专利名称：一种泽泻醇a的提纯方法
技术领域：
本发明涉及一种泽泻醇A的提纯方法，尤其是涉及一种用大孔树脂富集和逆流色谱分离手段纯化泽泻醇A的方法。
背景技术：
泽泻醇A，三萜类物质。分子式=C3tlH50O5理化性质无定形体，[a]23D+99.6° (氯仿)。溶于乙酸乙酯、丙酮、氯仿。微溶于甲醇、乙醇，不溶于水和石油醚。实验证明，泽泻醇A与含有胆固醇、2%胆酸钠及0. 2%氯化胆碱的食物同时喂养雄性大鼠时，十天后测量治疗组和对照组血液中胆固醇含量，发现能明显降低血液中胆固醇水平。泽泻醇A可以用作治疗肝炎，不易产生耐药性性，而且毒副作用低，市场前景较好。高速逆、流色i普(high—speed countercurrent chromatography, HSCCC) Mi 20 Μ$ 80年代发展起来的一种连续高效的液-液分配色谱分离技术，它不用任何固态的支撑物或载体。它利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡，当其中一相作为固定相，另一相作为流动相，在连续洗脱的过程中能保留大量固定相。由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，因而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等，不仅使样品能够全部回收，回收的样品更能反映其本来的特性，特别适合于天然生物活性成分的分离。而且由于被分离物质与液态固定相之间能够充分接触，使得样品的制备量大大提高，是一种理想的制备分离手段。它相对于传统的固-液柱色谱技术，具有适用范围广、操作灵活、高效、快速、制备量大、费用低等优点。目前HSCCC技术正在发展成为一种备受关注的新型分离纯化技术，已经广泛应用于生物医药、天然产物、食品和化妆品等领域，特别在天然产物行业中已被认为是一种有效的新型分离技术；适合于中小分子类物质的分离纯化。目前，提取泽泻醇A的方法多是有机试剂提取或超临界萃取，再大孔树脂分离或硅胶柱分离。所得泽泻醇A要么含量较低，要么成本较高、制备量小。如专利(申请号200810197317. 3) “一种泽泻三萜类化合物提取纯化工艺”，该专利公开的方法是甲醇提取，提取液浓缩后乙酸乙酯萃取，萃取物乙醇溶解上大孔树脂柱吸附，得总三萜类化合物。再如专利(申请号03124066. 6) “泽泻留醇提取物及其制备方法、质量控制方法”， 该专利公开的方法是采用超临界(X)2流体萃取泽泻制得泽泻总留醇提取物。还有专利“治疗乙型肝炎的药物组合物”，该专利公开的方法是乙醇回流提取，浓缩液氯仿萃取，硅胶柱分离，重结晶得针状结晶泽泻醇Α。文献“草泽泻三萜类化学成分的研究”，提供的方法是乙醇提取，石油醚、乙酸乙酯
3萃取，再硅胶柱分离得泽泻醇各种单体。文献“大孔树脂法纯化泽泻总萜醇类成分的实验研究”公开的是大孔树脂对泽泻醇的纯化方法。
发明内容
本发明要解决技术问题是提供一种连续生产、处理大、含量高的泽泻醇A的提纯方法。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的一种泽泻醇A的提纯方法，其特征在于包含以下步骤1)提取脱色取泽泻药材粉碎40-80目，加入8-15倍量70-90%乙醇溶液，回流提取1-3小时，2-3次，合并提取液加活性炭脱色，滤过得脱色液；2)大孔树脂吸附把上述提取液回收乙醇，再加适量水分散，保持温度60-80°C加入大孔树脂柱吸附，水醇梯度洗脱，收集有效成分洗脱液减压回收乙醇，放置沉淀；3)结晶上述沉淀物滤出，加入5-8倍量35-40%乙醇溶液回流洗涤，冷却常温，过滤不溶物，用无水乙醇回流溶解结晶；4)高速逆流色谱分离把上述结晶物滤出，选用庚烷-二氯甲烷-乙腈的溶剂系统，采用高速逆流色谱仪分离，制得泽泻醇A。所述步骤1)中活性炭为针剂类药用活性炭，用量为溶液量0. 3-0. 5%。所述步骤幻中大孔树脂型号可选D101、AB_8、HZ816或HPD-100中的一种，洗脱剂为 10-20BV 水一5-7BV20-40% 乙醇溶液一5-8BV60_90% 乙醇溶液。所述步骤4)中溶剂比例为庚烷(8-13) 二氯甲烷(2-5)乙腈(5-9)。本发明的优点是1)初步处理采用大孔树脂富集和结晶纯化，因为泽泻醇A含量低，如直接高速逆流色谱纯化分离溶剂难配比，溶剂反复多次易乳化。2)采用高速逆流色谱分离制备量大，周期短，成本较低，产品纯度高，而且分离过程样下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式
具体实施例方式实施例1 泽泻药材粉碎40目，取10千克，投入200L中试提取罐中，加入80L70%乙醇溶液回流提取1小时，抽取上清液，再加同样条件提取2次，合并提取液加入700g针剂类药用活性炭脱色，滤出活性炭，减压回收乙醇，再加适量水分散，保温80°C加入4LD101大孔树脂柱吸附，流速4L/H，吸附结束后，依次用40L水一20L40%乙醇溶液一32L60%乙醇溶液洗脱，收集60%乙醇洗脱液减压回收乙醇，放置沉淀，滤出，得沉淀物300g加入1.5L40%乙醇溶液回流洗涤，冷却常温，过滤不溶物，用无水乙醇回流溶解结晶，得到61g粉状结晶物。取庚烷(1 二氯甲烷O)乙腈(9)置于分液漏斗中混合均勻，静止分层，分离上下相，以上相为固定相，以下相为流动相，取上述粉状结晶物适量溶于下相中待用，开启制备型高速逆流色谱仪制备，以3ml/min流速泵入流动相，当流动相流出，开始连续进样，首尾洗脱，转速控制为700r/min，通过检测器定时收集泽泻醇A流分，浓缩干燥得泽泻醇A13g，高相液相检测含量98% (面积归一化法)。实施例2:泽泻药材粉碎80目，取10千克，投入200L中试提取罐中，加入150L90%乙醇溶液回流提取3小时，抽取上清液，再加同样条件提取1次，合并提取液加入900g针剂类药用活性炭脱色，滤出活性炭，减压回收乙醇，再加适量水分散，保温60°C加入4L AB-8大孔树脂柱吸附，流速3L/H，吸附结束后，依次用80L水一28L20%乙醇溶液一20L90%乙醇溶液洗脱，收集90%乙醇洗脱液减压回收乙醇，放置沉淀，滤出，得沉淀物270g加入2. 5L35%乙醇溶液回流洗涤，冷却常温，过滤不溶物，用无水乙醇回流溶解结晶，得到52g粉状结晶物。取庚烷(8) 二氯甲烷(5)乙腈(9)置于分液漏斗中混合均勻，静止分层，分离上下相，以上相为固定相，以下相为流动相，取上述粉状结晶物适量溶于下相中待用，开启制备型高速逆流色谱仪制备，以2ml/min流速泵入流动相，当流动相流出，开始连续进样，首尾洗脱，转速控制为1 lOOr/min，通过检测器定时收集泽泻醇A流分，浓缩干燥得泽泻醇A12g，高相液相检测含量98. 5% (面积归一化法)。实施例3 泽泻药材粉碎60目，取10千克，投入200L中试提取罐中，加入100L80%乙醇溶液回流提取2小时，抽取上清液，再加同样条件提取2次，合并提取液加入1. 2kg针剂类药用活性炭脱色，滤出活性炭，减压回收乙醇，再加适量水分散，保温80°C加入4L HZ816大孔树脂柱吸附，流速5L/H，吸附结束后，依次用60L水一乙醇溶液一乙醇溶液洗脱，收集75%乙醇洗脱液减压回收乙醇，放置沉淀，滤出，得沉淀物310g加入2L40%乙醇溶液回流洗涤，冷却常温，过滤不溶物，用无水乙醇回流溶解结晶，得到48g粉状结晶物。取庚烷(9) 二氯甲烷0)乙腈(7)置于分液漏斗中混合均勻，静止分层，分离上下相，以上相为固定相，以下相为流动相，取上述粉状结晶物适量溶于下相中待用，开启制备型高速逆流色谱仪制备，以1. 5ml/min流速泵入流动相，当流动相流出，开始连续进样，首尾洗脱，转速控制为850r/min，通过检测器定时收集泽泻醇A流分，浓缩干燥得泽泻醇A15g，高相液相检测含量99% (面积归一化法)。实施例4 泽泻药材粉碎60目，取10千克，投入200L中试提取罐中，加入14L80%乙醇溶液回流提取2小时，抽取上清液，再加同样条件提取1次，合并提取液加入Ikg针剂类药用活性炭脱色，滤出活性炭，减压回收乙醇，再加适量水分散，保温80°C加入4L HPD-100大孔树脂柱吸附，流速2L/H，吸附结束后，依次用40L水一20L40%乙醇溶液一30L75%乙醇溶液洗脱，收集75%乙醇洗脱液减压回收乙醇，放置沉淀，滤出，得沉淀物310g加入2. 4L30%乙醇溶液回流洗涤，冷却常温，过滤不溶物，用无水乙醇回流溶解结晶，得到45g粉状结晶物。取庚烷(1 二氯甲烷O)乙腈(9)置于分液漏斗中混合均勻，静止分层，分离上下相，以上相为固定相，以下相为流动相，取上述粉状结晶物适量溶于下相中待用，开启制备型高速逆流色谱仪制备，以2ml/min流速泵入流动相，当流动相流出，开始连续进样，首尾洗脱，转速控制为900r/min，通过检测器定时收集泽泻醇A流分，浓缩干燥得泽泻醇A14g，高相液相检测含量97. 5% (面积归一化法)。
权利要求
1.一种泽泻醇A的提纯方法，其特征在于包含以下步骤1)提取脱色取泽泻药材粉碎40-80目，加入8-15倍量70-90%乙醇溶液，回流提取1-3小时，2-3次，合并提取液加活性炭脱色，滤过得脱色液；2)大孔树脂吸附把上述提取液回收乙醇，再加适量水分散，保持温度60-80°C加入大孔树脂柱吸附，水醇梯度洗脱，收集有效成分洗脱液减压回收乙醇，放置沉淀；3)结晶上述沉淀物滤出，加入5-8倍量35-40%乙醇溶液回流洗涤，冷却常温，过滤不溶物，用无水乙醇回流溶解结晶；4)高速逆流色谱分离把上述结晶物滤出，选用庚烷-二氯甲烷-乙腈的溶剂系统，采用高速逆流色谱仪分离，制得泽泻醇A。
2.如权利要求1所述泽泻醇A的提纯方法，其特征在于所述步骤1)中活性炭为针剂类药用活性炭，用量为溶液量0. 3-0. 5%。
3.如权利要求1所述泽泻醇A的提纯方法，其特征在于所述步骤幻中大孔树脂型号可选 D101、AB-8、HZ816 或 HPD-100 中的一种，洗脱剂为 10-20BV 水一5_7BV20_40% 乙醇溶液—5-8BV60-90% 乙醇溶液。
4.如权利要求1所述泽泻醇A的提纯方法，其特征在于所述步骤4)中溶剂比例为庚烷(8-13) 二氯甲烷(2-5)乙腈(5-9)。
全文摘要
本发明提供了一种污染小、成本低的泽泻醇A的提纯方法，工艺方法是泽泻药材粉碎，70-90％乙醇回流提取，提取液加入活性炭脱色回收乙醇后，浓缩液在60-80℃状态加入大孔树脂吸附，水醇梯度洗脱，浓缩得沉淀物，洗涤结晶，结晶物再经高速逆流色谱仪分离，选用庚烷一二氯甲烷-乙腈的溶剂系统，制得产品。采用本发明生产泽泻醇A，所得产品纯度高、收率高。
文档编号C07J13/00GK102372759SQ201010263068
公开日2012年3月14日 申请日期2010年8月26日 优先权日2010年8月26日
发明者刘东锋, 李法庆, 杨成东 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司