专利名称：一种从甲醛固定组织或甲醛固定石蜡包埋组织中提取总蛋白质的方法
技术领域：
本发明涉及到生物技术领域，尤其是临床蛋白质组学领域，是一种从甲醛固定的， 或甲醛固定石蜡包埋(FFPE)组织中快速高效提取总蛋白质的方法。
背景技术：
医院病理挡案中保存了大量的甲醛固定的，或甲醛固定石蜡包埋(FFPE)组织切 片样本，这些样本绝大多数已经保存了几十年，甚至上百年，石蜡包埋组织是病理分子生物 学和蛋白质组学研究的重要材料。由于体外培养的细胞的表达谱研究并不能够真实反映体 内细胞的真实状况，研究其正常细胞和疾病相关的细胞，特别是癌细胞中表达谱差异，对于 判断癌化的进展，癌症的类型的判定，以方便于诊断和治疗有重要的意义，因此从甲醛固定 的，或甲醛固定石蜡包埋(FFPE)组织切片样本中提取DNA，mRNA，MicroRNA，SnoRNA，全蛋白 等等加以研究是一个重要的基础性工作，而合适的提取试剂和提取方法是关系到所提取的 核酸或蛋白质样品能否反映FFPE切片样本中真实数量和方便，快捷，安全地进行下游的重 要环节。早先人们主要从从甲醛固定的，或甲醛固定石蜡包埋(FFPE)组织切片样本提取的 是 DNA(Goelz 1985，Dubeau 1986)，而后 Erlander (2003)等从 FFPE 组织切片样本中提取 RNA和mRNA用于表达谱研究。可是对于FFPE组织切片样本的表达谱研究研究的重要方面_全蛋白的提取，由于 蛋白质被甲醛固定，所以蛋白质分子内部以及蛋白质分子之间存在着交链，导致蛋白质分 子的可溶性较差和蛋白质的抗原表位，特别是蛋白质立体表位被严重破坏，用常规的试剂 对脱蜡后的石蜡包埋组织内的蛋白质抽提时，全长的蛋白质会严重断裂为多肽和抗原表位 的恢复程度较差，所以国内外对石蜡包埋组织内全长蛋白质的提取报道较少。Ikeda(1998) 使用有机溶剂对含有2% SDS的RIPA裂解液，通过加热，提取淀粉样蛋白质，可是Shan-Rong Shi (2006)在使用Ikeda的方法，用同样的裂解液对同样类型的新鲜组织样本对全蛋白质 提取时，通过比较新鲜和石蜡包埋组织切片的SDS-PAGE的图谱发现，部分含量较少的蛋白 在石蜡包埋组织的western blot检测信号较弱甚至无法检测到，并且50-10Kda区域，蛋白 质条带呈现出涂抹状，说明蛋白质的提取效率较低，全长的蛋白质严重断裂。Okaka(2005) 使用高温脱腊，再通过温育含有尿素，2% SDS和巯基乙醇的溶液提取蛋白，但是石蜡不能 够被完全去除干净，提取的蛋白也被尿素在高温下修饰，同时高浓度的SDS对下游操作， 特别是蛋白的MS(质谱分析)产生严重的影响。Shan-Rong Shi (2006)使用了一种含有 20mMTris-HCl, pH 9.0,2% SDS的溶液对脱腊的组织切片蛋白质高温提取时，蛋白质的产 量有所提高，但是SDS不容易去除，会对抗原表位的恢复和MS分析产生严重的影响。
发明内容
本发明的目的是提供一种从甲醛固定的，或甲醛固定石蜡包埋(Formalin-Fixed， Paraffin-Embeded Tissue FFPE)的组织中快速高效提取全蛋白质的方法。
本发明的基本程序包括以下步骤1)将甲醛固定的组织用不含有去污剂的蛋白质抽提试剂在两种不同的温度条件 下温育以释放被交链的蛋白质；或者，将甲醛固定石蜡包埋的组织先用脱蜡试剂去蜡后，再用不含有去污剂的蛋 白质抽提试剂在两种不同的温度条件下温育以释放被交链的蛋白质；2)离心并分离上清，上清加入蛋白质沉淀试剂后分离并洗涤沉淀，再将沉淀采用 合适的试剂溶解获得甲醛固定的组织或甲醛固定石蜡包埋的组织的全蛋白质提取液。 较佳的，所述甲醛固定的组织或甲醛固定石蜡包埋的组织均为组织切片。步骤1中，所述脱蜡试剂包括可以溶解石蜡的有机溶剂和与石蜡不相溶的有机溶 剂。所述的可以溶解石蜡的有机溶剂可以选自甲苯，二甲苯，D-柠檬烯，正戊烷，正己 烷，正庚烷和正辛烷等无极性有机溶剂。所述的与石蜡不相溶的有机溶剂可以选自乙醇，甲醇，异丙醇和正丁醇等弱极性 有机溶剂。所述将甲醛固定石蜡包埋的组织用脱蜡试剂去蜡的方法具体为将石蜡包埋组织 先用可以溶解石蜡的有机溶剂处理3-5分钟，而后再在前述处理液中加入与石蜡不相溶的 有机溶剂处理5-60秒，再将处理后的组织洗涤并分离。所述可以溶解石蜡的有机溶剂与与石蜡不相溶的有机溶剂的体积比为 5 1-20 1，优选 5 1-10 1。本发明所述的脱蜡试剂，不同于常规的二甲苯/乙醇方法，传统的二甲苯/乙醇方 法对10-15 μ m厚石蜡包埋组织切片需要两次10分钟的脱腊过程，和分别用100%、96%、 70%的乙醇水化，两次10分钟的过程，这样需要的时间通常在1个多小时，而本发明所提供 的脱蜡试剂只需要短短几分钟就可以实现石蜡的完全去除。所述的不含有去污剂的蛋白质抽提试剂由还原试剂，变性试剂和缓冲液组成。 所述的还原试剂选自巯基乙醇，DTT, TCEP等，合适的浓度在5-500mM，最合适的浓度在 20-200mM,所述的变性试剂选自尿素，硫尿，盐酸胍，异硫氰酸胍，高氯酸钠，碘化钠等，合适 的浓度在1-9M，最合适的浓度在3-7M。所述的缓冲液组成选自HEPES，MOPS, TRIS，PIPES, MES, Glycine-NaOH, citrate等缓冲液体系，合适的浓度在lO-lOOOmM，最合适的浓度在 20-200mM。缓冲体系的pH2_10，最合适的浓度在pH5_9。优选的，不含有去污剂的蛋白质抽提试剂的配方如下20-200mMTris-HCl，pH3_9， TCEP 20-200mM，异硫氰酸胍 3-7M。所述不含有去污剂的蛋白质抽提试剂中还可以加Aprotinin，E-64，Leupeptin, PMSF等一种或几种蛋白酶抑制试剂或者它们的混合物。步骤1中用不含有去污剂的蛋白质抽提试剂在两种不同的温度条件下温育，是可 以可逆甲醛对蛋白质的交链作用，并且解链蛋白质分子内部以及蛋白质分子之间存在着交 链，以方便蛋白质完全溶解并且释放到蛋白质抽提试剂中。而采用不含有去污试的蛋白质 提取试剂，保护了绝大多的蛋白，尤其是癌症或肿瘤蛋白标记物的抗原表位的构象。所述在两种不同的温度条件下温育方法具体为先在30-120°C下温育10-60分 钟，优选60-120°C ；而后在30-100°C下温育1_5小时，优选30_80°C。实施例具体列举的为先在100°C下温育20分钟，而后在60°C下温育2小时。步骤2中所采用的蛋白质沉淀试剂可以包括三氯乙酸，DOC(脱氧胆酸钠)，乙醇，丙酮，硫酸氨，PEG8000(聚乙二醇8000)，乙醚，二乙醚等，也可以是以上几种成分按照一定 的质量或体积比组成的混合物。优选的，所述蛋白质沉淀试剂为二乙醚与乙醇的混合物，二乙醚与乙醇的体积 比为1/3-4/1 ；或者所述蛋白质沉淀试剂为乙醚与乙醇的混合物，乙醚与乙醇的体积比为 1/2-2/1。所述蛋白质沉淀试剂可以将释放的几乎全部蛋白质或多肽完全沉淀出来，在去除 上清的同时，减少了糖，脂肪，盐的污染。本发明所叙述的合适的溶解试剂是根据下游的实验(Western blot, ELIS，MS, 2D 电泳)要求所直接加的溶解缓冲液,可以是laemmli sample buffer, IEFsample buffer, 2D sample buffer，基质缓冲液等；或者也可以预先用加入少量的micrococcal nuclease, benzonase等消化，消除DNA，RNA残留，减少粘性，再加入前述溶解缓冲液。本发明标准化的实验步骤可设计如下1.取两块大约10-15um厚，IOOmm2石蜡包埋组织切片到1. 5ml的干净离心管中， 加入Iml正辛烷，高速涡悬震荡30秒，室温静置5分钟，期间偶尔颠倒离心管数次。2.加入IOOul甲醇，涡悬震荡10秒，再10000RPM离心2分钟，移去上下层的液体。3.用500ul的双蒸水清洗脱蜡的组织两次，尽量吸去液体，保留组织块沉淀。4.加入100 μ 1不含有去污剂的蛋白质抽提试剂，盖上盖子，涡悬震荡数秒。5.在电热消解仪或水浴锅中100°C加热20分钟，短暂离心一下，再用组织研磨棒 将组织切片磨碎。6.在电热消解仪或水浴锅中60°C加热2小时，期间大约每20分钟取出，震荡一次。7. 4°C，12000RPM离心15分钟，小心将上清转移到一个新的1. 5ml的干净离心管中。8.加入Iml的沉淀试剂，涡悬震荡10秒，在4°C的环境中保持10分钟。9. 40C，12000RPM离心15分钟，去除上清保留沉淀。10.加入0.5ml的沉淀试剂，涡悬震荡10秒，在4°C的环境中保持10分钟.4°C， 12000RPM离心15分钟，去除上清，保留沉淀.在通风橱中将试管倒置在滤纸上，让残余的液 体挥发干净。11.将固体沉淀溶解于合适的缓冲液中，再4°C，12000RPM离心5分钟，收集上清， 用于 SDS-PAGE，Western blot 等实验。所述步骤11中的固体沉淀可以根据下游实验的要求，溶解直接或间接于 laemmlisample buffer, IEF sample buffer, 2D sample buffer，基质缓冲液等；或者也可 以预先用加入少量的micrococcal nuclease, benzonase等消化，消除DNA，RNA残留，减少 粘性，再加入 IEF sample buffer, 2D sample buffer 等。本发明实施过程中需要的注意事项1.为提高石蜡包埋组织中蛋白质的回收效率，必须尽量减少在切片制作过程中甲 醛固定时间，同时在石蜡包埋前彻底脱水，甲醛固定的时间越长，蛋白质的提取，回收效率越低。2.尽量取用从石蜡包埋组织块中切取薄片，或没有封闭到载玻片的没有经过苏木 精等染色的切片。3.材料越新鲜或甲醛固定时间越短，蛋白质的回收效率越高。4.提取试剂中含有刺激性的化合物，操作时要戴好乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛 和衣服，防止吸入口鼻，沾染皮肤眼睛后，立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的 帮 助。5.对于甲醛浸泡的组织样本，每次可以取5-10mg的组织样本，用双蒸水洗涤离心 收集后后，直接从步骤4开始操作。6.本方法所提取的蛋白质只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体 内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。及时将石蜡包埋组织中全蛋白质提取出来，进行蛋白质的表达谱研究，以方便了 解疾病，特别是癌症的发生，发展，愈后情况有十分重要的意义。本方法通过特殊的快速脱 蜡试剂和蛋白质抽提试剂，在两种不同的温度条件下温育，可以将被交链的蛋白质释放出 来，经过简单的离心步骤，上清中含有的蛋白经过沉淀洗涤和合适的试剂溶解后，最大限度 地保持了蛋白质的完整性和抗原表位的正确构象，尤其适用于从甲醛固定的，或甲醛固定 石蜡包埋的病理组织切片中快速高效提取全蛋白质。本发明的方法制备的组织全蛋白质提 取液可以用于WesternBlot，ELISA，2D电泳，蛋白质芯片分析，MS分析等生物技术实验分 析，是目前最快速，安全，方便的石蜡包埋组织全长的蛋白质提取方式，为病理组织切片下 游的Western blot，ELISA等免役实验，MS(质谱分析)和以疾病蛋白质组学的临床诊断提 供了一种快速，安全，方便的途径。具体实施方法以下结合几个实例对本发明做进一步说明，应理解，实例并非用于限制本发明的 保护范围实施例11.取两块大约10-15um厚，IOOmm2石蜡包埋肾癌组织切片到1. 5ml的干净离心管 中，加入Iml正辛烷，高速涡悬震荡30秒，室温静置5分钟，期间偶尔颠倒离心管数次。2.加入IOOul甲醇，涡悬震荡10秒，再10000RPM离心2分钟，移去上下层的液体。3.用500ul的双蒸水清洗脱蜡的组织两次，尽量吸去液体，保留组织块沉淀。4.加入100 μ 1不含有去污剂的蛋白质抽提试剂(20mM Tris-HCl, ρ H 9， DTT200mM,盐酸胍7M)，盖上盖子，涡悬震荡数秒。5.在电热消解仪或水浴锅中100°C加热20分钟，短暂离心一下，再用组织研磨棒 将组织切片磨碎。6.在电热消解仪或水浴锅中60°C加热2小时，期间大约每20分钟取出，震荡一次。7. 4°C，12000RPM离心15分钟，小心将上清转移到一个新的1. 5ml的干净离心管中。8.加入Iml的沉淀试剂，涡悬震荡10秒，在4°C的环境中保持10分钟。9. 40C，12000RPM离心15分钟，去除上清保留沉淀。
10.加入0.5ml的沉淀试剂(二乙醚与乙醇的混合物，二乙醚与乙醇体积比为 1/3)。涡悬震荡10秒，在4°C的环境中保持10分钟.4°C，12000RPM离心15分钟，去除上 清，保留沉淀.在通风橱中将试管倒置在滤纸上，让残余的液体挥发干净。11.将固体沉淀溶解于laemmli sample buffer中，95度加热5分钟，再4°C， 12000RPM离心5分钟，收集上清，用于Western blot。将新鲜的肾癌组织IOmg按照实验4-11步骤操作后，比较新鲜的与石蜡包埋的肾 癌组织的Western blot免疫印迹发现，β actin的免疫印迹的色彩程度没有明显差异.
实施例21.取5-10mg甲醛固定12小时的存在于固定液中的肾癌组织。2.用500ul的双蒸水清洗组织两次，尽量吸去液体，保留组织块沉淀。3.加入100μ 1不含有去污剂的蛋白质抽提试剂(20mM HEPES, ρ H 3，TCEP 200mM,异硫氰酸胍3M)，盖上盖子，涡悬震荡数秒。4.在电热消解仪或水浴锅中100°C加热20分钟，短暂离心一下，再用组织研磨棒 将组织切片磨碎。5.在电热消解仪或水浴锅中60°C加热2小时，期间大约每20分钟取出，震荡一次。6. 4°C，12000RPM离心15分钟，小心将上清转移到一个新的1. 5ml的干净离心管中。7.加入Iml的沉淀试剂，涡悬震荡10秒，在4°C的环境中保持10分钟。8. 40C，12000RPM离心15分钟，去除上清保留沉淀。9.加入0. 5ml的沉淀试剂(乙醚与乙醇的混合物，乙醚与乙醇的体积比为2/1)。 涡悬震荡10秒，在4°C的环境中保持10分钟.40C，12000RPM离心15分钟，去除上清，保留 沉淀.在通风橱中将试管倒置在滤纸上，让残余的液体挥发干净。10.将固体沉淀溶解于laemmli sample buffer中，95度加热5分钟，再4°C， 12000RPM离心5分钟，收集上清，用于SDS-PAGE实验。将新鲜的肾癌组织IOmg按照实验3-10步骤操作后，比较新鲜的与石蜡包埋肾癌 组织的SDS-PAGE电泳发现，除了 10-50Kda区间石蜡包埋肾癌组织的蛋白质条带有点涂抹 夕卜，其他没有显著差异。实施例31.取两块大约1015um厚，IOOmm2石蜡包埋肾癌组织切片到1. 5ml的干净离心管 中，加入Iml正戊烷，高速涡悬震荡30秒，室温静置5分钟，期间偶尔颠倒离心管数次。2.加入IOOul乙二醇，涡悬震荡10秒，再10000RPM离心2分钟，移去上下层的液体。3.用500ul的双蒸水清洗脱蜡的组织两次，尽量吸去液体，保留组织块沉淀。4.加入100 μ 1不含有去污剂的蛋白质抽提试剂(20mM Mops, ρ H 10，巯基乙醇 20mM，尿素9Μ)盖上盖子，涡悬震荡数秒。5.在电热消解仪或水浴锅中100°C加热20分钟，短暂离心一下，再用组织研磨棒 将组织切片磨碎。6.在电热消解仪或水浴锅中60°C加热2小时，期间大约每20分钟取出，震荡一次。7. 4°C，12000RPM离心15分钟，小心将上清转移到一个新的1. 5ml的干净离心管中。8.加入Iml的沉淀试剂，涡悬震荡10秒，在4°C的环境中保持10分钟。9. 40C，12000RPM离心15分钟，去除上清保留沉淀。10.加入0. 5ml的沉淀试剂(二乙醚与乙醇的混合物，二乙醚与乙醇的体积比为4/1)。涡悬震荡10秒，在4°C的环境中保持10分钟.4°C，12000RPM离心15分钟，去除上 清，保留沉淀.在通风橱中将试管倒置在滤纸上，让残余的液体挥发干净。11.将固体沉淀溶解于IOOul终浓度lu/ul的benzonase缓冲液中消化，再用沉淀 试剂沉淀后，再溶解于2D sample buffer中，进行2D电泳。将新鲜的肾癌组织IOmg按照实验4-11步骤操作后，比较新鲜的与石蜡包埋肾癌 组织的2D电泳发现，除了 benzonase所特有的条带外，其它蛋白质点数差异并不显著。实施例41.取两块大约10-15um厚，IOOmm2石蜡包埋肾癌组织切片到1. 5ml的干净离心管 中，加入Iml正辛烷，高速涡悬震荡30秒，室温静置5分钟，期间偶尔颠倒离心管数次。2.加入IOOul乙二醇，涡悬震荡10秒，再10000RPM离心2分钟，移去上下层的液体。3.用500ul的双蒸水清洗脱蜡的组织两次，尽量吸去液体，保留组织块沉淀。4.加入100 μ 1不含有去污剂的蛋白质抽提试剂(20mMTris-HCl，p H9,TCEP20mM, 盐酸胍7M)盖上盖子，涡悬震荡数秒。5.在电热消解仪或水浴锅中100°C加热20分钟，短暂离心一下，再用组织研磨棒 将组织切片磨碎。6.在电热消解仪或水浴锅中60°C加热2小时，期间大约每20分钟取出，震荡一次。7. 4°C，12000RPM离心15分钟，小心将上清转移到一个新的1. 5ml的干净离心管中。8.加入Iml的沉淀试剂，涡悬震荡10秒，在4°C的环境中保持10分钟。9. 40C，12000RPM离心15分钟，去除上清保留沉淀。10.加入0. 5ml的沉淀试剂(乙醚与乙醇的混合物，乙醚与乙醇的体积比为1/2)。 涡悬震荡10秒，在4°C的环境中保持10分钟.40C，12000RPM离心15分钟，去除上清，保留 沉淀.在通风橱中将试管倒置在滤纸上，让残余的液体挥发干净。11.将固体沉淀溶解于IOOul终浓度lu/ul的benzonase缓冲液中消化，再用沉淀 试剂沉淀后，再溶解于2D sample buffer中，进行2D电泳，而后将β-actin和Cytokeratin 的蛋白质点取出，经过适当处理后用来做MS分析。将新鲜的肾癌组织IOmg按照实验4-11步骤操作后，比较新鲜的与石蜡包埋肾癌 组织的MS发现，β -actin和Cytokeratin的MS没有明显的差异。
权利要求
一种从甲醛固定组织或甲醛固定石蜡包埋组织中提取总蛋白质的方法，包括以下步骤1)将甲醛固定的组织用不含有去污剂的蛋白质抽提试剂在两种不同的温度条件下温育以释放被交链的蛋白质；或者，将甲醛固定石蜡包埋的组织先用脱蜡试剂去蜡后，再用不含有去污剂的蛋白质抽提试剂在两种不同的温度条件下温育以释放被交链的蛋白质；2)离心并分离上清，上清加入蛋白质沉淀试剂后分离并洗涤沉淀，再将沉淀采用合适的溶解试剂溶解获得甲醛固定的组织或甲醛固定石蜡包埋的组织的总蛋白质提取液。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述甲醛固定的组织或甲醛固定石蜡包埋 的组织均为组织切片。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中，所述脱蜡试剂包括可以溶解石蜡 的有机溶剂和与石蜡不相溶的有机溶剂。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中，将甲醛固定石蜡包埋的组织用脱 蜡试剂去蜡的方法为将石蜡包埋组织先用可以溶解石蜡的有机溶剂处理3-5分钟，而后 再在前述处理液中加入与石蜡不相溶的有机溶剂处理5-60秒，再将处理后的组织洗涤并 分离。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述可以溶解石蜡的有机溶剂与与石蜡不 相溶的有机溶剂的体积比为5 1-20 1。
6.如权利要求3-5任一所述的方法，其特征在于，所述的可以溶解石蜡的有机溶剂选 自甲苯，二甲苯，D-柠檬烯，正戊烷，正己烷，正庚烷和正辛烷；所述的与石蜡不相溶的有机 溶剂选自乙醇，甲醇，异丙醇和正丁醇。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中，所述的不含有去污剂的蛋白质抽 提试剂由还原试剂、变性试剂和缓冲液组成。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的还原试剂选自巯基乙醇，DTT和TCEP， 在蛋白质抽提试剂中的浓度为5-500mM;所述的变性试剂选自尿素，硫尿，盐酸胍，异硫氰 酸胍，高氯酸钠和碘化钠，在蛋白质抽提试剂中的浓度为1-9M;所述的缓冲液选自HEPES， MOPS,TRIS,PIPES,MES,Glycine NaOH和Citrate缓冲液体系，在蛋白质抽提试剂中的浓度 为lO-lOOOmM，缓冲体系的pH为2-10。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的还原试剂在蛋白质抽提试剂中的 浓度为20-200mM ；所述的变性试剂在蛋白质抽提试剂中的浓度为3-7M ；所述的缓冲液为 20-200mM pH 5-9的缓冲体系。
10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述不含有去污剂的蛋白质抽提试剂含有 如下组分pH3-9 的 20-200mM Tris-HCl ；TCEP 20-200mM ；异硫氰酸胍3-7M。
11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中，在两种不同的温度条件下温育的 方法为先在30-120°C下温育10-60分钟；而后在30-100°C下温育1_5小时。
12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，在两种不同的温度条件下温育的方法为先在60-120°C下温育20-60分钟；而后在30_80°C下温育1_5小时。
13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2中，所述蛋白质沉淀试剂选自三氯乙 酸，DOC,乙醇，丙酮，硫酸氨，PEG8000,乙醚和二乙醚中的一种或多种的混合。
14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述蛋白质沉淀试剂为二乙醚与乙醇的 混合物，二乙醚与乙醇的体积比为1/3-4/1 ；或者所述蛋白质沉淀试剂为乙醚与乙醇的混 合物，乙醚与乙醇的体积比为1/2-2/1。
15.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2中，所述的合适的溶解试剂选自 laemmli sample buffer、IEF sample buffer、2D sample buffer 或基质缓冲液。
全文摘要
本发明提供了一种从甲醛固定组织或甲醛固定石蜡包埋组织中提取总蛋白质的方法，主要包括以下几个步骤采用快速石蜡脱腊试剂将石蜡包埋组织中的石蜡彻底去除干净，再在双蒸水洗涤过的组织薄片中加入蛋白质提取试剂，经过两种不同温度的温育过程，将被甲醛交链的几乎全部蛋白质或多肽解链并完全释放出来，再经过快速蛋白质沉淀试剂，将释放的全部蛋白质或多肽完全沉淀出来。本发明的方法制备的组织全蛋白质提取液可以用于生物技术实验分析，为病理组织切片下游的Western blot，ELISA等免役实验，MS(质谱分析)和以疾病蛋白质组学的临床诊断提供了一种快速，安全，方便的途径。
文档编号C07K1/14GK101985461SQ20101028667
公开日2011年3月16日 申请日期2010年9月19日 优先权日2010年9月19日
发明者李瑞峰, 荀恒杰 申请人:生工生物工程(上海)有限公司