专利名称：c-Met抗体的制作方法
c-Met抗体本发明涉及结合C-Met的抗体以及它们在治疗发病机理是由此受体介导的症状和紊乱中的应用。c-Met,酪氨酸激酶超家族的成员，是肝细胞生长因子(HGF)的受体。HGF与c_Met 的结合造成受体二聚化或多聚化、在细胞内区域中的多个酪氨酸残基的磷酸化、催化活化、 以及进行下游信号传递。c-Met也通过包括受体过表达、扩增以及突变等与配体无关的机制被活化。c-Met活化增强细胞增殖、迁移、形态发生、存活(包括免于细胞凋亡)、以及蛋白酶合成、特征在于与侵袭细胞表型以及癌症患者的较差的临床结果和药物抗性相关。c-Met 信号通路是人类癌症中一种最常见的失调通路，并且几乎发生于所有类型的实体瘤中。PCT国际公开W 09/007427公开了鼠类和⑶R-移植的人化c_Met抗体。其中公开的鼠抗体224G11不与c-Met kma结构域结合。这一鼠抗体的人化IgGl衍生物，称作 h224Gll Mab的进一步的功能性能报道于Abstracts no. 835 (体外数据)和2792(体内数 M ) \iXR 2009 ^Ξ 4 American Association for Cancer Research (Denver, CO)会议上呈现它们的相关的海报。这些摘要和海报公开了二价h2MGll Mab没有固有的激动剂特性，起c-Met的完全拮抗剂的作用，并且潜在地减少c-Met 二聚化。报道了鼠224G11体内下调c-Met并且阻断c-Met磷酸化。在其他受体的情形下，二聚化是受体内化作用和降解的先决条件。这些摘要和海报没有公开关于c-Met内化作用的数据。此外，尚未鉴定出人化抗体结合的c-Met内的表位。PCT国际公开WO 05/016382也公开了 c_Met抗体但是没有鉴定出该抗体结合的表位。然而，提供了表位作图实例，所报道的结果仅仅表明六个c-Met抗体结合共同的表位而第七个c-Met抗体结合不同的表位。没有提供这些c-Met抗体结合的特定表位。存在对于在HGF存在和/或不存在下，与人c-Met的α -链的结合促进来自细胞表面的受体的内化作用的人c-Met的拮抗剂抗体的需求。也需要人c-Met的拮抗剂抗体， 其与人c-Met的α -链的结合促进来自包括含有功能获得性突变的c-Met变体的细胞表面的受体的内化作用。也需要诱导c-Met降解和磷酸化的c-Met减少的人c_Met的拮抗剂抗体。此种拮抗剂活性能够减少肿瘤细胞表面上可用于HGF的结合位点的数量，并且终止由 c-Met过表达、扩增或突变而引起的通路活化。同时，此种拮抗剂抗体应抑制HGF与c-Met 的结合以及HGF诱导的c-Met活化，并且少量诱导它们自身的激动剂活性或者不诱导其激动剂活性。本发明的抗体化合物满足了这些需求。它们结合人c-Met kma结构域的α-链的表位，抑制HGF对c-Met的结合和受体活化，同时诱导少量或者不诱导激动剂活性。本发明的抗体也在HGF存在或不存在下以及也在包括含有功能获得性突变的c-Met变体的细胞中诱导受体的内化作用。它们诱导c-Met的降解并且诱导磷酸化的人c-Met的减少，以及抑制表达这一受体的HGF依赖的和HGF无关的肿瘤细胞的增殖。鉴于这些特性，这些抗体化合物在治疗由c-Met通过多种不同机制介导的癌症上是有用的。此外，本发明抗体化合物拥有许多其他想要的特性。它们展现出对c-Met高的亲和性(Kd)、阻断HGF介导的c-Met磷酸化和下游信号通路、细胞增殖和细胞迁移；并且只诱导较弱的c-Met磷酸化同时诱导少量或者不诱导HGF样生物激动剂活性，如诱导肿瘤细胞增殖、能动性、迁移、血管生成、血管新生或抗细胞凋亡作用。它们抑制配体(HGF)依赖的和配体无关的c-Met通路活化。此外，相比于密切相关的受体RON和丛蛋白A2的E⑶，本发明的抗体化合物优选地结合人c-Met胞外结构域(EOT)，并且不造成c-Met E⑶的“脱落”。因此，本发明提供一种单克隆抗体或其抗原结合片段，该抗体a)结合人c-Met的α -链内的表位，和b)诱导细胞表面人c-Met的内化作用。任一前述抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段诱导肝细胞生长因子无关的细胞表面人c-Met的内化作用。在优选的实施方式中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID NO 的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ IDNO :40的氨基酸序列。在另一优选的实施方式中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID NO : 的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO 41的氨基酸序列。诱导细胞中的人c-Met内化作用的任一前述抗体或其抗原结合片段包括含有功能获得性突变的人c-Met变体。功能获得性突变可以是c-Met激酶结构域突变M1149T或近膜结构域突变R988C。任一前述抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段诱导细胞中至少40%的细胞表面人c-Met的内化作用。任一前述抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段诱导细胞中至少45%的细胞表面人c-Met的内化作用。任一前述抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段诱导细胞中至少50%的细胞表面人 c-Met的内化作用。任一前述抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段诱导细胞中至少55%的细胞表面人c-Met的内化作用。任一前述抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段诱导细胞中至少60%的细胞表面人c-Met的内化作用。任一前述抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段诱导细胞中至少65%的人 c-Met的内化作用。任一前述抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段诱导细胞中至少70%的细胞表面人c-Met的内化作用。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其诱导在肝细胞生长因子无关的肿瘤细胞中的总c-Met的减少。在优选的实施方式中，所述诱导在肝细胞生长因子无关的肿瘤细胞中的总c-Met的减少的单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID NO 的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO :40的氨基酸序列。在另一优选的实施方式中，所述诱导在肝细胞生长因子无关的肿瘤细胞中的总c-Met的减少的单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID NO : 的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ IDNO 41的氨基酸序列。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其诱导在肝细胞生长因子无关的肿瘤细胞中的磷酸化的c-Met的减少。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其在与包括具有SEQ IDNO 28所示氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO :40所示氨基酸序列的重链的抗体基本上相同的表位结合人c-Met的α -链，或者其在与包括具有SEQ ID NO 29所示氨基酸序列的轻链和具有SEQid no 41所示氨基酸序列的重链的抗体基本上相同的表位结合人c-met的α -链。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，排除包括具有seq idno 26所示氨基酸序列的轻链和具有seq id ν0:38所示氨基酸序列的重链的那些，其中表位包括 144hvfphnhtadiqs156(seq id no 82)及其内的一或多个氨基酸残基。任一前述抗体或抗原结合片段，其中表位还包括123dtyydd128(seq id no :81)及其内的一或多个氨基酸残基。任一前述抗体或抗原结合片段，其中表位还包括192finf195(seqid no :83)及其内的一或多个氨基酸残基。任一前述抗体或抗原结合片段，其中表位还包括22qketkdgfm227 (seq id no :84)及其内的一或多个氨基酸残基。任一前述抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体结合下述氨基酸序列或其内的氨基酸序列，所述氨基酸序列选自a) 121 wdtyyddql13(i (seq id no :77)，b) 131 Iscgsvnrgtcqrhvfphnhtadiqs156(seq id no :78)，c) 179ALGAKVLSSVKDRFINF195(SEQ ID NO:79)，和d) 216vrrlketkdgfm227 (seq id no :80)。任一前述抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体结合下述氨基酸序列或其内的氨基酸序列，所述氨基酸序列选自a) 123DTYYDD128 (SEQ ID NO :81)，b) 144HVFPHNHTADIQS156 (SEQ ID NO :82)，c)192finf195(SEQ id no :83)，和d) 220ketkdgfm227 (seq id no :84)。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其结合特征为下述氨基酸序列的表位或其内的氨基酸序列121vvdtyyddql130 (seq id no 77), 131iscgsvnrgtcqrhvfphnhtadiqs156 (seq id no: 78), 179algakvlssvkdrfinf195 (seq id no :7 ，和 216vrrlketkdgfm227 (seq id no :80)。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其结合特征为下述氨基酸序列的表位或其内的氨基酸序列123dtyydd128 (seq id no :81)，144hvfphnhtadiqs156 (seq id no :82)，192finf195 (seq id no :83)，和 22。ketkdgfm227 (seq id no :84)。任一前述抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体结合包括95cfpcqdcsska1(15(seq id no 86)本身及其内的氨基酸序列。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，排除包括具有seq idno 29所示氨基酸序列的轻链和具有seq id no :41所示氨基酸序列的重链的那些，其中所述表位包括 95cfpcqdcsska105(seq id no 86)及其内的一或多个氨基酸残基。结合人c-met的任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其包括三个轻链互补决定区(ixdr)和三个重链互补决定区(hcdr)，其中所述三个ixdr和所述三个hcdr选自下组a)包括氨基酸序列 SVSSSISSTNLH(SEQ ID NO :49)的 LCDRl ；
包括氨基酸序列gtsx1lx2s (seq id no 87)的lcdr2，其中x1是y或r，并且x2是 a或r;包括氨基酸序列qqwssypys(seq id no 51)的 lcdr3 ；包括氨基酸序列gytftsryih(seq id no :59)的 hcdrl ；包括氨基酸序列wiypvtgdtyyx7ex8fkg(seq id no :90)的 hcdr2，其中 x7是n、ι 或 r，并且)(8是1(或p ；和包括氨基酸序列gygafx9y (seq id no 91)的hcdr3，其中x9是y或f ；以及b)包括氨基酸序列 SVSSSVX3SIYLH(SEQ ID NO 88)的 LCDRl，其中 X3 是 S 或 R ；包括氨基酸序列stsnlas (seq id no 54)的 lcdr2 ；包括氨基酸序列x4x5yx6gyplt (seq id no 89)的 lcdr3，其中 x4 是 i 或 q，& 是 q 或v，并且&是s或r ；包括氨基酸序列gytftdyymh(seq id no 65)的 hcdrl ；包括氨基酸序列rvnpx1qrxnx12ttynqkfeg(seq id no :92)的 hcdr2，其中 xltl 是 n 或y，x11是g或r，并且x12是g或s ；和包括氨基酸序列x13nx14ldy (seq id no 93)的 hcdr3，其中 x13 是 t 或 a，并且 x14 是w或i ；其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段结合所述人C-Met的α _链内的表位并且诱导细胞表面人c-Met的内化作用。结合人c-Met的任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其包括三个轻链互补决定区(LCDR)和三个重链互补决定区(HCDR)，其中所述抗体包括三个轻链互补决定区 (IXDR)和三个重链互补决定区(HCDR)，其中lcdrl 包括氨基酸序列 svsssisstnlh(seq id no :49)；lcdr2包括氨基酸序列gtsx1lx2s (seq id no :87)，其中&是y或r，并且x2是a 或r;lcdr3 包括氨基酸序列 qqwssypys (seq id no 51)；hcdrl 包括氨基酸序列 gytftsryih(seq id no :59)；hcdr2 包括氨基酸序列 wiypvtgdtyyx7ex8fkg (seq idno :90)，其中 x7 是 n、i 或 r， 并且)(8是1(或p;以及hcdr3 包括氨基酸序列 gygafx9y (seq id no :91)，其中 x9 是 y 或 f。结合人c-met的任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其包括三个轻链互补决定区(ixdr)和三个重链互补决定区(hcdr)，其中lcdrl 包括氨基酸序列 svsssvx3siylh(seq id no :88)；其中 & 是 s 或 r ；lcdr2 包括氨基酸序列 stsnlas (seq id no :54)；lcdr3 包括氨基酸序列 x4x5yx6gyplt (se q id no 89)，其中 & 是 i 或 q，& 是 q 或 v，并且&是s或r ；hcdrl 包括氨基酸序列 gytftdyymh(seq id no :65)；hcdr2 包括氨基酸序列 rvnpxicirx1 ajtynqkfeg (seq idno 92)，其中)(1(1 是 n 或 y， x11是g或r，并且x12是g或s ；以及hcdr3 包括氨基酸序列 x13nx14ldy (seq id no 93)，其中)(13 是 t 或 a，并且 x14 是 w或Io结合人c-Met的任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其包括三个轻链互补决定区(IXDR)和三个重链互补决定区(HCDR)，以及其中所述三个IXDR和所述三个HCDR选自下组a)包括氨基酸序列 SVSSSISSTNLH(SEQ ID NO :49)的 LCDRl ；包括氨基酸序列GTSYLAS (SEQ ID NO 50)的 LCDR2 ；包括氨基酸序列QQWSSYPYS(SEQ ID NO 51)的 LCDR3 ；包括氨基酸序列GYTFTSRYIH(SEQ ID NO :59)的 HCDRl ；包括氨基酸序列WIYPVTGDTYYNEKFKG (SEQ ID NO 60)的 HCDR2 ；禾口包括氨基酸序列GYGAFYY (SEQ ID NO 61)的 HCDR3 ；b)包括氨基酸序列 SVSSSISSTNLH(SEQ ID NO :49)的 LCDRl ；包括氨基酸序列GTSYLAS (SEQ ID NO :50)的 LCDR2 ；包括氨基酸序列QQWSSYPYS(SEQ ID NO 51)的 LCDR3 ；包括氨基酸序列GYTFTSRYIH(SEQ ID NO :59)的 HCDRl ；包括氨基酸序列WIYPVTGDTYYIEKFKG (SE Q ID NO 62)的 HCDR2 ；禾口包括氨基酸序列GYGAFFY (SEQ ID NO 63)的 HCDR3 ；c)包括氨基酸序列 SVSSSISSTNLH(SEQ ID NO :49)的 LCDRl ；包括氨基酸序列GTSRLRS (SEQ ID NO 52)的 LCDR2 ；包括氨基酸序列QQWSSYPYS(SEQ ID NO 51)的 LCDR3 ；包括氨基酸序列GYTFTSRYIH(SEQ ID NO :59)的 HCDRl ；包括氨基酸序列WIYPVTGDTYYREPFKG (SE Q ID NO 64)的 HCDR2，和包括氨基酸序列GYGAFYY (SEQ ID NO :61)的 HCDR3 ；d)包括氨基酸序列 SVSSSVSSIYLH(SEQ ID NO :53)的 LCDRl ；包括氨基酸序列STSNLAS (SEQ ID NO 54)的 LCDR2 ；包括氨基酸序列IQYSGYPLT(SEQ ID NO 55)的 LCDR3 ；包括氨基酸序列GYTFTDYYMH(SEQ ID NO 65)的 HCDRl ；包括氨基酸序列RVNPNRGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO 66)的 HCDR2，和包括氨基酸序列TNWLDY (SEQ ID NO 67)的 HCDR3 ；e)包括氨基酸序列 SVSSSVSSIYLH(SEQ ID NO :53)的 LCDRl ；包括氨基酸序列STSNLAS (SEQ ID NO :54)的 LCDR2 ；包括氨基酸序列QVYSGYPLT(SEQ ID NO 56)的 LCDR3 ；包括氨基酸序列GYTFTDYYMH(SEQ ID NO 65)的 HCDRl ；包括氨基酸序列RVNPNRRGTTYNQKFEG (SEQ ID NO 68)的 HCDR2 ；禾口包括氨基酸序列ANWLDY (SEQ ID NO 69)的HCDR3 ；以及f)包括氨基酸序列 SVSSSVRSIYLH(SEQ ID NO :57)的 LCDRl ；包括氨基酸序列STSNLAS (SEQ ID NO :54)的 LCDR2 ；包括氨基酸序列QVYRGYPLT(SEQ ID NO 58)的 LCDR3 ；包括氨基酸序列GYTFTDYYMH(SEQ ID NO 65)的 HCDRl ；包括氨基酸序列RVNPYRGSTTYNQKFEG (SEQ ID NO 70)的 HCDR2 ；禾口
包括氨基酸序列ANILDY(SEQ ID NO 71)的HCDR3 ；并且其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段结合所述人C-Met的α -链内的表位并且诱导细胞表面人c-Met的内化作用。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段包括三个轻链互补决定区(LCDR)和三个重链互补决定区(HCDR)，其中所述三个IXDR和所述三个HCDR选自下组a)包括氨基酸序列 SVSSSISSTNLH(SEQ ID NO :49)的 LCDRl ；包括氨基酸序列GTSYLAS (SEQ ID NO 50)的 LCDR2 ；包括氨基酸序列QQWSSYPYS(SEQ ID NO 51)的 LCDR3 ；包括氨基酸序列GYTFTSRYIH(SEQ ID NO :59)的 HCDRl ；包括氨基酸序列WIYPVTGDTYYNEKFKG (SEQ ID NO 60)的 HCDR2 ；禾口包括氨基酸序列GYGAFYY (SEQ ID NO 61)的 HCDR3 ；b)包括氨基酸序列 SVSSSISSTNLH(SEQ ID NO :49)的 LCDRl ；包括氨基酸序列GTSYLAS (SEQ ID NO :50)的 LCDR2 ；包括氨基酸序列QQWSSYPYS(SEQ ID NO 51)的 LCDR3 ；包括氨基酸序列GYTFTSRYIH(SEQ ID NO :59)的 HCDRl ；包括氨基酸序列WIYPVTGDTYYIEKFKG (SE Q ID NO 62)的 HCDR2 ；禾口包括氨基酸序列GYGAFFY (SEQ ID NO 63)的 HCDR3 ；c)包括氨基酸序列 SVSSSISSTNLH(SEQ ID NO :49)的 LCDRl ；包括氨基酸序列GTSRLRS (SEQ ID NO 52)的 LCDR2 ；包括氨基酸序列QQWSSYPYS(SEQ ID NO 51)的 LCDR3 ；包括氨基酸序列GYTFTSRYIH(SEQ ID NO :59)的 HCDRl ；包括氨基酸序列WIYPVTGDTYYREPFKG (SEQ ID NO 64)的 HCDR2 ；禾口包括氨基酸序列GYGAFYY (SEQ ID NO :61)的 HCDR3。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段包括三个轻链互补决定区(LCDR)和三个重链互补决定区(HCDR)，其中所述三个IXDR和所述三个HCDR选自下组a)包括氨基酸序列 SVSSSVSSIYLH(SEQ ID NO :53)的 LCDRl ；包括氨基酸序列STSNLAS (SEQ ID NO 54)的 LCDR2 ；包括氨基酸序列IQYSGYPLT(SEQ ID NO 55)的 LCDR3 ；包括氨基酸序列GYTFTDYYMH(SEQ ID NO 65)的 HCDRl ；包括氨基酸序列RVNPNRGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO 66)的 HCDR2 ；禾口包括氨基酸序列TNWLDY (SEQ ID NO 67)的 HCDR3 ；b)包括氨基酸序列 SVSSSVSSIYLH(SEQ ID NO :53)的 LCDRl ；包括氨基酸序列STSNLAS (SEQ ID NO :54)的 LCDR2 ；包括氨基酸序列QVYSGYPLT(SEQ ID NO 56)的 LCDR3 ；包括氨基酸序列GYTFTDYYMH(SEQ ID NO 65)的 HCDRl ；包括氨基酸序列RVNPNRRGTTYNQKFEG (SEQ ID NO 68)的 HCDR2 ；禾口包括氨基酸序列ANWLDY (SEQ ID NO 69)的HCDR3 ；以及c)包括氨基酸片歹Ij SVSSSVRSIYLH(SEQ ID NO :57)的 LCDRl ；包括氨基酸序列STSNLAS (SEQ ID NO :54)的 LCDR2 ；
包括氨基酸序列QVYRGYPLT(SEQ ID NO 58)的 LCDR3 ；包括氨基酸序列GYTFTDYYMH(SEQ ID NO 65)的 HCDRl ；包括氨基酸序列RVNPYRGSTTYNQKFEG (SEQ ID NO 70)的 HCDR2 ；禾口包括氨基酸序列ANILDY(SEQ ID NO 71)的 HCDR3。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段包括三个轻链互补决定区(LCDR)和三个重链互补决定区(HCDR)，其中LCDRl 包括氨基酸序列 SVSSSVSSIYLH(SEQ ID NO :53)；LCDR2 包括氨基酸序列 STSNLAS (SEQ ID NO 54)；LCDR3 包括氨基酸序列 IQYSGYPLT (SEQ ID NO 55)；HCDRl 包括氨基酸序列 GYTFTDYYMH(SEQ ID NO :65)；HCDR2 包括氨基酸序列 RVNPNRGGTTYNQKFEG (SEQ IDNO 66)；禾口HCDR3 包括氨基酸序列 TNWLDY (SEQ ID NO 67)；任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段包括三个轻链互补决定区(LCDR)和三个重链互补决定区(HCDR)，其中LCDRl 包括氨基酸序列 SVSSSVSSIYLH(SEQ ID NO :53)；LCDR2 包括氨基酸序列 STSNLAS (SEQ ID NO :54)；LCDR3 包括氨基酸序列 QVYSGYPLT (SEQ ID NO 56)；HCDRl 包括氨基酸序列 GYTFTDYYMH(SEQ ID NO :65)；HCDR2 包括氨基酸序列 RVNPNRRGTTYNQKFEG (SEQ IDNO 68)；禾口HCDR3 包括氨基酸序列 ANWLDY (SEQ ID NO 69)。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链可变区(LCVR)和重链可变区 (HCVR)，其中所述LCVR和所述HCVR分别包括选自下组的氨基酸序列a) SEQ ID NO :94 和 SEQ ID NO 96 ；和b)SEQ ID NO :95 禾口 SEQ ID NO :97，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段结合所述人C-Met的α -链内的表位并且诱导细胞表面人c-Met的内化作用。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链可变区(LCVR)和重链可变区 (HCVR)，其中所述LCVR包括SEQ ID NO :94并且所述HCVR包括SEQ ID NO :96。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链可变区(LCVR)和重链可变区 (HCVR)，其中所述LCVR包括SEQ ID NO 95并且所述HCVR包括SEQ ID NO :97。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述LCVR和所述HCVR包括选自下组的氨基酸序列a) LCVR 是 SEQIDNO1 并且 HCVR 是 SEQ ID NO13
b) LCVR 是 SEQIDNO2 并且 HCVR 是 SEQ ID NO14
c) LCVR 是 SEQIDNO3 并且 HCVR 是 SEQ ID NO15
d) LCVR 是 SEQIDNO4 并且 HCVR 是 SEQ ID NO16
e) LCVR 是 SEQIDNO5 并且 HCVR 是 SEQ ID NO17
f) LCVR 是 SEQIDNO6 并且 HCVR 是 SEQ ID NO18
0171] 任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述LCVR和所述HCVR分别包括选自下组的氨基酸序列a) LCVR 是 SEQ ID NO 1 并且 HCVR 是 SEQ ID NO 13 ；b) LCVR 是 SEQ ID NO 2 并且 HCVR 是 SEQ ID NO 14 ；以及c) LCVR 是 SEQ ID NO 3 并且 HCVR 是 SEQ ID NO :15。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述LCVR和所述HCVR分别包括选自下组的氨基酸序列a) LCVR 是 SEQ ID NO 4 并且 HCVR 是 SEQ ID NO 16 ；b) LCVR 是 SEQ ID NO 5 并且 HCVR 是 SEQ ID NO: 17;以及c) LCVR 是 SEQ ID NO 6 并且 HCVR 是 SEQ ID NO :18。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述LCVR包括SEQID NO 4的氨基酸序列并且所述HCVR包括SEQ ID NO 16的氨基酸序列。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述LCVR包括SEQID NO 5的氨基酸序列并且所述HCVR包括SEQ ID NO 17的氨基酸序列。任一前述单克隆单克隆抗体，其中所述抗体包括轻链和重链，其中所述轻链和重链包括选自下组的氨基酸序列a)轻链是SEQ ID NO25并且I■链是SEQIDNO37
b)轻链是SEQ ID NO26并且I■链是SEQIDNO38
c)轻链是SEQ ID NO27并且I■链是SEQIDNO39
d)轻链是SEQ ID NO28并且I■链是SEQIDNO40
e)轻链是SEQ ID NO29并且I■链是SEQIDNO41
f)轻链是SEQ ID NO30并且I■链是SEQIDNO:42ο任一前述单克隆抗体，其中所述抗体包括轻链和重链，其中所述轻链和重链包括选自下组的氨基酸序列a)轻链是 SEQ ID NO 25 并且重链是 SEQ ID NO 37 ；b)轻链是SEQ ID NO 26并且重链是SEQ ID NO :38 ；以及c)轻链是 SEQ ID NO 27 并且重链是 SEQ ID NO :39。任一前述单克隆抗体，其中所述抗体包括轻链和重链，其中所述轻链和重链包括选自下组的氨基酸序列a)轻链是 SEQ ID NO 28 并且重链是 SEQ ID NO 40 ；b)轻链是SEQ ID NO 29并且重链是SEQ ID NO 41 ；以及c)轻链是 SEQ ID NO 30 并且重链是 SEQ ID NO :42。任一前述单克隆抗体，其中所述轻链包括SEQ ID NO 的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO 40的氨基酸序列。任一前述单克隆抗体，其中所述轻链包括SEQ ID NO : 的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO 41的氨基酸序列。任一前述单克隆抗体，其中所述抗体包括两个轻链和两个重链，其中每个轻链包括SEQ ID NO 28的氨基酸序列并且每个重链包括SEQID NO 40的氨基酸序列。任一前述单克隆抗体，其中所述抗体包括两个轻链和两个重链，其中每个轻链包括SEQ ID NO 29的氨基酸序列并且每个重链包括SEQID NO 41的氨基酸序列。
与任意前述c-Met单克隆抗体或其抗原结合片段相竞争结合c-Met的单克隆抗体或其抗原结合片段。此种竞争性单克隆抗体或其抗原结合片段可以结合与任一前述c-Met 单克隆抗体或其抗原结合片段相同的c-Met表位。在优选的实施方式中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段与包括轻链和重链的抗体竞争，其中所述轻链包括SEQ ID NO 的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO :40的氨基酸序列。在另一优选的实施方式中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段与包括轻链和重链的抗体竞争，其中所述轻链包括SEQ ID NO 29的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID N0:41的氨基酸序列。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其诱导肝细胞生长因子无关的肿瘤细胞总的所述人c-Met和磷酸化的人c-Met的减少，所述肿瘤细胞组成型过表达人c_Met。在优选的实施方式中，诱导肝细胞生长因子无关的、组成型过表达人c-Met的肿瘤细胞中总所述人c-Met和磷酸化的人c-Met的减少的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID NO :28的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO :40的氨基酸序列。在另一优选的实施方式中，诱导肝细胞生长因子无关的、组成型过表达人c-Met 的肿瘤细胞中总所述人c-Met和磷酸化的人c-Met的减少的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID NO :29的氨基酸序列并且所述重链包括 SEQ ID NO 41的氨基酸序列。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其诱导肝细胞生长因子无关的肿瘤细胞中总的所述人c-Met和磷酸化的人c-Met的减少，所述肿瘤细胞组成型磷酸化人c_Met。在优选的实施方式中，诱导肝细胞生长因子无关的、组成型磷酸化人c-Met的肿瘤细胞中总的所述人c-Met和磷酸化的人c-Met的减少的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID NO :28的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO 40 的氨基酸序列。在另一优选的实施方式中，诱导肝细胞生长因子无关的、组成型磷酸化人 c-Met的肿瘤细胞中总的所述人c-Met和磷酸化的人c_Met的减少的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID NO : 的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO 41的氨基酸序列。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其诱导肝细胞生长因子无关的肿瘤细胞中肝细胞生长因子应答的总的人c-Met和磷酸化的人c-Met的减少。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其相比于人RON胞外结构域或人丛蛋白 A2胞外结构域，优选地结合人c-Met胞外结构域。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其不诱导人c-Met胞外结构域的脱落。 在优选的实施方式中，不诱导人c-Met胞外结构域脱落的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID NO 的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO :40的氨基酸序列。在另一优选的实施方式中，不诱导人c-Met胞外结构域脱落的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID NO 的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID N0:41的氨基酸序列。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其不保护表达人c-Met的肿瘤细胞免于星形孢菌素诱导的细胞凋亡。在优选的实施方式中，不保护表达人c-Met的肿瘤细胞免于星形孢菌素诱导的细胞凋亡的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ IDNO :28的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO :40的氨基酸序列。在另一优选的实施方式中，不保护表达人C-Met的肿瘤细胞免于星形孢菌素诱导的细胞凋亡的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID N0:29 的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO :41的氨基酸序列。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其抑制肝细胞生长因子依赖的和肝细胞生长因子无关的表达人c-Met的肿瘤细胞增殖。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其抑制人肝细胞生长因子与人C-Met的结合。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段，其不诱导HGF样生物激动剂活性。HGF样生物激动剂活性包括肿瘤细胞增殖、肿瘤细胞能动性、肿瘤细胞迁移、血管生成、血管发生和抗细胞凋亡作用。在优选的实施方式中，不诱导HGF样生物激动剂活性的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID NO : 的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO 41的氨基酸序列。一种药物组合物，包括任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段和可药用的载体、 稀释剂或赋形剂。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段用于治疗。在优选的实施方式中，用于治疗的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID N0:28 的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO :40的氨基酸序列。在另一优选的实施方式中， 用于治疗的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID NO 29的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO 41的氨基酸序列。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段用于治疗人类的癌症。在优选的实施方式中，用于治疗人类癌症的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID NO 的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO :40的氨基酸序列。在另一优选的实施方式中，用于治疗人类癌症的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID NO 29的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO 41的氨基酸序列。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段用于与另一治疗剂组合治疗人类癌症。在优选的实施方式中，用于与另一治疗剂组合治疗人类癌症的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID NO :28的氨基酸序列并且所述重链包括 SEQ ID NO :40的氨基酸序列。在另一优选的实施方式中，用于与另一治疗剂组合治疗人类癌症的所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链和重链，其中所述轻链包括SEQ ID NO 29的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID N0:41的氨基酸序列。一种药物组合物，包括任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段和可药用的载体、 稀释剂或赋形剂。任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段在制造用于治疗人类癌症的药物中的应用。一种治疗癌症的方法，包括向有需要的人类患者给予有效量的任一前述单克隆抗体或其抗原结合片段。^X全长抗体正如其天然存在的，是包括通过二硫键互联的2条重(H)链和2条轻(L)链的免疫球蛋白分子。每一链的氨基酸末端部分包括主要通过其中所含的互补决定区 (CDR)来负责抗原识别的、约100-110或更多个氨基酸的可变区。每一链的羧基末端部分限定主要负责效应子功能的恒定区。⑶R被较保守的，称作框架区(“FR”)的区域分散。每一轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)由3个CDR和4个FR构成，它们按下述顺序从氨基末端到羧基末端排列 FRI、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。轻链的 3 个 CDR 称作 “ LCDRl、LCDR2 和 LCDR3” 并且重链的3个⑶R称作“HCDR1、HCDR2和HCDR3”。⑶R含有与抗原形成特异相互作用的大多数残基。在LCVR和HCVR内的CDR氨基酸残基的编号和位置是根据公知的Kabat编号协定。轻链分为K或λ，并且表征为本领域已知的特定恒定区。重链分为Y、μ、α、δ 或ε，并且分别将抗体的同种型定义为IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。IgG抗体可以进一步划分为亚型，如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4。每种重链类型表征为具有本领域公知序列的特定恒定区。如在此使用，如应用于本发明抗体化合物的术语“单克隆抗体”(Mab)指源自单拷贝或克隆如任何真核、原核或噬菌体克隆的抗体，而并不是生产它的方法。本发明的Mab优选以均一的或基本上均一的群体存在。完整的Mab含有2条重链和2条轻链。此种单克隆抗体的“抗原结合片段”包括例如，Fab片段、Fab'片段、F(ab' )2片段、单链Fv片段和包括轻链和重链的单臂抗体。可以例如通过重组技术、噬菌体展示技术、合成技术如CDR-移植、或此种技术的组合或者其他本领域已知的技术来生产本发明的单克隆抗体及其抗原结合片段。“抗体化合物”指在此公开的Mab和Fab。根据本发明展现类似的功能特性的其他抗体化合物可以通过常规方法来生产。例如，可以用人c-Met或其片段免疫小鼠，得到的抗体可以回收并纯化，并且可以通过在下面实施例2-19中公开的方法来评估确定它们是否拥有与在此公开的抗体化合物相似或相同的结合和功能特性。抗原结合片段也可以通过常规方法来生产。生产和纯化抗体及抗原结合片段的方法是本领域公知的并且可见于，例如 Harlow and Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York,第 5-8 以及 15 章，ISBN 0-87969-314-2。短语“人改造的抗体”指除了在此公开的抗体化合物以外的单克隆抗体及抗原结合片段，其与在此公开的那些具有类似的根据本发明的结合和功能特性，并且具有围绕源自于非人抗体的CDR的基本上是人源的或者完全是人源的的框架区。“框架区”或“框架序列”指框架区1至4中任一。本发明所涵盖的人改造的抗体和抗原结合片段包括其中框架区1至4中一或多个为基本上或完全是人源的分子，即其中存在任何的单个基本上是人源的或者完全是人源的框架区1至4的可能组合。例如，这包括其中框架区1和框架区2、框架区1和框架区3、框架区1、2和3等基本上是或者完全是人源的分子。基本上是人源的框架是与已知的人胚系框架序列具有至少约80%序列同一性的那些。优选地基本上是人源的框架与已知的人胚系框架序列具有至少约85%、约90%、约95%或约99%的序列同一性。完全人框架是与已知的人胚系框架序列相同的那些。人框架胚系序列可以通过其 _立占 http //imgt. cines. fr 自 ImMunoGeneTics (IMGT)，^#1 自 Marie-Paule Lefranc and Gerard Lefranc 的 The Immunoglobulin FactsBook, Academic Press,2001, ISBN012441351o 例如，胚系轻链框架可以选自下组A11、A17、A18、A19、A20、A27、A30、LI、L1I、 L12、L2、L5、L15、L6、L8、012、02和08，并且胚系重链框架区可以选自下组VH2_5、VH2-26、 VH2-70、VH3-20、VH3-72、VHI-46、VH3-9、VH3-66、VH3-74、VH4-31、VHI-18、VHI-69、VI-13-7、 VH3-11、VH3-15、VH3-21、VH3-23、VH3-30、VH3-48、VH4-39、VH4-59 和 VH5-5I。除了在此公开的那些，根据本发明展现类似功能特性的人改造的抗体可以使用若干不同的方法来产生。在一种方法中，亲本抗体化合物CDR移植到与亲本抗体化合物框架具有高序列同一性的人框架中。新框架的序列同一性通常将与亲本抗体化合物中相应框架的序列有至少约80%，至少约85%，至少约90%，至少约95%或至少约99%的同一性。在具有少于100个氨基酸残基的框架的情形下，可以改变一个、两个或三个氨基酸残基。这一移植可造成相比于亲本抗体而言减小的结合亲和性。如果是这种情况，那么可以根据Queen 等人，(1991)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88 J869公开的特定规则，将框架回复突变成亲本框架。描述用于人化鼠抗体的其他参考文献包括美国专利No. 4，816，397 ；5, 225，539和 5，693，761 ；Levitt (1983) J. Mol. Biol. 168 :595-620 所述的计算机程序 ABMOD 和 ENCAD ； 以及 Winter 和同事的方法(Jones 等人，(1986)Nature 321 :522-525 ;Riechmann 等人， (1988) Nature 332 :323-327 ；以及 Verhoeyen 等人，(1988) Science 239:1534-1536)。可以按照下面进行考虑用于回复突变的残基鉴定。当氨基酸落入下述目录时，被使用的人胚系序列的框架氨基酸(“受体框架”)由来自亲本抗体化合物的框架的框架区氨基酸(“供体框架”)所替代(a)在该位置，受体框架的人框架区的氨基酸对于人框架是不寻常的，而在该位置供体免疫球蛋白中的相应氨基酸对于人框架是典型的。(b)氨基酸的位置紧挨着⑶R之一；或者(c)在三维免疫球蛋白模型中，框架氨基酸的任何侧链原子都在约5-6埃(中心到中心)的CDR氨基酸的任何原子内。当受体框架的人框架区的每个氨基酸以及供体框架中的相应氨基酸在该外置对于人框架通常是不寻常的，此氨基酸可以由在该位置对于人框架是典型的氨基酸所取代。 这一回复突变原则使得恢复亲本抗体化合物的活性。另一种产生与在此公开的抗体化合物展现相似的功能特性的人改造的抗体的方法涉及随机突变移植CDR内的氨基酸而不改变框架，并且筛选得到的分子与亲本抗体化合物一样好甚至比它们更好的结合亲和性以及其他功能特性。也可以在每个CDR内的每个氨基酸位置引入单突变，随后评估此种突变对结合亲和性以及其他功能特性的影响。产生改善的特性的单突变可以组合以评估它们与其他组合的作用。此外，前述两种方法的组合是可能的。在⑶R移植后，除了在⑶R中引入氨基酸改变外，可以使特异框架区回复突变。这一方法描述于mi等人，(1999) J. Mol. Biol.四4: 151-162应用本发明的教导，本领域技术人员可以使用诸如定点诱变的常用技术来置换本发明公开的CDR和框架内序列的氨基酸，从而产生源自本发明序列的其他可变区氨基酸序列。所有天然产生的氨基酸都可以引入特异置换位点。在此公开的方法可以随后用于筛选这些其他的可变区氨基酸序列以鉴定具有所示体内功能的序列。以此方式，可以鉴定其他适于制备根据本发明的人改造的抗体及其抗原结合部分的序列。优选地，框架内的氨基酸置换限于在此公开的4条轻链和/或重链框架内中任何一或多条内的一、二或三个位置。优选地，⑶R内的氨基酸置换限于3条轻链和/或重链⑶R中任何一或多条内的一、二或三个位置。上述这些框架区和⑶R内的多种改变的组合也是可能的。可以通过下面实施例2-19中公开的方法来确认通过引入上述氨基酸修饰所产生的抗体化合物的功能特性符合通过在此公开的特异分子所展现的功能特性。术语“表位”指在抗体或抗体片段结合的肽或蛋白质上定位的氨基酸的特异排列。 表位通常由诸如氨基酸或糖侧链的分子的化学活性表面基团所组成，并且具有特异的三维结构特性以及特异的电荷特性。表位可以是线性的，即参与与单个氨基酸序列结合，或者是构象性的，即参与抗原不同区域的两个或更多个氨基酸序列的结合，这些序列可能并不必然是连续的。在此公开的表位可以由实施例3中公开的氨基酸序列组成，基本上由其组成或者包括它。与在此公开的分子相“竞争”的单克隆抗体或其抗原结合片段是与人C-Met在本发明分子结合的位点相同或重叠的位点处结合的那些。竞争单克隆抗体或其抗原结合片段可以例如，通过抗体竞争检测来鉴定。例如，纯化或部分纯化的人c-Met的样品可以结合到固相支持物上。然后，加入本发明的抗体化合物或其抗原结合片段以及怀疑能够与本发明抗体化合物竞争的单克隆抗体或其抗原结合片段。标记两个分子之一。如果标记的化合物和未标记的化合物结合c-Met上的单独的且分开的位点，那么标记的化合物将以相同的水平结合而不管是否存在怀疑的竞争化合物。然而，如果相互作用的位点是相同的或者重叠的，那么未标记的化合物将竞争，并且结合到抗原上的标记化合物的量将下降。如果过量存在未标记的化合物，那么如果有则极少量标记的化合物将结合。为了本发明的目的，竞争单克隆抗体或其抗原结合片段是使本发明抗体化合物与c-Met的结合减少约50%、约60%、 约70 %、约80 %、约85 %、约90 %、约95 %或约99 %的那些。进行此种竞争检测的方法的细节是本领域公知的并且可见于，例如Harlow and Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York,第 567-569页，ISBN 0_87969_314_2。此种检测可以通过使用纯化抗体而成为定量的。通过针对抗体自身滴定它来建立标准曲线，即使用相同的抗体用于标记和竞争物。滴定未标记的竞争单克隆抗体或其抗原结合片段抑制标记的分子与板结合的能力。对结果作图，并比较实现想要的结合抑制程度所需的浓度。可以通过本文实施例2-19中公开的方法来测定在此种竞争检测中与本发明抗体化合物竞争的单克隆抗体或其抗原结合片段是否具有与本发明抗体化合物相同或相似的功能特性。与在此公开的单克隆抗体或其抗原结合片段基本上结合相同的c-Met表位的单克隆抗体或其抗原结合片段是在与本发明分子结合的人c-Met位点重叠的位点处结合人 c-Met的那些。促进鉴定与在此公开的c-Met单克隆抗体或其抗原结合片段基本上结合相同表位的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法是本领域公知的并且描述于例如PCT国际公开WO 00/64946。可以通过本文实施例2_19中公开的方法来测定是否结合与本文公开的那些抗体或其抗原片段结合的位点基本上相同的c-Met表位之此类单克隆抗体或其抗原结合片段具有与本发明抗体化合物相同或相似的功能特性。“c-Met”或“人c-Met”指任何人c_Met，以及其功能上活跃的、突变的形式。c_Met 的结构示意性地表示为
权利要求
1.一种单克隆抗体，其a)结合人c-Met的α-链内的表位，b)诱导细胞表面人c-Met的内化作用。
2.权利要求1的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段诱导肝细胞生长因子无关的细胞表面人c-Met的内化作用。
3.权利要求1-2中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其诱导人c-Met在细胞中的内化作用，所述细胞包括含有选自c-Met激酶结构域突变M1149T和近膜结构域突变 R988C的获得性功能突变的人c-Met变体。
4.权利要求1-3中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合于选自下组的氨基酸序列中a)121 wdtyyddql13。(seq id no :77)，b)131ISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQS156 (SEQ ID NO :78),c)179ALGAKVLSSVKDRFINF195(SEQ ID NO:79)，和d)216VRRLKETKDGFM227 (SEQ ID NO :80)。
5.权利要求1-4中任一项的单克隆抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段结合于选自下组的氨基酸序列中a)123DTYYDD128 (SEQ ID NO :81)，b)144HVFPHNHTADIQS156 (SEQ ID NO :82)，c)i92finf195 (seq id no :83)，和d)220KETKDGFM227 (SEQ ID NO :84)。
6.权利要求1-5中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合构象表位中的氨基酸序列，特征为包括123DTYYDD128(SEQ ID NO:81), 144HVFPHNHTADIQS156(SEQ ID NO :82) , 192FINF195 (SEQ ID NO :83)，和 22(IKETKDGFM227 (SEQ ID NO 84)的。
7.权利要求1-3中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合包括84YKTGPVLEHPDCFPCQDCSSKANL1(17(SEQ ID NO 85)及其中的氨基酸序列。
8.权利要求1-3中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合包括95CFPCQDCSSKA1(15(SEQ IDNO 86)及其中的氨基酸序列。
9.权利要求1-8中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包括三个轻链互补决定区(LCDR)和三个重链互补决定区(HCDR)，其中所述三个 LCDR和所述三个HCDR选自下组a)包括氨基酸序列 SVSSSISSTNLH(SEQ ID NO :49)的 LCDRl ；包括氨基酸序列GTSX1LX2S (SEQ ID NO 87)的LCDR2，其中X1是Y或R，并且X2是A或R;包括氨基酸序列 QQWSSYPYS (SEQ ID NO 51)的 LCDR3 ；包括氨基酸序列 GYTFTSRYIH(SEQ ID NO :59)的 HCDRl ；包括氨基酸序列 Wiypvtcdtyyx7Ex8FKG(se q id no :90)的 hcdr2，其中 X7 是 N、ι 或 r， 并且)(8是1(或Ρ ；和包括氨基酸序列GYGAFX9Y (SEQ ID NO 91)的HCDR3，其中X9是Y或F ；以及b)包括氨基酸序列 SVSSSVX3SIYLH(SEQ ID NO :88)的 LCDR1，其中 X3 是 S 或 R ； 包括氨基酸序列 stsnlas (seq id no 54)的 lcdr2。包括氨基酸序列x4x5yx6gyplt (seq id no 89)的lcdr3，其中x4是i或q，&是q或v， 并且&是s或r ；包括氨基酸序列 gytftdyymh(seq id no :65)的 hcdrl。包括氨基酸序列 RVNPXiqRX1 A2Ttynqkfeg(seq idno :92)的 hcdr2，其中 xltl 是 ν 或 y， x11是g或r，并且x12是g或s ；和包括氨基酸序列x13nx14ldy (seq id no 93)的hcdr3，其中x13是t或α，并且x14是w 或io
10.权利要求1、3、7和9中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包括三个轻链互补决定区(ixdr)和三个重链互补决定区(hcdr)，其中lcdrl 包括氨基酸序列 svsssisstnlh(seq id no :49)，lcdr2包括氨基酸序列gtsx1lx2s (seq id no 87)，其中&是y或r，并且x2是a或r， lcdr3 包括氨基酸序列 qqwssypys (seq id no 51), hcdrl 包括氨基酸序列 gytftsryih(seq id no :59)，hcdr2 包括氨基酸序列 Wiypvtcdtyyx7Ex8FKG(seq idno :90)，其中 x7 是 ν、ι 或 r，并且 )(8是1(或p，和hcdr3包括氨基酸序列gygafx9y (seq id no :91)，其中x9是y或f。
11.权利要求1_6、8和9中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包括三个轻链互补决定区(IXDR)和三个重链互补决定区(HCDR)，其中IXDRl 包括氨基酸序列SVSSSVX3SIYLH(SEQ ID NO :88)，其中X3是S或R ；lcdr2 包括氨基酸序列 stsnlas (seq id no :54)，lcdr3包括氨基酸序列x4x5yx6gyplt (seq id no 89)，其中&是i或q，&是q或v，并且&是S或R，hcdrl 包括氨基酸序列 gytftdyymh(seq id no :65)，hcdr2 包括氨基酸序列 rvnpxiqrx1 a2ttynqkfeg(seq idno 92)，其中 xltl 是 ν 或 y，x11 是g或r，并且x12是6或s，和hcdr3包括氨基酸序列x13nx14ldy (seq id no :93)，其中x13是t或α，并且x14是w或i。
12.权利要求1-11中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，包括三个轻链互补决定区(ixdr)和三个重链互补决定区(hcdr)，其中所述三个ixdr和所述三个hcdr选自下组a)包括氨基酸序列SVSSSISSTNLH(SEQ ID NO :49)的 LCDRl， 包括氨基酸序列 gtsylas (seq id no 50)的 lcdr2，包括氨基酸序列 qqwssypys (seq id no 51)的 lcdr3， 包括氨基酸序列 gytftsryih(seq id no :59)的 hcdrl， 包括氨基酸序列 wiypvtgdtyynekfkg (seq id no 60)的 hcdr2，和包括氨基酸序列 gygafyy (seq id no 61)的 hcdr3 ；b)包括氨基酸序列SVSSSISSTNLH(SEQ ID NO :49)的 LCDRl， 包括氨基酸序列 gtsylas (seq id no :50)的 lcdr2，包括氨基酸序列 QQWSSYPYS (SEQ ID NO 51)的 LCDR3， 包括氨基酸序列 GYTFTSRYIH(SEQ ID NO :59)的 HCDRl， 包括氨基酸序列 WIYPVTGDTYYIEKFKG (SE Q ID NO 62)的 HCDR2，和包括氨基酸序列 GYGAFFY (SEQ ID NO 63)的 HCDR3 ；c)包括氨基酸序列SVSSSISSTNLH(SEQ ID NO :49)的 LCDRl， 包括氨基酸序列 GTSRLRS (SEQ ID NO 52)的 LCDR2，包括氨基酸序列 QQWSSYPYS (SEQ ID NO :51)的 LCDR3， 包括氨基酸序列 GYTFTSRYIH(SEQ ID NO :59)的 HCDRl， 包括氨基酸序列 WIYPVTGDTYYREPFKG (SEQ ID NO 64)的 HCDR2，和包括氨基酸序列 GYGAFYY (SEQ ID NO 61)的 HCDR3 ；d)包括氨基酸序列SVSSSVSSIYLH(SEQ ID NO :53)的 LCDRl， 包括氨基酸序列 STSNLAS (SEQ ID NO 54)的 LCDR2，包括氨基酸序列 IQYSGYPLT(SEQ ID NO 55)的 LCDR3， 包括氨基酸序列 GYTFTDYYMH(SEQ ID NO :65)的 HCDRl， 包括氨基酸序列 RVNPNRGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO 66)的 HCDR2，和包括氨基酸序列TNWLDY (SEQ ID NO 67)的HCDR3 ；e)包括氨基酸序列SVSSSVSSIYLH(SEQ ID NO :53)的 LCDRl， 包括氨基酸序列 STSNLAS (SEQ ID NO :54)的 LCDR2，包括氨基酸序列 QVYSGYPLT (SEQ ID NO 56)的 LCDR3， 包括氨基酸序列 GYTFTDYYMH(SEQ ID NO :65)的 HCDRl， 包括氨基酸序列 RVNPNRRGTTYNQKFEG (SEQ ID NO 68)的 HCDR2，和包括氨基酸序列ANWLDY (SEQ ID NO 69)的HCDR3，以及f)包括氨基酸序列SVSSSVRSIYLH(SEQ ID NO :57)的 LCDRl， 包括氨基酸序列 STSNLAS (SEQ ID NO :54)的 LCDR2，包括氨基酸序列 QVYRGYPLT (SEQ ID NO 58)的 LCDR3， 包括氨基酸序列 GYTFTDYYMH(SEQ ID NO :65)的 HCDRl， 包括氨基酸序列 RVNPYRGSTTYNQKFEG (SEQ ID NO 70)的 HCDR2，和包括氨基酸序列ANILDY(SEQ ID NO 71)的HCDR3。
13.权利要求1_3、7、9、10和12中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，包括三个轻链互补决定区(IXDR)和三个重链互补决定区(HCDR)，其中所述三个IXDR和所述三个HCDR 选自下组a)包括氨基酸序列SVSSSISSTNLH(SEQ ID NO :49)的 LCDRl， 包括氨基酸序列 GTSYLAS (SEQ ID NO 50)的 LCDR2，包括氨基酸序列 QQWSSYPYS (SEQ ID NO :51)的 LCDR3， 包括氨基酸序列 GYTFTSRYIH(SEQ ID NO :59)的 HCDRl， 包括氨基酸序列 WIYPVTGDTYYNEKFKG (SEQ ID NO 60)的 HCDR2，和包括氨基酸序列 GYGAFYY (SEQ ID NO :61)的 HCDR3 ；b)包括氨基酸序列SVSSSISSTNLH(SEQ ID NO :49)的 LCDRl， 包括氨基酸序列 GTSYLAS (SEQ ID NO :50)的 LCDR2，包括氨基酸序列 QQWSSYPYS (SEQ ID NO 51)的 LCDR3， 包括氨基酸序列 GYTFTSRYIH(SEQ ID NO :59)的 HCDRl， 包括氨基酸序列 WIYPVTGDTYYIEKFKG (SEQ ID NO 62)的 HCDR2，和包括氨基酸序列 GYGAFFY (SEQ ID NO 63)的 HCDR3 ； c)包括氨基酸序列 SVSSSISSTNLH(SEQ ID NO :49)的 LCDRl， 包括氨基酸序列 GTSRLRS (SEQ ID NO 52)的 LCDR2， 包括氨基酸序列 QQWSSYPYS (SEQ ID NO :51)的 LCDR3， 包括氨基酸序列 GYTFTSRYIH(SEQ ID NO :59)的 HCDRl， 包括氨基酸序列 WIYPVTGDTYYREPFKG (SEQ ID NO 64)的 HCDR2，和包括氨基酸序列 GYGAFYY (SEQ ID NO 61)的 HCDR3。
14.权利要求1_6、8、9、11和12中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，包括三个轻链互补决定区(IXDR)和三个重链互补决定区(HCDR)，其中所述三个IXDR和所述三个HCDR 选自下组a)包括氨基酸序列SVSSSVSSIYLH(SEQ ID NO :53)的 LCDRl， 包括氨基酸序列 STSNLAS (SEQ ID NO 54)的 LCDR2，包括氨基酸序列 IQYSGYPLT(SEQ ID NO 55)的 LCDR3， 包括氨基酸序列 GYTFTDYYMH(SEQ ID NO :65)的 HCDRl， 包括氨基酸序列 RVNPNRGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO 66)的 HCDR2，和包括氨基酸序列TNWLDY (SEQ ID NO 67)的HCDR3 ；b)包括氨基酸序列SVSSSVSSIYLH(SEQ ID NO :53)的 LCDRl， 包括氨基酸序列 STSNLAS (SEQ ID NO :54)的 LCDR2，包括氨基酸序列 QVYSGYPLT (SEQ ID NO 56)的 LCDR3， 包括氨基酸序列 GYTFTDYYMH(SEQ ID NO :65)的 HCDRl， 包括氨基酸序列 RVNPNRRGTTYNQKFEG (SEQ ID NO 68)的 HCDR2，和包括氨基酸序列ANWLDY (SEQ ID NO 69)的HCDR3，以及c)包括氨基酸序列SVSSSVRSIYLH(SEQ ID NO :57)的 LCDRl， 包括氨基酸序列 STSNLAS (SEQ ID NO :54)的 LCDR2，包括氨基酸序列 QVYRGYPLT (SEQ ID NO 58)的 LCDR3， 包括氨基酸序列 GYTFTDYYMH(SEQ ID NO :65)的 HCDRl， 包括氨基酸序列 RVNPYRGSTTYNQKFEG (SEQ ID NO 70)的 HCDR2，和包括氨基酸序列ANILDY(SEQ ID NO 71)的HCDR3。
15.权利要求1_3、8、9、11、12和14中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包括三个轻链互补决定区(IXDR)和三个重链互补决定区(HCDR)，其中包括氨基酸序列 SVSSSVSSIYLH(SEQ ID NO :53)的 LCDR1， 包括氨基酸序列 STSNLAS (SEQ ID NO :54)的 LCDR2， 包括氨基酸序列 IQYSGYPLT(SEQ ID NO 55)的 LCDR3， 包括氨基酸序列 GYTFTDYYMH(SEQ ID NO :65)的 HCDRl， 包括氨基酸序列 RVNPNRGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO 66)的 HCDR2，和包括氨基酸序列TNWLDY (SEQ ID NO 67)的HCDR3。
16.权利要求1_6、9、11、12和14中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包括三个轻链互补决定区(IXDR)和三个重链互补决定区(HCDR)，其中包括氨基酸序列 SVSSSVSSIYLH(SEQ ID NO :53)的 LCDR1，包括氨基酸序列 STSNLAS (SEQ ID NO 54)的 LCDR2，包括氨基酸序列 QVYSGYPLT (SEQ ID NO 56)的 LCDR3，包括氨基酸序列 GYTFTDYYMH(SEQ ID NO :65)的 HCDRl，包括氨基酸序列 RVNPNRRGTTYNQKFEG (SEQ ID NO 68)的 HCDR2，和包括氨基酸序列ANWLDY (SEQ ID NO 69)的HCDR3。
17.权利要求1-16中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，包括轻链可变区(LCVR) 和重链可变区(HCVR)，其中所述LCVR和所述HCVR分别包括选自下组的氨基酸序列a)SEQ ID NO :94 和 SEQ ID NO 96 ；以及b)SEQID NO 95 和 SEQ ID NO :97。
18.权利要求1_3、7、9、10、12、13和17中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，包括轻链可变区(LCVI )和重链可变区(HCVI )，其中所述LCVR包括SEQ ID NO :94并且所述 HCVR 包括 SEQ IDNO :96。
19.权利要求1_6、8、9、11、12和14-17中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，包括轻链可变区(LCVI )和重链可变区(HCVI )，其中所述LCVR包括SEQ ID NO 95并且所述 HCVR 包括 SEQ ID NO :97。
20.权利要求1-19中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述LCVR和所述 HCVR包括选自下组的氨基酸序列a)LCVR 是 SEQ ID NO 1 并且 HCVR 是 SEQ ID NO 13 ；b)LCVR 是 SEQ ID NO 2 并且 HCVR 是 SEQ ID NO 14 ；c)LCVR 是 SEQ ID NO 3 并且 HCVR 是 SEQ ID NO 15 ；d)LCVR 是 SEQ ID NO 4 并且 HCVR 是 SEQ ID NO 16 ；e)LCVR 是 SEQ ID NO 5 并且 HCVR 是 SEQ ID NO 17 ；禾口f)LCVR 是 SEQ ID NO 6 并且 HCVR 是 SEQ ID N0:18。
21.权利要求1_3、7、9、10、12、13、17、18和20中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述LCVR和所述HCVR分别包括选自下组的氨基酸序列a)LCVR 是 SEQ ID NO 1 并且 HCVR 是 SEQ ID NO 13 ；b)LCVR 是 SEQ ID NO 2 并且 HCVR 是 SEQ ID NO: 14;并且c)LCVR 是 SEQ ID NO 3 并且 HCVR 是 SEQ ID NO: 15。
22.前述权利要求1-6、8、9、11、12、14-17、19和20中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述LCVR和所述HCVR包括选自下组的氨基酸序列a)LCVR 是 SEQ ID NO 4 并且 HCVR 是 SEQ ID NO 16 ；b)LCVR 是 SEQ ID NO 5 并且 HCVR 是 SEQ ID NO 17 ；禾口c)LCVR 是 SEQ ID NO :6 并且 HCVR 是 SEQ ID NO: 18。
23.权利要求1-3、8、9、11、12、14、15、17、19、20和22中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述LCVR包括SEQ IDNO :4的氨基酸序列并且所述HCVR包括SEQ ID NO 16的氨基酸序列。
24.权利要求1-6、9、11、12、14、16、17、19、20和22中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述LCVR包括SEQ ID NO 5的氨基酸序列并且所述HCVR包括SEQ ID NO 17的氨基酸序列。
25.权利要求I-M中任一项的单克隆抗体，其中所述抗体包括轻链和重链，其中所述轻链和重链包括选自下组的氨基酸序列a)轻链是SEQ ID NO25并且I■链是SEQIDNO37 ；b)轻链是SEQ ID NO26并且I■链是SEQIDNO38 ；c)轻链是SEQ ID NO27并且I■链是SEQIDNO39 ；d)轻链是SEQ ID NO28并且I■链是SEQIDNO40 ；e)轻链是SEQ ID NO29并且I■链是SEQIDNO41 ；f)轻链是SEQ ID NO30并且I■链是SEQIDNO:42ο
26.权利要求1_3、7、9、10、12、13、17、18、20、21和25中任一项的单克隆抗体，其中所述抗体包括轻链和重链，其中所述轻链和重链包括选自下组的氨基酸序列a)轻链是SEQID NO 25并且重链是SEQ ID NO 37,b)轻链是SEQID NO 26并且重链是SEQ ID NO :38，和c)轻链是SEQID NO 27并且重链是SEQ ID NO :39。
27.权利要求1-6、8、9、11、12、14-17、19、20和22-25中任一项的单克隆抗体，其中所述抗体包括轻链和重链，其中所述轻链和重链包括选自下组的氨基酸序列a)轻链是SEQID NO 28并且重链是SEQ ID NO 40 ；b)轻链是SEQID NO 29并且重链是SEQ ID NO 41 ；以及c)轻链是SEQID NO 30并且重链是SEQ ID NO :42。
28.权利要求1-3、8、9、11、12、14、15、17、19、20、22、23、25 和 27 中任一项的单克隆抗体，其中所述轻链包括SEQ ID NO 28的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO 40的氨基酸序列。
29.权利要求1-6、9、11、12、14、16、17、19、20、22、M、25和27中任一项的单克隆抗体，其中所述轻链包括SEQ ID NO : 的氨基酸序列并且所述重链包括SEQ ID NO :41的氨基酸序列。
30.权利要求1-3、8、9、11、12、14、15、17、19、20、22、23、25、27 和 28 中任一项的单克隆抗体，其中所述抗体包括两条轻链和两条重链，其中每条轻链包括SEQ ID N0:28的氨基酸序列并且每条重链包括SEQ ID NO :40的氨基酸序列。
31.权利要求1-6、9、11、12、14、16、17、19、20、22、24、25、27 和 29 中任一项的单克隆抗体，其中所述抗体包括两条轻链和两条重链，其中每条轻链包括SEQ ID N0:29的氨基酸序列并且每条重链包括SEQ ID NO 41的氨基酸序列。
32.一种单克隆抗体或其抗原结合片段，其与权利要求1-31中任一项的c-Met单克隆抗体或其抗原结合片段竞争。
33.一种单克隆抗体或其抗原结合片段，其结合与权利要求1-32中任一项的c-Met单克隆抗体或其抗原结合片段结合的c-Met表位相同的c-Met表位。
34.一种药物组合物，包括权利要求1-33中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段， 以及可药用载体、稀释剂或赋形剂。
35.权利要求1-34中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段用于治疗。
36.权利要求1-35中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段用于治疗人类癌症。
全文摘要
本发明提供结合并抑制c-Met活性的单克隆抗体、其抗原结合片段以及上述的组合，并且所述单克隆抗体、其抗原结合片段以及其组合用于治疗发病机理是由c-Met介导的癌症和其他疾病、病症或紊乱。
文档编号C07K16/28GK102216333SQ200980146173
公开日2011年10月12日 申请日期2009年11月18日 优先权日2008年11月21日
发明者J·卢, J·戴维斯, L·刘, M·A·沃廷格尔, P·E·瓦扬古, W·曾 申请人:伊莱利利公司