PARP本身(Rhun等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.，245，1-10(1998))。
聚(ADP-核糖基)化作用也与恶性转化有关。例如，PARP活性在所分离的SV40-转化的成纤维细胞的核中更高，而白血病细胞和结肠癌细胞都显示比相当的正常白细胞和结肠粘膜更高的酶活性(Miwa等人，Arch.Biochem.Biophys.，181，313-321(1977)；Burzio等人，Proc.Soc.Exp.Bioi.Med.，149，933-938(1975)；以及Hirai等人，Cancer Res.，43，3441-3446(1983))。
PARP的大量低分子量抑制剂已经用于阐明聚(ADP-核糖基)化作用在DNA修复中的功能作用。在经烷基化剂处理的细胞中，PARP的抑制引起DNA-链断裂和细胞杀死的显著增加(Durkacz等人，Nature，283，593-596(1980)；Berger，N.A.，Radiation Research，101，4-14(1985))。
随后，这类抑制剂已经显示通过抑制潜在致命性损伤的修复而增强放射响应的效果(Ben-Hur等人，British Journal of Cancer，49(增刊VI)，34-42(1984)；Schlicker等人，Int.J.Radiat.Bioi.，75，91-100(1999))。PARP抑制剂已据报道在放射敏感的低氧肿瘤细胞中有效(US 5,032,617；US5,215,738和US 5,041,653)。
此外，PARP剔除(PARP-/-)的动物显示响应于烷基化剂和γ-照射的基因组不稳定性(Wang等人，Genes Dev.，9，509-520(1995)；Menissier deMurcia等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，94，7303-7307(1997))。
PARP的作用已经在某些血管疾病、脓毒性休克、缺血损伤和神经毒性中得到证明(Cantoni等人，Biochim.Biophys.Acta，1014，1-7(1989)；Szabo等人，J.Clin.Invest.，100，723-735(1997))。引起随后被PARP识别的DNA链断裂的氧自由基DNA损伤是对这类疾病状态的主要贡献因素，如PARP抑制剂研究所示(Cosi等人，J.Neurosci.Res.，39，38-46(1994)；Said等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，93，4688-4692(1996))。最近，PARP已被证明在出血性休克的发病中起作用(Liaudet等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，97(3)，10203-10208(2000))。
也已证明，哺乳动物细胞的高效逆病毒感染受到PARP活性抑制的阻滞。重组逆病毒载体感染的这类抑制作用发生在多种不同的细胞类型中(Gaken等人，J.Virology，70(6)，3992-4000(1996))。PARP抑制剂因而已被开发用在抗病毒疗法和癌症治疗中(WO 91/18591)。
此外，PARP抑制据推测可延缓人成纤维细胞老化特征的出现(Rattan和Clark，Biochem.Biophys.Res.Comme 201(2)，665-672(1994))。这可能涉及PARP在控制端粒功能中所起的作用(d′Addadi Fagagna等人，NatureGen.，23(1)，76-80(1999))。
PARP亦被认为与炎性肠道疾病(Szabo C.，“聚(ADP核糖)聚合酶的激活在休克与炎症的发病机理中的作用，PARP作为治疗靶”；Ed J.Zhang，2002by CRC Press；169-204)、溃疡性结肠炎(Zingarelli，B等人.，Immunology，113(4)，509-517(2004))和克隆氏疾病(Jijon，H.B.等人，Am.J.Physiol.Gastrointest.Liver Physiol.，279，G641-G651(2000))的治疗有关。
有些本发明人以前已经描述过(WO 02/36576)一类1(2H)-酞嗪酮化合物，它们充当PARP抑制剂。这些化合物具有下列通式
其中A和B一起代表任选被取代的稠合芳族环，其中Rc由-L-RL所代表。大量实例是下式
其中R代表一个或多个任选的取代基。
本发明人现已发现抑制PARP活性的另一类化合物。
因此，本发明的第一方面提供了式(I)化合物
和其异构体、盐、溶剂化物、化学保护形式和前药，其中R2、R3、R4和R5独立地选自H、C1-7烷氧基、氨基、卤代基或羟基； n是1或2； RN1和RN2独立地选自H和R，其中R是任选被取代的C1-10烷基、C3-20杂环基和C5-20芳基； 或RN1和RN2，与它们连接的氮原子一起形成任选的取代的五至七元含氮杂环； Het选自 (i)

其中Y1和Y3独立地选自CH和N，Y2是选自CX和N，X是H、Cl或F；和 (ii)

其中Q是O或S。
Het可能为

本发明的第二方面提供药物组合物，其包含第一方面化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
本发明的第三方面提供用在人或动物体治疗方法中的第一方面化合物。
本发明的第四方面提供了如发明的第一方面定义的化合物用于药物制备的用途 (a)抑制PARP(PARP-1与/或PARP-2)的活性； (b)治疗血管疾病、脓毒性休克、脑血管和心血管的局部缺血性损伤、脑血管及心血管的再灌注损伤、包括急性与慢性中风与帕金森病的神经毒性；出血性休克、炎性疾病例如关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎与克隆氏病、多发性硬化症；糖尿病的继发效应；以及心血管术后的细胞毒性的急性治疗或通过PARP活性的抑制能够改善的疾病； (c)用于癌症治疗的辅助治疗或改善肿瘤细胞对电离辐射或化疗药的治疗效果。
特别地，在本发明的第一方面中定义的化合物可以与以下药物作为抗癌联合治疗(或辅助治疗)一同使用烷化剂例如甲烷磺酸甲酯(MMS)、替莫唑胺与氮烯唑胺(DTIC)以及拓扑异构酶-I抑制剂象托泊替康、依立替康、卢比替康(Rubitcan)、依沙替康、勒托替康、Gimetecan、氟替康(高喜树碱)及7-取代non-silatecans；7-甲硅烷基喜树碱、BNP 1350；及非喜树碱拓扑异构酶-I抑制剂例如indolocarbazoles亦是双重拓扑异构酶-I与II抑制剂，象benzophenazines、XR 11576/MLN 576和benzopyridoindoles一样。这些组合可以根据特定药物的优选施用方法通过例如静脉制剂或通过口服施用。
本发明的另一方面还提供了如本发明的第一方面所定义的化合物用于制备用于癌症治疗的辅助用药物或改善肿瘤细胞对使用离子辐射或化疗药物的效果的药物的用途。
本发明的其他更进一步的方面提供了通过PARP的抑制使疾病得以改善的治疗，其包括给有治疗需要的个体施用治疗有效量的如第一方面所定义的化合物，优选地以药物组合物的形式及对癌症的治疗，包括给需要治疗的个体以组合的方式施用治疗有效量的如第一方面所定义的化合物，优选地以药物组合物的形式，与电离辐射或化疗药同时或依次地使用。
在本发明的进一方面中，化合物可以用于制备用于治疗癌症的药物，该癌症是同源重组(HR)依赖性DNA DSB修复活性缺陷的，或者用于治疗癌症患者，该癌症是HR依赖性DNA DSB修复活性缺陷的，包括对所述患者施用治疗有效量的化合物。
HR依赖性DNA DSB修复途径经由同源机理修复DNA的双链断裂(DSB)，以重新生成连续的DNA螺旋(K.K.Khanna和S.P.Jackson，Nat.Genet.27(3)247-254(2001))。HR依赖性DNA DSB修复途径的组分包括但不限于ATM(NM_000051)、RAD51(NM_002875)、RAD51L1(NM_002877)、RAD51C(NM_002876)、RAD51L3(NM_002878)、DMC1(NM_007068)、XRCC2(NM_005431)、XRCC3(NM_005432)、RAD52(NM_002879)、RAD54L(NM_003579)、RAD54B(NM_012415)、BRCA1(NM_007295)、BRCA2(NM_000059)、RAD50(NM_005732)、MRE11A(NM_005590)和NBS1(NM_002485)。其他牵涉在HR依赖性DNADSB修复途径中的蛋白质包括调节因子，例如EMSY(Hughes-Davies等人，Cell，115，523-535页)。HR组分也描述在Wood等人，Science，291，1284-1289(2001)中。
HR依赖性DNA DSB修复缺陷的癌症可以包含或者由一种或多种这样的癌细胞组成，它们相对于正常的细胞而言通过该途径修复DNA DSB的能力减低或者取消，即HR依赖性DNA DSB修复途径的活性可能在一种或多种癌细胞中被降低或者取消。
HR依赖性DNA DSB修复途径的一种或多种组分的活性可能在患有HR依赖性DNA DSB修复缺陷癌症的个体的一种或多种癌细胞中被消除。HR依赖性DNA DSB修复途径的组分在本领域中被充分表征(例如参见Wood等人，Science，291，1284-1289(2001))，并包括上文所列举的组分。
在有些优选的实施方式中，癌细胞可能具有BRCA1和/或BRCA2缺陷的表型，即BRCA1和/或BRCA2活性在该癌细胞中被降低或消除。具有这种表型的癌细胞可能是BRCA1和/或BRCA2缺陷的，即BRCA1和/或BRCA2的表达和/或活性可能在该癌细胞中被降低或消除，例如借助编码性核酸的突变或多态性，或者借助编码调节因子的基因的扩增、突变或多态性，例如编码BRCA2调节因子的EMSY基因(Hughes-Davies等人，Cell，115，523-535)，或者借助外遗传机制例如基因启动子甲基化。
BRCA1和BRCA2是已知的肿瘤抑制剂，它们的野生型等位基因经常在杂合载体肿瘤中丧失(Jasin M.，Oncogene，21(58)，8981-93(2002)；Tutt等人，Trends Mol Med.，8(12)，571-6(2002))。BRCA1和/或BRCA2突变与乳腺癌的关联在本领域中已被充分认识(Radice，P.J.，Exp Clin Cancer Res.，21(增刊3)，9-12(2002))。编码BRCA2结合因子的EMSY基因的扩增已知也与乳腺癌和卵巢癌有关。
BRCA1和/或BRCA2中突变的载体也处于卵巢、前列腺和胰腺癌症的升高风险中。
在有些优选的实施方式中，个体就BRCA1和/或BRCA2或其调节剂的一种或多种变异如突变和多态性而言是杂合的。BRCA1和BRCA2变异的检测是本领域熟知的，例如描述在EP 699754；EP 705903；Neuhausen，S.L和Ostrander，E.A.，Genet.Test，1，75-83(1992)；Janatova M.等人，Neoplasm，50(4)，246-50(2003))中。BRCA2结合因子EMSY扩增的测定描述在Hughes-Davies等人，Cell，115，523-535中。
与癌症有关的突变和多态性可以通过检测变异核酸序列的存在而在核酸水平上检测，或者通过检测变异(也就是突变或等位基因变异)多肽的存在而在蛋白质水平上检测。
以上在同时待决的PCT/GB2004/005025和US申请中有所描述，两者均在2004年11月30日提交，题目是“用于癌症治疗的DNA损伤修复抑制剂”，本文引用作为参考。
定义 五至七元含氮杂环此环必须包含至少一个氮原子，且可包含其他杂原子，例如O、S、N。
五至七元含氮杂环如下所示，其中Cn表示环原子数为n。
N1吡咯烷(四氢吡咯)(C5)、吡咯啉(例如，3-吡咯啉，2，5-二氢吡咯)(C5)、2H-吡咯或3H-吡咯(异吡咯，isoazole)(C5)、哌啶(C6)、二氢吡啶(C6)、四氢吡啶(C6)、氮杂(C7)； N2咪唑烷(C5)、吡唑烷(diazolidine)(C5)、咪唑啉(C5)、吡唑啉(二氢吡唑)(C5)、哌嗪(C6)； N1O1四氢唑(C5)、二氢唑(C5)、四氢异唑(C5)、二氢异唑(C5)、吗啉(C6)、四氢嗪(C6)、二氢嗪(C6)、嗪(C6)； N1S1噻唑啉(C5)、噻唑烷(C5)、硫吗啉(C6)； N2O1二嗪(C6)； N1O1S1噻嗪(C6)。
烷基本文所用的术语“烷基”涉及从具有1至20个碳原子(另有指定除外)的烃化合物的碳原子上除去氢原子所得到的一价部分，它可以是脂族的或脂环族的，并且可以是饱和的或不饱和的(例如部分不饱和的、完全不饱和的)。因而，术语“烷基”包括小类链烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基等，见下文的讨论。
就烷基而言，前缀(例如C1-4、C1-7、C1-20、C2-7、C3-7等)表示碳原子数或者碳原子数的范围。例如，本文所用的术语“C1-4烷基”涉及具有1至4个碳原子的烷基。烷基的实例包括C1-4烷基(低级烷基)、C1-7烷基和C1-20烷基。注意第一前缀可以根据其他限制而变化，例如，就不饱和的烷基而言，第一前缀必须至少是2；就环状烷基而言，第一前缀必须至少是3；等等。
(未取代的)饱和烷基的实例包括但不限于甲基(C1)、乙基(C2)、丙基(C3)、丁基(C4)、戊基(C5)、己基(C6)、庚基(C7)、辛基(C8)、壬基(C9)、癸基(C10)、十一基(C11)、十二基(C12)、十三基(C13)、十四基(C14)、十五基(C15)和二十基(C20)。
(未取代的)饱和直链烷基的实例包括但不限于甲基(C1)、乙基(C2)、正丙基(C3)、正丁基(C4)、正戊基(戊基)(C5)、正己基(C6)和正庚基(C7)。
(未取代的)饱和支链烷基的实例包括异丙基(C3)、异丁基(C4)、仲丁基(C4)、叔丁基(C4)、异戊基(C5)和新戊基(C5)。
链烯基本文所用的术语“链烯基”涉及具有一条或多条碳-碳双键的烷基。链烯基的实例包括C2-4链烯基、C2-7链烯基、C2-20链烯基。
(未取代的)不饱和链烯基的实例包括但不限于乙烯基(-CH＝CH2)、1-丙烯基(-CH＝CH-CH3)、2-丙烯基(烯丙基，-CH-CH＝CH2)、异丙烯基(1-甲基乙烯基，-C(CH3)＝CH2)、丁烯基(C4)、戊烯基(C5)和己烯基(C6)。
炔基本文所用的术语“炔基”涉及具有一条或多条碳-碳叁键的烷基。炔基的实例包括C2-4炔基、C2-7炔基、C2-20炔基。
(未取代的)不饱和炔基的实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)和2-丙炔基(炔丙基，-CH2-C≡CH)。
环烷基本文所用的术语“环烷基”涉及也是环状基团的烷基；也就是从碳环化合物碳环的脂环族环原子上除去氢原子所得到的一价部分，该碳环可以是饱和的或不饱和的(例如部分不饱和的、完全不饱和的)，该部分具有3至20个碳原子(另有指定除外)，包括3至20个环原子。因而，术语“环烷基”包括小类环烯基和环炔基。优选地，每个环具有3至7个环原子。环烷基的实例包括C3-20环烷基、C3-15环烷基、C3-10环烷基、C3-7环烷基。
环烷基的实例包括但不限于从下列化合物衍生的那些 饱和的单环烃化合物环丙烷(C3)、环丁烷(C4)、环戊烷(C5)、环己烷(C6)、环庚烷(C7)、甲基环丙烷(C4)、二甲基环丙烷(C5)、甲基环丁烷(C5)、二甲基环丁烷(C6)、甲基环戊烷(C6)、二甲基环戊烷(C7)、甲基环己烷(C7)、二甲基环己烷(C8)、薄荷烷(C10)； 不饱和的单环烃化合物环丙烯(C3)、环丁烯(C4)、环戊烯(C5)、环己烯(C6)、甲基环丙烯(C4)、二甲基环丙烯(C5)、甲基环丁烯(C5)、二甲基环丁烯(C6)、甲基环戊烯(C6)、二甲基环戊烯(C7)、甲基环己烯(C7)、二甲基环己烯(C8)； 饱和的多环烃化合物苧烷(C10)、蒈烷(C10)、蒎烷(C10)、莰烷(C10)、降蒈烷(C7)、降蒎烷(C7)、降冰片烷(C7)、金刚烷(C10)、萘烷(十氢萘)(C10)； 不饱和的多环烃化合物莰烯(C10)、苧烯(C10)、蒎烯(C10)； 具有芳族环的多环烃化合物茚(C9)、二氢化茚(例如2，3-二氢-1H-茚)(C9)、四氢萘(1，2，3，4-四氢萘)(C10)、苊(C12)、芴(C13)、phenalene(C13)、醋菲(C15)、醋蒽(C16)、胆蒽(C20)。
杂环基本文所用的术语“杂环基”涉及从杂环化合物的环原子上除去氢原子所得到的一价部分，该部分具有3至20个环原子(另有指定除外)，其中1至10个是环杂原子。优选地，每个环具有3至7个环原子，其中1至4个是环杂原子。
在这方面，前缀(例如C3-20、C3-7、C5-6等)表示环原子数或者环原子数的范围，无论碳原子还是杂原子。例如，本文所用的术语“C5-6杂环基”涉及具有5或6个环原子的杂环基。
杂环基的实例包括C3-20杂环基、C5-20杂环基、C3-15杂环基、C5-15杂环基、C3-12杂环基、C5-12杂环基、C3-10杂环基、C5-10杂环基、C3-7杂环基、C5-7杂环基和C5-6杂环基。
单环杂环基的实例包括但不限于从下列化合物衍生的那些 N1氮杂环丙烷(C3)、氮杂环丁烷(C4)、吡咯烷(四氢吡咯)(C5)、吡咯啉(例如3-吡咯啉、2，5-二氢吡咯)(C5)、2H-吡咯或3H-吡咯(异吡咯、异吖唑)(C5)、哌啶(C6)、二氢吡啶(C6)、四氢吡啶(C6)、氮杂(C7)； O1氧杂环丙烷(C3)、氧杂环丁烷(C4)、氧杂环戊烷(四氢呋喃)(C5)、氧杂环戊烯(二氢呋喃)(C5)、烷(四氢吡喃)(C6)、二氢吡喃(C6)、吡喃(C6)、氧杂(C7)； S1硫杂环丙烷(C3)、硫杂环丁烷(C4)、硫杂环戊烷(四氢噻吩)(C5)、硫杂环己烷(四氢噻喃)(C6)、硫杂环庚烷(C7)； O2二氧杂环戊烷(C5)、二烷(C6)和二氧杂环庚烷(C7)； O3三烷(C6)； N2咪唑烷(C5)、吡唑烷(二唑烷)(C5)、咪唑啉(C5)、吡唑啉(二氢吡唑)(C5)、哌嗪(C6)； N1O1四氢唑(C5)、二氢唑(C5)、四氢异唑(C5)、二氢异唑(C5)、吗啉(C6)、四氢嗪(C6)、二氢嗪(C6)、嗪(C6)； N1S1噻唑啉(C5)、噻唑烷(C5)、硫代吗啉(C6)； N2O1二嗪(C6)； O1S1氧硫杂环戊烯(C5)和氧硫杂环己烷(噻烷)(C6)；和 N1O1S1噻嗪(C6)。
取代的(非芳族)单环杂环基的实例包括从环状形式的糖类衍生的那些，例如呋喃糖类(C5)，例如阿拉伯呋喃糖、呋喃来苏糖、呋喃核糖和呋喃木糖，和吡喃糖类(C6)，例如别吡喃糖(allopyranose)、阿卓吡喃糖、吡喃葡萄糖、吡喃甘露糖、吡喃古洛糖、吡喃艾杜糖、吡喃半乳糖和吡喃塔罗糖。
螺-C3-7环烷基或杂环基本文所用的术语“螺-C3-7环烷基或杂环基”表示这样一种C3-7环烷基或C3-7杂环基环，与另一个环通过二环共用的单一原子连接。
C5-20芳基本文所用的术语“C5-20芳基”涉及从C5-20芳族化合物的芳族环原子上除去氢原子所得到的一价部分，所述化合物具有一个环或者两个或多个环(例如稠合)，并且具有5至20个环原子，其中至少一个所述环是芳族环。优选地，每个环具有5至7个环原子。
环原子可以都是碳原子，正如“碳芳基”，在这种情况下，该基团可以适宜地被称为“C5-20碳芳基”。
不具有环杂原子的C5-20芳基(也就是C5-20碳芳基)的实例包括但不限于从苯(即苯基)(C6)、萘(C10)、蒽(C14)、菲(C14)和芘(C16)衍生的那些。
或者，环原子可以包括一个或多个杂原子，包括但不限于氧、氮和硫，如“杂芳基”。在这种情况下，该基团可以适宜地被称为“C5-20杂芳基”，其中“C5-20”表示环原子，无论碳原子或杂原子。优选地，每个环具有5至7个环原子，其中0至4个是环杂原子。
C5-20杂芳基的实例包括但不限于从下列化合物衍生的C5杂芳基呋喃(氧杂环戊二烯)、噻吩(硫杂环戊二烯)、吡咯(吖唑)、咪唑(1，3-二唑)、吡唑(1，2-二唑)、三唑、唑、异唑、噻唑、异噻唑、二唑、四唑和三唑；和从下列化合物衍生的CX杂芳基异嗪、吡啶(吖嗪)、哒嗪(1，2-二嗪)、嘧啶(1，3-二嗪，例如胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶)、吡嗪(1，4-二嗪)和三嗪。
杂芳基可以经由碳或杂环原子键合。
包含稠合环的C5-20杂芳基的实例包括但不限于C9杂芳基，衍生自苯并呋喃、异苯并呋喃、苯并噻吩、吲哚、异吲哚；C10杂芳基，衍生自喹啉、异喹啉、苯并二嗪、吡啶并吡啶；C14杂芳基，衍生自吖啶和呫吨。
上述烷基、杂环基和芳基无论单独还是作为另一取代基的一部分，本身可以任选地被一个或多个基团取代，取代基选自它们自身和下文列举的另外取代基。
卤素-F、-Cl、-Br和-I。
羟基-OH。
醚-OR，其中R是醚取代基，例如C1-7烷基(也被称为C1-7烷氧基)、C3-20杂环基(也被称为C3-20杂环氧基)或C5-20芳基(也被称为C5-20芳氧基)，优选C1-7烷基。
硝基-NO2。
氰基(腈、甲腈)-CN。
酰基(酮基)-C(＝O)R，其中R是酰基取代基，例如H、C1-7烷基(也被称为C1-7烷基酰基或C1-7烃酰基)、C3-20杂环基(也被称为C3-20杂环基酰基)或C5-20芳基(也被称为C5-20芳基酰基)，优选C1-7烷基。酰基的实例包括但不限于-C(＝O)CH3(乙酰基)、-C(＝O)CH2CH3(丙酰基)、-C(＝O)C(CH3)3(丁酰基)和-C(＝O)Ph(苯甲酰基、苯酮)。
羧基(羧酸)-COOH。
酯(羧酸酯、羧酸的酯、氧羰基)-C(＝O)OR，其中R是酯取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。酯基的实例包括但不限于-C(＝O)OCH3、-C(＝O)OCH2CH3、-C(＝O)OC(CH3)3和-C(＝O)OPh。
酰氨基(氨基甲酰基、氨甲酰基、氨基羰基、甲酰胺)-C(＝O)NR1R2，其中R1和R2独立地是氨基取代基，如关于氨基所定义的。酰氨基的实例包括但不限于-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHCH3、-C(＝O)N(CH3)2、-C(＝O)NHCH2CH3和-C(＝O)N(CH2CH3)2，以及这样的酰氨基，其中R1和R2与它们所附着的氮原子一起构成杂环结构，例如哌啶子基羰基、吗啉代羰基、硫代吗啉代羰基和哌嗪基羰基。
氨基-NR1R2，其中R1和R2独立地是氨基取代基，例如氢、C1-7烷基(也被称为C1-7烷基氨基或二-C1-7烷基氨基)、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选H或C1-7烷基，或者在“环状”氨基的情况下，R1和R2与它们所附着的氮原子一起构成具有4至8个环原子的杂环。氨基的实例包括但不限于-NH2、-NHCH3、-NHC(CH3)2、-N(CH3)2、-N(CH2CH3)2和-NHPh。环状氨基的实例包括但不限于氮杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶子基、哌嗪基、全氢二氮杂基、吗啉代基和硫吗啉代基。环状氨基可以在它们的环上被本文所定义的任意取代基取代，例如羧基、羧酸酯和酰氨基。
酰基酰氨基(酰基氨基)-NR1C(＝O)R2，其中R1是酰胺取代基，例如氢、C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选H或C1-7烷基，最优选H，R2是酰基取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。酰基酰胺基团的实例包括但不限于-NHC(＝O)CH3、-NHC(＝O)CH2CH3和-NHC(＝O)Ph。R1和R2可以一起构成环状结构，例如琥珀酰亚氨基、马来酰亚氨基和邻苯二酰亚氨基
琥珀酰亚氨基马来酰亚氨基邻苯二酰亚氨基 脲基-N(R1)CONR2R3，其中R2和R3独立地是氨基取代基，如关于氨基所定义的，R1是脲基取代基，例如氢、C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选氢或C1-7烷基。脲基的实例包括但不限于-NHCONH2、-NHCONHMe、-NHCONHEt、-NHCONMe2、-NHCONEt2、-NMeCONH2、NMeCONHMe、-NMeCONHEt、-NMeCONMe2、-NMeCONEt2和-NHCONHPh。
酰氧基(反酯)-OC(＝O)R，其中R是酰氧基取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。酰氧基的实例包括但不限于-OC(＝O)CH3(乙酰氧基)、-OC(＝O)CH2CH3、-OC(＝O)C(CH3)3、-OC(＝O)Ph、-OC(＝O)C6H4F和-OC(＝O)CH2Ph。
巯基-SH。
硫醚(硫化物)-SR，其中R是硫醚取代基，例如C1-7烷基(也被称为C1-7烷硫基)、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。C1-7烷硫基的实例包括但不限于-SCH3和-SCH2CH3。
亚砜(亚磺酰基)-S(＝O)R，其中R是亚砜取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。亚砜基团的实例包括但不限于-S(＝O)CH3和-S(＝O)CH2CH3。
磺酰基(砜)-S(＝O)2R，其中R是砜取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。砜基团的实例包括但不限于-S(＝O)2CH3(甲磺酰基、甲磺酰)、-S(＝O)2CF3、-S(＝O)2CH2CH3和4-甲基苯磺酰基(甲苯磺酰基)。
硫代酰氨基(硫代氨甲酰基)-C(＝S)NR1R2，其中R1和R2独立地是氨基取代基，如关于氨基所定义的。酰氨基的实例包括但不限于-C(＝S)NH2、-C(＝S)NHCH3、-C(＝S)N(CH3)2和-C(＝S)NHCH2CH3。
磺酰氨基-NR1S(＝O)2R，其中R1是氨基取代基，如关于氨基所定义的，R是磺酰氨基取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。磺酰氨基的实例包括但不限于-NHS(＝O)2CH3、-NHS(＝O)2Ph和-N(CH3)S(＝O)2C6H5。
如上所述，构成以上所列取代基的基团、例如C1-7烷基、C3-20杂环基和C5-20芳基，本身可以被取代。因而，上述定义涵盖被取代的取代基。
进一步的优选 下列优选能够应用于本发明的每一方面，只要适用的话。
R2、R3、R4与R5优选地选自H、C1-7烷氧基、Cl和F。如果R2、R3、R4与R5之一是C1-7烷氧基，其优选是OMe。
R2、R3、R4与R5更优选地选自H和F。
R2、R4与R5最优选地是H。R3最优选地选自H和F。
在一些实施方案中，n优选为1。在其他实施方案中，n优选是2。
Het优选是
优选地至Y1、Y2与Y3中两个是N，且更优选地Y1、Y2与Y3中有一个是N或没有任何一个是N。如果Y1、Y2与Y3中的一个是N，优选地是Y1或Y2。
X优选地选自H与F，当n为1时更优选为F，当n为2时更优选为H。
如果Het为

，则Q优选为S。在这些基团中，

是优选的。
如果RN1与RN2选自H与R，则优选RN1是H，RN2是R。R优选是任选地被取代的C1-7烷基或C3-20杂环基，更优选地是被取代的C1-7烷基。C1-7烷基优选地为非取代或被单个取代基取代，其优选地选自C5-20杂环基(例如，哌啶基、N-甲基吡咯基、四氢呋喃基)、C5-20芳基(例如，呋喃基、苯基、吡啶基)、氨基(例如，二甲基氨基)、卤素(例如Cl、F)、羟基、醚(例如，C1-7烷氧基)、硫醚(例如，C1-7烷硫基)。更优选地单取代基其选自C5-20杂环基(例如哌啶基、N-甲基吡咯基、四氢呋喃基)、C5-20芳基(例如呋喃基、苯基、吡啶基)、氨基(例如二甲基氨基)与醚(例如，C1-7烷氧基)。
当RN1与RN2连同它们相连接的氮原子形成五至七元含氮杂环，它们优选地形成式II的基团
其中RN选自 (i)-RII； (ii)-C(＝O)NHRII； (iii)-C(＝S)NHRII； (iv)-S(＝O)2RII；和 (v)-C(＝O)RII， 其中RII如前面所定义(即任选被取代的C1-10烷基、C3-20杂环基和C5-20芳基)。
优选地，RN选自 (i)-C(＝O)NHRIL (ii)-S(＝O)2RII；和 (iii)-C(＝O)RII， 其中RII如前面所定义(即任选被取代的C1-10烷基、C3-20杂环基和C5-20芳基)。
在式II基团中，RII优选地选自任选被取代的C1-10烷基与C5-20芳基。
当RII是C1-10烷基时，其优选地选自C1-7烷基，例如甲基、乙基、异丙基、正丁基、叔丁基和C3-6环烷基，这些基团任选地是取代的。
当RIIC1-10烷基时，且特别是直链和支链的C1-7烷基时，其任选地被单取代或多取代，优选地为单取代，基团选自例如C5-20芳基(例如苯基、甲基苯基、二甲氧基苯基)、C5-20芳氧基(例如，苯氧基)、C3-20杂环基(例如哌啶基)、C1-7烷氧基(例如甲氧基、苄氧基)。
当RII是C5-20芳基时，它可选自任选被取代的C5-6芳基(例如，苯基、唑、异唑、吡唑)和任选被取代的C8-10芳基(例如苄二唑、thianopyrazole)。
当RII是C5-20芳基，特别是C5-6芳基与C8-10芳基时，其任选地由选自以下的一个或多个基团取代，例如卤素(例如F、Cl)、C1-7烷基(例如Me、CF3)、C5-20芳氧基(例如苯氧基)、C1-7烷氧基(例如，甲氧基、苄氧基)、酰胺基(例如-NH-C(＝O)-Me)。
当RN1与RN2连同它们相连接的氮原子形成五至七元含氮杂环时，它们可形成式III的基团
其中Rc优选地选自H；任选被取代的C1-20烷基；任选被取代的C5-20芳基；任选被取代的C3-30杂环基；任选被取代的酰基，其中酰基取代基优选地选自C5-20芳基与C3-20杂环基(例如哌嗪基)；任选被取代的酰氨基，其中氨基优选地选自H和C1-20烷基或连同氮原子形成C5-20杂环基；和任选被取代的酯基，其中酯取代基优选地选自C1-20烷基。
Rc更优选地选自任选被取代的酯基，其中酯取代基优选地选自C1-20烷基。
特别优选的化合物包括53、71、72、74、79和155。
上述优选酌情可以彼此组合在一起。
包括其他形式 上文包括这些取代基的熟知的离子、盐、溶剂合物和被保护形式。例如，对羧酸(-COOH)的称谓还包括阴离子(羧酸根)形式(-COO-)、其盐或溶剂合物以及常规被保护形式。类似地，对氨基的称谓包括质子化形式(-N+HR1R2)、氨基的盐或溶剂合物，例如盐酸盐，以及氨基的常规被保护形式。类似地，对羟基的称谓还包括阴离子形式(-O-)、其盐或溶剂合物以及羟基的常规被保护形式。
异构体、盐、溶剂合物、被保护形式和前药 某些化合物可以存在一种或多种特定的几何、旋光、对映、非对映、差向异构、立体异构、互变异构、构象或端基异构型，包括但不限于顺式(cis)-与反式(trans)-型；E-与Z-型；c-、t-与r-型；内-与外-型；R-、S-与内消旋-型；D-与L-型；d-与l-型；(+)与(-)型；酮基-、烯醇-与烯醇化物-型；顺(syn)-与反(anti)-型；顺错-与反错-型；α-与β-型；轴向与平伏型；船-、椅-、扭曲-、信封-与半椅-型；及其组合，以下统称为“异构体”(或“异构型”)。
如果化合物是结晶形式，则它可以存在多种不同的多晶型。
注意，除了下文关于互变异构型的讨论，特别要从本文所用的术语“异构体”中排除在外的是结构(或构造)异构体(也就是在原子之间的连接而非仅仅是原子的空间位置有差别的异构体)。例如，对甲氧基-OCH3的称谓不被解释为对其结构异构体、即羟甲基-CH2OH的称谓。类似地，对邻-氯苯基的称谓不被解释为对其结构异构体、即间-氯苯基的称谓。不过，对一类结构的称谓也可以包括属于这种类别的结构异构型(例如，C1-7烷基包括正丙基和异丙基；丁基包括正-、异-、仲-与叔-丁基；甲氧基苯基包括邻-、间-与对-甲氧基苯基)。
上述排除不涉及互变异构型，例如酮-、烯醇-和烯醇化物-形式，例如下列互变异构对酮/烯醇、亚胺/烯胺、酰胺/亚氨基醇、脒/脒、亚硝基/肟、硫酮/烯硫醇、N-亚硝基/羟基偶氮和硝基/酸式硝基。
注意在术语“异构体”中特别包括具有一个或多个同位素取代的化合物。例如，H可以是任意同位素形式，包括1H、2H(D)和3H(T)；C可以是任意同位素形式，包括12C、13C和14C；O可以是任意同位素形式，包括16O和18O；等等。
除非另有指定，对特定化合物的称谓包括全部这样的异构型，包括其(完全或部分)外消旋和其他混合物。制备(例如不对称合成)和分离(例如分步结晶和色谱手段)这类异构型的方法是本领域已知的，或者以已知方式调整本文所教导的方法或已知方法而容易获得。
除非另有指定，对特定化合物的称谓也包括其离子、盐、溶剂合物和被保护的形式，如下文所讨论，以及它的不同多晶型。
可能适宜或者需要制备、纯化和/或处理相应的活性化合物的盐，例如药学上可接受的盐。药学上可接受的盐的实例讨论于Berge等人，“药学可接受的盐”，J.Pharm.Sci.，66，1-19(1977)。
例如，如果化合物是阴离子的或者具有可以是阴离子的官能团(例如，-COOH可以是-COO-)，则可以与适合的阳离子生成盐。适合的无机阳离子的实例包括但不限于碱金属离子如Na+和K+，碱土金属阳离子如Ca2+和Mg2+，和其他阳离子如Al3+。适合的有机阳离子的实例包括但不限于铵离子(即NH4+)和取代的铵离子(例如NH3R+、NH2R2+、NHR3+、NR4+)。某些适合的取代的铵离子的实例是从下列衍生的那些乙胺、二乙胺、二环己胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、苄胺、苯基苄胺、胆碱、葡甲胺和氨丁三醇，以及氨基酸如赖氨酸和精氨酸。常见季铵离子的实例是N(CH3)4+。
如果化合物是阳离子性的或者具有可以是阳离子的官能团(例如-NH2可以是-NH3+)，则可以与适合的阴离子生成盐。适合的无机阴离子的实例包括但不限于从下列无机酸衍生的那些盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、亚硫酸、硝酸、亚硝酸、磷酸和亚磷酸。适合的有机阴离子的实例包括但不限于从下列有机酸衍生的那些乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、棕榈酸、乳酸、苹果酸、扑酸、酒石酸、柠檬酸、葡糖酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、天冬氨酸、苯甲酸、肉桂酸、丙酮酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、乙二磺酸、草酸、羟乙磺酸、戊酸和葡糖酸。适合的聚合阴离子的实例包括但不限于从下列聚合酸衍生的那些鞣酸、羧甲基纤维素。
可能适宜或者需要制备、纯化和/或处理相应的活性化合物的溶剂合物。术语“溶剂合物”在本文中在常规意义上用于表示溶质(例如活性化合物、活性化合物的盐)与溶剂的配合物。如果溶剂是水，则溶剂合物适宜被称为水合物，例如一水合物、二水合物、三水合物等。
可能适宜或者需要制备、纯化和/或处理活性化合物的化学保护形式。在本文中使用的术语“化学保护形式”涉及这样的化合物，其中一个或多个反应性官能团被保护免于发生不需要的化学反应，也就是说为被保护的或保护基团(也称被掩蔽或掩蔽基团或者被封闭或封闭基团)的形式。通过保护反应性官能团，可以进行牵涉其他未保护的反应性官能团的反应，而不影响被保护的基团；通常在随后的步骤中可以除去保护基团，而不实质性影响分子的其余部分。例如参见Protective Groups in OrganicSynthesis(T.Green和P.Wuts；第3版；John Wiley and Sons，1999)。
例如，羟基可以被保护为醚(-OR)或酯(-OC(＝O)R)，例如叔丁基醚；苄基、二苯甲基(二苯基甲基)或三苯甲基(三苯基甲基)醚；三甲代甲硅烷基或叔丁基二甲基甲硅烷基醚；或乙酰基酯(-OC(＝O)CH3，-OAc)。
例如，醛或酮基团可以分别被保护为缩醛或缩酮，其中羰基(＞C＝O)借助与例如伯醇的反应转化为二醚(＞C(OR)2)。在酸的存在下使用大为过量的水，借助水解作用容易再生出醛或酮基团。
例如，胺基团可以被保护为例如酰胺或氨甲酸乙酯，例如甲酰胺(-NHCO-CH3)；苄氧基酰胺(-NHCO-OCH2C6H5，-NH-Cbz)；叔丁氧基酰胺(-NHCO-OC(CH3)3，-NH-Boc)；2-联苯-2-丙氧基酰胺(-NHCO-OC(CH3)2C6H4C6H5，-NH-Bpoc)；9-芴基甲氧基酰胺(-NH-Fmoc)；6-硝基藜芦氧基酰胺(-NH-Nvoc)；2-三甲代甲硅烷基乙氧基酰胺(-NH-Teoc)；2，2，2-三氯乙氧基酰胺(-NH-Troc)；烯丙氧基酰胺(-NH-Alloc)；(2-苯磺酰基)乙氧基酰胺(-NH-Psec)；或者在适合的情况下，为N-氧化物(＞NO□)。
例如，羧酸基团可以被保护为酯，例如C1-7烷基酯(例如甲基酯、叔丁基酯)；C1-7卤代烷基酯(例如C1-7三卤烷基酯)；三C1-7烷基甲硅烷基-C1-7烷基酯；或C5-20芳基-C1-7烷基酯(例如苄基酯、硝基苄基酯)；或酰胺，例如甲基酰胺。
例如，巯基可以被保护为硫醚(-SR)，例如苄基硫醚；乙酰氨基甲基醚(-S-CH2NHC(＝O)CH3)。
可能适宜或需要制备、纯化和/或处理活性化合物的前体药物形式。本文所用的术语“前体药物”涉及这样一种化合物，它在被代谢时(例如体内)，产生所需的活性化合物。通常，前体药物是无活性的，或者活性低于活性化合物，但是可以提供有利的处理、施用或代谢性质。
例如，有些前体药物是活性化合物的酯(例如生理学上可接受的、易于代谢的酯)。在代谢期间，酯基(-C(＝O)OR)被裂解，产生活性药物。这类酯可以这样生成，例如借助母体化合物中的任意羧酸基团(-C(＝O)OH)的酯化作用，酌情预先保护存在于母体化合物中的任意其他反应性基团，如果需要的话继之以去保护。这类易于代谢的酯的实例包括这些，其中R是C1-20烷基(例如-Me、-Et)；C1-7氨基烷基(例如氨乙基、2-(N，N-二乙氨基)乙基、2-(4-吗啉代)乙基)；和酰氧基-C1-7烷基(例如酰氧基甲基、酰氧基乙基，例如新戊酰氧基甲基、乙酰氧基甲基、1-乙酰氧基乙基、1-(1-甲氧基-1-甲基)乙基-羰基氧基乙基、1-(苯甲酰氧基)乙基、异丙氧基-羰基氧基甲基、1-异丙氧基-羰基氧基乙基、环己基-羰基氧基甲基、1-环己基-羰基氧基乙基、环己氧基-羰基氧基甲基、1-环己氧基-羰基氧基乙基、(4-四氢吡喃氧基)羰基氧基甲基、1-(4-四氢吡喃氧基)羰基氧基乙基、(4-四氢吡喃基)羰基氧基甲基和1-(4-四氢吡喃基)羰基氧基乙基)。
进一步适合的前体药物形式包括膦酸酯和羟乙酸盐。确切而言，羟基(-OH)可以这样被制成膦酸酯前体药物先与氯代二苄基亚磷酸酯(盐)反应，继之以氢化，生成膦酸酯基-O-P(＝O)(OH)2。这样一种基团可以在代谢期间被磷酸酶清除，得到具有羟基的活性药物。
而且，有些前体药物被酶活化，得到活性化合物或者在进一步化学反应之后得到活性化合物的化合物。例如，前体药物可以是糖衍生物或其他糖苷缀合物，或者可以是氨基酸酯衍生物。
字首缩略词 为方便起见，很多化学部分用熟知的缩写代表，包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基(nPr)、异丙基(iPr)、正丁基(nBu)、叔丁基(tBu)、正己基(nHex)、环己基(cHex)、苯基(Ph)、联苯(biPh)、苄基(Bn)、萘基(naph)、甲氧基(MeO)、乙氧基(EtO)、苯甲酰基(Bz)和乙酰基(Ac)。
为方便起见，很多化合物用熟知的缩写代表，包括但不限于甲醇(MeOH)、乙醇(EtOH)、异丙醇(i-PrOH)、甲乙酮(MEK)、乙醚或二乙醚(Et2O)、乙酸(AcOH)、二氯甲烷(亚甲基氯，DCM)、三氟乙酸(TFA)、二甲基甲酰胺(DMF)、四氢呋喃(THF)和二甲基亚砜(DMSO)。
合成 本发明的化合物如式I所示
并可由如式2所示的化合物
与如式3所示的胺类化合物
及其前体或被保护形式(参阅下文)的偶合而合成。偶联可在偶联剂系统如2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐或(二甲基氨基丙基)乙基碳二亚胺盐酸盐/羟基苯并三唑存在下，在碱如二异丙基乙胺(Hunig’s碱)的存在下，在溶剂如二甲基乙酰胺或二氯甲烷中，在反应温度范围为0℃到所用溶剂的沸点下进行。
或者，本发明化合物可以用已知方法将式2的化合物转化为活化态，如酰氯或活化态酯(如N-羟基琥珀酰亚胺酯)，然后再将活化态与式3化合物反应而合成。
式2化合物可以由式4化合物的去保护而得到
其中RE是任选被取代的C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基。
式4化合物可以由式5化合物
和式6化合物
或式7化合物
的偶合而合成。式5和式6化合物的偶合可在温和的碱性条件((Williamson反应)如碳酸钾的丙酮溶液中进行。
式5和式7化合物的偶合可以通过使用Mitsunobu反应而进行(例如使用偶氮二甲酸二异丙酯与三苯基膦的丙酮溶液)。
式5、6和7化合物是可购得的，或是易于合成的(参阅实施例)。
当本发明的化合物中RN1和RN2和它们所连接的N原子形成式II基团时
那么这些化合物可用式1a代表
其中RII是H原子的式1a化合物，可由式7代表
并可以通过式7化合物的保护态例如式8化合物的去保护而合成
去保护反应可用已知的方法，例如在酸如三氟乙酸或盐酸存在下的酸催化裂解，在溶剂如二氯甲烷或乙醇和/或水的存在下，反应温度范围为0℃到所用溶剂的沸点。
式8化合物可以通过前面所描述方法由式2化合物合成。
RII是酰基部分的式1a化合物可由式9代表
其中RC1选自任选取代的C1-20烷基、C5-20芳基和C3-20杂环基，并可由式7化合物与式RC1COQ化合物的反应而合成，其中RC3如前所定义，Q是合适的离去基团，如卤原子例如氯，任选在碱如吡啶、三乙胺或二异丙基乙胺的存在下，任选在溶剂如二氯甲烷的存在下，在反应温度范围为0℃到所用溶剂的沸点下进行。
式9化合物可由式7所示化合物与式RC1CO2H化合物反应而合成，其中RC1如前所定义。在偶联试剂系统如O-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐或(二甲氨基丙基)乙基碳二亚胺盐酸盐/羟基苯并三唑的存在下，在碱如二异丙基乙基胺(Hunig’s碱)的存在下，在溶剂如二甲基乙酰胺或二氯甲烷中，在反应温度范围为0℃到所用溶剂的沸点下进行。
RII是酰氨基或硫代酰氨基部分的式1a化合物可由式10代表
其中Y是O或S，且RN3选自任选被取代的C1-20烷基、C5-20芳基和C3-20杂环基，并可由式7化合物与式RN3NC(＝Y)化合物的反应而合成，其中RN1如前定义，在溶剂如二氯甲烷的存在下，在反应温度范围为0℃到所用溶剂的沸点下进行。
RII是磺酰基部分的式1a化合物可由分子式11代表
其中RS1选自任选被取代的C1-20烷基、C5-20芳基和C3-20杂环基。可由式7化合物与式RS1SO2Cl化合物反应而合成，其中RS1如前所定义，在碱如吡啶、三乙胺、二异丙基乙胺的存在下，在溶剂如二氯甲烷的存在下，在反应温度范围为0℃到所用溶剂的沸点下进行。
式8化合物
可由式12化合物
与式13化合物通过Mitsunobo偶联反应而合成。

式12化合物可从式14化合物衍生
采用由式2化合物合成式8化合物的类似方法。
用途 本发明提供活性化合物，具体而言在抑制PARP的活性中有活性。
本文所用的术语“活性”涉及能够抑制PARP活性的化合物，具体包括具有内在活性的化合物(药物)以及这类化合物的前体药物，这些前体药物本身可能表现很少或没有内在活性。
在下文实施例中描述了一种可以适宜用于评估由特定化合物所提供的PARP抑制作用的测定法。
本发明进一步提供抑制细胞中PARP活性的方法，其包括使所述细胞与有效量的活性化合物、优选药学上可接受的组合物形式接触。这样一种方法可以在体外或体内实施。
例如，可以使细胞样品体外生长，使活性化合物与所述细胞接触，观察该化合物对这些细胞的效应。作为“效应”的实例，可以测定在某一时间实现的DNA修复的量。若发现活性化合物对细胞发挥影响，则这可以用作化合物在治疗携带相同细胞型细胞的患者的方法中的有效性的预后或诊断标志。
就治疗病症而言，本文所用的术语“治疗”一般涉及治疗和疗法，无论是人类还是动物(例如在兽医应用中)，其中达到一定的所需治疗作用，例如病症进展的抑制，包括进展速率的降低、进展速率的终止、病症的改善和病症的治愈。也包括作为预防性措施的治疗(即预防)。
本文所用的术语“辅助手段”涉及活性化合物与已知治疗手段的联合应用。这类手段包括用于治疗不同癌症类型的药物细胞毒性方案和/或电离放射。确切而言，活性化合物已知可强化大量癌症化学疗法的治疗作用，这包括用于治疗癌症的拓扑异构酶类毒物(例如托泊替康、伊立替康、鲁比替康(rubitecan))、大多数已知的烷基化剂(例如DTIC、替莫唑胺(temozolamide))和铂类药物(例如卡铂、顺铂)。
活性化合物也可以用作抑制PARP的细胞培养添加剂，例如为了使细胞敏感于已知化学治疗剂或体外电离放射治疗。
活性化合物也可以用作体外测定法的一部分，例如为了测定候选宿主是否可能从有关化合物治疗中受益。
施用 活性化合物或包含活性化合物的药物组合物可以借助任意适宜的施用途径对个体施用，无论系统性/外周性还是在所需作用部位，包括但不限于口服(例如摄食)；局部(包括例如透皮、鼻内、眼、口腔和舌下)；肺(例如吸入或吹入疗法，例如使用气雾剂，例如通过口或鼻)；直肠；阴道；肠胃外，例如注射，包括皮下、皮内、肌内、静脉内、动脉内、心脏内、鞘内、脊柱内、囊内、囊下、眼眶内、腹膜内、气管内、表皮下、关节内、蛛网膜下和胸骨内；药库的植入，例如皮下或肌内。
所述个体可以是真核生物、动物、脊椎动物、哺乳动物、啮齿动物(例如豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)、鼠科动物(例如小鼠)、犬科动物(例如狗)、猫科动物(例如猫)、马科动物(例如马)、灵长目动物、类人猿(例如猴子或猿)、猿猴(例如狨、狒狒)、猿(例如大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)或人类。
制剂 尽管活性化合物有可能单独施用，不过优选作为药物组合物(例如制剂)呈递，该组合物包含至少一种如上所定义的活性化合物以及一种或多种药学上可接受的载体、助剂、赋形剂、稀释剂、填充剂、缓冲剂、稳定剂、防腐剂、润滑剂或本领域技术人员熟知的其他材料和任选的其他治疗剂或预防剂。
因而，本发明进一步提供如上所定义的药物组合物和制备药物组合物的方法，包括混合至少一种如上所定义的活性化合物以及一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂、缓冲剂、助剂、稳定剂或其他材料，如本文所述。
本文所用的术语“药学上可接受的”涉及这样的化合物、材料、组合物和/或剂型，它们在合理的医药判定范围内适用于与个体(例如人)的组织接触，而没有过分的毒性、刺激性、变态反应或者其他问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。每种载体、赋形剂等在与制剂其他成分相容的意义上也必须是“可接受的”。
适合的载体、稀释剂、赋形剂等可以参见标准的药学著作。例如参见“药物添加剂手册”，第2版(M.Ash和I.Ash编辑)，001(SynapseInformation Resources，Inc.，Endicott，纽约，USA)、“Remington药学科学”。第20版，Lippincott，Williams & Wilkins出版，2000和“药物赋形剂手册”，第2版，1994。
制剂可以适宜地呈递在单元剂型中，可以借助药学领域熟知的任意方法制备。这类方法包括使活性化合物与构成一种或多种附属成分的载体相结合的步骤。一般而言，制剂这样制备均匀和紧密地使活性化合物与液体载体或微细粉碎的固体载体或者两种载体相结合，然后如果必要的话使产物成形。
制剂可以是液体、溶液、悬液、乳剂、酏剂、糖浆剂、片剂、锭剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂、扁囊剂、丸剂、安瓿剂、栓剂、阴道栓、软膏剂、凝胶剂、糊剂、霜剂、喷雾剂、烟雾剂、泡沫剂、洗剂、油剂、大九剂、干药糖剂或气雾剂的形式。
适合于口服施用(例如摄入)的制剂可以呈递为离散的单元，例如胶囊剂、扁囊剂或片剂，每一单元含有预定量的活性化合物；粉剂或颗粒剂；在水性或非水性液体中的溶液或悬液；水包油型液体乳剂或油包水型液体乳剂；大丸剂；干药糖剂；或者糊剂。
片剂可以借助常规手段制备，例如压制或模制，任选地还有一种或多种附属成分。压制片可以这样制备在适合的机械中压制活性化合物的自由流动形式，例如粉末或颗粒，任选地混合有一种或多种粘合剂(例如聚维酮、明胶、阿拉伯胶、山梨糖醇、黄蓍胶、羟丙基甲基纤维素)、填充剂或稀释剂(例如乳糖、微晶纤维素、磷酸氢钙)、润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石粉、二氧化硅)、崩解剂(例如羟乙酸淀粉钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂或湿润剂(例如月桂基硫酸钠)和防腐剂(例如对-羟基苯甲酸甲酯、对-羟基苯甲酸丙酯、山梨酸)。模制片可以这样制备在适合的机械中模制用惰性液体稀释剂湿润了的粉状化合物的混合物。片剂可以任选地被包衣或刻划，并且经过配制可以提供其中的活性化合物的缓释或控释，例如使用不同比例的羟丙基甲基纤维素，以提供所需的释放特性。片剂可以任选地带有肠溶衣，以提供在肠道部分而非胃中的释放。
适合于局部施用(例如透皮、鼻内、眼、口腔和舌下)的制剂可以被配制成软膏剂、霜剂、悬液、洗剂、粉剂、溶液、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。或者，制剂可以包含药贴或敷料，例如浸渍有活性化合物和任选的一种或多种赋形剂或稀释剂的绷带或粘附性硬膏剂。
适合于口内局部施用的制剂包括锭剂(lozenge)，其在经过矫味的基质中包含活性化合物，通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶；锭剂(pastille)，在惰性基质例如明胶和甘油或者蔗糖和阿拉伯胶中包含活性化合物；和漱口剂，在适合的液体载体中包含活性化合物。
适合于对眼睛局部施用的制剂也包括滴眼剂，其中活性化合物溶解或悬浮在适合的载体中，尤其是用于活性化合物的水性溶剂。
其中载体是固体的适合于鼻施用的制剂包括粗粉，粒径例如在约20至约500微米的范围内，采取鼻吸的方式施用，也就是说通过鼻腔从紧邻鼻放置的粉剂容器中迅速吸入。其中载体是液体的、用于以例如鼻喷雾剂、滴鼻剂或通过雾化器以气雾剂施用的适合制剂包括活性化合物的水溶液或油溶液。
适合于吸入施用的制剂包括从加压包装中以气雾剂呈递的那些，采用适合的抛射剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟代甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他适合的气体。
适合于经由皮肤局部施用的制剂包括软膏剂、霜剂和乳剂。当配制在软膏剂中时，活性化合物可以任选地与石蜡类或水混溶性软膏基质一起使用。或者，可以利用水包油型霜剂基质将活性化合物配制在霜剂中。如果需要的话，霜剂基质的水相可以包括例如至少约30％w/w多元醇，即具有两个或多个羟基的醇，例如丙二醇、丁烷-1，3-二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇及其混合物。局部制剂可合乎需要地包括增强活性化合物穿过皮肤或其他病患区域的吸收或渗透的化合物。这类皮肤渗透增强剂的实例包括二甲基亚砜和有关的类似物。
当配制成局部乳剂时，油相可以任选地仅包含乳化剂，或者它可以包含至少一种乳化剂与脂肪或油或者脂肪和油的混合物。优选地，包括亲水性乳化剂以及充当稳定剂的亲脂性乳化剂。还优选同时包括油和脂肪。总体而言，乳化剂以及或者没有稳定剂一起构成所谓的乳化性蜡，该蜡与油和/或脂肪一起构成所谓的乳化性软膏基质，后者构成霜剂的油性分散相。
适合的乳化剂和乳剂稳定剂包括吐温60、司盘80、鲸蜡硬脂醇、肉豆蔻醇、甘油单硬脂酸酯和月桂基硫酸钠。适合于制剂的油或脂肪的选择基于实现所需的美容性质，因为活性化合物在大多数可能用在药物乳剂的油中的溶解度可能非常低。因而，霜剂应当优选是非油腻、非掉色和可洗涤的产品，具有适合的粘稠度，以避免从管或其他容器中漏出。可以使用直链或支链一元或二元烷基酯，例如异己二酸二酯、硬脂酸异鲸蜡基酯、椰子脂肪酸的丙二醇二酯、肉豆蔻酸异丙酯、油酸癸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、棕榈酸2-乙基己基酯或已知称为Crodamol CAP的支链酯的掺合物，后三者是优选的酯。它们可以单独或联合使用，这依赖于所需的性质。或者，可以使用高熔点脂质，例如白软石蜡和/或液体石蜡或其他矿物油。
适合于直肠施用的制剂可以呈递为栓剂，含有适合的基质，例如包含可可脂或水杨酸酯。
适合于阴道施用的制剂可以呈递为阴道栓、棉塞、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂，除了活性化合物以外还含有本领域已知的适当的载体。
适合于肠胃外施用(例如注射，包括皮肤、皮下、肌内、静脉内和皮内)的制剂包括水性与非水性的等渗、无热原、无菌注射溶液，它可以含有抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、制菌剂和赋予制剂与受药者血液等渗的溶质；水性与非水性无菌悬液，它可以包括悬浮剂和增稠剂；和脂质体或其他微粒系统，它们被设计成使化合物靶向于血液组分或者一种或多种器官。适合用在这类制剂中的等渗载体的实例包括氯化钠注射液、林格氏溶液或乳酸化林格氏注射液。通常，活性化合物在溶液中的浓度是约1ng/ml至约10μg/ml，例如约10ng/ml至约1μg/ml。制剂可存放于单剂或多剂密封容器中，例如安瓿和小瓶，并且可以贮存在冷冻干燥(冻干)条件下，仅需在使用前不久加入无菌液体载体例如注射用水即可。从无菌粉剂、颗粒剂和片剂可以制备临时注射溶液和悬液。制剂可以是脂质体或其他微粒系统的形式，它们被设计成使活性化合物靶向于血液组分或者一种或多种器官。
剂量 可以理解的是，活性化合物和包含活性化合物的组合物的适当剂量可以因患者而异。确定最佳剂量一般将牵涉本发明治疗的治疗益处水平与任何风险或有害副作用之间的平衡。所选择的剂量水平将依赖于多种因素，包括但不限于特定化合物的活性、施用途径、施用时间、化合物的排泄速率、治疗的持续时间、联合使用的其他药物、化合物和/或材料，以及患者的年龄、性别、体重、条件、一般健康状况与既往病史。化合物的量和施用途径最终将取决于医师，不过一般而言，剂量所实现的在作用部位的局部浓度将实现所需效果，而不导致实质性伤害或有害副作用。
体内施用可以在一剂中实现，连续地或间歇地(例如按适当间隔以分开的剂量)遍及治疗过程。确定最有效的施用手段和剂量的方法是本领域技术人员所熟知的，将因疗法所用制剂、治疗目的、所治疗的靶细胞和所治疗的个体而异。单次或多次施用可以以主治医师选择剂量水平和方式进行。
一般而言，活性化合物的适合剂量在约100μg至约250mg每千克个体体重每天的范围内。若活性化合物是一种盐、酯、前体药物等，则基于母体化合物计算施用量，因此所用的实际重量会成比例地增加。
实施例 一般实验方法 制备型HPLC 样品用Waters质量-定向式纯化系统纯化，采用Waters 600LC泵、Waters Xterra C18柱(5μm，19mm×50mm)和Micromass ZQ质谱仪，按阳离子电喷雾电离模式操作。流动相A(含0.1％甲酸水溶液)和B(含0.1％甲酸的乙腈)按梯度使用5％B至100％历经7分钟，保持3分钟，流速20ml/min。
分析型HPLC-MS 分析型HPLC用Spectra System P4000泵和Jones Genesis C18柱(4μm，50mm×4.6mm)进行。流动相A(含0.1％甲酸水溶液)和B(乙腈)按梯度使用5％B达1分钟，5分钟后升至98％B，保持3分钟，流速2ml/min。用TSP UV 6000LP检测器在254nm下检测，PDA范围210-600mm。质谱仪是Finnigan LCQ，按阳离子电喷雾模式操作。
NMR 1H NMR和13C NMR利用Bruker DPX 300光谱计分别在300MHz和75MHz下记录。化学位移按百万分之份数(ppm)、相对于内标四甲基硅烷的δ报告。除非另有规定，全部样品均溶解于DMSO-d6中。
实施例1
(a)向3-(溴甲基)苯甲酸甲酯(2)(1.0g，7.2mmol)和碳酸钾(2.0g，14.5mmol)的丙酮溶液(10ml)中加入水杨酰胺(1)(1.0g，7.2mmol)，在25℃下搅拌反应14h。将溶液真空浓缩，所得的残留物用50ml水处理，再用二氯甲烷(2×50ml)萃取。合并有机层，用硫酸镁干燥，过滤后真空浓缩析出白色固体，用柱层析(50g二氧化硅，己烷乙酸乙酯)纯化得到白色固体的3-(2-氨基甲酰基-苯氧基甲基)-苯甲酸甲酯(3)(2.0g，97.60％)；m/z[M+1]+285。
(b)将3-(2-氨基甲酰基-苯氧基甲基)-苯甲酸甲酯(3)(2.0g)和2M氢氧化钠(4ml)的甲醇(8ml)混合物在25℃下搅拌14h。将溶液真空浓缩，反应残留物用20ml水处理，并用二氯甲烷(2×20ml)洗涤。用2M的HCl酸化水层，过滤，用水和己烷洗涤，干燥，得到白色固体的3-(2-氨基甲酰基-苯氧基甲基)-苯甲酸(4)(1.87g，97％)；m/z[M+1]+271，95％的纯度。
(c)向3-(2-氨基甲酰基-苯氧基甲基)-苯甲酸(4)(0.20mmol)的二甲基乙酰胺溶液(1ml)加入适合的胺类化合物(0.23mmol)。然后加入Hunig碱(0.31mmol)和2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(0.25mmol)，室温下搅拌反应16h。将反应混合物用制备型HPLC纯化，得到以下化合物




(d)将3-(2-氨基甲酰基-苯氧基甲基)-苯甲酸(4)(0.50g，1.8mmol)，Hunigs碱(0.48ml，2.7mmol)，1-哌嗪甲酸叔丁酯(0.30g，2.0mmol)和2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯(0.83g，2.2mmol)在二甲基甲酰胺(5ml)中的混合物在25℃下搅拌14h。将反应混和物用20ml水处理，用二氯甲烷萃取(2×50ml)。合并有机层，用50ml盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩得到黄色油状物(24)(1.6g)，无需提纯直接用于下一步反应。
(e)将12M盐酸∶乙醇(2∶1)溶液加入到4-[3-(2-氨基甲酰基-苯氧基甲基)-苯甲酰基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(24)中，在25℃下搅拌反应14h。将反应在真空下部分浓缩后，用50ml水稀释该混合物，并用氨碱化，再用二氯甲烷萃取(2×50ml)。合并有机层，用50ml盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤后真空浓缩得到白色固体25(0.6g)；m/z[M+1]+339，95％的纯度。
(f) (i)将合适的异氰酸盐(0.16mmol)加入化合物25(0.15mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液中。为发生磺酰氯化反应，再将Hunigs碱(39μl，0.22mmol)加入到反应混合物，在室温下搅拌反应16h。然后将反应混合物用制备型HPLC纯化，得到以下化合物


(ii)将合适的磺酰氯(0.16mmol)加入到化合物25(0.15mmol)的二氯甲烷溶液(1ml)中。为发生磺酰氯化反应，还将Hunigs碱(39μl，0.22mmol)加入到反应混合物中，在室温下搅拌反应16h。将反应混合物用制备型HPLC纯化得到以下化合物

(iii)将合适的酰氯或酸(0.16mmol)加入到化合物25(0.15mmol)的二氯甲烷溶液(1ml)中，再加入Hunigs碱(39μl，0.22mmol)。然后向所有酸性反应中加入2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(66.8mg，0.18mmol)，在室温下搅拌反应16h。然后将反应混合物用制备型HPLC纯化得到以下化合物


实施例2
(a)将2-氟-5-甲酰基苯甲氰(63)(10g，67.056mmol)混悬于40ml的甲醇中直到完全溶解。分批加入NaBH4(2.89g；73.76mmol)，加样时间为3.5h。在室温下搅拌反应76h。减压去除甲醇，将残留物溶于DCM(20ml)，再加入水(20ml)。水相用DCM再次萃取，合并有机层，用水洗涤，硫酸镁干燥。减压下去除去DCM得到白色固体化合物64(9.174g，收率95％，[M+H]+152(弱离子化))。
(b)将化合物64(7g，47mmol)溶于甲醇中，加入5M氢氧化钠(20ml)，60℃下搅拌反应9h。将反应混合物真空浓缩，残留物用水溶解，再用6M盐酸酸化至pH值为3，形成白色固体。将固体过滤，滤液在真空下浓缩。获得的固体用甲苯研磨，再真空浓缩共沸混合物去除残留水，烘箱中干燥。得到还含有氯化钠的固态化合物65(10.77g，[M-H]-169)，保持原样，用于下步反应。
(c)将化合物65(19g，113mmol)溶于甲醇，缓慢加入12ml浓硫酸，然后回流18h。将反应混合物蒸发，并缓慢加入250ml碳酸氢钠，用乙酸乙酯(3×150ml)萃取，用硫酸镁干燥，真空浓缩。残留物用闪式色谱(洗脱剂己烷/乙酸乙酯9/1)纯化得到纯化合物66(9.325g，[M+H]+185(弱离子化))。
(d)将化合物66(3g 16.2mmol)溶于25ml丙酮中，然后加入水杨酰胺(2.4g 17.9mmol)和三苯基膦(5.1g 19.5mmol)。室温下搅拌悬浮液直到全部反应物溶于溶液中，再滴加DIAD(3.8g 19.5mmol)，加样时间为20mins，室温下搅拌18h。析出白色沉淀，过滤后用热乙酸乙酯重结晶得到白色固体的化合物67(2.77g，[M+H]+304)。
(e)将化合物67(2.7g，9mmol)混悬于2M氢氧化钠(10ml)和30ml甲醇中，室温下搅拌2h。将甲醇蒸发，加入1N盐酸直到形成白色固体。将固体过滤，用水洗涤，干燥，得到纯化合物68(2.5g，[M+H]+290)。
(f)根据实施例1(d)的方法由化合物68合成化合物69(收率72％，[M+H]+458)。
(g)根据实施例1(e)的方法由化合物69合成化合物70([M+H]+358)。
(i)分别采用实施例1(f)、(i)、(ii)和(iii)的方法，可由化合物70制备下列化合物







实施例3
(a)将3-甲氧基水杨酸甲酯(87)(1.4g，7.6mmol)混悬于15ml含有7N氨的甲醇溶液中，在60℃在密封管中搅拌24h。将溶液真空浓缩，得到褐色固体的化合物88(1.4g，收率93％，[M+H]+168)。
(b)根据实施例2(d)的方法由化合物88合成化合物89(收率54％，[M+H]+334)。
(c)根据实施例2(e)的方法由化合物89合成化合物90(收率93％，[M+H]+320)。
(d)根据实施例1(d)的方法由化合物90合成化合物91([M+H]+488)。
(e)根据实施例1(e)的方法由化合物91合成化合物92([M+H]+388)。
(f)分别采用实施例1(f)、(i)、(ii)和(iii)的方法，由化合物92制备下列化合物





实施例4
(a)将6ml浓硫酸加入到3-氟-2-羟基苯甲酸(103)(5g，32mmol)的甲醇(20ml)溶液中，搅拌，回流18h。将反应混合物真空浓缩，加入500ml饱和碳酸氢钠，再用乙酸乙酯(3×150ml)萃取。收集有机萃取物，硫酸镁干燥，蒸发，得到为液体的化合物104(3.9g，收率72％，[M-H]-169)，其固化为淡黄色的晶体。
(b)根据实施例3(a)的方法由化合物104合成化合物105(收率97％，[M+H]+156)。
(c)根据实施例2(d)的方法由化合物105合成化合物106(收率80％，[M+H]+304)。
(d)根据实施例2(e)的方法由化合物106合成化合物107([M+H]+290)。
(e)根据实施例1(d)的方法由化合物107合成化合物108([M+H]+458)。
(f)根据实施例1(e)的方法由化合物108制备化合物109([M+H]+358)。
(g)分别采用实施例1(f)、(i)、(ii)和(iii)的方法，由化合物109制备下列化合物





实施例5
(a)根据实施例3(a)的方法由化合物120合成化合物121(收率93％，[M+H]+156)。
(b)根据实施例2(d)的方法由化合物121合成化合物122([M+H]+304)。
(c)根据实施例2(e)的方法由化合物122合成化合物123([M-H]-288)。
(d)根据实施例1(d)的方法由化合物123合成化合物124([M+H]+458)。
(e)根据实施例1(e)的方法由化合物124合成化合物125([M+H]+358)。
(f)分别采用实施例1(f)、(i)、(ii)和(iii)的方法，可由化合物125制备下列化合物





实施例6
(a)向冷却到-78℃的2-(3-溴-苯基)-乙醇(136)(15.0g，74.6mmol)的无水二乙醚(200ml)溶液中加入N，N，N′，N′-四甲基乙二胺(TMEDA)(22.2ml，149.2mmol)。在-78℃下搅拌5分钟后，滴加正丁基锂(2.5M己烷溶液；59.7ml，149.2mmol)，加样时间10分钟(加样大约过半时出现白色沉淀)。将溶液升温到-20℃达一个小时，再次冷却到-78℃。往反应混合物中通干二氧化碳气体10分钟直到放热停止，使之温热到室温1h。醚用115ml水萃取，水层用6N盐酸酸化使pH值达0.5。所得白色沉淀用乙酸乙酯(2×170ml)萃取。合并有机相，硫酸镁干燥，过滤、真空干燥得到米白色粉末化合物137。LC-MS分析得到单峰(11.40g，92％)，无需继续纯化。m/z(LC-MS，ESN)，RT＝3.21min，(M-H)＝165.0。
1H NMR(300MHz，D6-DMSO)12.88(1H，-COOH)，7.86(1H，S)7.83(1H，dt J 2.1Hz，J 7.5Hz)，7.53(1H，d，J 2.1Hz)，7.46(1H，t，J 7.5Hz)，4.68(1H，-OH)，3.68(2H，t，J 6.7Hz)，2.84(2H，t，J 6.7Hz)。
(b)向3-(2-羟乙基)-苯甲酸(137)(12.0g，72mmol)的DCM溶液(150mL)中加入1-哌嗪甲酸叔丁酯(14.9g，80.0mmol)和O-苯并三唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(30.2g，80.0mmol)。搅拌该混合物5分钟后再加入三乙胺(20.6ml，150.0mmol)。在室温搅拌反应30分钟，过滤反应混合物并真空浓缩。所得的油状产物经层析得到白色固体138，洗脱剂为乙酸乙酯∶己烷1∶1(rf 0.13)。LC-MS分析得单峰(18.0g，75％)，无需继续纯化。m/z(LC-MS，ESP)，RT＝3.79min。(M+H)334。
(c)(i)向冷却至-5℃的4-[3-(2-羟基-乙基)-苯甲酰基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(138)(10.0g，29.9mmol)的DCM(100ml)溶液滴加三乙胺(5mL，35.9mmol)，接着滴加甲烷磺酰氯(2.8mL，35.8mmol)，温热反应到室温30分钟。然后将反应混合物用水洗涤(2×25ml)。有机层洗涤后，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩后得油状物。LC-MS分析(9.75g收率79％)，无需继续纯化。m/z(LC-MS，ESP)，RT＝4.11mins。(M+H)＝413。
(ii)将由(i)分离的粗制油(5.8g，22.5mmol)溶解在二甲基甲酰胺(50mL)中，接着加入碳酸铯(7.3g，22.4mmol)和]水杨酰胺(1)(3.08g，22.4mmol)。将反应在冰箱中冷却过夜，用水(2×50mL)、己烷(2×50mL)、TBME(2×50mL)洗涤，得到白色固体139，室温下真空干燥过夜。LC-MS分析得单峰。(6.3g，95％的纯度)，无需继续纯化。m/z(LC-MS，ESP)，RT＝4.13mins。(M+H)413。
(d)向4-{3-[2-(2-氨基甲酰基-苯氧基)-乙基]苯甲酰基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(139)(4.2g，9.2mmol)中加入4M氯化氢的二烷溶液(14.4mL，57.0mmol)。在15分钟后真空去除溶剂，再加入7M氨的甲醇溶液(15mL，75mmol)，过滤产生的乳霜沉淀。真空浓缩滤液得到粘胶物140(2.9g，收率90％)。LC-MS分析(纯度＞95％)，无需继续纯化。m/z(LC-MS，ESP)，RT＝3.10mins。(M+H)＝354。
(e)分别采用实施例1(f)、(i)、(ii)和(iii)的方法，由化合物140制备下列化合物







实施例7
(a)向2，2-四甲基哌啶(179)(10.7mL，64.0mmol)的干四氢呋喃(50mL)溶液中加入冷却至-75℃的2.5M正丁基锂(26.5mL，64.0mmol)的正己烷/四氢呋喃溶液。再向反应混合物滴加2-(4-氟-苯基)-乙醇(4.5g，32mmol)，维持温度为-75℃。在氮下搅拌反应6h后，得到橙红色溶液。再向反应混合物通二氧化碳15分钟，反应温热到室温。有机相真空下浓缩，残留物用40ml水溶解后，用DCM(2×25ml)洗涤。水相用稀盐酸(100ml，1N)调pH值到1，然后将溶液用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并有机相，硫酸镁干燥，浓缩后得到粗制蜡状固体，用乙酸乙酯重结晶，析出白色晶体180。LC-MS分析。(2.4g，95％的纯度)无需继续纯化。m/z(LC-MS，ESN)，RT＝2.66mins。(M-H)＝183。1H NMR(300MHz，D6-DMSO)14.30(1H，-COOH)，7.70(1H，dd，J 2.1，7.2Hz)，7.47(1H，ddd J 2.1，6.0，8.4Hz)，7.20(1H，dd，J 8.5，11.1Hz)，4.59(1H，-OH)，3.60(2H t，J 6.9Hz)，2.74(2H，t，J 6.9Hz)。
(b)向2-氟-5-(2-羟基-乙基)-苯甲酸(180)(2.5g，15mmol)的DCM溶液(50mL)中加入1-哌嗪甲酸叔丁酯(3.09g，16.6mmol)和O-苯并三唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(6.27g，16.6mmol)。搅拌5分钟后再加入三乙胺(5.8mL，33.1mmol)。室温搅拌反应30分钟后，过滤反应混合物，并真空浓缩。所得的油状产物经层析分离得到白色固体181，洗脱剂为乙酸乙酯∶己烷9∶1(rf 0.25)。LC-MS分析得单峰(3.97g，75％)，无需继续纯化。m/z(LC-MS，ESP)，RT＝3.28min。(M+H)＝353。
(c)(i)将冷却至-5℃的化合物181(2.5g，13.6mmol)的DCM(30ml)溶液中滴加三乙胺(2.1mL，14mmol)，接着滴加甲烷磺酰氯(1.61g，14mmol)，将反应温热到室温45分钟。反应混合物用水洗涤(2×25ml)，有机相洗涤后，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩后得油状物，(2.6g收率82％)，无需继续纯化。m/z(LC-MS，ESP)，RT＝4.46mins。(M+H)＝431。
(ii)将由(i)分离的粗制油(2.5g，5.8mmol)溶解在二甲基甲酰胺(15mL)中，接着加入碳酸铯(7.3g，5.9mmol)和水杨酰胺(802mg，5.9mmol)。将反应在冰箱中冷却过夜，用水(2×10mL)、己烷(2×10mL)、TBME(10mL)洗涤，得到白色固体182，室温下真空干燥过夜。LC-MS分析得单峰。(1.9g，纯度65％))，无需继续纯化。m/z(LC-MS，ESP)，RT＝3.56mins，(M+H)472。1HNMR(300MHz，D6-DMSO)7.78(1H，dd J＝1.8，7.8Hz)，7.49-7.42(2H，m)，7.37(1H，dd，J＝2.1，6.6Hz)，7.2(2H，m)，7.01(1H，m)，4.37(2H，m)，3.59-3.62(2H，m)，3.39-3.40(2H，m)，3.24-3.27(2H，m)，3.12-2.19(4H，m)，2.40(9H，s)。
(d)向4-{5-[2-(2-氨基甲酰基-苯氧基)-乙基]-2-氟-苯甲酰基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(182)(0.472g，1.0mmol)中加入4M氯化氢的二烷溶液(3.0mL，10.0mmol)。15分钟后真空去除溶剂，再加入7M氨的甲醇溶液(2mL，13mmol)，过滤产生的乳霜沉淀。将滤液真空浓缩，得到白色泡沫183(0.31g收率84％)。LC-MS分析(纯度＞90％)，无需继续纯化。m/z(LC-MS，ESP)，RT＝2.52mins。(M+H)＝372。
(e)分别采用实施例1(f)、(i)和(iii)的方法，由化合物183制备下列化合物



实施例8

(a)5-氟-2-羟基-苯甲酰胺(193) 向一个50mL的螺旋密封式压力容器中加入5-氟-2-羟基苯甲酸甲酯(1.0g，5.88mmol)和7N氨的甲醇溶液(15ml)。将压力容器密封后，在60℃搅拌内容物过夜。将反应冷却至室温，蒸发至干，析出白色晶体固体。LC-MS分析得单峰，(0.91g，100％纯度)；m/z(LC-MS，ESP)，RT＝2.94mins，(M+H)156。
(b)4-(2-氟-5-羟基甲基-苯甲酰基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(194) 20℃下向2-氟-5-羟基甲基-苯甲酸(65)(8.50g，50.0mmol)的DMF(90mL)溶液中加入三乙胺(13.8mL，100mmol)，再加入哌嗪-1-甲酸叔丁酯(11.16g，60.0mmol)，然后在15分钟逐份加入HBTU(24.6g，65.0mmol)，可观察到轻微放热现象，搅拌反应30分钟。然后冷却反应混合物至15℃，滴加100mL水，形成黄色粘稠混悬液。用DCM(3×80mL)萃取该水状液体。萃取相用100mL稀碳酸钠溶液、100mL水洗涤，用硫酸钠干燥，用一薄硅垫过滤。将滤液真空浓缩后得到无色油状物。LC-MS分析中得单峰(15.4g，收率91％)，无需纯化可供下步反应使用；m/z(LC-MS，ESP)，RT＝3.84mins，(M+H)339。
(c)4-(2-氟-5-甲磺酰基氧基甲基-苯甲酰基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(195) 向4-(2-氟-5-羟基甲基-苯甲酰基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(194)(6.8g，20.12mmol)的干燥DCM(60mL)溶液中加入三乙胺(2.7mL，20.12mmol)。将获得的溶液冷却至5℃，在5分钟滴加甲烷磺酰氯(1.55mL，20.12mmol)。在反应30分钟后，用水洗涤(2×50mL)，用硫酸钠干燥，得到粘稠玻璃状物质。LC-MS分析中得单峰(6.37g，收率76％)，无需任何纯化可供下步反应使用；m/z(LC-MS，ESP)，RT＝4.20mins，(M+H)417。
(d)4-[5-(2-氨基甲酰基-4-氟-苯氧基甲基)-2-氟-苯甲酰基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(196) 向氮气层覆盖下的4-(2-氟-5-甲磺酰基氧基甲基-苯甲酰基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(195)(0.832g，2.0mmol)的DMF(3mL)溶液中加入5-氟-2-羟基-苯甲酰胺(193)(0.31g，2.0mmol)，再加入碳酸钾(0.552g，4.0mmol)。然后将混合物加热到90℃，加热反应1h后，将反应冷却到45℃，加入4mL水。然后在搅拌下将反应冷却到0℃。得到产生的细微白色悬浮物。过滤固体，用冷水(2×10mL)、己烷(2×10mL)和TBME(2×10mL)洗涤。干燥后固体在LC-MS分析中得单峰(0.548g，收率57％)，无需纯化可供下步反应使用；m/z(LC-MS，ESP)，RT＝3.18mins，(M+H)476。
(e)5-氟-2-[4-氟-3-(哌嗪-1-羰基]-苄氧基]-苯甲酰胺(197) 向浓盐酸(15mL)的乙醇(7mL)溶液中逐份加入4-[5-(2-氨基甲酰基-4-氟-苯氧基甲基)-2-氟-苯甲酰基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(196)(3.49g，7.35mmol)。在1h后，将反应混合物在真空浓缩，含水残留物用50mL水稀释，用醚洗涤(2×30mL)，然后用5mL氨水碱化，再用乙酸乙酯萃取(3×50mL)。合并萃取液，用硫酸钠干燥，真空浓缩，得到晶体固体。LC-MS分析中得单峰(2.73g，收率98％)，无需纯化可供下步反应使用；m/z(LC-MS，ESP)，RT＝3.05mins，(M+H)376。
(f)化合物库 (i)向合适的5-氟-2-[4-氟-3-(哌嗪-1-羰基)-苄氧基]-苯甲酰胺(197)(0.20mmol)的二氯甲烷溶液(2mL)中加入合适的异氰酸盐(0.15mmol)，室温下搅拌反应16h。将反应混合物用制备型HPLC纯化，得到下列化合物


(ii)向5-氟-2-[4-氟-3-(哌嗪-1-羰基)-苄氧基]-苯甲酰胺(197)(0.1mmol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液中加入合适的磺酰氯(0.1mmol)和三乙胺(0.2mmol)，搅拌反应过夜，然后通过制备型HPLC纯化，得到下列化合物

(iii)向5-氟-2-[4-氟-3-(哌嗪-1-羰基)-苄氧基]-苯甲酰胺(197)(0.1mmol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液中加入合适的酰氯(0.1mmol)和三乙胺(0.2mmol)，搅拌反应过夜。然后通过制备型HPLC纯化，得到下列化合物

实施例9 为了评估化合物的抑制作用，利用下列测定法测定IC50值或在给定浓度下的百分抑制。
将从Hela细胞核提取物中分离的哺乳动物PARP用Z-缓冲液(25mMHepes(Sigma)；12.5mM MgCl2(Sigma)；50mM KCl(Sigma)；1mMDTT(Sigma)；10％甘油(Sigma)；0.001％NP-40(Sigma)；pH7.4)在96孔FlashPlates(商标)(NEN，UK)中孵育，加入不同浓度的所述抑制剂。全部化合物均稀释在DMSO中，最终测定浓度在10与0.01μM之间，DMSO的最终浓度为1％每孔。每孔的总测定体积为40μl。
在30℃下培育10分钟后，加入10μl反应混合物引发反应，反应混合物中含有NAD(5μM)、3H-NAD和30mer双链DNA-寡聚物。指定阳性和阴性反应孔与化合物孔(未知)一起处理，以计算酶活性％。然后将平板振摇2分钟，在30℃下孵育45分钟。
在孵育之后，向每孔加入50μl 30％乙酸猝灭反应。然后将平板在室温下振摇1小时。
将平板转移至TopCount NXT(商标)(Packard，UK)供闪烁计数。所记录的数值是每孔计数30秒后得到的每分钟的计数(cpm)。
然后利用下列方程计算每种化合物的酶活性％
计算IC50值(抑制50％酶活性的浓度)，其是在不同浓度范围内测定的，通常从10μM至0.001μM。这类IC50值用作对比值，以鉴别增加的化合物效力。
下列化合物的IC50低于0.1μM29、35、37、43、53、71、72、73、74、75、77、78、79、80、86、141、164、174、185、187、188、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217。
除了上述的以外，下列化合物的IC50低于0.5μM28、30、31、32、33、34、39、41、42、44、45、46、48、50、51、52、54、55、56、57、58、59、61、62、76、81、82、83、84、85、128、129、135、143、144、145、147、148、152、158、159、160、161、166、167、184、186、189、191。
除了上述的以外，下列化合物的IC50低于1μM15、26、27、36、38、40、47、49、60、116、190。
除了上述的以外，下列化合物的IC50低于10μM5、6、8、9、10、12、13、14、17、18。
下列化合物没有确定IC50值，但它们在1.5μM时呈现25％或更大的抑制97、99、110、111、112、113、126、127、130、131、132、133、134。
计算化合物的强化系数(PF50)，为对照细胞生长的IC50除以细胞生长+PARP抑制剂的IC50之比。对照和化合物处理细胞的生长抑制曲线是在烷基化剂甲磺酸甲酯(MMS)的存在下生成的。使用0.2微摩尔固定浓度的供试化合物。MMS的浓度跨越从0至10μg/ml的范围。
利用磺基罗丹明B(SRB)测定法评估细胞生长(Skehan，P.等人，(1990)，“用于抗癌药物筛选的新的比色细胞毒性测定法”，J.Natl.Cancer Inst.82，1107-1112.)。将2,000个HeLa细胞接种到平底96孔微量滴定平板的每孔中，体积为100μl，在37℃下孵育6小时。将细胞用单独的培养基或者含有最终浓度为0.5、1或5μM的PARP抑制剂的培养基培养。使细胞另外生长1小时，然后向未处理细胞或PARP抑制剂处理细胞加入一定浓度范围的MMS(通常为0、1、2、3、5、7和10μg/ml)。使用用单独PARP抑制剂处理过的细胞来评估PARP抑制剂的生长抑制作用。
将细胞静置另外16小时，然后更换培养基，使细胞在37℃下生长另外72小时。然后除去培养基，用100μl冰冷的10％(w/v)三氯乙酸固定细胞。将平板在4℃下孵育20分钟，然后用水洗涤四次。然后将每孔细胞用100μl 0.4％(w/v)的SRB 1％乙酸溶液染色20分钟，然后用1％乙酸洗涤四次。然后将平板在室温下干燥2小时。向每孔加入100μl 10mM Tris碱，使来自染色细胞的染剂增溶。轻轻振摇平板，在室温下静置30分钟，然后在Microquant微量滴定平板读数器上测量564nm下的光密度。
以下化合物在500nM时的PF50至少为1.553、71、72、73、74、79、216。化合物188在200nM时的PF50至少为1.5。
权利要求
1.式(I)化合物
和其异构体、盐、溶剂化物、化学保护形式和前药，其中R2、R3、R4和R5独立地选自H、C1-7烷氧基、氨基、卤代基或羟基；n是1或2；
RN1和RN2独立地选自H和R，其中R是任选被取代的C1-10烷基、C3-20杂环基和C5-20芳基；
或RN1和RN2，与它们连接的氮原子一起形成任选被取代的5至7元含氮杂环；
Het选自
其中Y1和Y3独立地选自CH和N，Y2是选自CX和N，X是H、Cl或F；和
(ii)
其中Q是O或S。
2.根据权利要求1的化合物，其中R2、R3、R4和R5选自H、甲氧基、Cl和F。
3.根据权利要求1或权利要求2的化合物，其中R2、R4和R5是H，且R3最优选H或F。
4.根据上述权利要求的任意一项的化合物，其中Het是
5.根据上述权利要求的任意一项的化合物，其中Y1、Y2和Y3之一或没有任何一个是N。
6.根据上述权利要求的任意一项的化合物，其中X选自H和F。
7.根据上述权利要求的任意一项的化合物，其中RN1是H且RN2是R。
8.根据权利要求7的化合物，其中R是任选被取代的C1-7烷基或C3-20杂环基。
9.根据权利要求1至6的任意一项的化合物，其中RN1与RN2连同它们相连接的氮原子形成式II的基团
其中RN选自
(i)-RII；
(ii)-C(＝O)NHRII；
(iii)-C(＝S)NHRII；
(iv)-S(＝O)2RII；和
(v)-C(＝O)RII，
其中RII选自任选被取代的C1-10烷基、C3-20杂环基和C5-20芳基。
10.根据权利要求9的化合物，其中RN选自
(i)-C(＝O)NHRII；
(ii)-S(＝O)2RII；和
(iii)-C(＝O)RII。
11.根据权利要求1至6的任意一项的化合物，其中RN1与RN2连同它们相连接的氮原子形成式III的基团
其中RC选自H；任选被取代的C1-20烷基；任选被取代的C5-20芳基；任选被取代的C3-20杂环基；任选被取代的酰基；任选被取代的酰氨基；和任选被取代的酯基。
12.根据权利要求11的化合物，其中Rc选自任选被取代的酯基。
13.药物组合物，其包含根据权利要求1至12的任意一项的化合物和可药用的载体或稀释剂。
14.根据权利要求1至12的任意一项在人或动物体治疗方法中应用的化合物。
15.根据权利要求1至12的任意一项的化合物在制备抑制PARP活性的药物中的用途。
16.根据权利要求1至12的任意一项的化合物在制备治疗血管疾病、脓毒性休克、缺血性损伤、再灌注损伤、神经毒性、出血性休克、炎性疾病、病毒感染、或通过PARP活性的抑制能够改善的疾病的药物中的用途。
17.根据权利要求1至12的任意一项的化合物在制备用于癌症治疗的辅助治疗或改善肿瘤细胞对电离辐射或化疗药的治疗效果的药物中的用途。
18.根据权利要求1至12的化合物在制备在个体中治疗癌症的药物中的用途，其中所述的癌症是HR依赖性DNA DSB修复途径缺陷的。
19.根据权利要求18的用途，其中所述的癌症包含一种或多种相对于正常的细胞而言通过HR修复DNA DSB的能力降低或者取消的癌症细胞。
20.根据权利要求19的用途，其中所述的癌症细胞具有BRCA1或BRCA2缺陷的表型。
21.根据权利要求20的用途，其中所述的癌症细胞在BRCA1或BRCA2中是缺陷的。
22.根据权利要求18至21的任意一项的用途，其中所述的个体编码HR依赖性DNA DSB修复途径组分的基因中的突变是杂合的。
23.根据权利要求22的用途，其中所述的个体在BRCA1和/或BRCA2的突变上是杂合的。
24.根据权利要求18至23中任意一项的用途，其中所述的癌症是乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌或前列腺癌。
25.根据权利要求18至24中任意一项的用途，其中所述的治疗进一步包括给予电离辐射或化疗药。
26.通过抑制PARP治疗得到改善的疾病的方法，其包括给需要治疗的个体施用治疗有效量的根据权利要求1至12的任意一项的化合物。
27.治疗癌症的方法，其包括给需要治疗的个体施用与电离辐射或化疗药同时或依次联合的治疗有效量的根据权利要求1至12任意一项的化合物。
全文摘要
式(I)化合物和其异构体、盐、溶剂化物、化学保护形式和前药，其中R2、R3、R4和R5独立地选自H、C1-7烷氧基、氨基、卤代基或羟基；n是1或2；RN1和RN2独立地选自H和R，其中R是任选被取代的C1-10烷基、C3-20杂环基和C5-20芳基；或RN1和RN2，与它们连接的氮原子一起形成任选被取代的5至7元含氮杂环；Het选自(i)，其中Y1和Y3独立地选自CH和N，Y2是选自CX和N，X是H、Cl或F；和(ii)，其中Q是O或S。确切而言，本发明涉及这些化合物抑制聚(ADP-核糖)聚合酶活性的用途，该酶也称作聚(ADP-核糖)合成酶和聚ADP-核糖基转移酶，通常被称为PARP。
文档编号C07D261/10GK101124201SQ200580048416
公开日2008年2月13日 申请日期2005年12月22日 优先权日2004年12月22日
发明者M·H·贾瓦伊德, G·C·M·史密斯, N·M·B·马丁, S·戈梅斯, V·J·M·L·洛, X-L·F·科克罗夫特, K·A·米尼尔 申请人:库多斯药物有限公司