浙贝乙素胆汁酸酯及其制备方法和应用的制作方法

专利名称：：浙贝乙素胆汁酸酯及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一类新的有机化合物的合成及其作为药物的应用，具体涉及浙贝乙素与胆酸、鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸和去氧胆酸经化学合成所得的新酯类化合物，并涉及到该酯类化合物在镇咳、祛痰和平喘方面的应用。
背景技术：
：由于社会老龄化以及环境污染的加剧，呼吸系统疾病的发病率不断上升。咳嗽是呼吸系统疾病的常见症状，一般情况下，咳嗽是一种重要的反射性保护机制，通过咳嗽排出呼吸道内的痰液或异物，保持呼吸道的清洁和通畅，从而防止感染形成。如果咳嗽剧烈持续，不仅病人痛苦，而且易产生其他并发症，因此需要选择适当的镇咳药物来缓解咳嗽。引起咳嗽的原因很多，主要为化学和物理两种因素，根据其性质又可分为内源性和外源性两种形式。内源性咳嗽通常是由炎症介质如气管炎、哮喘、肺炎和肺肿瘤等疾病过量释放的炎症介质所引起；外源性咳嗽通常是由外源性化学或物理物质刺激，以及目前临床上治疗高血压的血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)的不良反应所造成。目前，镇咳药物虽然有很多种，但这些药物一般都通过对神经的抑制而产生作用，具有较大的副作用，如可待因的长期使用会导致成瘾、呼吸抑制和便秘，而右美沙芬可诱发幻觉、妄想等精祌病症状。另外因感冒或急慢性支气管炎、支气管哮喘引起的咳嗽往往多痰，若单纯使用镇咳药物，虽然咳嗽会有所减轻，但因痰液排出受阻，而痰液不但有利于细菌的大量繁殖，而且还可能含有收缩支气管的物质，可引发支气管痉挛和过敏性哮喘，这样咳嗽反而会迁延不止，病情加剧，对于这类咳嗽，最好选择在镇咳的同时兼有化痰作用的药物。因此，寻找新一代非麻醉性、无依赖性镇咳祛痰药物将显得十分必要。随着对咳嗽反射机制研究的深入和筛选镇咳药物研究方法的创新，具有新的作用机制的镇咳药物将成为可能。相对于众多镇咳化学药物的单纯镇咳作用来说，许多中药复方大多同时具备镇咳、祛痰和平喘的功效，而且毒副作用比较小，又没有成瘾性，具有独特的优势。如蛇胆贝母类复方制剂。蛇胆贝母类复方制剂如蛇胆川贝散、蛇胆川贝口服液虽有着良好的疗效而在中国有着悠久的应用历史，但却无法解决中药复方本身所固有的作用物质不明确所带来的质量无法控制等弊端。并且由于组方的蛇胆和贝母同属贵重药材，这类复方制剂还面临着中药材资源严重不足的问题。.
发明内容本发明人考虑到组成该类复方制剂的两味中药有其特殊性，如胆汁中的各种胆汁酸为具有甾体结构的弱有机酸，而贝母的主要有效成分为瑟瓦林类生物碱。胆汁酸虽具有镇咳祛痰平喘的功效，研究发现它们发挥作用的剂量一般较大；而贝母生物碱具有良好的清热润肺、化痰止咳及散结之功效，但是贝母生物碱的毒性一般比较大。因此我们借鉴药物化学中常用的"结构拼合"的思路，基于以上两味药的主要药效成分分别为各种胆汁酸和瑟瓦林类生物碱的研究结果，大胆设想，是否可以将瑟瓦林类生物碱和不同胆汁酸进行结构拼合而得到能发挥出复方功效并可增效减毒的新物质呢？在进行结构拼合的研究中，我们以瑟瓦林类生物碱中具有良好镇咳、祛痰和平喘作用的浙贝乙素和5种胆汁酸经化学合成得到5个酯化合物，使其成为活性成分结构清晰、疗效确切和质量可控的新药。药理研究发现合成的5个酯化合物，相对原来单一的有效成分显示出更强的镇咳、祛痰和平喘功效，且毒性与原料浙贝乙素和5种胆汁酸相比极度减弱。本发明人先前已经对浙贝乙素进行了一系列的结构改造，得到了许多活性很好的衍生物，包括乙酰化浙贝乙素、丙酰化浙贝乙素、浙贝乙素胆酸盐等。但是这些衍生物相对于原料浙贝乙素来说，活性有所提高，但毒性没有很好的减弱(参考文献1.杨曦亮，张勇慧，阮汉利等.浙贝乙素及其5种衍生物对小鼠的半数致死量测定[J].医药导报，2005,24:660-662。2.Fang-zhouXU，ChangCHEN,Yong-huiZHANG，etal.Synthesisandantitussiveevaluationofverticinone-cholicacidsalt,anovelandpotentialcoughtherapeuticagent[J].ActaPharmacolSin，2007,28:1591-1596)。为了寻找具有优良镇咳、祛痰活性且毒性较低的药物，将贝母中的主要活性成分之一浙贝乙素和胆汁酸经过化学合成得到5个酯化合物。通过前期的活性筛选，发现5个酯化合物显示出很好的镇咳、祛痰活性，而且5个酯化合物分别经小鼠腹腔注射，LDso在3g/kg以上，具有良好的开发前景。本发明的任务是提供一组酯类化合物，并提供其在镇咳、祛痰和平喘方面的应用，使其具有活性成分结构清晰、疗效确切、毒副作用小、质量可控、兼有镇咳、祛痰和平喘作用等特点，以克服现有镇咳化学药物毒副作用较大和容易成瘾以及传统中药复方制剂质量难以控制等不足。实现本发明的技术方案是本发明提供的这种酯类化合物是浙贝乙素分别与胆酸、鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸和去氧胆酸经化学合成所得的一组酯类化合物。本发明提供的化合物的结构通式如下本发明以浙贝乙素和5种胆汁酸中的任意一种为原料，利用胆汁酸含有的羧基和浙贝乙素含有的羟基，经化学合成得到5个酯化合物。.原料1.浙贝乙素(5a,14a陽cevanin-3卩，20(3-dihydroxy-6-one)，英文名为verticinone或peiminine，分子式C27H43N03，为白色细长状针晶，212。C-214°C，N原子为其碱性中心。其结构式如下CH32.胆汁酸各种胆汁酸的结构见如下通式，不同胆汁酸的区别仅在于6、7或12位取代基的不同<-COOH基团为各种胆汁酸的酸性中心。.COOH(1)胆酸(R尸HR2=a-OHR3=OH)C24H40O5，白色粉末状结晶，，178°C-182°C(2)鵝去氧胆酸(R^HR产a-OHR3-H)C24H40O4'白色粉末状结晶，w.p.144°C-146°C(3)熊去氧胆酸(R产HR2=(3-OHR3=H)C24H40O4，白色粉末状结晶，肌p.200。C-204。C(4)猪去氧胆酸(R严OHR2-HR^H)C24H40()4，白色粉末状结晶，w.;7.168°C-170°C(5)去氧胆酸(R产HRfHRfOH)C24H40O4，白色粉末状结晶，肌p.173°C-176°C本发明包括利用浙贝乙素结构中的3位P构型的羟基和胆酸、鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸或去氧胆酸结构中的羧基，经化学合成得到5个酯化合物。该酯化合物相对于原料药来说，不仅具有更为良好的镇咳、祛痰和平喘作用，5个酯化合物分别经小鼠腹腔注射，LD5Q在3g/kg以上。5种胆汁酸与浙贝乙素合成的酯化合物结构如下图化合物1为胆酸与浙贝乙素成的酯化合物，命名为5a，14a-cevanin-6-O陽20(3-hydroxy-3卩-yl-3a,7a,12a-trihydroxy-5(3-cholan-24-oate。f奇写为CA-Ver。化合物2为鹅去氧胆酸与浙贝乙素成的酯化合物，命名为5ct,14a-cevanin-6-O-20p-hydroxy-3卩-yl-3a,7a-dihydroxy-5卩-cholan-24-oate。f奇写为CDCA-Ver。化合物3为熊去氧胆酸与浙贝乙素成的酯化合物，命名为5a,14a-cevanin-6-O-20卩-hydroxy-邓-yl-3a,7p-dihydroxy-5卩-cholan-24-oate。简写为UDCA-Ver。化合物4为猪去氧胆酸与浙贝乙素成的酯化合物，命名为5a,1:R,=HR2=a-OHR3=OH2:R=HR2=a-OHR3=H3:R尸HR2=P-OHR3=H4:R|=OHR2=HR3=H5:R，HR2=HR3=OH14ct-cevanin-6-O-20卩勿droxy-3p-yl-3(x,6a-dihydroxy邻-cholan-24-oate。简写为HDCA-Ver。化合物5为去氧胆酸与浙贝乙素成的酯化合物，命名为5ct,14a-cevanin-6-O-20(3-hydroxy-3p-yl-3a,12a陽dihydroxy-5卩-cholan-24-oate。简写为DCA-Ver。化合物1-5的理化性质比较见表1，"C-NMR数据比较见表2，'H-NMR数据比较见表3。表1表示5个酯化合物基本理化性质比较；表2表示5个酯化合物13C-NMR数据比<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>372.872.872,872.872.93,71.972.071.571.67L8430.430.630.430—330.54,39.740.037.328,236,556.456.455.856.256.45,41.541.542,548.842,16210.4210.2210.4210.46,34.734.636.968.127.1745.945.945.745.945.87,68.468.571.435.326.2841.941.941.541.841.58,39.639.743.635.136.1956.456.456.556.456.59,26.632.939.339.933.71038.338.338.338.438.310'34.635.134.136.034.11129.329.428.729.329.7l，'28.220.621.421.128.71240.940.940.440.940.712'73—039.440.240.073.21339.139.239.239.838.413'46.542.743.842.946,61444.044.0'43.844.043.94'41.850.555.756.048.31524.624.624.224.624.715'23.223.726,924.723,61621.021.021.220.82U16'27.528.228.331.027.41748.848.848.148.448.417'47.055.755.055.847.]1861.861.86].l6K861.618']2.51].712.212.112,7912.712,712.512.712.719'22.522.823.424.223.22070.970.971.570.971.020'35.335.535.435.535.22120.520.520.220.520.221'17.318.318.418.517.32270.570.471.470.670.522'31.531.531.031.631.52319.0L9.018.619.018.723'31.531.031.031.531.52429.029.028.529.028.924']73.8173.8173.8173.8]73.82527.627.627.827.627.52662.262,362.362.161.72717.317.316.417.317.6表3，H-NMRdataofCA-Ver，CDCA-Ver,UDCA-Ver，HDCA-VerandDCA-Ver(J，CDC13,400MHz)Proton12345Proton2343a-CH4.6919-CH30.8021-CH31.031.08"47464.684.684.674.673'p-CH0.790.790-790.806，卩匿CH——1.021.031,041.037，a-CH........1.071.071.091.087'卩-CH3.843.853.583.62—-4.063.68—14<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>实验资料1.CA-Ver、CDCA-Ver、UDCA-Ver、HDCA-Ver和DCA-Ver镇咳活性的测定采用小鼠浓氨水引咳法，取昆明种小鼠130只，雌雄各半，体重1822g，随机分成13组，每组10只。用磷酸可待因作为阳性对照药，剂量为30mg/kg，5个酯化合物的给药剂量均为3mg/kg，原料药浙贝乙素及5种胆汁酸的给药剂量也均为3mg/kg，以上药物均用0.5%CMC-Na溶液混悬，阴性对照组给予等容量溶剂，上述各组均灌胃给药，于给药后60分钟分别将小白鼠置于倒置500ml烧杯内，内放一棉球，用lml注射器吸取氨水0.2ml注入棉球，迅速倒置烧杯，以免气体漏逸，观察和记录小白鼠的咳嗽潜伏期和3分钟内咳嗽次数。结果见表4，与阴性比较，5个酯化合物和浙贝乙素均具显著性差异，5种胆汁酸原料的镇咳效果则不明显，可能与两原料给药剂量较小有关。由该结果可以看出，在5个酯化合物中，CA-Ver表现出比浙贝乙素更强的镇咳活性。5个酯化合物之间镇咳活性没有显著性差异，都有进一歩开发的意义。表4表示5个酯化合物与各自原料镇咳效果比较。表4EffectofCA-Vei-,CDCA-Ver,UDCA-Ver,HDCA-VerandDCA-Veroncoughinducedbyammonia<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>DCA31040.40±17.09n.2士2.1532.53CA-Ver31078.14±25.47***6.7±2.67***59.64CDCA-Vei'31076.51±23.18***94±2.的***43.37UDCA-Ver31075.96±28.18**9.1±2.85***45.18HDCA-Ver31077.72±20.06***7.8±2.82***53.01DCA-Ver31078.53±24.22***7.9±3.51***52.41**P<0.01,***P<0.001(uj0.5%CMC-Na)2.CA-Ver、CDCA-Ver、UDCA-Ver、HDCA-Ver和DCA-Ver祛痰活性的测定采用小鼠酚红法，取昆明种小鼠130只，雌雄各半，体重1822g，随机分成13组，每组10只。用愈创木酚甘油醚作为阳性对照药，剂量为50mg/kg，5个酯化合物的给药剂量均为3mg/kg，原料药浙贝乙素及5种胆汁酸的给药剂量也均为3mg/kg，以上药物均用0.5。/。CMC-Na溶液混悬，阴性对照组给予等容量溶剂，上述各组均灌胃给药。实验前一天饥饿过夜,只供饮水。给药30分钟后，腹腔注射5%酚红生理盐水溶液，再过30分钟后将小鼠脱颈椎处死。背位固定，剪开颈部皮肤，分离气管，取自甲状软骨处至气管分叉处的气管段，将其浸泡于3ml5%碳酸氢钠溶液中，充分振荡。于波长557nm处比色测定吸光度。根据酚红标准曲线，计算酚红的排泌量，由此得出5个酯化合物的祛痰活性。结果见表5，与阴性比较，5个酯化合物和浙贝乙素均显示出一定的祛痰活性，其中CA-Ver在5个酯化合物中最强。表5表示5个酯化合物与各自原料祛痰效果比较。表5EffectofCA-Ver,CDCA陽Ver，UDCA-Ver,HDCA-VerandDCA-Verontheamountofphenolred(PR)secretedinmice(Mean±S.E,n=10)ExperimentaldesignDose(mg/kg)NoanimalsAbsorbance(A)Phenolredsecretion(Hg/ml)0.5%CMC-Na—100.1207±0.04850.8670±0.3505Guaifenesin50100.2585±0.06431.8526±0.4635***Verticinone3100.2494±0.07421.7876±0.5343***CA3100.]279±0.07040.9185±0.5072CDCA3100.]345±0.06410.9657±0.4621UDCA3100.1229±0.03800.8827±0.2754HDCA3100.1272±0.05210.9134±0.3763DCA3100.1325±0.05070.9514±0.3662CA-Ver3100.2370±0.0741.6989±0.5143***CDCA-Ver3100.2175±0.06701.5594±0.4828**UDCA-Ver3100.2219±0.07221.5908±0.5200"3100.1957±0.07931.4034±0.5708*3100.177.0±0.05401.2697±0.3920**P<0.05,**P<0.01,***P<0.001(v.s0.5%CMC-Na)3.CA-Ver、CDCA-Ver、UDCA-Ver、HDCA-Ver和DCA-Ver平喘活性的测定采用豚鼠药物引喘法，取150200g的豚鼠，雌雄不拘，逐一测定引喘潜伏期，挑选合格者。将豚鼠放入402型超声雾化仪中，以恒定速率喷入2°/。氯化乙酰胆碱和0.1%磷酸组胺的等量混合液15秒，观察6分蚀之内豚鼠出现喘息性抽搐的潜伏期即引喘潜伏期，如见豚鼠跌倒立即将其取出，以免死亡。并记录引喘潜伏期，引喘潜伏期大于120秒则认为不合格而不予选用。次日将合格豚鼠随机分成13组，每组10只。用氨茶碱作为阳性对照药，剂量为25mg/kg，5个酯化合物的给药剂量均为6mg/kg，5种胆汁酸的给药剂量也均为6mg/kg，原料药浙贝乙素的给药剂量为3mg/kg,以卜—药物均用0.5。/。CMC-Na溶液混悬，阴性对照组给予等容量溶剂，上述各组均灌胃给药。给药1小时后，以同样条件引喘并测定引喘潜伏期。比较给药前后引喘潜伏期的变化观察5个酯化合物的平喘活性。'结果见表6，与阴性比较，CA-Ver、UDCA-Ver、DCA-Ver和浙贝乙素均显示出一定的平喘活性，其中CA-Ver在5个酯化合物中最强。表6表示5个酯化合物与各自原料平喘效果比较。表6EffectofCA-Ver,CDCA-Ver，UDCA-Ver,HDCA-VerandDCA-VeronasthmainducedbyAcethlcholineChlorideandHistaminePhosphateinguinea-pigs(Mean±S.E,n=8)LatencyofExperimentalDossNoanimalsLatencyofasthmabeforeasthmaafterProlongedperiodofdesign(mg/kg)drugadministration/sdrugasthma/sadministration/s0.5%CMC-Na——857.8±10.473.4±10.515.6±5.7Aminophylline25856.1±10.3194.4±45.2138.3±46.2***Verticinone859.9±9.9111.1±22.551.2±22.4***CA6852.5±6.568.8±6.116.3±6.2CDCA6857.4±8.575.3±10.717.9±12.8UDCA6854.0±7.170.3±12.416.3±8.1HDCA6860.0±8.476.5±8.616.5±6.217HDCA-VerDCA-Ver.5±7.875.4±8.916.9±6.4CA-Ver6854.4±8.898.8±23.144.4±21.4sCDCA-Ver6852.4±6.776.1土12.223.8±6.9sIJDCA-Ver6857.1±9.581.8±7.624.6±8.7sHDCA-Ver6853.9±8.879.8±10.825.9±9.8*DCA-Ver6857.9±12.692.3±13.634.4±8.7**P<0.05，**P<0.01,***P<0.001(v.s0.5o/oCMC-Na)4.CA-Ver、CDCA-Ver、UDCA-Ver、HDCA-Ver和DCA-Ver急性毒性的研究参照徐淑云主编的药理实验方法学(第二版)，测定CA-Ver、CDCA-Ver、UDCA-Ver、HDCA-Ver和DCA-Ver的LD5。值。取小鼠20只，以4只为一组分5组，选择组距较大的一系列剂量给小鼠以0.2ml/10g口服灌胃和腹腔注射，观察灌胃和腹腔注射后1小时内的反应和死之率，结果不理想时将浓度提高或降低，经多次预试结果显示，当剂量调至3g/kg腹腔注射给药或者3g/kg灌胃给药，均没有发现小鼠死亡现象。精密称取一定量的样品，加入一定量CMC,Na(约0.1250g)研溶并定容至25ml。将小鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半，禁食不禁水12小时后，腹腔注射给药分别为Omg，500nig，1500mg，2500mg，3500mg。观察14天结果均没有出现死亡现象。结果显示CA-Ver、CDCA-Ver、UDCA-Ver、HDCA-Ver和DCA-Ver分别经小鼠腹腔注射，1^5()值在3g/kg以上。图1至图5分别是5个酯化合物的合成路线图图丄为CA-Ver的合成路线；图2为CDCA-Ver的合成路线；图3为UDCA-Ver的合成路线；图4为HDCA-Ver的合成路线图5为DCA-Ver的合成路线。图6为本发明提供的化合物的结构通式。具体实施方式以下实施例旨在进一步说明本发明，并不对本发明的范围加以限制。实施例1化合物CA-Ver的制备(合成路线见图1)1.1将24.5g(0.060mol)的胆酸，180ml无水甲醇加入到500ml的圆底烧瓶中，待胆酸完全溶解在甲醇中，滴加1.5ml浓硫酸，室温条件下磁力搅拌过夜。TLC分析，判定反应终点。停止反应，加固体碳酸氢钠，搅拌10min。抽滤，用无水甲醇洗涤三次。合并滤液，减压蒸干溶剂。粗品用乙酸乙酯重结晶，得到化合物a，无色晶体。真空干燥，最后得到化合物a22.28g，计算产率为88%。肌;.153-154°C(UU55-156。C)。IR(cm"):3417,2938,2869,1739，1465,1441,1376,1254,1173，1079,1012,981。'H-NMR(400MHz,CDC13)，&0.67(3H,s，18，-CH3),0.88(3H,s,19，-CH3),0.98(3H,d，21，-CH3),3.43(1H，m,3,卩-CH)，3.67(3H,s,-OCH3),3.84(1H,m,7，p-CH),3.96(1H,m,12，p-CH)。1.2将6.3g(0.015mol)的化合物a、1.8g(0.0265mol)的咪唑和100ml的无水四氢呋喃(THF)加入到250ml的双颈圆底烧瓶中。将2.4g(0.016mol)的TBDMSiCl溶解在30ml的无水THF中，所得溶液用滴液漏斗滴加到反应体系中，要求滴加的速度约为l滴/5秒，反应温度控制在l(TC左右，反应体系保证密闭。待TBDMSiCl溶液滴加完毕后，室温反应48小时。向反应体系加入50ml的蒸馏水停止反应。反应产物用2x100ml的CH2Cl2萃取两次。合并有机层并用水洗两次，用无水硫酸镁干燥并浓縮回收CH2Cl2。粗品用甲醇重结晶，得到化合物b，无色粉木。真空干燥，最后得到化合物b5.80g，计算产率为72.1%。肌户.172-175°C。IR(cm"):3520,3333，2934,2862,1736，1464,1440,1375，1253，1171，1071,1043,982。iH陽NMR(400MHz,CDC13)，<5:0.67(3H,s，18，-CH3),0.87(3H,s,19，-CH3),0.97(3H，d,21，-CH3)，3.42(1H,m,3'p-CH),3.66(3H,s，-OCH3),3.84(1H,m,7，卩-CH),3.97(1H,m,12，p-CH)。1.3将5.4g(O.Olmol)的化合物b和100ml的THF加入到250ml的双颈圆底烧瓶中。待化合物b完全溶解后加入30ml的5%的NaOH水溶液，室温搅拌过夜。反应12小时后，向反应体系中加入一定量的10%的盐酸，调节反应体系的pH值到3左右。产物用2xl00ml的乙酸乙酯萃取两次。合并有机层并用水洗两次，用无水硫酸镁干燥并浓縮回收乙酸乙酯。19粗品用乙酸乙酯重结晶，得到化合物c，无色晶体。真空干燥，最后得到化合物c4.90g，计算产率为93.8%。肌/.158-161。C。IR(cm"):3418,2933,2861,1710,1467,1410,1378,12541197,1081,1043,981,874，837,776。！H-NMR(400MHz,CDC13)，0.70(3H,s,18，-CH3),0.88(3H,s，19，-CH3),1.00(3H，d,21，-CH3),3.48(1H,m,3，卩-CH),3.83(1H,m,7，卩-CH),3.96(1H,m,12'(3墨CH)。1.4将3.1g(0.006mol)的化合物c和100ml的无水CH2C12加入到250ml的双颈圆底烧瓶中。待化合物c完全溶解后依次加入79mg(0.00065mol)的DMAP，2.6g(0.006mol)的浙贝乙素(5a,14a-cevanine-3(3,20卩-dihydroxy-6-one)，L34g(0.0065mol)的DCC。室温搅袢反应48小时。随着反应进行，体系中出现许多沉淀物。停止反应，过滤掉沉淀物并浓縮有机溶剂。将反应剩余的残渣溶解在CH2Cl2中并用适量0.5N的盐酸洗涤两次，然后再用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。最后有机层用无水硫酸钠干燥并浓縮回收CH2Cl2。粗产品经石J":胶柱色谱(洗脱剂为EtOAc/PE/Et2NH^/10/0.1)分离纯化，得到化合物d，无色粉末。真空干燥，最后得到化合物d3.30g，计算产率为58.9%。肌户.171-173°C。IR(cm"):3478,3327,2932,2855,2775,1693,1634,1453,1380,1253,1193,1092,986,878,838,775。^-NMR(400MHz,CDC13)，&0.68(3H,s，18，-CH3),0.88(3H，s，19，-CH3),0.99(3H,d,21'-CH3)，3.47(1H,m,3'卩-CH),3,84(1H,m,7'卩-CH),3.96(1H,m,12，p-CH),4.69(1H,m,3a-CH)，0.79(3H,s，19-CH3),1.03(3H，s,21-CH3),1.08(3H,d,27-CH3)。1.5将2.5g(0.0027mol)的化合物d和50ml的THF加入到100ml的双颈圆底烧瓶中，用冰浴冷却反应体系。待化合物d完全溶解后加入20ml的5n/。的氢氟酸，室温搅拌24小时。反应24小时后，向反应体系中加入一定量的10%的碳酸氢钠水溶液，调节反应体系的pH值到8左右。产物用2xl00ml的乙酸乙酯萃取两次。合并有机层并用水洗两次，然后再用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。最后用无水硫酸钠干燥并浓縮有机溶剂。粗产品经硅胶柱色谱(洗脱剂为EtOAc/PE/Et2NKNl/l/0.1)分离纯化，得到化合物CA-Ver，无色粉末。真空干燥，最后得到化合物CA-Ver2.10g，计算产率为95%。148-150°C。[a]2D0=-45.5(c0.001,CHC13)。IR(cm.'):3441,2939,2870,2774,1713,1466,1450,1380,1259,1174,1078,1042,982。EI-MSm/z:820([M+H]+，5.19%)，819(M+，4.78%)，412(17.27%),411(22.68%),410(13.17%),354(21.18%),271(30.11%),253(29.64%),112(100%),111(26,45%)，91(60.28%),79(56.14%)。'H-NMR(400MHz，CDC13)，4.69(1H,m,3a陽CH),3.97(1H,s,12，卩-CH),3.84(1H,s,7'(3-CH),3.47(1H,s,3'p-CH),1.08(3H,d，27-CH3),1.03(3H,s,21-CH3)，0.98(3H，d，21'-CH3)，0.88(3H,s,19，-CH3),0.80(3H,s，19-CH3)，0.68(3H,s,18，-CH3)。13C-NMR(lOOMHz，CDC13)，&210.4(C-6),173.8(C-24，)，73.0(C-12,)'72.8(C-3),71.9(C-3，)，70.9(C-20),70.5(C-22),68.4(C-7，)，62.2(C-26)，61.8(C-18)，56.4(C-9),56.4(C-5)。实施例2化合物CDCA-Ver的制备(合成路线见图2)2.1将23.5g(0.060mol)的鹅去氧胆酸，180ml无水甲醇加入到500ml的圆底烧瓶中，待鹅去氧胆酸完全溶解在甲醇中，滴加1.5ml浓硫酸，室温条件下磁力搅拌过夜。TLC分析，判定反应终点。停止反应，加固体碳酸氢钠，搅拌10min。抽滤，用无水甲醇洗涤三次。合并滤液，减压蒸干溶剂。粗品用乙酸乙酯重结晶，得到化合物e，无色晶体。真空干燥，最后得到化合物e20.71g，计算产率为85%。肌/.144-146。C。IR(cm"):3399,2934,2866,1744,1464,1441,1375,1249，1167,1077,1046,979。！H-NMR(400MHz,CDC13)，<5:0.66(3H,s,18'墨CH3)，0.91(3H,s，19，-CH3),0.92(3H,d,21'-CH3)，3.46(1H,m，3'(3-CH),3.67(3H，s，-OCH3),3.86(1H,m,7'卩-CH)。2.2将6.1g(0.015mol)的化合物e、1.8g(0.0265mol)的咪唑和100ml的无水四氢呋喃(THF)加入到250ml的双颈圆底烧瓶中。将2.4g(0.016mol)的TBDMSiCl溶解在30ml的无水THF中，所得溶液用滴液漏斗滴加到反应体系中，要求滴加的速度约为1滴/5秒，反应温度控制在l(TC左右，反应体系保证密闭。待TBDMSiCl溶液滴加完毕后，室温反应48小时。向反应体系加入50ml的蒸馏水停止反应。反应产物用2xl00ml的CH2Cl2萃取两次。合并有机层并用水洗两次，用无水硫酸镁干燥并浓縮回收CH2Cl2。粗品用甲醇重结晶，得到化合物f，无色粉木。真空干燥，最后得到化合物f5.48g，计算产率为70.3%。flip.190-193°C。IR(cm.1):3521,2945,2866，1727，1468，1444,1378，1358,1256,1225,1157,1088,1008,981,874，836,774。！H-NMR(400MHz,CDC13),&0.65(3H，s,18，-CH3),0.89(3H,s,19'-CH3)，0.92(3H，d,21，-CH3),3.45(IH,m，3，卩-CH),3.67(3H,s,-OCH3),3.84(1H,m，7'卩-CH)。2.3将5.2g(O.Olmol)的化合物f和100ml的THF加入到250ml的双颈圆底烧瓶中。待化合物f完全溶解后加入30ml的5%的NaOH水溶液，室温搅拌过夜。反应12小时后，向反应体系中加入一定量的10%的盐酸，调节反应体系的pH值到3左右。产物用2x100ml的乙酸乙酯萃取两次。合并有机层并用水洗两次，用无水硫酸镁干燥并浓縮回收乙酸乙酯。粗品用乙酸乙酯重结晶，得到化合物g，无色晶体。真空干燥，最后得到化合物g4.86g，计算产率为96.0%。肌;.149-15rC。IR(cm"):3384,2930,2859,1706，1468,1381，1253,1178，1077，1017,961,873，835,776.關MR(400MHz,CDC13)，c5:0.66(3H,s,18，-CH3),0.89(3H,s,19，-CH3),0.94(3H,d,21，-CH3),3.45(1H，m,3，p-CH),3.84(1H,m,7,卩-CH)。2.4将3.0g(0.006mol)的化合物g和100ml的无水CH2C12加入到250ml的双颈圆底烧瓶中。待化合物g完全溶解后依次加入79mg(0.00065mol)的DMAP，2.6g(0.006mol)的浙贝乙素(5a,14a-cevanine-3(3,20卩-dihydroxy-6-one)，1.34g(0.0065mol)的DCC。室温搅拌反应48小时。随着反应进行，体系中出现许多沉淀物。停止反应，过滤掉沉淀物并浓縮有机溶剂。将反应剩余的残渣溶解在CH2Cb中并用适量0.5N的盐酸洗涤两次，然后再用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。最后有机层用无水硫酸钠干燥并浓縮回收CH2Cl2。粗产品经硅胶柱色谱(洗脱剂为EtOAc/PE/Et2NH4/ll/0.1)分离纯化，得到化合物h，无色粉末。真空千燥，最后得到化合物h3.38g，计算产率为61.5%。181-183。C。IR(cm-'):3507,2932,2856,2775,1712,1467,1379,1254,1170，1091,1004,985,873,837,775。'H陽NMR(400MHz,CDC13)，&0.65(3H,s,18'-CH3),0.91(3H,s,19，-CH3),0.93(3H,d,21，-CH3),3.45(1H，m,3'卩-CH)，3.84(1H,m,7'(3-CH),4.68(1H,m,3a-CH),0.79(3H,s,19-CH3),1.03(3H,s,21-CH3),1.07(3H,d,27-CH3)。2.5将2.5g(0.0027mol)的化合物h和50ml的THF加入到100ml的双颈圆底烧瓶中，用冰浴冷却反应体系。待化合物h完全溶解后加入20ml的5%的氢氟酸，室温搅拌24小时。反应24小时后，向反应体系中加入一定量的10%的碳酸氢钠水溶液，调节反应体系的pH值到8左右。产物用2xl00ml的乙酸乙酯萃取两次。合并有机层并用水洗两次，然后再用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。最后用无水硫酸钠干燥并浓縮有机溶剂。粗产品经硅胶柱色谱(洗脱剂为EtOAc/PE/Et2NH-l/2/0.1)分离纯化，得到化合物CDCA-Ver,无色粉末。真空干燥，最后得到化合物CDCA-Ver2.02g，计算产率为93%。w.p133.5-137.5°C。[a]2DG=-90.0(c0.001,CHC13)。IR(cm-1):3516，3439,2930，2867,2753,1742,1711,1693,1465,1448,1376,1249,1164,1080,1001,978。EI-MSm/z:804([M+H]+,12.84%),803([M-H]+,19.30%),786(48.12%),750(48.15%),413(11.64%),412(12.87%),411(39.17%),356(34.98%),341(23.86%)，255(11.40%),112(100%),111(31.61%),91(55.48%),79(56.03%)。^-NMR(400MHz,CDC13)，(5:4.68(1H,m,3a-CH),3.85(1H,s,7'p-CH),3.46(1H,m,3'p-CH),1.07(3H，d,27-CH3),1.02(3H,s,21-CH3),0.93(3H,d，21'-CH3),0.90(3H,s,19'-CH3)，0.79(3H,s,19-CH3)，0.66(3H,s,18,-CH3)。13C-NMR(100MHz,CDC13)，&210.5(C-6),173.8(C-24，)，72.8(C-3),72.0(C-3，)，70.9(C-20),70.4(C-22),68.5(C-7，)，62.3(C-26),61.8(C-18)，56.4(C-9)，56.4(C-5)。实施例3化合物UDCA-Ver的制备(合成路线见图3)3.1将23.5g(0.060mol)的熊去氧胆酸，180ml无水甲醇加入到500ml的圆底烧瓶中，待熊去氧胆酸完全溶解在甲醇中，滴加1.5ml浓硫酸，室温条件下磁力搅拌过夜。TLC分析，判定反应终点。停止反应，加固体碳酸氢钠，搅拌10min。抽滤，用无水甲醇洗涤三次。合并滤液，减压蒸干溶剂。粗品用乙酸乙酯重结晶，得到化合物i，无色晶体。真空干燥，最后得到化合物i22.17g，计算产率为91%。肌/7.210-212。C。IR(cm"):3468,2939,2861,1709,1453，1429,1384,1366,1301，1269,1241,1105,1077,1048,1010,948。'H-NMR(400MHz，CDC13)，<5:0.67(3H,s,18，-CH3),0.92(3H,s,19，-CH3)，0.94(3H,d,21，-CH3),3.5123(IH,m,3'P-CH),3.60(1H，m,7'a-CH),3.67(3H，s,-OCH3)。3.2将6.1g(0.015mol)的化合物i、1.8g(0.0265mol)的咪唑和100ml的无水四氢呋喃(THF)加入到250ml的双颈圆底烧瓶中。将2.4g(0.016mol)的TBDMSiCl溶解在30ml的无水THF中，所得溶液用滴液漏斗滴加到反应体系中，要求滴加的速度约为1滴/5秒，反应温度控制在IO'C左右，反应体系保证密闭。待TBDMSiCl溶液滴加完毕后，室温反应48小时。向反应体系加入50ml的蒸馏水停止反应。反应产物用2xl00ml的CH2Cl2萃取两次。合并有机层并用水洗两次，用无水硫酸镁干燥并浓縮回收CH2Cl2。粗品用甲醇重结晶，得到化合物j，无色粉末。真空干燥，最后得到化合物j5.60g，计算产率为71.8%。m.p.l55墨158。C。IR(cm"):3547,2933,2860,1729,1451,1379，1252，1169,1102,1021,988,875，837，773。'H-NMR(400MHz，CDC13)，山0.67(3H,s,18，-CH3),0.92(3H,s,19，-CH3),0.94(3H,d，2r-CH3)，3.51(1H，m,3'卩-CH)，3.61(1H,m,7'a-CH)，3.67(3H,s,-0CH3)。3.3将5.2g(O.Olmol)的化合物j和100ml的THF加入到250ml的双颈圆底烧瓶中。待化合物j完全溶解后加入30ml的5。/。的NaOH水溶液，室温搅拌过夜。反应12小时后，向反应体系中加入一定量的10%的盐酸，调节反应体系的pH值到3左右。产物用2xl00ml的乙酸乙酯萃取两次。合并有机层并用水洗两次，用无水硫酸镁干燥并浓縮回收乙酸乙酯。粗品用乙酸乙酯重结晶，得到化合物k，无色晶体。真空干燥，最后得到化合物k4.76g,计筧产率为94.0。/o。附.p.218-22rC。IR(cm"):3546,3384,2931,2859,1702,1467,1381,1255,1099,1018,952,873，836,775。'H-丽R(400MHz，CDC13),&0.67(3H,s,18，-CH3),0.92(3H,s，19'-CH3),0,95(3H,d,21,-CH3)，3.52(1H,m,3'卩-CH)，3.62(1H,m,7，a-CH)。3.4将3.0g(0.006mol)的化合物k和100ml的无水CH2C12加入到250ml的双颈圆底烧瓶中。待化合物k完全溶解后依次加入79mg(0.00065mol)的DMAP，2.6g(0.006mol)的浙贝乙素(5a,14a-cevanine-3卩，2邻-dihydroxy-6-one)，L34g(0.0065mol)的DCC。室温搅拌反应48小时。随着反应进行，体系中出现许多沉淀物。停止反应，过滤掉沉淀物并浓縮有机溶剂。将反应剩余的残渣溶解在CH2Cb中并用适量0.5N的盐酸洗涤两次，然后再用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。最后有机层用无水硫酸钠干燥并浓缩回收CH2C12。粗产品经硅胶柱色谱(洗脱剂为EtOAc/PE/Et2NH-l/ll/0.1)分离纯化，得到化合物1，无色粉末。真空干燥，最后得到化合物13.06g，计算产率为55.6%。160-162°C。IR(cm"):3456,2932,2857,2775，1734，1713,1690,1466,145i,1379,1254,1233,1170,1079，956,872,836,775。'H-NMR(400MHz,CDC13)，A0.67(3H,s,18，-CH3),0.92(3H,s,19，-CH3),0.93(3H，d,21'-CH3)，3.51(1H，m,3,卩-CH),3.60(1H,m,7'a-CH),4,69(1H,m，3a-CH),0.79(3H,s,19-CH3),1.03(3H,s,21-CH3)，1.09(3H,d,27-CH3)。3.5将2.5g(0.0027mol)的化合物1和50ml的THF加入到100ml的双颈圆底烧瓶中，用冰浴冷却反应体系。待化合物1完全溶解后加入20ml的5%的氢氟酸，室温搅拌24小时。反应24小时后，向反应体系中加入一定量的10%的碳酸氢钠水溶液，调节反应体系的pH值到8左右。产物用2xl00ml的乙酸乙酯萃取两次。合并有机层并用水洗两次，然后再用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。最后用无水硫酸钠干燥并浓縮有机溶剂。粗产品经硅胶柱色谱(洗脱剂为EtOAc/PE/Et2NH-l/2/0.1)分离纯化，得到化合物UDCA-Ver，无色粉末。真空干燥，最后得到化合物UDCA-Ver2.06g，计算产率为95%。w.p.126.5-128.5°C。[a]2DQ=+34.5(c0.001,CHC13)。IR(cm"):3411,2933,2859,1709,1452,1383,1255,1237，1171,1080,1053，959。EI-MSm/z:804([M+H]+，4.26%),803(M+,2.26%),785(4.98%),413(17.23%),411(34.45%),410(8.67%),356(23.60%),341(14.94%),256(14.43%),113(45.87%),112(42.00%),1.11(26.32%),91(55.07%)，79(53.23%),，5(100%)。^-NMR(400MHz,CDC13)，&4.68(1H,m,3a-CH)，3.68(1H,m,7'a-CH),3.58(1H,m，3，卩-CH),1.07(3H,d,27-CH3),1.03(3H,s，21-CH3),0.96(3H，d,21,-CH3),0.88(3H,s,19，-CH3)，0,79(3H,s,19-CH3),0.68(3H,s,18，-CH3)。13C-NMR(100MHz,CDCI3)，&210.2(C-6),173.8(C-24，),72.8(C-3),71.5(C-3，),71.5(C-20),71.4(C-22)，71.4(C-7，)，62.3(C-26),61.1(C-18),56.5(C-9),55.8(C-5)。实施例4化合物HDCA-Ver的制备(合成路线见图4)4.1将23.5g(0.060mol)的猪去氧胆酸，180ml无水甲醇加入到500ml的圆底烧瓶中，待猪去氧胆酸完全溶解在甲醇中，滴加1.5ml浓硫酸，室温条件下磁力搅拌过夜。TLC分析，判定反应终点。停止反应，加固体碳酸氢钠，搅拌10min。抽滤，用无水甲醇洗涤三次。合并滤液，减压蒸干溶剂。粗品用乙酸乙酯重结晶，得到化合物m，无色晶体。真空千燥，最后得到化合物m20.34g，计算产率为83.5%。122-124°C。IR(cm"):3392,2938,2866,1742,1452,1377,1255,1168,1039,957。！H-NMR(400MHz,CDC13)，&0.64(3H,s,18，-CH3),0.90(3H,s,19，-CH3),0.93(3H，d,21，-CH3),3.62(1H,m,3'卩-CH),3.67(3H,s,-OCH3),4.05(1H,m,6'(3-CH)。4.2将6.1g(0.015mol)的化合物m、1.8g(0.0265mol)的咪唑和100ml的无水四氢呋喃(THF)加入到250ml的双颈圆底烧瓶中。将2.4g(0.016mol)的TBDMSiCl溶解在30ml的无水THF中，所得溶液用滴液漏斗滴加到反应体系中，要求滴加的速度约为1滴/5秒，反应温度控制在1CTC左右，反应体系保证密闭。待TBDMSiCl溶液滴加完毕后，室温反应48小时。向反应体系加入50ml的蒸馏水停止反应。反应产物用2xl00ml的CH2Cl2萃取两次。合并有机层并用水洗两次，用无水硫酸镁干燥并浓縮回收CH2Cl2。粗品用甲醇重结晶，得到化合物n，无色粉末。真空干燥，最后得到化合物n5.62g，计算产率为72.1。/。。肌/U51-153。C。IR(cm"):3602,3418,2941,2858,1733,1467,1440,1377,1311,1251,1168,1073，1033,988,871,837，775。'H墨NMR(400MHz,CDC13)，<5:0.63(3H,s,18，-CH3),O.卯(3H,s，19，-CH3),0.92(3H，d,21，-CH3),3.59(1H,m，3'卩-CH),3.67(3H,s,-OCH3),4.03(1H，m，6'卩陽CH)。4.3将5.2g(O.Olmol)的化合物n和100ml的THF加入到250ml的双颈圆底烧瓶中。待化合物n完全溶解后加入30ml的5%的NaOH水溶液，室温搅拌过夜。反应12小时后，向反应体系中加入一定量的10%的盐酸，调节反应体系的pH值到3左右。产物用2xl00ml的乙酸乙酯萃取两次。合并有机层并用水洗两次，用无水硫酸镁干燥并浓縮回收乙酸乙酯。粗品用乙酸乙酯重结晶，得到化合物o，.无色晶体。真空干燥，最后得到化合物o4.86g，计党产率为96%。肌p.206-208。C。IR(cm"):3395,2942,2858,1730,1467,1444,1392,1252,1173,1096,1029,963,873,837,774。'H-NMR(400MHz,CDC13)，&0.64(3H,s,18，-CH3),0.9026(3H,s,19，-CH3)，0.93(3H,d,21'-CH3),3.59(1H,m,3，卩-CH),4.05(1H,m,6'卩-CH)。4.4将3.0g(0.006mol)的化合物o和100ml的无水CH2C12加入到250ml的双颈圆底烧瓶中。待化合物o完全溶解后依次加入79mg(0.00065mol)的DMAP，2.6g(0.006mol)的浙贝乙素(5a,14a-cevanine-3卩，20卩-dihydroxy-6-one)，1.34g(0.0065mol)的DCC。室温搅拌反应48小时。随着反应进行，体系中出现许多沉淀物。停止反应，过滤掉沉淀物并浓縮有机溶剂。将反应剩余的残渣溶解在CH2Cl2中并用适量0.5N的盐酸洗涤两次，然后再用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。最后有机层用无水硫酸钠干燥并浓縮回收CH2Cl2。粗产品经硅胶柱色谱(洗脱剂为EtOAc/PE/Et2NH^/ll/0.1)分离纯化，得到化合物p，无色粉末。真空干燥，最后得到化合物p2.83g，计算产率为51.5%。179-182。C。IR(cm"):3528,3311,2931,2856,2757,1699,1673,1658,1453,1381，1252,1168,1087,1004,986,875,837,774。■H-NMR(400MHz,CDC13)，&0.64(3H,s,18，-CH3),0.90(3H，s，19'-CH3),0.93(3H，d,21，-CH3),3.58(1H,m,3'卩-CH),4.05(1H,m,6'卩-CH),4.68(1H，m,3a-CH),0.80(3H,s，19-CH3),1.04(3H，s,21-CH3),1.09(3H,d,27-CH3)。4.5将2.5g(0.0027mol)的化合物p和50ml的THF加入到100ml的双颈圆底烧瓶中，用冰浴冷却反应体系。待化合物p完全溶解后加入20ml的5%的氢氟酸，室温搅拌24小时。反应24小时后，向反应体系中加入一定量的10%的碳酸氢钠水溶液，调节反应体系的pH值到8左右。产物用2xl00ml的乙酸乙酯萃取两次。合并有机层并用水洗两次，然后再用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。最后用无水硫酸钠干燥并浓縮有机溶剂。粗产品经硅胶柱色谱(洗脱剂为EtOAc/PE/Et2NH^/2/(U)分离纯化，得到化合物HDCA-Ver，无色粉末。真空干-燥，最后得到化合物HDCA-Ver2.10g，计算产率为97%。121.5-123.6°C。[a]2D°=-52.5(c0.001,CHC13)。IR(cm"):3381,2935,2870，2777,1713，1454,1380,1243,1167,1038,957。EI-MSw/z:804(M+,12.84%),803([M-H]+,3.36%),785(2.69%),112(9.88%),111(3.70%),91(3.62%)，79(3.34%),55(9.52%),43(100%)。'H-NMR(400MHz,CDC13)，&4.67(1H,m,3a-CH),4.06(1H,m,6'卩-CH),3.62(1H,m,3'卩-CH),1.09(3H,d,27-CH3)，1.04(3H,s,21-CH3)，0.93(3H,d，21'-CH3),0.90(3H,s,19'-CH3),0.79(3H,s,19-CH3),0.64(3H,s,18'-CH3)。I3C-NMR(訓MHz，CDC13)，<5:210.4(C墨6),173.8(C陽24，)，72.8(C-3),71.6(C-3'),70.9(C-20),70.6(C-22)，68.1(C-6，)，62.1(C-26),61.8(C-18),56.4(C-9),56.2(C-5)。实施例5化合物DCA-Ver的制备(合成路线见图5)5.1将23.5g(0.060mol)的去氧胆酸，180ml无水甲醇加入到500ml的圆底烧瓶中，待去氧胆酸完全溶解在甲醇中，滴加1.5ml浓硫酸，室温条件下磁力搅拌过夜。TLC分析，判定反应终点。停止反应，加固体碳酸氢钠，搅拌10min。抽滤，用无水甲醇洗涤三次。合并滤液，减压蒸千溶剂。粗品用乙酸乙酯重结晶，得到化合物q，无色晶体。真空干燥，最后得到化合物q20.6g，计算产率为84.5%。148-150°C。IR(cm"):3630,3511,3332,2943,2867,1744,1449,1372,1249,1196,1164,1039，1017,973。'H-NMR(400MHz,CDC13)，&0.67(3H,s,18'-CH3)，0.90(3H,s,19，-CH3),0.96(3H，d，21，-CH3),3.61(1H,m,3'卩-CH),3.67(3H,s.-OCH3),3.98(1H,m，12，卩-CH)。5.2将6.1g(0.015mol)的化合物q、1.8g(0.0265mol)的咪唑和100ml的无水四氢呋喃(THF)加入到250ml的双颈圆底烧瓶中。将2.4g(0.016mol)的TBDMSiCl溶解在30ml的无水THF中，所得溶液用滴液漏斗滴加到反应体系中，要求滴加的速度约为1滴/5秒，皮应温度控制在l(TC左右，反应体系保证密闭。待TBDMSiCl溶液滴加完毕后，室温反应48小时。向反应体系加入50ml的蒸馏水停止反应。反应产物用2xl00ml的CH2Cl2萃取两次。合并有机层并用水洗两次，用无水硫酸镁干燥并浓縮回收CH2Cl2。粗品用甲醇重结晶，得到化合物r，无色粉末。真空干燥，最后得到化合物r5.73g，计算产率为73.5%。m.p.165-167。C。IR(cm"):3623,3453,2940,2862,1737,1465,1444，1377,1252，1211，1175,1100，1030,949,876,840，774。H-NMR(400MHz,CDC13)，&0.67(3H，s，18，-CH3),0.89(3H,s,19，-CH3),0.97(3H,d,21，-CH3),3.58(1H,m,3'卩-CH),3.67(3H,s，-OCH3),3.97(1H,m,12，卩-CH)。.5.3将5.2g(O.Olmol)的化合物r和100ml的THF加入到250ml的双颈圆底烧瓶中。待化合物r完全溶解后加入30ml的5。/。的NaOH水溶液，室温搅拌过夜。反应12小时后，28向反应体系中加入一定量的10%的盐酸，调节反应体系的pH值到3左右。产物用2xl00ml的乙酸乙酯萃取两次。合并有机层并用水洗两次，用无水硫酸镁干燥并浓缩回收乙酸乙酯。粗品用乙酸乙酯重结晶，得到化合物s，无色晶体。真空干燥，最后得到化合物s4.76g，计算产率为94.0。/。。w.p.229-23rC。IR(cm-'):3549,3171,2933,2864,1721，1468，1452,1399,1375，1254,1154,1049'949,873,837，782。'H-NMR(400MHz，CDC13)，<5:0.68(3H,s，1.8'-CH3),0.91(3H,s,19，-CH3),1.00(3H,d,21'-CH3),3.62(1H,m，3'卩-CH),3.94(1H,m,12，卩-CH)。5.4将3.0g(0.006mol)的化合物s和100ml的无水CH2C12加入到250ml的双颈圆底烧瓶中。待化合物s完全溶解后依次加入79mg(0.00065mol)的DMAP，2.6g(0.006moi)的浙贝乙素(5a,14a-cevanine-3卩，20卩-dihydroxy-6-one)，1.34g(0.0065mol)的DCC。室温搅拌反应48小时。随着反应进行，体系中出现许多沉淀物。停止反应，过滤掉沉淀物并浓縮有机溶剂。将反应剩余的残渣溶解在CH2Cl2中并用适量0.5N的盐酸洗涤两次，然后再用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。最后有机层用无水硫酸钠千燥并浓缩回收CH2Cl2。粗产品经硅胶柱色谱(洗脱剂为EtOAc/PE/Et2NP^l/ll/0.1)分离纯化，得到化合物t，无色粉末。真空干燥，最后得到化合物t3.1g，计算产率为55.6%。肌;.170-172。C。IR(cm—":3504,3350，2934，2858，2775,1710，1467,1452,1379，1256,1174,1097，953,875,837，801,775。'H-NMR(400MHz，CDC13)，(5:0.67(3H,s,18，-CH3),0.89(3H,s,19，-CH3)，0.98(3H,d，21,-CH3),3.58(1H,m,3'卩-CH),3.97(1H,m,12，卩-CH),4.68(1H,m,3a-CH),0.79(3H,s，19-CH3),1.03(3H，s,2-CH3),1.07(3H,d，27-CH3)。5.5将2.5g(0.0027mol)的化合物t和50ml的THF加入到WOml的双颈圆底烧瓶中，用冰浴冷邻反应体系。待化合物t完全溶解后加入20ml的5%的氢氟酸，室温搅拌24小时。反应24小时后，向反应体系中加入一定量的10%的碳酸氢钠水溶液，调节反应体系的pH值到8左右。产物用2x100ml的乙酸乙酯萃取两次。合并有机层并用水洗两次，然后再用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次。最后用无水硫酸钠干燥并浓縮有机溶剂。粗产品经硅胶柱色谱(洗脱剂为EtOAc/PE/Et2NH^/2/0.1)分离纯化，得到化合物DCA-Ver，无色粉末。真空干燥，最后得到化合物DCA-Ver2.06g，计算产率为95%。108.5-110.4°C。[a]2D0=+15.5(c0.001,CHC13)。IR(cm—1):3442,2935,2860,2777，1709,14511381,1256,1172，1092,1043,945。EI-MSm/z:804([M+H]+,2.11%),803(M+,0.60%),802([M-H]+,0.74%),786(2.38%),430(0.71%),413(16.28%),411(40.74%),356(29.21%),341(18.40%),273(39.71),256(60.75%),112(100%),111(25.92%),91(43.88%),79(43.60%)。)H-NMR(400MHz,CDC13)，&4,67(1H,m,3a-CH),3.98(1H,s,12，卩-CH),3.60(1H,m,3，卩-CH),1.08(3H,d,27-CH3),1.03(3H,s,21-CH3)，0.98(3H,d,21，-CH3)，0.90(3H,s,19'-CH3)，0.80(3H,s,19-CH3),0.68(3H,s,18，-CH3)。13C-NMR(100MHz,CDC13)，&210.4(C-6),173.8(C-24，)，73.2(C-12'),72.9(C-3),71.8(C-3，)，71.0(C-20),70.5(C-22),61,7(C-26),61.6(C-18)，56.5(C-9),56.4(C-5)。权利要求1.具有下式的化合物或其盐其中R1＝H，R2＝α-OH，R3＝OH或R1＝H，R2＝α-OH，R3＝H或R1＝H，R2＝β-OH，R3＝H或R1＝OH，R2＝H，R3＝H或R1＝H，R2＝H，R3＝OH。2.—种药物组合物，含有权利要求1所述的化合物或其药物可接受的盐以及可药用的稀释剂、添加剂或/和载体。.3.权利要求1所述的化合物或其可药用的盐在制备镇咳、祛痰和平喘药物中的应用。4.一种镇咳祛痰平喘药物，其特征在于，它是以权利要求l所述的化合物或其药物可接受盐为活性成份。5.制备权利要求1所述化合物的方法，包括以下步骤第一歩将5种胆汁酸中的任意一种溶解在一定量的无水甲醇中，待胆汁酸完全溶解后，向反应体系中滴加几滴浓硫酸fT为催化剂，反应时间为24小时，反应停止后处理反应产物得到胆汁酸甲酯；第二步先将物质的量比约为1:2的胆汁酸甲酯和咪唑溶解在无水四氢呋喃(THF)中，然后将与胆汁酸甲酯等物质的量的叔丁基二甲基氯硅垸(TBDMSiCl)溶解在一定量的THF中，所得溶液用滴液漏斗滴加到反应体系中，要求滴加的速度约为1滴/5秒，反应温度控制在l(TC左右，反应体系保证密闭，待TBDMSiCl溶液滴加完毕后，室温反应48小时，反应停止后处理反应产物得到3a-叔丁基二甲基硅氧基-胆汁酸甲酯；第三歩将3a-叔丁基二甲基硅氧基-胆汁酸甲酯溶解在一定量的THF中，然后加入一定量的5%的NaOH水溶液，室温搅拌过夜，反应12小时后停止反应得到3a-叔丁基二甲基硅氧基-胆汁酸；第四步将等摩尔量的3a-叔丁基二甲基硅氧基-胆汁酸和浙贝乙素溶解在无水二氯甲垸中，然后加入一定量的DMAP和DCC。室温搅拌反应48小时，反应停止后处理反应产物得到5a，14a-瑟瓦林-6-氧-20卩-羟基-3(3-醇-3a-叔丁基二甲基硅氧基-胆汁酸酯；第五歩将5a,14a-瑟瓦林-6-氧-20(3-羟基-3p-醇-3a-叔丁基二甲基硅氧基-胆汁酸酯溶解在一定量的THF中，加入一定量的5%的氢氟酸，室温搅拌24小时，反应停止后处理反应产物得到胆汁酸浙贝乙素酯。6.制备胆酸浙贝乙素酯的方法，包括以下步骤第一歩将胆酸溶解在一定量的无水甲醇中，待胆酸完全溶解后，向反应体系中滴加几滴浓硫酸作为催化剂，反应时间为24小时，反应停止后处理反应产物得到胆酸甲酯；第二歩先将物质的量比约为1:2的胆酸甲酯和咪唑溶解在无水四氢呋喃(THF)中，然后将与胆酸甲酯等物质的量的叔丁基二甲基氯硅垸(TBDMSiCl)溶解在一定量的THF中，所得溶液用滴液漏斗滴加到反应体系中，要求滴加的速度约为1滴/5秒，反应温度控制在10。C左右，反应体系保证密闭，待TBDMSiCl溶液滴加完毕后，室温反应48小时，反应停止后处理反应产物得到3a-叔丁基二甲基硅氧基-胆酸甲酯；第三歩将3a-叔丁基二甲基硅氧基-胆酸甲酯溶解在一定量的THF中，然后加入一定量的5%的NaOH水溶液，室温搅拌过夜。反应12小时后停止反应得到3a-叔丁基二甲基硅氧基-胆酸；第四步将等摩尔量的3ct-叔丁基二甲基硅氧基-胆酸和浙贝乙素溶解在无水二氯甲烷中，然后加入一定量的DMAP和DCC。室温搅拌反应48小时，反应停止后处理反应产物得到5a,14ot-瑟瓦林-6-氧-20卩-羟基-3卩-醇-3a-叔丁基二甲基硅氧基-胆酸酯；第五歩将5a，14a-瑟瓦林-6-氧-2邻-羟基-3p-醇-3ct-叔丁基二甲基硅氧基-胆酸酯溶解在一定量的THF中，加入一定量的5%的氢氟酸，室温搅拌24小时，反应停止后处理反应产物得到胆酸浙贝乙素酯。7.制备鹅去氧胆酸浙贝乙素酯的方法，包括以下步骤第一歩将鹅去氧胆酸溶解在一定量的无水甲醇中，待鹅去氧胆酸完全溶解后，向反应体系中滴加几滴浓硫酸作为催化剂，反应时间为24小时，反应停止后处理反应产物得到鹅去氧胆酸甲酯；第二步先将物质的量比约为1:2的鹅去氧胆酸甲酯和咪唑溶解在无水四氢呋喃(THF)中，然后将与鹅去氧胆酸甲酯等物质的量的叔丁基二甲基氯硅垸(TBDMSiCl)溶解在一定量的THF中，所得溶液用滴液漏斗滴加到反应体系中，要求滴加的速度约为1滴/5秒，反应温度控制在l(TC左右，反应体系保证密闭，待TBDMSiCl溶液滴加完毕后，室温反应48小时。反应停止后处理反应产物得到3a-叔丁基二甲基硅氧基-鹅去氧胆酸甲酯；第三歩将3a-叔丁基二甲基硅氧基-鹅去氧胆酸甲酯溶解在一定量的THF中，然后加入一定量的5%的NaOH水溶液，室温搅拌过夜。反应12小时后停止反应得到3a-叔丁基二甲基硅氧基-鹅去氧胆酸；第四歩将等摩尔量的3a-叔丁基二甲基硅氧基-鹅去氧胆酸和浙贝乙素溶解在无水二氯甲烷中，然后加入一定量的DMAP和DCC，室温搅拌反应48小时，反应停止后处理反应产物得到5a,14a-瑟瓦林-6-氧-20(3-羟基-3(3-醇-3(x-叔丁基二甲基硅氧基-鹅去氧胆酸酯；第五步将5a,14a-瑟瓦林-6-氧-20p-羟基-3卩-醇-3cx-叔丁基二甲基硅氧基-鹅去氧胆酸酯溶解在一定量的THF中，加入一定量的5%的氢氟酸，室温搅拌24小时，反应停止后处理反应产物得到鹅去氧胆酸浙贝乙素酯。8.制备熊去氧胆酸浙贝乙素酯的方法，包括以下步骤第一步将熊去氧胆酸溶解在一定量的无水甲醇中，待熊去氧胆酸完全溶解后，向反应体系中滴加几滴浓硫酸作为催化剂，反应时间为24小时，反应停止后处理反应产物得到熊去氧胆酸甲酯；第二歩先将物质的量比约为1:'2的熊去氧胆酸甲酯和咪哗溶解在无水四氢呋喃(THF)中，然后将与熊去氧胆酸甲酯等物质的量的叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSiCl)溶解在一定量的THF中，所得溶液用滴液漏斗滴加到反应体系中，要求滴加的速度约为l滴/5秒，反应温度控制在l(TC左右，反应体系保证密闭，待TBDMSiCl溶液滴加完毕后，室温反应48小时，反应停止后处理反应产物得到3a-叔丁基二甲基硅氧基-熊去氧胆酸甲酯；第三歩将3a-叔丁基二甲基硅氧基-熊去氧胆酸甲酯溶解在一定量的THF中，然后加入一定量的5%的NaOH水溶液，室温搅拌过夜，反应12小时后停止反应得到3a-叔丁基—甲基硅氧基-熊去氧胆酸。第四歩将等摩尔量的3a-叔丁基二甲基硅氧基-熊去氧胆酸和浙贝乙素溶解在无水二氯甲垸中，然后加入一定量的DMAP和DCC。室温搅拌反应48小时，反应停止后处理反应产物得到5a,14ct-瑟瓦林-6-氧-20(3-羟基-3p-醇-3a-叔丁基二甲基硅氧基-熊去氧胆酸酯；第五歩将5a,14a-瑟瓦林-6-氧-20P-羟基,-醇-3d-叔丁基二甲基硅氧基-熊去氧胆酸酯溶解在一定量的THF中，加入一定量的5%的氢氟酸，室温搅拌24小时，反应停止后处理皮应产物得到熊去氧胆酸浙贝乙素酯。9.制备猪去氧胆酸浙贝乙素酯的方法，包括以下步骤第一歩将猪去氧胆酸溶解在一定量的无水甲醇中，待猪去氧胆酸完全溶解后，向反应体系中滴加几滴浓硫酸作为催化剂，反应时间为24小时，反应停止后处理反应产物得到猪去氧胆酸甲酯。第二步先将物质的量比约为1:2的猪去氧胆酸甲酯和咪唑溶解在无水四氢呋喃(THF)中，然后将与猪去氧胆酸甲酯等物质的量的叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSiCl)溶解在一定量的THF中，所得溶液用滴液漏斗滴加到反应体系中，要求滴加的速度约为1滴/5秒，反应温度控制在l(TC左右，反应体系保证密闭，待TBDMSiCl溶液滴加完毕后，室温反应48小时，反应停止后处理反应产物得到3a-叔丁基二甲基硅氧基-猪去氧胆酸甲酯。第三歩将3a-叔丁基二甲基硅氧基-猪去氧胆酸甲酯溶解在一定量的THF中，然后加入一定量的5%的NaOH水溶液，室温搅拌过夜，反应12小时后停止反应得到3a-叔丁基二甲基硅氧基-猪去氧胆酸；第四步将等摩尔量的3a-叔丁基二甲基硅氧基-猪去氧胆酸和浙贝乙素溶解在无水二氯甲烷中，然后加入一定量的DMAP和DCC。室温搅拌反应48小时，反应停止后处理反应产物得到5a,14ot-瑟瓦林-6-氧-2邻-羟塞-3p-醇-3a-叔丁基二甲基硅氧基-猪去氧胆酸酯。第五步将5a,14a-瑟瓦林-6-氧-20(3-羟基-3p-醇-3a-叔丁基二甲基硅氧基-猪去氧胆酸酯溶解在一定量的THF中，加入一定量的5%的氢氟酸，室温搅拌24小时，反应停止后处理反应产物得到猪去氧胆酸浙贝乙素酯。10.制备去氧胆酸浙贝乙素酯的方法，包括以下歩骤第--步将去氧胆酸溶解在一定量的无水甲醇中，待去氧胆酸完全溶解后，向反应体系中滴加几滴浓硫酸作为催化剂，反应时间为24小时，反应停止后处理反应产物得到去氧胆酸甲酯；'第二步先将物质的量比约为1:2的去氧胆酸甲酯和咪唑溶解在无水四氢呋喃(THF)中，然后将与去氧胆酸甲酯等物质的量的叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSiCl)溶解在一定量的THF中，所得溶液用滴液漏斗滴加到反应体系中，要求滴加的速度约为1滴/5秒，反应温度控制在l(TC左右，反应体系保证密闭，待TBDMSiCl溶液滴加完毕后，室温反应48小时，反应停止后处理反应产物得到3a-叔丁基二甲基硅氧基-去氧胆酸甲酯；第三步将3a-叔丁基二甲基硅氧基-去氧胆酸甲酯溶解在一定量的THF中，然后加入一定量的5%的NaOH水溶液，室温搅拌过夜，反应12小时后停止反应得到3a-叔丁基二甲基硅氧基-去氧胆酸；第四歩将等摩尔量的3a-叔丁基二甲基硅氧基-去氧胆酸和浙贝乙素溶解在无水二氯甲垸中，然后加入一定量的DMAP和DCC。室温搅拌反应48小时，反应停止后处理反应产物得到5a,14a-瑟瓦林-6-氧-20(3-羟基-3p-醇-3ot-叔丁基二甲基硅氧基-去氧胆酸酯；第五歩将5a,14cc-瑟瓦林-6-氧-20p-羟基-3卩-醇-3a-叔丁基二甲基硅氧基-去氧胆酸酯溶解在一定量的THF中，加入一定量的5%的氢氟酸，室温搅拌24小时，反应停止后处理反应产物得到去氧胆酸浙贝乙素酯。全文摘要本发明提供的浙贝乙素胆汁酸酯是浙贝乙素与胆酸、鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸和去氧胆酸经化学合成所得的一组酯类化合物，其作为镇咳祛痰平喘药物，具活性成分结构清晰、疗效确切、毒副作用小、质量可控、兼有镇咳、祛痰和平喘作用等特点，克服了现有镇咳化学药物毒副作用较大、容易成瘾和传统中药复方制剂质量难以控制的不足。文档编号C07J71/00GK101643493SQ20081004872公开日2010年2月10日申请日期2008年8月7日优先权日2008年8月7日发明者吴继洲,鹏张,张久亮,皮慧芳,阮汉利申请人:华中科技大学