专利名称：治疗用dll4结合蛋白的制作方法
技术领域：
本发明涉及改进的DLL4结合蛋白的开发和用途及其在抑制、预防和/或治疗癌症、肿瘤和/或其他血管发生依赖性疾病例如眼部新生血管化，或血管发生非依赖性疾病(其特征在于异常DLL4表达或活性)例如自身免疫病中的用途。发明背景 细胞与细胞之间的通讯是许多生物过程例如分化、增殖和动态平衡所需的。由真核生物广泛使用的一个系统是Notch信号通路。这一途径，尤其是Notch受体，对于功能肿瘤血管发生也是关键的。因此，抑制对Notch受体的功能，阻止Notch受体和/或阻止Notch信号通路是抗癌组合物和治疗的潜在策略。Notch受体的小分子抑制剂已证明是有毒的，因为它们抑制Notch受体在全身的野生型(正常)组织的表达。因此，Notch信号通路的不同成员应被视为疗法的潜在靶向。Notch受体的血管配体是Delta 4或Delta样4 (DLL4)。DLL4大部分表达在血管中，对血管发育是关键的(Yan 等人，Clin. Cancer Res.，13 (24) :7243-7246(2007)；Shutter 等人，Genes Dev. , 14 (11) 1313-1318 (2000) ;Gale 等人，Proc. Natl. Acad. Sci.USA, 101(45) :15949-15954(2004) ;Krebs 等人，Genes Dev. , 14(11) :1343-1352 (2000))。DLL4杂合小鼠是胚胎致死的，原因在于血管发育的主要缺陷(Gale等人，Proc. Natl.Acad. Sci. USA, 101 (45) :15949-15954(2004) ；Duarte 等人，Genes Dev. , 18(20)2474-2478(2004) ;Krebs 等人，Genes Dev. , 18(20) :2469-2473 (2004))。DLL4 的表达被VEGF 诱导(Liu 等人，Mol. Cell Biol. ,23(1) :14-25(2003) ;Lobov 等人，Proc. Natl. Acad.Sci. USA, 104 (9) :3219-3224 (2007))。反过来，DLL4可负调节VEGF信号通路，部分通过抑制VEGFR2 和诱导 VEGRl (Harrington 等人，Microvasc. Res. ,75(2) 144-154 (2008) ；Suchting等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 104 (9) :3225-3230 (2007))。DLL4 和 VEGF 之间的精妙配合对功能性血管发生是必需的。除了它的生理学功能，DLL4在肿瘤血管中被上调(Gale等人，Proc. Natl.Acad. Sci. USA, 101 (45) :15949-15954(2004) ；Mailhos 等人，Differentiation,69(2-3) :135-144(2001) ；Patel 等人，Cancer Res. ,65(19) :8690-8697(2005) ；Patel等人，Clin. Cancer Res. , 12 (16) :4836-4844(2006) ；Noguera-Troise 等人，Nature,444(7122) :1032-1037 (2006)) 0 DLL4的阻止有效地在多种模型中抑制原发性肿瘤生长(Noguera-Troise 等人，Nature,444 (7I22) 1032-1037 (2006) ；Ridgway 等人，Nature,444(7122) :1083-1087(2006) ;Scehnet 等人，Blood，109 (11) :4753-4760 (2007))。DLL4 抑制甚至针对对抗VEGF治疗有抗性的肿瘤有效。DLL4和VEGF的组合抑制提供了增强的抗肿瘤活性。有趣的是，不像VEGF的抑制减少肿瘤血管形成，DLL4阻止(blockade)导致肿瘤血管密度的增加，其中所述血管是异常的，不能支持有效的血液输送并且不起有效作用。因此，DLL4为治疗癌症提供了潜在祀向。在本领域中存在这样的需要，即能够靶向DLL4_Notch通路并且从而抑制、或甚至预防肿瘤血管发生和生长的治疗剂。发明概沭本发明提供结合DLL4的蛋白质，其包括抗体、⑶R-嫁接的抗体和其能够结合DLL4的结合片段。优选地，本文所述的结合蛋白以高亲和力结合DLL4。更优选地，根据本发明的
结合蛋白能够中和DLL4。本发明还提供制备和使用DLL4结合蛋白，包括人DLL4结合蛋白的方法。有利地，本发明消除了对制备人源化DLL4结合蛋白的需要，从而消除了与人源化DLL4结合蛋白的并发症。本发明的一方面涉及包括能够结合人DLL4的抗原结合结构域的结合蛋白，所述抗原结合结构域包括选自下述的至少一个或多个CDR CDR-Hl =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7(SEQ ID NO :99)，其中；父1是3或&父2是3、6或&X3 是 S、N、T、G 或 R ;X4是Y;X5 是 Y 或 H ;X6 是 W ;和X7 是 G;CDR-H2 =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16 (SEQ ID NO :100)，其中；X1 是0;X2 是 I ;X3 是 Y、N 或 S ;X4 是 Y ;父5是1\队六、1、3或1 ;X6 是 G ;X7 是 S、N、T 或 G;X8 是 T ;X9 是 Y ;X10 是 Y ;X11 是&X12 是 P ;X13 是 S ;X14 是 L ;X15 是 K ;和父16是5、队0或6;CDR-H3 =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-Xltl-X11 (SEQ ID NO :101)，其中；
父1是￡、丫、卩、0、胃、1^或八;父2是0、六、5、6、丫、￡或N;X3 是 V、M、L、P 或 A ;父4是1、八、卩、1 、5、1(、0、￥、6、]\1或￡;X5 是 L、Y、F 或 M ;X6 是R、G、S、Q 或A ;X7 是 G ;X8 是 G、A 或 S ; X9 是 S、A、L、V、R 或G ;X10 是 D ;和父11是丫、0、5、队11、￡、1 、1、？、(、I、M、T、Q或K ;CDR-Ll =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11 (SEQ ID NO :102)，其中；X1 是 S ;X2 是6;X3 是 Q、E 或 D ;父4是1 、5、6、]\1、1(、1或1';X5 是 L ;X6 是 G ;X7 是 D 或 E ;X8 是 K ;X9 是 Y ;X1。是 A 或 V ;和X11 是 S ;CDR-L2 =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7(SEQ ID NO :103)，其中；X1 是 E 或 Q ;X2 是 D ;X3 是 S、L、T、A、E 或F ;X4 是K、T、E、N、Q、S 或M;X5 是 R ;X6 是 P ;和X7 是 S ;和CDR-L3 =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9(SEQ ID NO :104)，其中；X1 是0;X2 是 A ;X3 是 W ;X4 是 D ;父5是1 、5、]\^、队6或1(;X6 是 D 或 E ;
X7 是 T、V、A、S 或 M ;父8是6、八或(；和X9 是 V。优选地，本发明的DLL4结合蛋白的抗体结合结构域包括至少一个⑶R，其包括选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO : I 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :1 的残基 52-67 (CDR-H2) ；SEQ IDNO :1 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :111 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :111的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ IDNO 111 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :117 (CDR-Hl)；SEQIDNO :118 (CDR-H2) ；SEQID NO :119 (CDR-H3)； SEQ ID NO :121 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 122 (CDR-H2) ；SEQID NO :123 (CDR-H3)；SEQ ID NO :125 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 126 (CDR-H2) ；SEQID NO :127 (CDR-H3)；SEQ ID NO :129 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 130 (CDR-H2) ；SEQID NO :131 (CDR-H3)；SEQ ID NO :133 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 134 (CDR-H2) ；SEQID NO :135 (CDR-H3)；SEQ ID NO :137 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 138 (CDR-H2) ；SEQID NO :139 (CDR-H3)；SEQ ID NO :141 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 142 (CDR-H2) ；SEQID NO :143 (CDR-H3)；SEQ ID NO :145 (CDR-Hl)；SEQIDNO 146 (CDR-H2) ；SEQID NO :147 (CDR-H3)；SEQ ID NO :149 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 150 (CDR-H2) ；SEQID NO :151 (CDR-H3)；SEQ ID NO :153 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 154 (CDR-H2) ；SEQID NO :155 (CDR-H3)；SEQ ID NO :157 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 158 (CDR-H2) ；SEQID NO :159 (CDR-H3)；SEQ ID NO :161 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 162 (CDR-H2) ；SEQID NO :163 (CDR-H3)；SEQ ID NO :165 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 166 (CDR-H2) ；SEQID NO :167 (CDR-H3)；SEQ ID NO :169 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 170 (CDR-H2) ；SEQID NO :171 (CDR-H3)；SEQ ID NO :173 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 174 (CDR-H2) ；SEQID NO :175 (CDR-H3)；SEQ ID NO :177 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 178 (CDR-H2) ；SEQID NO :179 (CDR-H3)；SEQ ID NO :181 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 182 (CDR-H2) ；SEQID NO :183 (CDR-H3)；SEQ ID NO 185 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 186 (CDR-H2) ；SEQID NO :187 (CDR-H3)；SEQ ID NO 189 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 190 (CDR-H2) ；SEQID NO :191 (CDR-H3)；SEQ ID NO :193 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 194 (CDR-H2) ；SEQID NO :195(CDR-H3)；SEQ ID NO :197 (CDR-Hl)；SEQIDNO : 198 (CDR-H2) ；SEQID NO :199 (CDR-H3)；SEQ ID NO :201(CDR-Hl)；SEQIDNO :202 (CDR-H2) ；SEQID NO :203(CDR-H3)；SEQ ID NO :205 (CDR-Hl)；SEQIDNO :206 (CDR-H2) ；SEQID NO :207 (CDR-H3)；SEQ ID NO :209(CDR-Hl)；SEQIDNO :210 (CDR-H2) ；SEQID NO :211(CDR-H3)；SEQ ID NO :213 (CDR-Hl)；SEQIDNO :214 (CDR-H2) ；SEQID NO :215 (CDR-H3)；SEQ ID NO :217 (CDR-Ll)；SEQIDNO :218 (CDR-L2) ；SEQID NO :219 (CDR-L3)；SEQ ID NO :221 (CDR-Ll)；SEQIDNO :222 (CDR-L2) ；SEQID NO :223 (CDR-L3)；SEQ ID NO :225 (CDR-Ll)；SEQIDNO :226 (CDR-L2) ；SEQID NO :227 (CDR-L3)；SEQ ID NO :229 (CDR-Ll)；SEQIDNO :230 (CDR-L2) ；SEQID NO :231 (CDR-L3)；SEQ ID NO :233 (CDR-Ll)；SEQIDNO :234 (CDR-L2) ；SEQID NO :235 (CDR-L3)；
SEQ ID NO :237 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :238 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :239 (CDR-L3)；SEQ ID NO :241 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :242 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :243 (CDR-L3)；SEQ ID NO :245(CDR-Ll) ；SEQ ID NO :246 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :247(CDR-L3)；SEQ ID NO :249 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :250 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :251 (CDR-L3)；SEQ ID NO :253 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :254 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :255 (CDR-L3)；SEQ ID NO :257 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :258 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :259 (CDR-L3)；SEQ ID NO :261(CDR-Ll) ；SEQ ID NO :262 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :263(CDR-L3)；SEQ ID NO :265 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :266 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :267 (CDR-L3)；SEQ ID NO :269 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :270 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :271 (CDR-L3)；SEQ ID NO :273 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :274 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :275 (CDR-L3)；SEQ ID NO :277 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :278 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :279 (CDR-L3)；SEQ ID NO :281 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :282 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :283 (CDR-L3)；SEQ ID NO :285 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :286 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :287 (CDR-L3)；SEQ ID NO :289 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :290 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :291 (CDR-L3)；SEQ ID NO :293 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :294 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :295 (CDR-L3)；SEQ ID NO :297 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :298 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :299 (CDR-L3)；SEQ ID NO :301 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :302 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :303 (CDR-L3)；SEQ ID NO :305 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :306 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :307 (CDR-L3)；SEQ ID NO :309 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :310 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :311 (CDR-L3)；SEQ ID NO :313 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :314 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :315 (CDR-L3)；SEQ ID NO :334 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :334 的残基 52-67 (CDR-H2)；SEQ ID NO :334 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :335 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :335 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ ID NO :335 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :336 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :336 的残基 52-67 (CDR-H2)；SEQ ID NO 336 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :337 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :337 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ ID NO :337 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :338 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :338 的残基 52-67 (CDR-H2)；SEQ ID NO 338 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :339 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :339 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ ID NO :339 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :340 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :340 的残基 52-67 (CDR-H2)；SEQ ID NO 340 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :341 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :341 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ ID NO 341 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :342 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :342 的残基 52-67 (CDR-H2)；SEQ ID NO 342 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :343 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :343 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ ID NO :343 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :344 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :344 的残基 52-67 (CDR-H2)；SEQ ID NO :344 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :345 的残基 24-34 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :345 的残基 50-56 (CDR-L2)；SEQ ID NO :345 的残基 89-97 (CDR-L3)；SEQ ID NO :346 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :346 的残基 52-67 (CDR-H2)；SEQ ID NO 346 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :347 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :347 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ ID NO :347 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :348 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :348 的残基 52-67 (CDR-H2)；SEQ ID NO 348 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :349 的残基 24-34 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :349 的残基 50-56 (CDR-L2)；SEQ ID NO :349 的残基 89-97 (CDR-L3)；SEQ ID NO :350 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :350 的残基 52-67 (CDR-H2)；SEQ ID NO 350 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :351 的残基 24-34 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :351 的残基 50-56 (CDR-L2)；SEQ ID NO 351 的残基 89-97 (CDR-L3)；SEQ ID NO :352 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :352 的残基 52-67 (CDR-H2)；SEQ ID NO 352 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :353 的残基 24-34 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :353 的残基 50-56 (CDR-L2)；SEQ ID NO :353 的残基 89-97 (CDR-L3)；SEQ ID NO :354 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :354 的残基 52-67 (CDR-H2)；SEQ ID NO :354 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :355 的残基 24-34 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :355 的残基 50-56 (CDR-L2)；SEQ ID NO :355 的残基 89-97 (CDR-L3)；SEQ ID NO :356 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :356 的残基 52-67 (CDR-H2)；SEQ ID NO 356 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :357 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :357 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ ID NO :357 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :358 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :358 的残基 52-67 (CDR-H2)；SEQ ID NO 358 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :359 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :359 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ ID NO :359 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :360 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :360 的残基 52-67 (CDR-H2)；SEQ ID NO 360 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :361 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :361 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ ID NO 361 的残基 88-96 (CDR-L3)。在另一个实施方案中，结合蛋白包括至少3个上述⑶R。优选地，根据本发明的DLL4结合蛋白包含一个或多个上述⑶R。更优选地，结合蛋白包含三个或多个上述⑶R。最优选地，根据本发明的DLL4结合蛋白包含六个上述⑶R，即，上述CDR-H I、CDR-H2、CDR-H3、CDR-Ll、CDR-L2 和 CDR-L3。
在优选的实施方案中，结合蛋白包含至少3个⑶R选自上述序列。更优选地，结合蛋白包含3个⑶R，所述3个⑶R选自下述的可变结构域⑶R组。VH E9 CDR 鉬CDR-Hl SEQ ID NO 1 的残基 31-37CDR-H2 SEQ ID NO :1 的残基 52-67
CDR-H3 SEQ ID NO :1 的残基 100-110VL E9 CDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :111 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :111 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :111 的残基 88-96
VH E9. 4CDR 鉬CDR-Hl : SEQ ID NO :117CDR-H2 SEQ ID NO 118CDR-H3 SEQ ID NO 119VL E9. 4CDR 鉬CDR-Ll :SEQ ID NO :229CDR-L2 SEQ ID NO :230CDR-L3 :SEQ ID NO :231VH E9. IlCDR 组CDR-Hl SEQ ID NO 121CDR-H2 SEQ ID NO :122CDR-H3 :SEQ ID NO :123VL E9. IlCDR 组CDR-Ll :SEQ ID NO :233CDR-L2 :SEQ ID NO :234CDR-L3 :SEQ ID NO :235VH E9. 14CDR 组CDR-Hl : SEQ ID NO :125CDR-H2 :SEQ ID NO :126CDR-H3 SEQ ID NO :127VL E9. 14CDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :237CDR-L2 :SEQ ID NO :238CDR-L3 :SEQ ID NO :239VH E9. 17CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO 129CDR-H2 SEQ ID NO :130LV
6H: ON ai Qas: TH-Hao[8020]
'辟 H(DS9 _63 HA[Z.S20]
6sz: on ai Qas: ci-nao[9020]8sc: on ai Qas: zi-mo[9020]
L9Z: on ai Qas: u-mo[nzo]
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LW- on ai Qas: CH-nao[2020]9h:on ai Qas: CH-nao[1020]SH: on ai Qas: TH-Hao
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WlmITWTA[1020]
CDR-H2 SEQ ID NO : 150CDR-H3 :SEQ ID NO 151VL E9. 65CDR 组CDR-L1 SEQ ID NO 261CDR-L2 SEQ ID NO 262CDR-L3 SEQ ID NO 263VH E9. 66CDR 鉬CDR-H1 SEQ ID NO : 153CDR-H2 :SEQ ID NO : 154CDR-H3 :SEQ ID NO : 155VL E9. 66CDR 组CDR-L1 SEQ ID NO 265CDR-L2 SEQ ID NO :266CDR-L3 SEQ ID NO 267VH E9. 71CDR 组CDR-H1 SEQ ID NO : 157CDR-H2 SEQ ID NO : 158CDR-H3 SEQ ID NO : 159VL E9. 71CDR 组CDR-L1 SEQ ID NO 269CDR-L2 SEQ ID NO 270CDR-L3 SEQ ID NO :271VH E9. 13CDR 组CDR-H1 SEQ ID NO : 161CDR-H2 :SEQ ID NO : 162CDR-H3 SEQ ID NO : 163VL E9. 13CDR 组CDR-L1 SEQ ID NO 217CDR-L2 SEQ ID NO 218CDR-L3 SEQ ID NO 219VH E9. 16CDR 组CDR-H1 SEQ ID NO 165CDR-H2 SEQ ID NO : 166CDR-H3 SEQ ID NO : 167VL E9. 16CDR 组CDR-L1 SEQ ID NO 221CDR-L2 SEQ ID NO 222CDR-L3 SEQ ID NO 223VH E9. 38CDR 组
CDR-H 1 SEQ ID NO 169CDR-H2 SEQ ID NO : 170CDR-H3 :SEQ ID NO 171VL E9. 38CDR 组CDR-L1 SEQ ID NO 225CDR-L2 SEQ ID NO 226CDR-L3 SEQ ID NO 227VH E9. 2B CDR 组CDR-H1 SEQ ID NO : 173CDR-H2 :SEQ ID NO : 174CDR-H3 :SEQ ID NO : 175VL E9. 2B CDR 组CDR-L1 SEQ ID NO 273CDR-L2 SEQ ID NO 274CDR-L3 SEQ ID NO 275VH E9. IF CDR 组CDR-H1 SEQ ID NO : 177CDR-H2 :SEQ ID NO : 178CDR-H3 SEQ ID NO : 179VL E9. IF CDR 组CDR-L1 SEQ ID NO 277CDR-L2 SEQ ID NO 278CDR-L3 SEQ ID NO 279VH E9. 10H CDR 组CDR-H1 SEQ ID NO : 181CDR-H2 :SEQ ID NO : 182CDR-H3 :SEQ ID NO : 183VL E9. 10H CDR 组CDR-L1 SEQ ID NO 301CDR-L2 SEQ ID NO 302CDR-L3 SEQ ID NO 303VH E9. 5E CDR 组CDR-H1 :SEQ ID NO :185CDR-H2 SEQ ID NO 186CDR-H3 SEQ ID NO : 187VL E9. 5E CDR 组CDR-L1 SEQ ID NO 293CDR-L2 SEQ ID NO :294CDR-L3 SEQ ID NO 295
VH E9. 10C CDR 组CDR-H1 SEQ ID NO 189CDR-H2 SEQ ID NO : 190CDR-H3 :SEQ ID NO 191VL E9. IOC CDR 组CDR-L1 SEQ ID NO 281CDR-L2 SEQ ID NO 282CDR-L3 SEQ ID NO 283VH E9. 7E CDR 组CDR-H1 SEQ ID NO 193CDR-H2 :SEQ ID NO : 194CDR-H3 :SEQ ID NO : 195VL E9. 7E CDR 组CDR-L1 SEQ ID NO 289CDR-L2 SEQ ID NO :290CDR-L3 SEQ ID NO :291VH E9. 12B CDR 鉬CDR-H1 SEQ ID NO 197CDR-H2 :SEQ ID NO : 198CDR-H3 :SEQ ID NO : 199VL E9. 12B CDR 组CDR-L1 SEQ ID NO 297CDR-L2 SEQ ID NO 298CDR-L3 SEQ ID NO 299VH E9. 10E CDR 组CDR-H1 SEQ ID NO :201CDR-H2 SEQ ID NO 202CDR-H3 SEQ ID NO 203VL E9. 10E CDR 组CDR-L1 SEQ ID NO 285CDR-L2 SEQ ID NO 286CDR-L3 SEQ ID NO 287VH E9. 6A CDR 组CDR-H1 SEQ ID NO 205CDR-H2 SEQ ID NO :206CDR-H3 SEQ ID NO 207VL E9. 6A CDR 组CDR-L1 SEQ ID NO 305CDR-L2 SEQ ID NO 306
CDR-L3 SEQ ID NO :307VH E9. 7A CDR 鉬CDR-Hl SEQ ID NO :209CDR-H2 SEQ ID NO :210CDR-H3 :SEQ ID NO :211VL E9. 7A CDR 鉬CDR-Ll SEQ ID NO :309
CDR-L2 SEQ ID NO :310CDR-L3 SEQ ID NO :311VH E9. 8H CDR 鉬CDR-Hl SEQ ID NO :213CDR-H2 SEQ ID NO :214CDR-H3 SEQ ID NO :215VL E9. 8H CDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :313CDR-L2 SEQ ID NO :314CDR-L3 SEQ ID NO :315VH E9. ICDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :334 的残基 31-37CDR-H2 SEQ ID NO :334 的残基 52-67CDR-H3 SEQ ID NO :334 的残基 100-110VL E9. ICDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :335 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :335 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :335 的残基 88-96VH E9-SE1CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :336 的残基 31-37CDR-H2 SEQ ID NO :336 的残基 52-67CDR-H3 SEQ ID NO :336 的残基 100-110VL E9-SE1CDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :337 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :337 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :337 的残基 88-96VH E9-SE2CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :338 的残基 31-37CDR-H2 SEQ ID NO :338 的残基 52-67CDR-H3 SEQ ID NO :338 的残基 100-110VL E9-SE2CDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :339 的残基 23-33
CDR-L2 SEQ ID NO :339 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :339 的残基 88-96VH E9-SE3CDR 鉬CDR-Hl SEQ ID NO :340 的残基 31-37CDR-H2 SEQ ID NO :340 的残基 52-67CDR-H3 SEQ ID NO :340 的残基 100-110VL E9-SE3CDR 鉬
CDR-Ll SEQ ID NO :341 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :341 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :341 的残基 88-96VH E9-SE4CDR 鉬CDR-Hl SEQ ID NO :342 的残基 31-37CDR-H2 SEQ ID NO :342 的残基 52-67CDR-H3 SEQ ID NO :342 的残基 100-110VL E9-SE4CDR 鉬CDR-Ll SEQ ID NO :343 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :343 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :343 的残基 88-96VH E9-SE5CDR 鉬CDR-Hl SEQ ID NO :344 的残基 31-37CDR-H2 SEQ ID NO :344 的残基 52-67CDR-H3 SEQ ID NO :344 的残基 100-110VL E9-SE5CDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :345 的残基 24-34CDR-L2 SEQ ID NO :345 的残基 50-56CDR-L3 SEQ ID NO :345 的残基 89-97VH E9-SE6 CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :346 的残基 31-37CDR-H2 SEQ ID NO :346 的残基 52-67CDR-H3 SEQ ID NO :346 的残基 100-110VL E9-SE6 CDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :347 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :347 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :347 的残基 88-96VH E9-SE7CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :348 的残基 31-37CDR-H2 SEQ ID NO :348 的残基 52-67CDR-H3 SEQ ID NO :348 的残基 100-110VL E9-SE7CDR 组
CDR-Ll SEQ ID NO :349 的残基 24-34CDR-L2 SEQ ID NO :349 的残基 50-56CDR-L3 SEQ ID NO :349 的残基 89-97VH E9-SE8CDR 鉬CDR-Hl SEQ ID NO :350 的残基 31-37CDR-H2 SEQ ID NO :350 的残基 52-67CDR-H3 SEQ ID NO :350 的残基 100-110
VL E9-SE8CDR 鉬CDR-Ll SEQ ID NO :351 的残基 24-34CDR-L2 SEQ ID NO :351 的残基 50-56CDR-L3 SEQ ID NO :351 的残基 89-97VH E9-FR1CDR 鉬CDR-Hl SEQ ID NO :352 的残基 31-37CDR-H2 SEQ ID NO :352 的残基 52-67CDR-H3 SEQ ID NO :352 的残基 100-110VL E9-FR1CDR 鉬CDR-Ll SEQ ID NO :353 的残基 24-34CDR-L2 SEQ ID NO :353 的残基 50-56CDR-L3 SEQ ID NO :353 的残基 89-97VH E9-FR2CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :354 的残基 31-37CDR-H2 SEQ ID NO :354 的残基 52-67CDR-H3 SEQ ID NO :354 的残基 100-110VL E9-FR2CDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :355 的残基 24-34CDR-L2 SEQ ID NO :355 的残基 50-56CDR-L3 SEQ ID NO :355 的残基 89-97VH E9. 7ICDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :356 的残基 31-37CDR-H2 SEQ ID NO :356 的残基 52-67CDR-H3 SEQ ID NO :356 的残基 100-110VL E9. 7ICDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :357 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :357 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :357 的残基 88-96VH E9. 71 (M) CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :358 的残基 31-37CDR-H2 SEQ ID NO :358 的残基 52-67CDR-H3 SEQ ID NO :358 的残基 100-110
VL E9. 71 (M) CDR 鉬CDR-Ll SEQ ID NO :359 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :359 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :359 的残基 88-96VH E9. 71 (L) CDR 鉬CDR-Hl SEQ ID NO :360 的残基 31-37
CDR-H2 SEQ ID NO :360 的残基 52-67CDR-H3 SEQ ID NO :360 的残基 100-110VL E9. 71 (L) CDR 鉬CDR-Ll SEQ ID NO :361 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :361 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :361 的残基 88-96在另一个实施方案中，结合蛋白包含由3个⑶R组成的可变重链(VH)组(其选自上述由3个CDR组成的任意VH组)和由3个CDR组成的可变轻链(VL)组(其选自上述由3个⑶R组成的任意VL组)。在还另一个实施方案中，结合蛋白包含下述中命名的由3个⑶R组成的VH组和相应命名的由3个CDR组成的VL组。优选地，根据本发明的结合蛋白包含至少两个可变结构域⑶R组，其选自下述可变结构域⑶R组VH E9CDR 组和 VL E9CDR 组，VH E9. 4CDR 组和 VL E9. 4CDR 组，VH E9. IlCDR 组和 VL E9. IlCDR 组，VH E9. 14CDR 组和 VL E9. 14CDR 组，VH E9. 17CDR 组和 VL E9. 17CDR 组，VH E9. 18CDR 组和 VL E9. 18CDR 组，VH E9. 19CDR 组和 VL E9. 19CDR 组，VH E9. 22CDR 组和 VL E9. 22CDR 组，VH E9. 48CDR 组和 VL E9. 48CDR 组，VH E9. 65CDR 组和 VL E9. 65CDR 组，VH E9. 66CDR 组和 VL E9. 66CDR 组，VH E9. 71CDR 组和 VL E9. 71CDR 组，VH E9. 13CDR 组和 VL E9. 13CDR 组，VH E9. 16CDR 组和 VL E9. 16CDR 组，VH E9. 38CDR 组和 VL E9. 38CDR 组，VH E9. 2B CDR 组和 VL E9. 2B CDR 组，VH E9. IF CDR 组和 VL E9. IF CDR 组，VH E9. IOH CDR 组和 VL E9. IOH CDR 组，VH E9. 5E CDR 组和 VL E9. 5E CDR 组，VH E9. IOC CDR 组和 VL E9. IOC CDR 组，VH E9. 7E CDR 组和 VL E9. 7E CDR 组，
VH E9. 12B CDR 组和 VL E9. 12B CDR 组，VH E9. IOE CDR 组和 VL E9. IOE CDR 组，VH E9. 6A CDR 组和 VL E9. 6A CDR 组，VH E9. 7A CDR 组和 VL E9. 7A CDR 组，VH E9. 8H CDR 组和 VL E9. 8H CDR 组，VH E9-SE1CDR 组和 VL E9-SE1CDR 组，VH E9-SE2CDR 组和 VL E9-SE2CDR 组，VH E9-SE3CDR 组和 VL E9-SE3CDR 组，VH E9-SE4CDR 组和 VL E9-SE4CDR 组，VH E9-SE5CDR 组和 VL E9-SE5CDR 组，VH E9-SE6CDR 组和 VL E9-SE6CDR 组，VH E9-SE7CDR 组和 VL E9-SE7CDR 组，VH E9-SE8CDR 组和 VL E9-SE8CDR 组，VH E9-FR1CDR 组和 VL E9-FR1CDR 组，VH E9-FR2CDR 组和 VL E9-FR2CDR 组，VH E9. 71CDR 组和 VL E9. 71CDR 组，
VH E9. 71 (M) CDR 组和 VL E9. 71 (M) CDR 组，和VH E9. 71 (L) CDR 组和 VL E9. 71 (L) CDR 组。在还另一个实施方案中，上述结合蛋白进一步包括人接纳体构架。优选地，所述人接纳体构架包括选自下述的氨基酸序列重链接纳体构架序列SEQ ID NO :6-22,重链接纳体序列SEQ ID NO : 35-62，轻链接纳体序列SEQ ID N0:23_34，和轻链接纳体序列SEQ ID NO :63_98。在另一个实施方案中，上述结合蛋白包含人接纳体构架，其包含至少一个构架区氨基酸取代，其中所述构架的氨基酸序列与所述人接纳体构架的序列至少65%等同，并且包括与所述人接纳体构架等同的至少70个氨基酸残基。在另一个实施方案中，本文所述结合蛋白包含人接纳体构架，其包括在关键残基处的至少一个构架区氨基酸取代，所述关键残基选自与⑶R接近的残基；糖基化位点残基；稀有残基；能够与人DLL4相互作用的残基；规范残基；在重链可变区和轻链可变区之间的接触残基；在Vernier区内的残基；和在Chothia定义的可变重链⑶Rl和Kabat定义的第一个重链构架之间重叠的区域中的残基。优选地，所述关键残基选自2H、4H、24H、26H、27H、29H、34H、35H、37H、39H、44H、45H、47H、48H、49H、50H、51H、58H、59H、60H、63H、67H、69H、71H、73H、76H、78H、91H、93H、94H、
2L、4L、25L、29L、27bL、33L、34L、36L、38L、43L、44L、46L、47L、48L、49L、55L、58L、62L、64L、
71L、87L、89L、90L、91L、94L、95L。在另一 个实施方案中，本文所述结合蛋白包含共有人可变结构域。在优选的实施方案中，上述结合蛋白包含具有选自下述的氨基酸序列的至少一个可变结构域SEQ ID NO :I、111、116、228、120、232、124、236、128、240、132、244、136、248、140、252、144、256、148、260、152、264、156、268、160、216、164、220、168、224、172、272、176、276、180、300、184、292、188、280、192、288、196、296、200、284、204、304、208、308、212、312、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360 和 361。在另一个实施方案中，根据本发明的结合蛋白包含2个可变结构域，其中所述2个可变结构域具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :1和111、SEQ ID NO :116和228、SEQID NO :120 和 232、SEQ ID NO :124 和 236、SEQ ID NO : 128 和 240、SEQ ID NO :132 和 244、SEQ ID NO :136 和 248、SEQ ID NO :140 和 252、SEQ ID NO :144 和 256、SEQ ID NO :148 和260,SEQ ID NO :152和 264、SEQ ID NO : 156和 268、SEQ ID NO : 160和 216、SEQ ID NO :164和 220、SEQ ID NO :168 和 224、SEQ ID NO :172 和 272、SEQ ID NO :176 和 276、SEQ ID NO:180 和 300、SEQ ID NO : 184和 292、SEQ ID NO : 188 和 280、SEQ ID NO : 192和 288、SEQ IDNO :196 和 296、SEQ ID NO :200 和 284、SEQ ID NO :204 和 304、SEQ ID NO :208 和 308、SEQID NO :212 和 312、SEQ ID NO :334 和 335、SEQ ID NO :336 和 337、SEQ ID NO :338 和 339、SEQ ID NO :340 和 341、SEQ ID NO :342 和 343、SEQ ID NO :344 和 345、SEQ ID NO :346 和347,SEQ ID NO :348和 349、SEQ ID NO :350和 351、SEQ ID NO :352 和 353、SEQ ID NO :354和 355、SEQ ID NO :356 和 357、SEQ ID NO :358 和 359、SEQ ID NO :360 和 361。在一个实施方案中，根据本发明的结合蛋白包含重链可变结构域(Vh)，优选地其中所述Vh包括选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :I、116、120、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、334、336、338、340、342、344、346、348、350、352、354、356、358 和 360。在还另一个实施方案中，根据本发明的结合蛋白包含轻链可变结构域(VJ，优选地其中所述'包括选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :111、228、232、236、240、244、248、252、256、260、264、268、216、220、224、272、276、300、292、280、288、296、284、304、308、312、335、337、339、341、343、345、347、
349、351、353、355、357、359 和 361。在优选的实施方案中，根据本发明的结合蛋白包含Vh和优选地其中Vh和\是上述序列中的任意。在另一个实施方案中，本发明提供一种能够结合人DLL-4的结合蛋白，所述结合蛋白包括Ig恒定重链区，其具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3 ；Ig恒定轻链区，其具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO 4和SEQ ID NO 5 ；
Ig可变重链区，其具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :I、116、120、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、334、336、338、340、342、344、346、348、
350、352、354、356、358 和 360 ;和Ig可变轻链区，其具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :111、228、232、236、240、244、248、252、256、260、264、268、216、220、224、272、276、300、292、280、288、296、284、304、308、312、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357、359 和 361。本发明的另一方面涉及一种包括能够结合人DLL4的抗原结合结构域的结合蛋白，所述抗原结合结构域包括选自下述的至少一个或多个CDR CDR-Hl =X1-X2-X3-X4-X5 (SEQ ID NO :105)，其中；父1是3^或0;父2是11或Y;X3 是 W ;X4 是 M ;X5 是 S 或 H ;CDR-H2 =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17(SEQ ID NO:106)，其中；或T;X2 是 I ;X3 是 S ;X4 是 Y、N、S、Q、V、T、H或 D ;X5 是 D ;X6 是 G;X7 是 S、R、I、T、G、K、H或 N;父8是队丫、5、1或T ;父9是1(、]\1、队0、￡、1\1 、5、六或1;X1。是 Y、D 或 E ;X11 是 S 或 Y ;X12 是 A ;X13 是 D ;X14 是 S ;X15 是 V ;乂16是1(;和X17 是 G ;CDR-H3 =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 (SEQ ID NO :107)，其中；X1 是 A ;X2 是 G、A 或 R ;
X3 是 G ;X4 是 G、S 或 A ;X5 是 N ;X6 是 V 或 M ;X7 是6;X8 是 F、L、Y 或 M ;X9 是 D ;和 X1。是 I、S 或L;CDR-Ll =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11 (SEQ ID NO :108)，其中，X1 是 S ;X2 是 A 或 G ;X3 是 D ;X4 是K、N、L、Q、M、E、S、T、G或D ;父5是1;X6 是 G ;X7 是 T、S、N、A、G 或E ;X8 是 K、Q、N 或 R ;X9 是 Y ;Xltl 是 V 或 I ;和X11 是 S ;CDR-L2 =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7(SEQ ID NO :109)，其中；X1 是 Q ;X2 是0;X3 是 A、G、W、S 或D ;父4是1(、]\1、0、队1、1\1或￡;X5 是尺；X6 是 P ;和父7是5;和CDR-L3 =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9(SEQ ID NO :110)，其中；X1 是0;父2是3或八；X3 是 W ;X4 是 D;父5是尺、5、0、？、八、￥、1或1;X6 是 S、G、I、N、R 或 T ;X7 是 D 或 G ;父8是￥、八、？或E;和
X9 是 V.优选地，本发明的DLL4结合蛋白的抗体结合结构域包括至少一个⑶R，所述至少一个⑶R包括选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :112 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :112 的残基 50-66 (CDR-H2)；SEQ ID NO :112 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :113 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :113 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ ID NO :113 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :316 的残基 31-35 (CDR-H I) ；SEQ ID NO :316 的残基 50-66 (CDR-H2)；SEQ ID NO :316 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :317 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :317 的残基 50-66 (CDR-H2)； SEQ ID NO :317 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :318 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :318 的残基 50-66 (CDR-H2)；SEQ ID NO :318 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :319 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :319 的残基 50-66 (CDR-H2)；SEQ ID NO :319 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :320 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :320 的残基 50-66 (CDR-H2)；SEQ ID NO :320 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :321 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :321 的残基 50-66 (CDR-H2)；SEQ ID NO :321 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :322 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :322 的残基 50-66 (CDR-H2)；SEQ ID NO :322 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :323 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :323 的残基 50-66 (CDR-H2)；SEQ ID NO :323 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :324 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :324 的残基 50-66 (CDR-H2)；SEQ ID NO :324 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :325 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :325 的残基 50-66 (CDR-H2)；SEQ ID NO :325 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :326 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :326 的残基 50-66 (CDR-H2)；SEQ ID NO :326 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :327 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :327 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ ID NO :327 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :328 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :328 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ ID NO :328 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :329 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :329 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ ID NO :329 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :330 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :330 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ ID NO :330 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :331 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :331 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ ID NO :331 的残基 88-96 (CDR-L3)；
SEQ ID NO :332 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :332 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ IDNO :332 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :333 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :333 的残基 49-55 (CDR-L2)；SEQ IDNO 333 的残基 88-96 (CDR-L3)。在另一个实施方案中，结合蛋白包括至少3个上述公开的⑶R。优选地，根据本发明的DLL4结合蛋白包含一个或多个上述⑶R。更优选地，结合蛋白包含三个或多个上述⑶R。最优选地，根据本发明的DLL4结合蛋白包含六个上述⑶R即上述 CDR-Hl、CDR-H2、CDR-H3、CDR-Ll、CDR-L2 和 CDR-L3。 在优选的实施方案中，结合蛋白包含至少3个选自上述序列的CDR。在另一个优选的实施方案中，结合蛋白包含3个⑶R，所述3个⑶R选自下述的可变结构域⑶R组VH AlO CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :112 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :112 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :112 的残基 99-108VL AlOCDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :113 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :113 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :113 的残基 88-96VH MO. 3CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :316 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :316 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :316 的残基 99-108VL MO. 3CDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :327 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :327 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :327 的残基 88-96VH MO. K30CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :317 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :317 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :317 的残基 99-108VH MO. K42CDR 组CDR-H I SEQ ID NO :318 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :318 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :318 的残基 99-108VH MO. 9A CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :319 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :319 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :319 的残基 99-108
VH MO. 8A CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :320 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :320 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :320 的残基 99-108VH MO. LA CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :321 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :321 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :321 的残基 99-108
VH MO. 5D CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :322 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :322 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :322 的残基 99-108VH MO. 3A CDR 鉬CDR-Hl SEQ ID NO :323 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :323 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :323 的残基 99-108VL MO. 3A CDR 鉬CDR-Ll SEQ ID NO :330 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :330 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :330 的残基 88-96VH MO. 6B CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :324 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :324 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :324 的残基 99-108VL MO. 6B CDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :331 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :331 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :331 的残基 88-96VH MO. 3D CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :325 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :325 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :325 的残基 99-108VL MO. 3D CDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :332 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :332 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :332 的残基 88-96VH MO. 4C CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :326 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :326 的残基 50-66
CDR-H3 SEQ ID NO :326 的残基 99-108VL MO. 4C CDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :333 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :333 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :333 的残基 88-96VL MO. L45CDR 鉬CDR-Ll SEQ ID NO :328 的残基 23-33、CDR-L2 SEQ ID NO :328 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :328 的残基 88-96VL MO. L73CDR 鉬CDR-Ll SEQ ID NO :329 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :329 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :329 的残基 88-96。在另一个实施方案中，结合蛋白包含由3个⑶R组成的可变重链(VH)组(其选自上述由3个CDR组成的任意VH组)和由3个CDR组成的可变轻链(VL)组(其选自上述由3个⑶R组成的任意VL组)。在还另一个实施方案中，结合蛋白包含下述中命名的由3个⑶R组成的VH组和相应命名的由3个CDR组成的VL组。优选地，根据本发明的结合蛋白包含至少两个可变结构域⑶R组，其选自下述可变结构域⑶R组VH AlOCDR 组和 VL AlOCDR 组；VH A10. 3CDR 组和 VL A10. 3CDR 组；VH A10. 3A CDR 组和 VL A10. 3A 组；VH A10. 6B CDR 组和 VL A10. 6B 组；VH A10. 3D CDR 组和 VL A10. 3D CDR 组；VH A10. 4C CDR 组和 VL A10. 4C CDR 组；VH A10. K30CDR 组和 VL A10. 3CDR 组；VH A10. K42CDR 组和 VL A10. 3CDR 组；VH A10. 3CDR 组和 VL A10. L45CDR 组；VH A10. 3CDR 组和 VL A10. L73CDR 组；VH A10. 9A CDR 组和 VL A10. 3CDR 组；VH A10. 8A CDR 组和 VL A10. 3CDR 组；VH A10. IA CDR 组和 VL A10. 3CDR 组；和VH A10. 5D CDR 组和 VL A10. 3CDR 组。在还另一个实施方案中，上述结合蛋白进一步包括人接纳体构架。优选地，所述人接纳体构架包括选自下述的氨基酸序列重链接纳体构架序列SEQ ID NO :6-22,重链接纳体序列SEQ ID NO : 35-62，轻链接纳体序列SEQ ID N0:23_34，和轻链接纳体序列SEQ ID NO :63_98。
在另一个实施方案中，上述结合蛋白包含人接纳体构架，其包含至少一个构架区氨基酸取代，其中所述构架的氨基酸序列与所述人接纳体构架的序列至少65%等同，并且包括与所述人接纳体构架等同的至少70个氨基酸残基。在另一个实施方案中，本文所述结合蛋白包含人接纳体构架，其包括在关键残基处的至少一个构架区氨基酸取代，所述关键残基选自与⑶R接近的残基；糖基化位点残基； 稀有残基；能够与人DLL4相互作用的残基；规范残基；在重链可变区和轻链可变区之间的接触残基；在Vernier区内的残基；和在Chothia定义的可变重链⑶Rl和Kabat定义的第一个重链构架之间重叠的区域中的残基。优选地，所述关键残基选自2H、4H、24H、26H、27H、29H、34H、35H、37H、39H、44H、45H、47H、48H、49H、50H、51H、58H、59H、60H、63H、67H、69H、71H、73H、76H、78H、91H、93H、94H、2L、4L、25L、29L、27bL、33L、34L、36L、38L、43L、44L、46L、47L、48L、49L、55L、58L、62L、64L、71L、87L、89L、90L、91L、94L、95L。在另一个实施方案中，本文所述结合蛋白包含共有人可变结构域。在优选的实施方案中，上述结合蛋白包含具有选自下述的氨基酸序列的至少一个可变结构域SEQ ID NO :112，113，316，327，317，318，319，320，321，322，323，330，324，331，325，332，326，333，328 和 329.在另一个实施方案中，上述结合蛋白包含2个可变结构域，其中所述2个可变结构域具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :112和113、SEQ ID NO :316和327、SEQ ID NO:323 和 330、SEQ ID NO :324 和 331、SEQ ID NO :325 和 332 和 SEQ ID NO :326 和 333。在一个实施方案中，根据本发明的结合蛋白包含重链可变结构域(Vh)，优选地其中所述Vh包括选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO. 112、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325 和 326。在还另一个实施方案中，根据本发明的结合蛋白包含轻链可变结构域(VJ，优选地其中所述八包括选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :113、327、328、329、330、331、332和
333。在另一个实施方案中，本发明提供一种能够结合人DLL-4的结合蛋白，所述结合蛋白包括Ig恒定重链区，其具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3 ；Ig恒定轻链区，其具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO 4和SEQ ID NO 5 ；Ig可变重链区，其具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :112、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325 和 326 ;和Ig可变轻链区，其具有选自下述的氨基酸序列
SEQ ID NO :113、327、328、329、330、331、332 和 333。根据本发明，本文所述的DLL4结合蛋白的可变重链(VH)结构域和可变轻链(VL)结构域可使用本领域可用的重组技术组合(shuffled)已产生和选自另外的DLL4结合蛋白，包括本文所述的VH和VL结构域的各种组合。在优选的实施方案中，根据本发明的DLL4结合蛋白结合人DLL4(hu DLL4)和至少一种其他物种的DLL4。更优选地，本文所述的DLL4结合蛋白结合人DLL4和选自小鼠DLL4 (mu DLL4)、食蟹猴 DLL4 (cynomologus DLL4, cyno DLL4)大鼠 DLL4 及其组合的 DLL4。在另一个实施方案中，DLL4结合蛋白是完全人抗体或其抗原结合部分。在另一个实施方案中，DLL4结合蛋白是⑶R嫁接的抗体。更优选地，DLL4结合蛋白是CDR-嫁接的抗体或其抗原结合部分，其包括一个或多个上述CDR。还更优选地，所述⑶R嫁接的抗体或其抗原结合部分包括上述可变结构域。更优 选地，CDR嫁接的抗体或其抗原结合部分包括2个上述可变结构域。优选地，CDR嫁接的抗体或其抗原结合部分包括人接纳体构架。更优选地，人接纳体构架上述人接纳体构架的任意一个。更优选地，结合蛋白能够中和选自人DLL4、小鼠DLL4、食蟹猴DLL4、大鼠DLL4及其组合的DLL4的活性。评价中和DLL4活性可通过本领域已知的若干体外和体内测定来评估。用于评估中和DLL4活性的示例性参数包括但不限于抑制DLL4与Notch受体和/或Notch信号通路的相互作用的抗体，其具有约至少10_6M、至少10_7M或至少10_8M的IC5tl值。在一个实施方案中，如通过表面等离振子共振测量的，本发明的结合蛋白具有对于DLL4的结合速率(on rate)常数(Kon)为至少约IO2M-1S-1 ;至少约IO3M-1S-1 ;至少约IO4M-1S-1 ;至少约lOfs—1 ;或至少约IO6M4s'优选地，如通过表面等离振子共振测量的，本发明的结合蛋白具有对于DLL4的结合速率常数(KJ为lOfs—1至lOfs—1之间
至 IO4MY1 之间；104M_1s_1 至 IO5MY1 之间或 IO5IT1S-1 至 IO6IT1S-1 之间。在另一个实施方案中，如通过表面等离振子共振测量的，本发明的结合蛋白具有对于DLL4的解离速率常数(Koff)为:至多约KT3s-1 ;至多约KT4s-1 ;至多约lO、-1 ;或至多约KT6s'优选地，如通过表面等离振子共振测量的，本发明的结合蛋白具有对于DLL4的解离速率常数(Koff)为 I。、-1 至 KT4s-1 ; KT4s-1 至 lO、-1 ;或 lO、-1 至 10、'在另一个实施方案中，本发明的结合蛋白具有对于DLL4的解离常数(Kd)为至多约KT7M ;至多约10_8M ;至多约10_9M ;至多约KTkiM ;至多约KT11M ;至多约KT12M ;或至多10_13M。优选地，本发明的结合蛋白具有对于DLL4的解离常数(Kd)为10_7M至10_8M;10_8M至 KT9M ； KT9M 至 KT10M ； 10,至 KT11M ； KT11M 至 KT12M ;或 ofl(T12M 至 IO-13M0本发明的一个实施方案提供抗体构建体，其包括上述任意一种DLL4结合蛋白和接头多肽或免疫球蛋白恒定结构域。在优选的实施方案中，根据本发明的抗体构建体选自免疫球蛋白分子，单克隆抗体，嵌合抗体，CDR嫁接的抗体,人源化抗体，Fab, Fab',F(ab/ ) 2, Fv, 二硫键连接的Fv, scFv,单结构域抗体,双抗体，多特异性抗体，双重特异性抗体和双特异性抗体。在优选的实施方案中，本发明的抗体构建体包括重链免疫球蛋白恒定结构域，其选自人IgM恒定结构域,人IgGl恒定结构域,人IgG2恒定结构域,人IgG3恒定结构域,人IgG4恒定结构域，人IgE恒定结构域和人IgA恒定结构域，和可改变Fe y受体结合、FcRn结合、Clq结合并可改变药物动力学性质和/或Fe效应物功能的上述Ig同种型突变体。在另一个实施方案中，抗体构建体是糖基化的。优选地，所述糖基化是人糖基化模式。在另一个实施方案中，本文所述的DLL4结合蛋白与试剂缀合。本发明的结合蛋白缀合物包括抗体缀合物，其中本文所述的的抗体构建体与试剂缀合。优选地，所述试剂选自免疫粘附分子、显像剂、治疗剂和细胞毒剂。在优选的实施方案中，所述显像剂选自放射性标记、酶、荧光标记、发光标记、生物发光标记、磁性标记和生物素。更优选地，所述显像剂是放射性标记，其选自3H、14C、35S、9°Y、99TC、mIn、125I、mI、177LU、166H0 和 153Sm。在优选的实施方案中，所述治疗剂或细胞毒剂选自抗代谢物、烷化剂、抗生素、生长因子、细胞因子、抗血管生成剂、抗有丝分裂剂、蒽环类、毒素和细胞凋亡剂。 在另一个实施方案中，以上公开的DLL4结合蛋白、抗体构建体或结合蛋白缀合物(其包括抗体缀合物)以晶体存在。优选地，所述晶体是无载体的药学控释结晶。在优选的实施方案中，此类结晶结合蛋白、结晶抗体构建体或结晶抗体缀合物具有比其可溶性配对物更长的体内半衰期。在另一个优选的实施方案中，结晶结合蛋白、结晶抗体构建体或结晶结合蛋白缀合物(其包括抗体缀合物)在结晶后保留生物学活性。本发明的一个方面涉及分离的核酸，其编码DLL4结合蛋白、抗体构建体、DLL4结合抗体缀合物或其DLL4结合部分。特别优选的是分离的核酸，其编码选自下述的多肽包括重链可变结构域的多肽，其中所述重链可变结构域包括上述⑶R-H1、⑶R-H2或⑶R-H3 ;包括轻链可变结构域的多肽，其中所述轻链可变结构域包括上述⑶R-L1、⑶R-L2或⑶R-L3 ;或两种多肽的组合。另一个实施方式提供载体，其包括分离的核酸上述。在优选的实施方案中，所述载体选自 pcDNA、pTT (Durocher 等人，Nucl. Acids Res. , 30 (2e9) : 1-9 (2002))、p!T3 (具有另外的多克隆位点的 pTT)、pEFBOS (Mizushima 等人，Nucl. Acids. Res.，18(17)5322 (1990))、pHybE、pBV、pJV和pBJ和适于原核或真核细胞的任何其他表达载体。在本发明的另一方面，提供了用上述载体转化宿主细胞。所述宿主细胞可以是原核或真核细胞。优选的原核宿主细胞是大肠杆菌(Escherichia coli)。优选地,真核细胞选自原生生物细胞、动物细胞、植物细胞和真菌细胞。更优选地，宿主细胞是哺乳动物细胞，包括但不限于CHO和COS细胞。优选的真菌细胞是但不限于酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)。优选的昆虫细胞是Sf9细胞。本发明的另一方面提供产生结合人DLL4的结合蛋白的方法，其包括在足以产生结合人DLL4的结合蛋白的条件下，在培养基中培养以上公开的任一种宿主细胞的步骤。另一个实施方案提供根据上述方法产生的结合蛋白。—个实施方案提供用于释放根据本发明的DLL4结合蛋白的组合物，其中所述组合物包括制剂，其进一步包括结晶如上公开的DLL4结合蛋白、结晶抗体构建体或结晶结合蛋白缀合物(其包括抗体缀合物)和成分，和进一步至少一种聚合载体。优选地，聚合载体是选自下述中的一种或多种的聚合物聚丙烯酸、聚氰基丙烯酸酯、聚氨基酸、聚酐、聚酯肽、聚酯、聚乳酸、乳酸-乙醇酸共聚物或PLGA、聚b-羟基丁酸酯、聚己内酯、聚二氧杂环己酮、聚乙二醇、聚(羟丙基)甲基丙烯酰胺、聚有机磷腈、聚原酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、马来酐-烷基乙烯基醚共聚物、pluronic多元醇、清蛋白、藻酸盐、纤维素和纤维素衍生物、胶原、纤维蛋白、明胶、透明质酸、寡糖、糖胺聚糖、硫酸化多糖、掺合物及其共聚物。优选地所述成分选自清蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明胶、羟丙基-￠-环糊精、甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇。另一个实施方案提供用于治疗哺乳动物的方法，其包括给哺乳动物施用有效量的组合物的步骤，所述组合物包括上述结晶DLL4结合蛋白、结晶抗体构建体或结晶蛋白缀合物(其包括抗体缀合物)。本发明还提供药物组合物，其包括如上公开的DLL4结合蛋白、抗体构建体或结合蛋白缀合物(其包括抗体缀合物)和药学可接受的载体。在另一个实施方案中，药物组合物包括至少一种另外的试剂。所述另外的试剂可以是用于治疗其中DLL4是有害的病症的治疗剂。优选地，药物组合物包括另外的试剂，其选自治疗剂；显像剂；抗肿瘤剂；化疗剂(例如DNA烷化剂、顺钼、卡钼、抗-微管蛋白剂、紫杉醇、多烯紫杉醇、多柔比星、吉西他滨、健择、蒽环类、阿霉素、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、5-氟尿嘧啶(5-FU)、leucovorin、伊立替康)和受体酪氨酸激酶抑制剂(例如埃罗替尼，吉非替尼)、C0X-2抑制剂(例如塞来昔布)、激酶抑制剂，和血管发生抑制剂(其包括但不限于抗-VEGF抗体或 VEGF-trap);共刺激分子阻断剂(其包括但不限于抗_B7. I抗体、抗-B7. 2抗体、CTLA4_Ig、抗-CD20抗体)；粘附分子阻断剂(其包括但不限于抗-LFA-I抗体、抗-E/L选择素抗体，和小分子抑制剂)；抗细胞因子抗体或其功能片段(其包括但不限于抗-IL-18，抗-TNF和抗-IL-6/细胞因子受体抗体)；氨甲蝶呤；环孢菌素；雷帕霉素；FK506 ;可检测标记或报道分子；TNF拮抗剂；抗风湿剂；肌肉弛缓剂，麻醉药，非类固醇消炎药(NSAID)，止痛剂，麻醉齐U，镇静剂，局部麻醉剂，神经肌肉阻断剂，抗微生物剂，抗牛皮癣剂，皮质类固醇，促蛋白合成类固醇，促红细胞生成素，免疫接种，免疫球蛋白，免疫抑制剂，生长激素，激素替代药物，放射性药物，抗抑郁药，抗精神病药，刺激剂，哮喘药物治疗，3激动剂，吸入类固醇，肾上腺素或类似物，细胞因子和细胞因子拮抗剂。另一方面，本发明提供用于抑制人DLL4活性的方法，其包括使人DLL4与以上公开的结合蛋白接触从而使得人DLL4被抑制或中和。在一个相关方面，本发明提供用于患有其中DLL4是有害的病症的人受试者中抑制DLL4活性的方法，其包括给所述人受试者施用以上公开的结合蛋白从而使得所述人受试者中的人DLL4被抑制并且获得治疗。优选地，所述病症选自原发性和转移性癌症，其包括乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、口咽癌、下咽癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、胆囊和胆管癌、小肠癌、尿道癌(其包括肾癌、膀胱癌和尿道上皮癌)、女性生殖道癌(其包括子宫颈癌、子宫癌和卵巢癌以及绒毛膜癌和妊娠滋养细胞疾病)，男性生殖道癌(其包括前列腺癌、精囊癌、睾丸癌和生殖细胞肿瘤)，内分泌腺体癌(其包括甲状腺癌、肾上腺癌和脑垂体腺癌)，和皮肤癌，以及血管瘤、黑色素瘤、肉瘤(其包括骨和软组织发生的肉瘤以及卡波西氏肉瘤)、脑瘤、神经癌、眼部肿瘤、脑膜癌(其包括星形胶质细胞瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、神经瘤、神经母细胞瘤，神经鞘瘤和脑膜瘤)，造血恶性肿瘤的实体肿瘤例如白血病和淋巴瘤(霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤)，肿瘤转移，眼部新生血管化(其包括糖尿病失明、视网膜病变、年龄引起的黄斑变性和虹膜发红)，水肿、类风湿关节炎、多发性硬化症，动脉硬化斑块、克罗恩病、炎症性肠病、顽固性腹水、牛皮癣、结节病、动脉血管硬化、败血症、消化道溃疡、烧伤和胰腺炎、多囊性卵巢疾病(POD)、子宫内膜异位症、子宫肌瘤、良性前列腺增生和其他独立于和依赖于血管生成的疾病，其特征在于异常DLL4活性。另一方面，本发明提供治疗患有其中人DLL4是有害的病症的患者的方法，其包括如上讨论，在第二种试剂施用之前、同时或之后，施用以上公开的任一种结合蛋白的步骤。在优选的实施方案中，所述第二种试剂选自放疗剂；抗肿瘤剂；化疗剂(例如DNA烷化剂，顺钼，卡钼，抗-微管蛋白剂，紫杉醇，多烯紫杉醇，紫杉醇(taxol)，多柔比星，吉西他滨，健择，蒽环类，阿霉素，拓扑异构酶I抑制剂，拓扑异构酶II抑制剂，5-氟尿嘧啶(5-FU)，leucovorin，伊立替康)，受体酪氨酸激酶抑制剂(例如埃罗替尼，吉非替尼)，C0X-2抑制剂(例如塞来昔布)，激酶抑制剂和血管发生抑制剂(其包括但不限于抗-VEGF抗体或VEGF-trap);共刺激分子阻断剂(其包括但不限于抗-B7. 1，抗-B7. 2，CTLA4_Ig，抗-CD20);粘附分子阻断剂(其包括但不限于抗-LFA-I抗体，抗-E/L选择素抗体，小分子抑制剂)；抗_细胞因子抗体或其功能片段(其包括但不限于抗-IL-18，抗-TNF，抗-IL-6/细胞因子受体抗体)；氨甲蝶呤；环孢菌素；雷帕霉素；FK506 ;可检测标记或报道分子；TNF拮抗剂；抗风湿剂；肌肉弛缓剂，麻醉药，非类固醇消炎药(NSAID)，止痛剂，麻醉剂，镇静齐IJ，局部麻醉剂，神经肌肉阻断剂，抗微生物剂，抗牛皮癣剂，皮质类固醇，促蛋白合成类固醇，促红细胞生成素，免疫接种，免疫球蛋白；免疫抑制剂，生长激素，激素替代药物，放射性药物，抗抑郁药，抗精神病药，刺激剂，哮喘药物治疗，3激动剂，吸入类固醇，肾上腺素或类似物，细胞因子和细胞因子拮抗剂。在优选的实施方案中，以上公开的药物组合物通过选自下述的至少一种模式施用给受试者肠胃外、皮下、肌内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内、脑室内、结肠内、颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视剛莫内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、快速灌注(bolus)、阴道、直肠、口腔含化、舌下、鼻内和经皮。本发明的另一方面提供针对本发明的至少一种DLL4结合蛋白的至少一种DLL4抗-独特型抗体。所述抗-独特型抗体包括任意含有蛋白或肽的分子，其包括至少一部分的免疫球蛋白分子，例如但不限于重链或轻链或其配体结合部分DE至少一种互补决定区(CDR)、重链或轻链可变区、重链或轻链恒定区、构架区和其任意部分，其可并入本发明的结合蛋白。任意的各种免疫检测测定方式的可以适用于应用本发明的DLL4结合蛋白来检测混合物、溶液或生物样品中的DLL4。此类疫检测测定方式包括但不限于放射免疫测定(RIA)，免疫沉淀，酶联免疫测定(ELISA)，免疫印迹(例如Western)，包括吸附或固定化到底物上的本发明的DLL4结合蛋白的免疫试纸条(例如immunodipsticks), FACS等等。使用本发明的DLL4结合蛋白检测DLL4可以是在混合物上、溶液或生物样品中在体外进行。可以与本发明的结合蛋白接触以检测或测量样品中的DLL4的生物样品包括但不限于，尿液，唾液，口腔拭子(颊、舌，或喉拭子)、皮肤拭子、皮肤刮、直肠拭子、阴道拭子、全血样品、血浆样品、血清样品、组织活检和由本领域已知方法从个体获得的任意其他样品。在另一个实施方案中，DLL4结合蛋白可以应用于体内检测DLL4例如各种断层摄影术和扫描方法，其包括但不限于X-射线计算机辅助断层摄影术(CT)，磁共振成像(MRI)和正电子发射断层摄影术(PET)。发明详述、
本发明涉及DLL4结合蛋白，特别是抗-DLL4抗体，或其结合DLL4的抗原-结合部分。本发明的各个方面涉及抗体和抗体片段及其药物组合物，以及用于制备此种抗体和抗体片段的核酸、重组表达载体和宿主细胞。使用本发明的抗体以检测人DLL4或鼠DLL4的方法，在体外或体内抑制人或小鼠DLL4和/或人或小鼠VEGFR2或VEGRl活性的方法和调节基因表达的方法也由本发明包含。除非本文另有定义，连同本发明使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。术语的含义和范围应当清晰，然而，在任何潜在不明确性的情况下，本文提供的定义优先于任何字典或外来定义。此外，除非上下文另有要求，单数术语应包括复数，且复数术语应包括单数。在本申请中，除非另有说明，“或”的使用意味着“和/或”。此夕卜，术语“包括”及其他形式的使用是非限制性的。同样，除非另有具体说明，术语例如“元件”或“组分”涵盖包含一个单位的元件和组分以及包含超过一个亚单位的元件和组分。一般地，连同本文描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白和核酸化学和杂交使用的命名法和其技术是本领域众所周知和通常使用的那些。除非另有说明，本发明的方法和技术一般根据本领域众所周知，且如各种一般和更具体的 参考文献中所述的常规方法来进行，所述参考文献在本说明书自始至终引用和讨论。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书、如本领域通常实现的或如本文所述来进行。连同本文描述的分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学使用的命名法、以及其实验室程序和技术是本领域众所周知和通常使用的那些。使用标准技术用于化学合成、化学分析、药物制备、配制和递送以及患者治疗。为了本发明可以更容易地理解，选择的术语在下文定义。如本文使用的，术语“多肽”指氨基酸的任何聚合链。术语“肽”和“蛋白”可与术语多肽互换使用，且同样指氨基酸的聚合链。术语“多肽”包含天然或人工蛋白、蛋白片段和蛋白序列的多肽类似物。多肽可以是单体或聚合的。除非另外与上下文矛盾，此处使用“多肽”意在包含多肽和其片段及变体(包括变体的片段)。对于抗原多肽，多肽片段任选含有至少一个邻接或非线性多肽表位。可以使用本领域普通方法确定至少一个表位片段的精确边界。该片段包含至少约5个邻接氨基酸，例如至少约10个邻接氨基酸、至少约15个邻接氨基酸、或至少约20个邻接氨基酸。多肽变体如此处所述。术语“分离的蛋白”或“分离的多肽”是这样的蛋白或多肽，其由于其衍生起源或来源不与天然结合的组分结合，所述天然结合的组分在其天然状态下与其伴随；基本上不含来自相同物种的其他蛋白；由来自不同物种的细胞表达；或在自然界中不存在。因此，化学合成或在不同于其天然起源的细胞的细胞系统中合成的多肽将是与其天然结合的组分“分离的”。还可以通过分离，使用本领域众所周知的蛋白纯化技术，使得蛋白基本上不含天然结合的组分。如本文使用的，术语“回收”指通过分离，例如使用本领域众所周知的蛋白纯化技术，使得化学种类例如多肽基本上不含天然结合的组分的过程。如本文使用的，术语“人DLL4”(本文缩写为“hDLL4”或“huDLL4”)包括若干EGF样结构域和受体结合所需的DSL结构域。术语包括蛋白，所述蛋白包括约74-75kDa。人DLL4的结构和推导的DNA以及蛋白序列在例如Shutter等人，Genes&Dev. ,4 :1313-1318 (2000)中进一步描述。术语“人DLL4”意图包括重组人DLL4(rh DLL4)，其可以通过标准重组表达法制备。如本文使用的，对于DLL4，“生物学活性”指DLL4的所有固有生物学特性。DLL4的生物学特性包括但不限于结合Notch受体，激活Notch受体，负调节VEGF信号，抑制VEGFR2和诱导VEGRl。如本文使用的，关于抗体、蛋白、或肽与第二种化学种类相互作用的术语“特异性结合”或“特异地结合”，意指相互作用取决于化学种类上特定结构(例如，抗原决定簇或表位)的存在；例如，抗体识别且与特定蛋白结构结合而不是一般地与蛋白结合。如果抗体对表位“A”特异，那么在包含标记的“A”和抗体的反应中，包含表位A的分子(或游离的，未标记的A)的存在将减少与抗体结合的标记的A的量。如本文使用的，术语“抗体”广泛地指包含4条多肽链-2条重(H)链和2条轻(L)链的任何免疫球蛋白(Ig)分子，或其保留Ig分子的基本表位结合特征的任何功能片段、突变体、变体或衍生。此种突变体、变体或衍生抗体形式是本领域已知的。其非限制性实施方 案在下文讨论。在全长抗体中，每条重链包含重链可变区(在本文中缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包含3个结构域CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(在本文中缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含I个结构域CL。VH和VL区可以进一步细分成称为互补性决定区(CDR)的高变区，用称为构架区(FR)的较保守区域点缀。每个VH和VL由3个⑶R和4个FR组成，以下列顺序从氨基末端到羧基末端排列FR1、OTR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。免疫球蛋白分子可以是任何类型(例如，IgG, IgE, IgM, IgD, IgA和IgY)、种类(例如，IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2)或亚类。术语“Fe区”用于定义免疫球蛋白重链的C末端区域，它可以通过完整抗体的木瓜蛋白酶消化来产生。Fe区可以是天然序列Fe区或变体Fe区。免疫球蛋白的Fe区一般包含2个恒定结构域-CH2结构域和CH3结构域，且任选包含CH4结构域。Fe部分中改变抗体效应子功能的氨基酸残基替换是本领域已知的(Winter等人，美国专利号5，648，260和5，624，821)。抗体的Fe部分介导几种重要的效应子功能，例如细胞因子诱导、ADCC、吞噬作用、依赖补体的细胞毒性(CDC)以及抗体和抗原-抗体复合物的半衰期/清除率。取决于治疗目的，在一些情况下这些效应子功能对于治疗用抗体是所需的，但在其他情况下可能是不必要的或甚至有害的。某些人IgG同种型，特别是IgGl和IgG3，经由分别与Fe YRs和补体Clq结合介导ADCC和⑶C。新生Fe受体(FcRn)是决定抗体循环半衰期的关键组分。在另外一个实施方案中，至少一个氨基酸残基在抗体恒定区例如抗体Fe区中进行替换，从而使得抗体的效应子功能被改变。免疫球蛋白的2条相同重链的二聚化由CH3结构域的二聚化来介导，且通过铰链区内的二硫键来稳定(Huber等人，Nature ；264 =415-420(1976 ；Thies等人，J Mol Biol ;293 :67-79(1999))。铰链区内的半胱氨酸残基突变以阻止重链-重链二硫键将使CH3结构域的二聚化不稳定。负责CH3 二聚化的残基已得到鉴定(Dair Acqua, Biochemistry 37:9266-9273(1998))。因此，可能产生单价半 _Ig。有趣的是，已在自然界中发现关于IgG和IgA亚类的这些单价半Ig分子(Seligman,Ann Immunol129 :855-70(1978) ;Biewenga 等人，Clin Exp Immunol 51:395-400(1983))。FcRn IgFe 区的化学计量已测定为 2 l(West 等人，Biochemistry 39 :9698-708 (2000))，且半 Fe足以介导 FcRn 结合(Kim 等人，Eur J Immunol ;24 :542-548 (1994))。破坏 CH3 结构域二聚化的突变可能对其FcRn结合没有更大的不利作用，因为对于CH3 二聚化重要的残基位于CH3b折叠结构的内界面上，而负责FcRn结合的区域位于CH2-CH3结构域的外界面上。然而，由于其比常规抗体的那种更小的尺寸，半Ig分子可以在组织穿透中具有某些优点。在一个实施方案中，至少一个氨基酸残基在本发明的结合蛋白的恒定区例如Fe区中进行替换，从而使得重链的二聚化被破坏，从而产生半DVD Ig分子。IgG的抗炎症活性完全取决于IgG Fe片段N-联聚糖的唾液酸化作用。已经确定了对抗炎症活性准确的聚糖要求，这样就可以生成合适的IgGl Fe片段，从而生成具有大大增强的能力的完全重组的唾液酸化IgGl Fe (Anthony, R. M.，等人，Science 320 :373-376 (2008))。
如本文使用的，术语抗体的“抗原结合部分”(或简单地“抗体部分”)，指保留与抗原(即，对于抗原的具体表位，例如hDLL4的表位)特异性结合的能力的一种或多种抗体片段。已显示抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段来执行。此种抗体实施方案也可以是双特异性、双重特异性、或多特异性形式；与2种或更多不同抗原(或相同抗原的2种或更多不同表位)特异性结合。包含在术语抗体的“抗原结合部分”内的结合片段的例子包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CHl结构域组成的单价片段；(ii)F(ab' )2片段，包含由铰链区的二硫键连接的2个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CHl结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(v) dAb片段(Ward等人，Nature, 341 :544-546(1989) ;PCT公开号WO 90/05144A1，它包含单个可变结构域;和(vi)分离的互补性决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的2个结构域VL和VH由分开的基因编码，但它们可以使用重组方法通过合成接头来连接，所述合成接头使得它们能够作为单条蛋白链制备，在所述单条蛋白链中VL和VH区配对以形成单价分子(称为单链 Fv(scFv);参见，例如，Bird 等人 Science, 242 :423-426 (1988);和 Huston 等人 Proc.Natl. Acad. Sci. USA, 85 :5879-5883 (1988))。此种单链抗体也预期包含在术语抗体的“抗原结合部分”内。也包含其他形式的单链抗体例如双抗体。双抗体是二价、双特异性抗体，其中VH和VL结构域在单条多肽链上表达，但使用的接头太短而不允许相同链上的2个结构域之间的配对，从而促使结构域与另一条链的互补结构域配对且产生2个抗原结合部位(参见例如，Holliger,等人 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90 :6444-6448(1993) ;Pol jak 等人Structure, 2 :1121-1123 (1994))。此种抗体结合部分是本领域已知的(参见Kontermann和 Dubel 编，Antibody EnRineerinR(2001)(Springer-Verlag. New York.第 790 页(ISBN3-540-41354-5))。此外，单链抗体还包括包含一对串联Fv区段(VH-CH1-VH-CH1)的“线性抗体”，所述串联Fv区段连同互补轻链多肽一起形成一对抗原结合区域(Zapata等人，Protein Eng. 8(10) :1057-1062(1995);和美国专利号 5，641，870)。如本文使用的，术语“抗体构建体”(或“DLL4抗体构建体”)指包括与接头多肽或免疫球蛋白恒定结构域连接的本发明的一个或多个抗原结合部分的多肽。接头多肽包含通过肽键连接的2个或更多氨基酸残基，且用于连接一个或多个抗原结合部分。此种接头多肽是本领域众所周知的(参见例如，Holliger等人Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90 6444-6448(1993) ；Poljak R. J. , Structure,2 :1121-1123 (1994)) 免疫球蛋白恒定结构域指重或轻链恒定结构域。人IgG重链和轻链恒定结构域氨基酸序列是本领域已知的且在表I中表不。表I :人IgG重链恒定结构域和轻链恒定结构域的序列
权利要求
1.一种包括能够结合人DLL4的抗原结合结构域的结合蛋白，所述抗原结合结构域包括选自下述的至少一个或多个CDR CDR-Hl =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7(SEQ ID N0:99)，其中； X1是S或N ; X3 是 S、N、T、G 或 R;X4 是 Y; X5是Y或H ; X6是W ;和 X7 是 G ;CDR-H2 =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16 (SEQ ID NO :100)，其中；XI是 D ;X2 是 I ; &是￥^或S ;X4 是 Y; 父5是1\队々、1、3或R;X6 是 G ; 父7是5、队！'或6; XjT ;X9 是 Y; 乂10是￥; XII是 N ; X12 是 P ; X13 是 S ; X14 是 L ; X15是K ;和 父16是5、队0或6;CDR-H3 =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11 (SEQ ID NO :101)，其中； XI是￡、丫、卩、0、胃、1^ 或A ; X2 是0、六、5、6、丫3 或N ;X3 是 V、M、L、P 或 A ; 父4是1、六、卩、1 、5、1(、0、￥、6、]\1或￡; 父5是1^、丫、？或1; X6 是 R、G、S、Q或 A ;X7 是 G ; 父8是63或S ; X9 是 S、A、L、V、R或 G; X10是D ;和 XII是丫、0、5、队11、￡、1 、1、？、(、I、M、T、Q或K ;CDR-Ll =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11 (SEQ ID NO :102)，其中；XI是 S ;X2 是 G ; &是0、￡或D ; X4 是 R、S、G、M、K、L 或T ;X5 是 L ;X6 是 G ; X7是D或E ;X8 是 K ;X9 是 Y; X10是A或V ;和 XII是 S ;CDR-L2 =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (SEQ ID NO :103)，其中； X1是E或Q ;X2 是 D ; X3 是 S、L、T、A、E 或F; X4 是 K、T、E、N、Q、S 或 M; 乂5是尺； X6是P ;和 X7 是 S ; 和CDR-L3 =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9 (SEQ ID NO :104)，其中；X1 是 Q ;X2 是 A ; X3是W;X4 是 D ; 父5是1 、5、]\^、队6或1(; X6是D或E ; 父7是1\￥3、3或1; 父8是6、六或C ;和 X9 是 V.
2.根据权利要求I的结合蛋白，其中所述至少一个CDR包括选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO : I 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :1 的残基 52-67 (CDR-H2) ；SEQ ID NO:I 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :111 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :111 的残基 49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 111 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO 117 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :118 (CDR-H2) ；SEQ ID NO :119 (CDR-H3)； SEQ ID NO :121 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO : 122 (CDR-H2) ；SEQ ID NO : 123 (CDR-H3)；SEQ ID NO 125 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO : 126 (CDR-H2) ；SEQ ID NO : 127 (CDR-H3)；SEQ ID NO 129 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :130 (CDR-H2) ；SEQIDNO :131 (CDR-H3)；SEQ ID NO 133 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO 134(CDR-H2) ；SEQIDNO :135 (CDR-H3)；SEQ ID NO 137 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :138 (CDR-H2) ；SEQIDNO :139 (CDR-H3)；SEQ ID NO 141 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :142 (CDR-H2) ；SEQIDNO :143 (CDR-H3)；SEQ ID NO 145 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO 146 (CDR-H2) ；SEQIDNO :147 (CDR-H3)；SEQ ID NO :149 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :150 (CDR-H2) ；SEQIDNO :151 (CDR-H3)；SEQ ID NO 153 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO 154(CDR-H2) ；SEQIDNO :155 (CDR-H3)； SEQ ID NO 157 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :158 (CDR-H2) ；SEQIDNO :159 (CDR-H3)； SEQ ID NO 161 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :162 (CDR-H2) ；SEQIDNO :163 (CDR-H3)；SEQ ID NO 165 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :166 (CDR-H2) ；SEQIDNO :167 (CDR-H3)；SEQ ID NO 169 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :170 (CDR-H2) ；SEQIDNO :171 (CDR-H3)；SEQ ID NO 173 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO 174(CDR-H2) ；SEQIDNO :175 (CDR-H3)；SEQ ID NO 177 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :178 (CDR-H2) ；SEQIDNO :179 (CDR-H3)；SEQ ID NO 181 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :182 (CDR-H2) ；SEQIDNO :183 (CDR-H3)；SEQ ID NO 185 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :186 (CDR-H2) ；SEQIDNO :187 (CDR-H3)；SEQ ID NO 189 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :190 (CDR-H2) ；SEQIDNO :191 (CDR-H3)；SEQ ID NO 193 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO 194(CDR-H2) ；SEQIDNO :195 (CDR-H3)；SEQ ID NO 197 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :198 (CDR-H2) ；SEQIDNO :199 (CDR-H3)；SEQ ID NO 201 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :202 (CDR-H2) ；SEQIDNO :203 (CDR-H3)；SEQ ID NO 205 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :206 (CDR-H2) ；SEQIDNO :207 (CDR-H3)；SEQ ID NO 209 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :210 (CDR-H2) ；SEQIDNO :211 (CDR-H3)；SEQ ID NO 213 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :214 (CDR-H2) ；SEQIDNO :215 (CDR-H3)；SEQ ID NO 217 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :218 (CDR-L2) ；SEQIDNO :219 (CDR-L3)；SEQ ID NO 221 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :222 (CDR-L2) ；SEQIDNO :223 (CDR-L3)；SEQ ID NO 225 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :226 (CDR-L2) ；SEQIDNO :227 (CDR-L3)；SEQ ID NO 229 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :230 (CDR-L2) ；SEQIDNO :231 (CDR-L3)；SEQ ID NO 233 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :234 (CDR-L2) ；SEQIDNO :235 (CDR-L3)；SEQ ID NO 237 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :238 (CDR-L2) ；SEQIDNO :239 (CDR-L3)；SEQ ID NO 241 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :242 (CDR-L2) ；SEQIDNO :243 (CDR-L3)；SEQ ID NO 245 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :246 (CDR-L2) ；SEQIDNO :247 (CDR-L3)；SEQ ID NO 249 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :250 (CDR-L2) ；SEQIDNO :251 (CDR-L3)；SEQ ID NO 253 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :254 (CDR-L2) ；SEQIDNO :255 (CDR-L3)；SEQ ID NO 257 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :258 (CDR-L2) ；SEQIDNO :259 (CDR-L3)；SEQ ID NO 261 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :262 (CDR-L2) ；SEQIDNO :263 (CDR-L3)；SEQ ID NO 265 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :266 (CDR-L2) ；SEQIDNO :267 (CDR-L3)；SEQ ID NO 269 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :270 (CDR-L2) ；SEQIDNO :271 (CDR-L3)；SEQ ID NO 273 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :274 (CDR-L2) ；SEQIDNO :275 (CDR-L3)；SEQ ID NO 277 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :278 (CDR-L2) ；SEQIDNO :279 (CDR-L3)；SEQ ID NO 281 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :282 (CDR-L2) ；SEQIDNO :283 (CDR-L3)；SEQ ID NO 285 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :286 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :287 (CDR-L3)；SEQ ID NO 289 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :290 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :291 (CDR-L3)；SEQ ID NO 293(CDR-Ll) ；SEQ ID NO :294 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :295 (CDR-L3)；SEQ ID NO 297 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :298 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :299 (CDR-L3)；SEQ ID NO 301 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :302 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :303 (CDR-L3)；SEQ ID NO 305 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :306 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :307 (CDR-L3)；SEQ ID NO 309 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :310 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :311 (CDR-L3)；SEQ ID NO 313 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :314 (CDR-L2) ；SEQ ID NO :315 (CDR-L3)； SEQ ID NO :334 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :334 的残基 52-67 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 334 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :335 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :335 的残基49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 335 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :336 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :336 的残基 52-67 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 336 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :337 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :337 的残基49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 337 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :338 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :338 的残基 52-67 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 338 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :339 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :339 的残基49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 339 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :340 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :340 的残基 52-67 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 340 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :341 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :341 的残基49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 341 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :342 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :342 的残基 52-67 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 342 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :343 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :343 的残基49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 343 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :344 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :344 的残基 52-67 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 344 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :345 的残基 24-34 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :345 的残基 50-56 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 345 的残基 89-97 (CDR-L3)；SEQ ID NO :346 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :346 的残基 52-67 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 346 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :347 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :347 的残基 49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 347 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :348 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :348 的残基 52-67 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 348 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :349 的残基 24-34 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :349 的残基 50-56 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 349 的残基 89-97 (CDR-L3)；SEQ ID NO :350 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :350 的残基 52-67 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 350 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :351 的残基24-34 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :351 的残基50-56 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 351 的残基 89-97 (CDR-L3)；SEQ ID NO :352 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :352 的残基 52-67 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 352 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :353 的残基 24-34 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :353 的残基 50-56 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 353 的残基 89-97 (CDR-L3)； SEQ ID NO :354 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :354 的残基 52-67 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 354 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :355 的残基 24-34 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :355 的残基 50-56 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 355 的残基 89-97 (CDR-L3)；SEQ ID NO :356 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :356 的残基 52-67 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 356 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :357 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :357 的残基 49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 357 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :358 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :358 的残基 52-67 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 358 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :359 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :359 的残基 49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 359 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :360 的残基 31-37 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :360 的残基 52-67 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 360 的残基 100-110 (CDR-H3)；SEQ ID NO :361 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :361 的残基49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 361 的残基 88-96 (CDR-L3)。
3.根据权利要求2的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括至少3个CDR。
4.根据权利要求3的结合蛋白，其中所述至少3个⑶R包括选自下述的可变结构域⑶R组 VH E9CDR组CDR-Hl SEQ ID NO 1 的残基 31-37CDR-H2 SEQ ID NO :1 的残基 52-67CDR-H3SEQ ID NO :1 的残基 100-110VL E9CDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :111 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :111 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :111 的残基 88-96VH E9.4CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :117CDR-H2 SEQ ID NO :118·X 兗/9 f ^T"rV 8ST 寸 ZST Zo8 Whcdu W haZ9C: on ai Qas: zi-mo992: on ai Qas: zi-mo59z: on ai Qas: u-mo W H(D99 _63 TAssT: on ai Qas: m-mo 歹Si: on ai Qas: CH-naocsT: on ai Qas: m-mo W H(D99 _63 HAC9C: on ai Qas: zi-moZ9Z: on ai Qas: zi-mo\9Z: on ai Qas: u-mo WH03S9_63 TATST: on ai Qas: CH-naoosT: on ai Qas: zu-mo6n: on ai Qas: TH-Hao WH03S9_63 HA69z: on ai Qas: ci-nao8sc: on ai Qas: zi-moL9Z: on ai Qas: u-moWWdsFWIain'- on ai Qas: m-mo9n: on ai Qas: CH-naoSH: on ai Qas: TH-HaoW1Q38FW1H55z: on ai Qas: ci-nao哪:on ai Qas: zi-moZ9Z: on ai Qas: u-mo W WDZZ '63 TASH: on ai Qas: CH-naozn: on ai Qas: zu-moTH: ON ai Qas: TH-HaoW WDZZ _63 HAtsc: on ai Qas: zi-moosc: on ai Qas: zi-mo6fz: on ai Qas: u-moWlmeTWTA6CT: ON QI Q3S: CH-HQOCDR-Hl SEQIDNO:157CDR-H2 SEQIDNO:158CDR-H3 SEQIDNO:159VL E9. 71CDR钼CDR-Ll SEQIDNO:269CDR-L2 SEQIDNO:270CDR-L3 SEQIDNO:271VH E9. 13CDR钼CDR-Hl SEQIDNO:161CDR-H2 SEQIDNO:162CDR-H3 SEQIDNO:163VL E9. 13CDR钼CDR-Ll SEQIDNO:217CDR-L2 SEQIDNO:218CDR-L3 SEQIDNO:219VH E9. 16CDR钼CDR-Hl SEQIDNO:165CDR-H2 SEQIDNO:166CDR-H3 SEQIDNO:167VL E9. 16CDR 组CDR-Ll SEQIDNO:221CDR-L2 SEQIDNO:222CDR-L3 SEQIDNO:223VH E9. 38CDR 组CDR-Hl SEQIDNO:169CDR-H2 SEQIDNO:170CDR-H3 SEQIDNO:171VL E9. 38CDR 组CDR-Ll SEQIDNO:225CDR-L2 SEQIDNO:226CDR-L3 SEQIDNO:227VH E9. 2B CDR 组CDR-Hl SEQIDNO:173CDR-H2 SEQIDNO:174CDR-H3 SEQIDNO:175VL E9. 2B CDR 组CDR-Ll SEQIDNO:273CDR-L2 SEQIDNO:274CDR-L3 SEQIDNO:275VH E9. IF CDR 组 CDR-H1 SEQ ID NO 177 CDR-H2 SEQ ID NO 178 CDR-H3 SEQ ID NO 179 VL E9. IF CDR 组 CDR-L1 SEQ ID NO 277 CDR-L2 SEQ ID NO 278 CDR-L3 SEQ ID NO 279 VH E9. 1QH CDR 组 CDR-H1 SEQ ID NO 181 CDR-H2 SEQ ID NO 182 CDR-H3 SEQ ID NO 183 VL E9. 1QH CDR 组 CDR-L1 SEQ ID NO 301 CDR-L2 SEQ ID NO 302 CDR-L3 SEQ ID NO 303 VH E9. 5E CDR 组 CDR-H1 SEQ ID NO 185 CDR-H2 SEQ ID NO 186 CDR-H3 SEQ ID NO 187 VL E9. 5E CDR 组 CDR-L1 SEQ ID NO 293 CDR-L2 SEQ ID NO 294 CDR-L3 SEQ ID NO 295 VH E9. IOC CDR 组 CDR-H1 SEQ ID NO 189 CDR-H2 SEQ ID NO 190 CDR-H3 SEQ ID NO 191 VL E9. IOC CDR 组 CDR-L1 SEQ ID NO 281 CDR-L2 SEQ ID NO 282 CDR-L3 SEQ ID NO 283 VH E9. 7E CDR 组 CDR-H1 SEQ ID NO 193 CDR-H2 SEQ ID NO 194 CDR-H3 SEQ ID NO 195 VL E9. 7E CDR 组 CDR-L1 SEQ ID NO 289 CDR-L2 SEQ ID NO 290L LSTS: on ai Qas: u-moW丽丽'63 TAstc: on ai Qas: m
5.根据权利要求4的结合蛋白，其包括至少两个可变结构域⑶R组。
6.根据权利要求5的结合蛋白，其中所述至少2个可变结构域CDR组选自VH E9CDR 组和 VL E9CDR 组，VH E9. 4CDR 组和 VL E9. 4CDR 组，VH E9. IlCDR 组和 VL E9. IlCDR 组，VH E9. 14CDR 组和 VL E9. 14CDR 组，VH E9. 17CDR 组和 VL E9. 17CDR 组，VH E9. 18CDR 组和 VL E9. 18CDR 组，VH E9. 19CDR 组和 VL E9. 19CDR 组，VH E9. 22CDR 组和 VL E9. 22CDR 组，VH E9. 48CDR 组和 VL E9. 48CDR 组， VH E9. 65CDR 组和 VL E9. 65CDR 组，VH E9. 66CDR 组和 VL E9. 66CDR 组，VH E9. 71CDR 组和 VL E9. 71CDR 组，VH E9. 13CDR 组和 VL E9. 13CDR 组，VH E9. 16CDR 组和 VL E9. 16CDR 组，VH E9. 38CDR 组和 VL E9. 38CDR 组，VH E9. 2B CDR 组和 VL E9. 2B CDR 组，VH E9. IF CDR 组和 VL E9. IF CDR 组，VH E9. IOH CDR 组和 VL E9. IOH CDR 组，VH E9. 5E CDR 组和 VL E9. 5E CDR 组，VH E9. IOC CDR 组和 VL E9. IOC CDR 组，VH E9. 7E CDR 组和 VL E9. 7E CDR 组，VH E9. 12B CDR 组和 VL E9. 12B CDR 组，VH E9. IOE CDR 组和 VL E9. IOE CDR 组，VH E9. 6A CDR 组和 VL E9. 6A CDR 组，VH E9. 7A CDR 组和 VL E9. 7A CDR 组，VH E9. 8H CDR 组和 VL E9. 8H CDR 组，VH E9-SE1CDR 组和 VL E9-SE ICDR 组，VH E9-SE2CDR 组和 VL E9-SE2CDR 组，VH E9-SE3CDR 组和 VL E9-SE3CDR 组，VH E9-SE4CDR 组和 VL E9-SE4CDR 组，VH E9-SE5CDR 组和 VL E9-SE5CDR 组，VH E9-SE6CDR 组和 VL E9-SE6CDR 组，VH E9-SE7CDR 组和 VL E9-SE7CDR 组，VH E9-SE8CDR 组和 VL E9-SE8CDR 组，VH E9-FR1CDR 组和 VL E9-FR1CDR 组，VH E9-FR2CDR 组和 VL E9-FR2CDR 组，VH E9. 71CDR 组和 VL E9. 71CDR 组，VH E9. 71 (M) CDR 组和 VL E9. 71 (M) CDR 组，和VH E9. 71 (L) CDR 组和 VL E9. 71 (L) CDR 组。
7.根据权利要求1-6中任一项的结合蛋白，其进一步包括人接纳体构架。
8.根据权利要求7的结合蛋白，其中所述人接纳构架包括选自下述的氨基酸序列 重链接纳体构架序列SEQ ID NO 6-22, 重链接纳体序列SEQ ID NO : 35-62， 轻链接纳体序列SEQ ID NO :23-34，和 轻链接纳体序列SEQ ID NO :63-98。
9.根据权利要求7或8的结合蛋白，其中所述人接纳体构架包含至少一个构架区氨基酸取代，其中所述构架的氨基酸序列与所述人接纳体构架的序列至少65%等同，并且包括与所述人接纳体构架等同的至少70个氨基酸残基。
10.根据权利要求8的结合蛋白，其中所述人接纳体构架包括在关键残基处的至少一个构架区氨基酸取代，所述关键残基选自 与⑶R接近的残基； 糖基化位点残基； 稀有残基； 能够与人DLL4相互作用的残基； 规范残基； 在重链可变区和轻链可变区之间的接触残基； 在Vernier区内的残基；和 在Chothia定义的可变重链⑶Rl和Kabat定义的第一个重链构架之间重叠的区域中的残基。
11.根据权利要求10的结合蛋白，其中所述关键残基选自2H、4H、24H、26H、27H、29H、34H、35H、37H、39H、44H、45H、47H、48H、49H、50H、51H、58H、59H、60H、63H、67H、69H、71H、73H、76H、78H、91H、93H、94H、2L、4L、25L、29L、27bL、33L、34L、36L、38L、43L、44L、46L、47L、48L、49L、55L、58L、62L、64L、71L、87L、89L、90L、91L、94L、95L。
12.根据权利要求11的结合蛋白，其中所述结合蛋白是共有人可变结构域。
13.根据权利要求I的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括具有选自下述的氨基酸序列的至少一个可变结构域SEQ ID NO :1、111、116、228、120、232、124、236、128、240、132、244、136、248、140、252、144、256、148、260、152、264、156、268、160、216、164、220、168、224、172、272、176、276、180、300、184、292、188、280、192、288、196、296、200、284、204、304、208、308、212、312、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360 和 361。
14.根据权利要求13的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括2个可变结构域，其中所述2个可变结构域具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :1和111、SEQ ID NO :116和228、SEQ ID NO :120 和 232、SEQ ID NO :124 和 236、SEQ ID NO :128 和 240、SEQ ID NO :132 和·244,SEQ ID NO :136和 248、SEQ ID NO : 140和 252、SEQ ID NO : 144和 256、SEQ ID NO :148和 260、SEQ ID NO :152 和 264、SEQ ID NO :156 和 268、SEQ ID NO :160 和 216、SEQ ID NO:164和 220、SEQ ID NO : 168 和 224、SEQ ID NO : 172和 272、SEQ ID NO : 176 和 276、SEQ IDNO :180 和 300、SEQ ID NO :184 和 292、SEQ ID NO : 188 和 280、SEQ ID NO : 192 和 288、SEQID NO :196 和 296、SEQ ID NO :200 和 284、SEQ ID NO :204 和 304、SEQ ID NO :208 和 308、SEQ ID NO :212 和 312、SEQ ID NO :334 和 335、SEQ ID NO :336 和 337、SEQ ID NO :338 和.339,SEQ ID NO :340 和 341、SEQ ID NO :342 和 343、SEQ ID NO :344 和 345、SEQ ID NO :346和 347、SEQ ID NO :348 和 349、SEQ ID NO :350 和 351、SEQ ID NO :352 和 353、SEQ ID NO:.354和 355、SEQ ID NO :356 和 357、SEQ ID NO :358 和 359、SEQ ID NO :360 和 361。
15.根据权利要求11的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括具有选自下述的氨基酸序列的至少一个可变结构域SEQ ID NO :1、111、116、228、120、232、124、236、128、240、132、244、.136、248、140、252、144、256、148、260、152、264、156、268、160、216、164、220、168、224、172、.272、176、276、180、300、184、292、188、280、192、288、196、296、200、284、204、304、208、308、.212、312、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、.351、352、353、354、355、356、357、358、359、360和 361。
16.根据权利要求2的结合蛋白，其中所述抗原结合结构域包括VH。
17.根据权利要求16的结合蛋白，其中所述Vh包括选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :1、116、120、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、.176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、334、336、338、340、342、344、346、348、350、.352、354、356、358和 360。
18.根据权利要求2的结合蛋白，其中所述所述抗原结合结构域包括
19.根据权利要求18的结合蛋白，其中所述'包括选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :111、228、232、236、240、244、248、252、256、260、264、268、216、220、224、.272、276、300、292、280、288、296、284、304、308、312、335、337、339、341、343、345、347、349、.351、353、355、357、359和 361。
20.根据权利要求2的结合蛋白，其中所述所述抗原结合结构域包括\和'.
21.根据权利要求19的结合蛋白，其进一步包括Vh，其中所述Vh包括选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :1、116、120、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、.176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、334、336、338、340、342、344、346、348、350、.352、354、356、358和 360。
22.根据权利要求20的结合蛋白，其中所述\包括选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :111、228、232、236、240、244、248、252、256、260、264、268、216、220、224、.272、276、300、292、280、288、296、284、304、308、312、335、337、339、341、343、345、347、349、.351、353、355、357、359 和 361。
23.根据权利要求2的结合蛋白，其进一步包括选自下述的重链免疫球蛋白恒定结构域人IgM恒定结构域；人IgGl恒定结构域；人IgG2恒定结构域；人IgG3恒定结构域；人IgG4恒定结构域；人IgE恒定结构域和人IgA恒定结构域。
24.根据权利要求23的结合蛋白，其中所述重链免疫球蛋白恒定结构域是人IgGl恒定结构域。
25.根据权利要求24的结合蛋白，其中所述人IgGl恒定结构域包括选自SEQID NO .2和SEQ ID NO 3的氣基酸序列。
26.根据权利要求2的结合蛋白，其进一步包括轻链免疫球蛋白恒定结构域选自人IgK恒定结构域和人IgX恒定结构域。
27.根据权利要求26的结合蛋白，其中所述轻链免疫球蛋白恒定区结构域是人IgK恒定结构域，其包括氨基酸序列SEQ ID N0:4。
28.根据权利要求26的结合蛋白，其中所述轻链免疫球蛋白恒定区结构域是人IgX恒定结构域，其包括氨基酸序列SEQ ID N0:5。
29.根据权利要求I的结合蛋白，其中所述结合蛋白选自免疫球蛋白分子，scFv，单克隆抗体，人抗体，嵌合抗体，人源化抗体，单结构域抗体，Fab片段,Fab'片段,Ffeb' )2,Fv,二硫键连接的Fv，单结构域抗体，双抗体，多特异性抗体，双特异性抗体和双重特异性抗体。
30.根据权利要求29的结合蛋白，其中所述结合蛋白是人抗体。
31.一种能够结合人DLL-4的结合蛋白，所述结合蛋白包括 Ig恒定重链区，其具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :2和SEQ ID NO 3 ； Ig恒定轻链区，其具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :4和SEQ ID NO 5 ； Ig可变重链区，其具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :1、116、120、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、.176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、334、336、338、340、342、344、346、348、350、.352、354、356、358 和 360 ;和 Ig可变轻链区，其具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :111、228、232、236、240、244、248、252、256、260、264、268、216、220、224、.272、276、300、292、280、288、296、284、304、308、312、335、337、339、341、343、345、347、349、.351、353、355、357、359 和 361。
32.根据权利要求31的结合蛋白，其中所述Ig恒定轻链区是SEQID NO :5.
33.根据权利要求1-32中任一项的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够阻止DLL4与Notch蛋白的相互作用，所述Notch蛋白选自Notch-1、Notch-2、Notch-3、Notch-4及其组
34.根据权利要求33的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够阻止DLL4与Notch-I和Notch-4的相互作用。
35.根据权利要求33的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够阻止DLL4与Notch-I的相互作用。
36.根据权利要求33的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够阻止DLL4与Notch-4的相互作用。
37.根据权利要求1-32中任一项的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够调节DLL4的生物学功能。
38.根据权利要求1-32中任一项的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够中和DLL4。
39.根据权利要求38的中和结合蛋白，其中所述DLL4选自人DLL4、小鼠DLL4、食蟹猴DLL4和大鼠DLL4。
40.根据权利要求38的中和结合蛋白，其中所述中和结合蛋白减少DLL4与其受体结合的能力。
41.根据权利要求38的中和结合蛋白，其中所述中和结合蛋白能够降低正常血管生成。
42.根据权利要求38的中和结合蛋白，其中所述中和结合蛋白具有的解离常数(Kd)选自至多约KT7M ;至多约KT8M ;至多约KT9M ;至多约KT10M ;至多约KT11M ;至多约KT12M和至多 1(T13M。
43.根据权利要求38的中和结合蛋白，其中所述中和结合蛋白具有的结合速率选自至少约IO2MY1 ;至少约IO3MY1 ;至少约IO4IT1S-1 ;至少约IO5IT1S-1和至少约IO6IT1S'
44.根据权利要求38的中和结合蛋白，其中所述中和结合蛋白具有的解离速率选自至多约KT3s-1 ;至多约KT4s-1 ;至多约KT5s-1和至多约KT6S'
45.一种包括权利要求1-32中任一项的结合蛋白的标记的结合蛋白，其中所述结合蛋白与可检测标记缀合。
46.权利要求45的标记的结合蛋白，其中所述可检测标记选自放射性标记、酶、荧光标记、发光标记、生物发光标记、磁性标记和生物素。
47.权利要求46的标记的结合蛋白，其中所述标记是放射性标记，其选自3H、14C、35S、90Y、99TC、mIn、125I、mI、177Lu、166HO 和 153Sm0
48.一种包括权利要求1-32中任一项所述的结合蛋白的抗体构建体，所述抗体构建体进一步包括接头多肽或免疫球蛋白恒定结构域。
49.根据权利要求48的抗体构建体，其选自 免疫球蛋白分子， 单克隆抗体， 嵌合抗体， ⑶R嫁接的抗体， 人源化抗体，Fab, Fab',F (ah' )2, Fv, 二硫键连接的Fv, scFv, 单结构域抗体， 双抗体， 多特异性抗体， 双重特异性抗体，和 双特异性抗体。
50.根据权利要求48的抗体构建体，其中所述抗体构建体包括重链免疫球蛋白恒定结构域，其选自 人IgM恒定结构域， 人IgGl恒定结构域， 人IgG2恒定结构域， 人IgG3恒定结构域， 人IgG4恒定结构域， 人IgE恒定结构域， 人IgA恒定结构域，和具有一个或多个突变、改变与Fe新生受体、Fe y受体或Clq结合强度的IgG恒定结构域变体。
51.根据权利要求48的抗体构建体，其包括具有选自下述的氨基酸序列的免疫球蛋白恒定结构域SEQ ID NO 2, SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :5 及其组合。
52.—种包括如权利要求48中所述的抗体构建体的抗体缀合物，其中所述抗体构建体与治疗剂和细胞毒剂缀合。
53.根据权利要求52的抗体缀合物，其中所述治疗剂或细胞毒剂选自抗代谢物、烷化剂、抗生素、生长因子、细胞因子、抗血管生成剂、抗有丝分裂剂、蒽环类、毒素和细胞凋亡剂。
54.一种分离的核酸，其编码选自下述的多肽包括重链可变结构域的多肽，其中所述重链可变结构域包括一种或多种如权利要求I中所述的⑶R-H I、⑶R-H2或⑶R-H3 ;包括轻链可变结构域的多肽，其中所述轻链可变结构域包括一种或多种如权利要求I中所述的CDR-Ll、CDR-L2或CDR-L3 ;或两种多肽的组合。
55.—种载体,其包括根据权利要求54的分离的核酸。
56.权利要求55的载体，其中所述载体选自pcDNA、pTT、pTT3、pEFB0S、pBV、pJV、pHybE和 PBJ0
57.—种宿主细胞,其包括根据权利要求55和56任一项的载体。
58.根据权利要求57的宿主细胞，其中所述宿主细胞是原核细胞。
59.根据权利要求58的宿主细胞，其中所述宿主细胞是大肠杆菌。
60.根据权利要求59的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真核细胞。
61.根据权利要求60的宿主细胞，其中所述真核细胞选自原生生物细胞、动物细胞、植物细胞和真菌细胞。
62.根据权利要求61的宿主细胞，其中所述真核细胞是选自哺乳动物细胞、鸟类细胞和昆虫细胞的动物细胞。
63.根据权利要求62的宿主细胞，其中所述宿主细胞是CHO细胞。
64.根据权利要求62的宿主细胞，其中所述宿主细胞是COS细胞。
65.根据权利要求61的宿主细胞，其中所述真菌细胞是酿酒酵母。
66.根据权利要求62的宿主细胞，其中所述昆虫细胞是Sf9细胞。
67.一种产生结合人DLL4的结合蛋白的方法，其包括在足以产生结合人DLL4的结合蛋白的条件下，在培养基中培养权利要求57-66中任一项的宿主细胞。
68.—种结合蛋白，其根据权利要求67的方法产生。
69.一种结晶结合蛋白，其包括根据权利要求1-32任一项的结合蛋白，其中所述结合蛋白以晶体存在。
70.根据权利要求69的结晶结合蛋白，其中所述晶体是无载体的药学控释晶体。
71.根据权利要求69的结晶结合蛋白，其中所述结合蛋白具有比所述结合蛋白的可溶性配对物更长的体内半衰期。
72.根据权利要求69的结晶结合蛋白，其中所述结合蛋白保留生物学活性。
73.一种用于释放结合蛋白的组合物，所述组合物包括 (a)制剂，其中所述制剂包括根据权利要求69-72中任一项的结晶结合蛋白和成分；和(b)至少一种聚合载体。
74.根据权利要求73的组合物，其中所述聚合载体是选自下述中的一种或多种的聚合物聚丙烯酸、聚氰基丙烯酸酯、聚氨基酸、聚酐、聚酯肽、聚酯、聚乳酸、乳酸-乙醇酸共聚物或PLGA、聚b-羟基丁酸酯、聚己内酯、聚二氧杂环己酮、聚乙二醇、聚(羟丙基)甲基丙烯酰胺、聚有机磷腈、聚原酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、马来酐-烷基乙烯基醚共聚物、pluronic多元醇、清蛋白、藻酸盐、纤维素和纤维素衍生物、胶原、纤维蛋白、明胶、透明质酸、寡糖、糖胺聚糖、硫酸化多糖、掺合物及其共聚物。
75.根据权利要求73的组合物，其中所述成分选自清蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明胶、羟丙基-P -环糊精、甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇。
76.一种用于治疗哺乳动物的方法，其包括给哺乳动物施用有效量的根据权利要求73的组合物的步骤。
77.一种药物组合物，其包含权利要求1-32中任一项的结合蛋白和药学可接受的载体。
78.权利要求77的药物组合物，其进一步包含用于治疗其中DLL4活性是有害的病症的至少一种另外的治疗剂。
79.权利要求78的药物组合物，其中所述另外的试剂选自血管发生抑制剂；激酶抑制剂；共刺激分子阻断剂；粘附分子阻断剂；抗细胞因子抗体或其功能片段；氨甲蝶呤；皮质类固醇；环孢菌素；雷帕霉素；FK506和非类固醇消炎药。
80.一种用于减少人DLL4活性的方法，其包括使人DLL4与权利要求1_32中任一项的结合蛋白接触，从而使得人DLL4活性减少。
81.一种用于减少患有其中DLL4活性是有害的病症的人受试者中的人DLL4活性的方法，其包括给所述人受试者施用权利要求1-32中任一项的结合蛋白，从而使得所述人受试者中的人DLL4活性减少。
82.一种用于治疗受试者的其中DLL4活性是有害的疾病或病症的方法，其通过下述实现给所述受试者施用权利要求1-32中任一项的结合蛋白，从而实现治疗。
83.权利要求82的方法，其中所述病症选自乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、口咽癌、下咽癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、胆囊癌、胆管癌、小肠癌、尿道癌、女性生殖道癌、男性生殖道癌、内分泌腺体癌、皮肤癌、血管瘤、黑色素瘤、肉瘤、脑瘤、神经癌、眼部肿瘤、脑膜癌、造血恶性肿瘤的实体肿瘤、肿瘤转移、眼部新生血管化、水肿、类风湿关节炎、多发性硬化症、动脉硬化斑块、克罗恩病、炎症性肠病、顽固性腹水、牛皮癣、结节病、动脉血管硬化、败血症、消化道溃疡、烧伤和胰腺炎、多囊性卵巢疾病(POD)、子宫内膜异位症、子宫肌瘤、良性前列腺增生和其他独立于和依赖于血管生成的疾病，其特征在于异常DLL4活性。
84.权利要求83的方法，其中所述病症是原发性和转移性癌症。
85.权利要求83的方法，其中所述尿道癌选自肾癌、膀胱癌和尿道上皮癌。
86.权利要求83的方法，其中所述的女性生殖道癌选自子宫颈癌、子宫癌、卵巢癌、绒毛膜癌和妊娠滋养细胞疾病。
87.权利要求83的方法，其中所述男性生殖道癌选自前列腺癌、精囊癌、睾丸癌和生殖细胞肿瘤。
88.权利要求83的方法，其中所述内分泌腺体癌选自甲状腺癌、肾上腺癌和脑垂体腺癌。
89.权利要求83的方法，其中所述肉瘤选自骨肉瘤/软组织肉瘤和卡波西氏肉瘤。
90.权利要求83的方法，其中所述脑膜癌选自星形胶质细胞瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、神经瘤、神经母细胞瘤,神经鞘瘤和脑膜瘤。
91.权利要求83的方法，其中所述造血恶性肿瘤的实体肿瘤是白血病、霍奇金氏白血病、非霍奇氏白血病、淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤。
92.权利要求83的方法，其中所述眼部新生血管化选自糖尿病失明、视网膜病变、年龄弓I起的黄斑变性和虹膜发红。
93.一种治疗患有其中DLL4是有害的病症的患者的方法，其包括在第二种试剂施用之前、同时或之后，施用权利要求1-32中任一项的结合蛋白的步骤，其中所述第二种试剂选自能够结合人VEGFR2的抗体或其片段；氨甲蝶呤；能够结合人TNF的抗体或其片段；皮质类固醇、环孢菌素、雷帕霉素、FK506和非类固醇消炎药。
94.一种包括能够结合人DLL4的抗原结合结构域的结合蛋白，所述抗原结合结构域包括选自下述的至少一个或多个⑶R CDR-Hl =X1-X2-X3-X4-X5(SEQ ID NO :105)，其中；X1 是 S、N 或 D ; X2是H或Y ; X3是W;X4 是 M ; X5是S或H ;CDR-H2 =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17(SEQ ID NO: 106)，其中； X1 是 I、D、M或T ;X2 是 I ;X3 是 S ; X4 是 Y、N、S、Q、V、T、H 或D ;X5 是 D ;X6 是 G ; X7 是 S、R、I、T、G、K、H 或 N; 乂8是队丫、5、I或T ; 父9是1(、]\1、队0、￡、1\1 、5、4或1;Xltl 是 Y、D 或E ; X11是S或Y ; X12 是 A ; X13 是 D ; X14 是 S ; X15 是 V ; X16是K ;和 X17 是 G ;CDR-H3 =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 (SEQ ID NO :107),其中；X1 是 A ;父2是6、六或R;X3 是 G ;X4 是 G、S 或 A ;X5 是 N ;X6是V或M ; X7 是 G ;父8是？、1^、丫或1;X9是D ;和Xltl是 I、S或L;CDR-Ll =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11 (SEQ ID NO :108)，其中；XI是 S ;X2是A或G ;X3 是 D ;X4 是K、N、L、Q、M、E、S、T、G或D ;X5 是 L ;X6 是 G ;父7是1\5、队々、6或E ;父8是1(、0^或R ;X9 是 Y;X10是V或I ;和XII是 S ;CDR-L2 =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (SEQ ID NO :109)，其中；X1 是 Q ;X2 是 D ;X3 是 A、G、W、S 或 D ;X4 是 K、M、Q、N、L、T、I 或E ;X5 是 R ;X6是P ;和X7 是 S ;和CDR-L3 =X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9 (SEQ ID NO :110)，其中；X1 是 Q ;X2是S或A ;X3是W;X4 是 D ;父5是1 、5、0、？、六、￥、1或1; X6 是 S、G、I、N、R或 T ; X7是D或G ; 乂8是￥、八、？或￡;和 X9 是 V.
95.权利要求94的结合蛋白，其中所述至少一个⑶R包括选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :112 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :112 的残基 50-66 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 112 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :113 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :113 的残基 49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 113 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :316 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :316 的残基 50-66 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 316 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :317 的残基31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :317 的残基50-66 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 317 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :318 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :318 的残基 50-66 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 318 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :319 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :319 的残基 50-66 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 319 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :320 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :320 的残基 50-66 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 320 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :321 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :321 的残基 50-66 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 321 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :322 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :322 的残基 50-66 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 322 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :323 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :323 的残基 50-66 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 323 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :324 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :324 的残基 50-66 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 324 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :325 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :325 的残基 50-66 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 325 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :326 的残基 31-35 (CDR-Hl) ；SEQ ID NO :326 的残基 50-66 (CDR-H2) ；SEQ IDNO 326 的残基 99-108 (CDR-H3)；SEQ ID NO :327 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :327 的残基49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 327 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :328 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :328 的残基49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 328 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :329 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :329 的残基 49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 329 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :330 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :330 的残基 49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 330 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :331 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :331 的残基49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 331 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :332 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :332 的残基49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 332 的残基 88-96 (CDR-L3)；SEQ ID NO :333 的残基 23-33 (CDR-Ll) ；SEQ ID NO :333 的残基49-55 (CDR-L2) ；SEQ IDNO 333 的残基 88-96 (CDR-L3)。
96.权利要求95的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括至少3个CDR。
97.权利要求96的结合蛋白，其中所述至少3个⑶R包括选自下述的可变结构域⑶R 组 VH AlOCDR 鉬 CDR-Hl SEQ ID NO :112 的残基 31-35 CDR-H2 SEQ ID NO :112 的残基 50-66 CDR-H3 SEQ ID NO :112 的残基 99-108 VL AlOCDR 组 CDR-Ll SEQ ID NO :113 的残基 23-33 CDR-L2 SEQ ID NO :113 的残基 49-55 CDR-L3 SEQ ID NO :113 的残基 88-96 VH MO. 3 CDR 组 CDR-Hl SEQ ID NO :316 的残基 31-35 CDR-H2 SEQ ID NO :316 的残基 50-66 CDR-H3 SEQ ID NO :316 的残基 99-108 VL MO. 3CDR 组 CDR-Ll SEQ ID NO :327 的残基 23-33 CDR-L2 SEQ ID NO :327 的残基 49-55 CDR-L3 SEQ ID NO :327 的残基 88-96 VH MO. K30CDR 组 CDR-Hl SEQ ID NO :317 的残基 31-35 CDR-H2 SEQ ID NO :317 的残基 50-66 CDR-H3 SEQ ID NO :317 的残基 99-108 VH MO. K42CDR 组 CDR-Hl SEQ ID NO :318 的残基 31-35 CDR-H2 SEQ ID NO :318 的残基 50-66 CDR-H3 SEQ ID NO :318 的残基 99-108 VH MO. 9A CDR 组 CDR-Hl SEQ ID NO :319 的残基 31-35 CDR-H2 SEQ ID NO :319 的残基 50-66 CDR-H3 SEQ ID NO :319 的残基 99-108 VH MO. 8A CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :320 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :320 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :320 的残基 99-108VH MO. LA CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :321 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :321 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :321 的残基 99-108VH MO. 5D CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :322 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :322 的残基 50-66 CDR-H3 SEQ ID NO :322 的残基 99-108VH MO. 3A CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :323 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :323 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :323 的残基 99-108VL MO. 3A CDR 鉬CDR-Ll SEQ ID NO :330 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :330 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :330 的残基 88-96VH AKX 6B CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :324 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :324 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :324 的残基 99-108VL MO. 6B CDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :331 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :331 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :331 的残基 88-96VH AKX 3D CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :325 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :325 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :325 的残基 99-108VL MO. 3D CDR 组CDR-Ll SEQ ID NO :332 的残基 23-33CDR-L2 SEQ ID NO :332 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :332 的残基 88-96VH AKX 4C CDR 组CDR-Hl SEQ ID NO :326 的残基 31-35CDR-H2 SEQ ID NO :326 的残基 50-66CDR-H3 SEQ ID NO :326 的残基 99-108VL AlO. 4C CDR 鉬 CDR-Ll SEQ ID NO :333 的残基 23-33 CDR-L2 SEQ ID NO :333 的残基 49-55 CDR-L3 SEQ ID NO :333 的残基 88-96 VL MO. L45CDR 组 CDR-Ll SEQ ID NO :328 的残基 23-33 CDR-L2 SEQ ID NO :328 的残基 49-55 CDR-L3 SEQ ID NO :328 的残基 88-96 VL MO. L73CDR 鉬 CDR-Ll SEQ ID NO :329 的残基 23-33 CDR-L2 SEQ ID NO :329 的残基 49-55CDR-L3 SEQ ID NO :329 的残基 88-96
98.权利要求97的结合蛋白，其包括至少两个可变结构域CDR组。
99.权利要求98的结合蛋白，其中所述至少两个可变结构域CDR组选自 VH AlOCDR 组和 VL AlOCDR 组；VH A10. 3CDR 组和 VL A10. 3CDR 组；VH A10. 3A CDR 组和 VL A10. 3A 组；VH A10. 6B CDR 组和 VL A10. 6B 组；VH A10. 3D CDR 组和 VL A10. 3D CDR 组；VH A10. 4C CDR 组和 VL A10. 4C CDR 组；VH A10. K30CDR 组和 VL A10. 3CDR 组；VH A10. K42CDR 组和 VL A10. 3CDR 组；VH A10. 3CDR 组和 VL A10. L45CDR 组；VH A10. 3CDR 组和 VL A10. L73CDR 组；VH A10. 9A CDR 组和 VL A10. 3CDR 组；VH A10. 8A CDR 组和 VL A10. 3CDR 组； VH A10. IA CDR 组和 VL A10. 3CDR 组；和 VH A10. 5D CDR 组和 VL A10. 3CDR 组。
100.权利要求94-99中任一项的结合蛋白，其进一步包括人接纳体构架。
101.权利要求100的结合蛋白，其中所述人接纳体构架包括选自下述的氨基酸序列 重链接纳体构架序列SEQ ID NO 6-22, 重链接纳体序列SEQ ID NO : 35-62， 轻链接纳体序列SEQ ID NO :23-34，和 轻链接纳体序列SEQ ID NO :63-98。
102.权利要求100或101的结合蛋白，其中所述人接纳体构架包含至少一个构架区氨基酸取代，其中所述构架的氨基酸序列与所述人接纳体构架的序列至少65%等同，并且包括与所述人接纳体构架等同的至少70个氨基酸残基。
103.权利要求101的结合蛋白，其中所述人接纳体构架包括在关键残基处的至少一个构架区氨基酸取代，所述关键残基选自与⑶R接近的残基； 糖基化位点残基； 稀有残基； 能够与人DLL4相互作用的残基； 规范残基； 在重链可变区和轻链可变区之间的接触残基； 在Vernier区内的残基；和 在Chothia定义的可变重链⑶Rl和Kabat定义的第一个重链构架之间重叠的区域中 的残基。
104.权利要求103的结合蛋白，其中所述关键残基选自2H、4H、24H、26H、27H、29H、34H、35H、37H、39H、44H、45H、47H、48H、49H、50H、51H、58H、59H、60H、63H、67H、69H、71H、73H、76H、78H、91H、93H、94H、2L、4L、25L、29L、27bL、33L、34L、36L、38L、43L、44L、46L、47L、48L、49L、55L、58L、62L、64L、71L、87L、89L、90L、91L、94L、95L.
105.权利要求104的结合蛋白，其中所述结合蛋白是共有人可变结构域。
106.权利要求94的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括具有选自下述的氨基酸序列的至少一个可变结构域SEQ ID NO :112、113、316、327、317、318、319、320、321、322、323、330、324、331、325、332、326、333、328和 329。
107.权利要求106的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括2个可变结构域，其中所述2个可变结构域具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :112和113、SEQ ID NO :316和327、SEQ ID NO :323 和 330、SEQ ID NO :324 和 331、SEQ ID NO :325 和 332、SEQ ID NO :326 和333。
108.权利要求104的结合蛋白，，其中所述结合蛋白包括具有选自下述的氨基酸序列的至少一个可变结构域SEQ ID NO :112、113、316、327、317、318、319、320、321、322、323、330、324、331、325、332、326、333、328 和 329。
109.权利要求95的结合蛋白，其中所述所述抗原结合结构域包括Vh.
110.权利要求109的结合蛋白，其中所述Vh包括选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :112、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325 和 326。
111.权利要求95的结合蛋白，其中所述所述抗原结合结构域包括八。
112.权利要求111的结合蛋白，其中所述'包括选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :113、327、328、329、330、331、332 和 333。
113.权利要求95的结合蛋白，其中所述所述抗原结合结构域包括V1^PVp
114.权利要求112的结合蛋白，其进一步包括Vh，其中所述Vh包括选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :112、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325 和 326。
115.根据权利要求20的结合蛋白，其中所述'包括选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :113、327、328、329、330、331、332 和 333。
116.权利要求95的结合蛋白，其进一步包括选自下述的重链免疫球蛋白恒定结构域人IgM恒定结构域^IgGl恒定结构域jIgG2恒定结构域AlgG3恒定结构域AlgG4恒定结构域；人IgE恒定结构域和人IgA恒定结构域。
117.权利要求117的结合蛋白，其中所述重链免疫球蛋白恒定结构域是人IgGl恒定结构域。
118.权利要求117的结合蛋白，其中所述人IgGl恒定结构域包括选自SEQID N0:2和SEQ ID NO 3的氨基酸序列。
119.权利要求95的结合蛋白，其进一步包括轻链免疫球蛋白恒定结构域选自人IgK恒定结构域和人IgX恒定结构域。
120.权利要求119的结合蛋白，其中所述轻链免疫球蛋白恒定区结构域是人IgK恒定结构域，其包括氨基酸序列SEQ ID N0:4。
121.权利要求119的结合蛋白，其中所述轻链免疫球蛋白恒定区结构域是人IgX恒定结构域，其包括氨基酸序列SEQ ID NO:5。
122.权利要求94的结合蛋白其中所述结合蛋白选自免疫球蛋白分子；scFv;单克隆抗体；人抗体；嵌合抗体；人源化抗体；单结构域抗体；Fab片段；Fab’片段；F(ab’ ) 2 ；Fv ；二硫键连接的Fv，单结构域抗体，双抗体，多特异性抗体，双特异性抗体和双重特异性抗体。
123.权利要求122的结合蛋白，其中所述结合蛋白是人抗体。
124.—种能够结合人DLL-4的结合蛋白，所述结合蛋白包括 Ig恒定重链区，其具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :2和SEQ ID NO 3 ； Ig恒定轻链区，其具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :4和SEQ ID NO 5 ； Ig可变重链区，其具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :112、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325 和 326 ;和Ig可变轻链区，其具有选自下述的氨基酸序列SEQ ID NO :113、327、328、329、330、331、332 和 333。
125.权利要求124的结合蛋白，其中所述Ig恒定轻链区是SEQID NO :5。
126.根据权利要求94-125中任一项的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够阻止DLL4与Notch蛋白的相互作用，所述Notch蛋白选自Notch-1、Notch-2、Notch-3、Notch-4及其组八口 o
127.权利要求126的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够阻止DLL4与Notch-I和Notch-4的相互作用。
128.权利要求126的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够阻止DLL4与Notch-I的相互作用。
129.权利要求126的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够阻止DLL4与Notch-4的相互作用。
130.权利要求94-125中任一项的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够调节DLL4的生物学功能。
131.权利要求94-125中任一项的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够中和DLL4。
132.权利要求131的中和结合蛋白，其中所述DLL4选自人DLL4、小鼠DLL4、食蟹猴DLL4和大鼠DLL4。
133.权利要求131的中和结合蛋白，其中所述中和结合蛋白减少DLL4与其受体结合的能力。
134.权利要求131的中和结合蛋白，其中所述中和结合蛋白能够降低正常血管生成。
135.权利要求131的中和结合蛋白，其中所述中和结合蛋白具有的解离常数(Kd)选自至多约KT7M ;至多约KT8M ;至多约KT9M ;至多约KT10M ;至多约KT11M ;至多约KT12M和至多 IO^13Mo
136.权利要求131的中和结合蛋白，其中所述中和结合蛋白具有的结合速率选自至少约IO2MY1 ;至少约IO3MY1 ;至少约IO4IT1S-1 ;至少约IO5IT1S-1和至少约IO6IT1S'
137.权利要求131的中和结合蛋白，其中所述中和结合蛋白具有的解离速率选自至多约I。、-1 ;至多约KT4s-1 ;至多约KT5s-1和至多约KT6S'
138.—种包括权利要求94-137中任一项的结合蛋白的标记的结合蛋白，其中所述结合蛋白与可检测标记缀合。
139.权利要求138的标记的结合蛋白，其中所述可检测标记选自放射性标记、酶、荧光标记、发光标记、生物发光标记、磁性标记和生物素。
140.权利要求139的标记的结合蛋白，其中所述标记是放射性标记，其选自3H、14C、35S,90Y,"Tc,111 In, 1251 , 1311 , 177Lu, 166Ho 和 153Sm。
141.一种抗体构建体，其包括权利要求94-137中任一项所述的结合蛋白和进一步包括接头多肽或免疫球蛋白恒定结构域。
142.根据权利要求141的抗体构建体，其选自 免疫球蛋白分子， 单克隆抗体， 嵌合抗体， ⑶R嫁接的抗体， 人源化抗体，Fab, Fab',F (ah' )2, Fv, 二硫键连接的Fv, scFv, 单结构域抗体， 双抗体， 多特异性抗体， 双重特异性抗体，和 双特异性抗体。
143.根据权利要求141的抗体构建体，其中所述抗体构建体包括重链免疫球蛋白恒定结构域，其选自 人IgM恒定结构域， 人IgGl恒定结构域， 人IgG2恒定结构域， 人IgG3恒定结构域，人IgG4恒定结构域， 人IgE恒定结构域， 人IgA恒定结构域， 和具有一个或多个突变、改变与Fe新生受体、Fe y受体或Clq结合强度的IgG恒定结构域变体。
144.根据权利要求141的抗体构建体，其包括具有选自下述的氨基酸序列的免疫球蛋白恒定结构域SEQ ID NO 2, SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :5 及其组合。
145.一种包括如权利要求141中所述的抗体构建体的抗体缀合物，其中所述抗体构建体与治疗剂和细胞毒剂缀合。
146.根据权利要求145的抗体缀合物，其中所述治疗剂或细胞毒剂选自抗代谢物、烷化剂、抗生素、生长因子、细胞因子、抗血管生成剂、抗有丝分裂剂、蒽环类、毒素和细胞凋亡剂。
147.—种分离的核酸，其编码选自下述的多肽包括重链可变结构域的多肽，其中所述重链可变结构域包括一种或多种如权利要求94中所述的⑶R-H1、⑶R-H2或⑶R-H3 ;包括轻链可变结构域的多肽，其中所述轻链可变结构域包括一种或多种如权利要求94中所述的raR-Ll、raR-L2或⑶R-L3 ;或两种多肽的组合。
148.一种载体，其包括根据权利要求147的分离的核酸。
149.权利要求148的载体，其中所述载体选自pcDNA、pTT、pTT3、pEFBOS、pBV、pJV、pHybE 和 pBJo
150.—种宿主细胞，其包括根据权利要求148和149任一项的载体。
151.根据权利要求150的宿主细胞，其中所述宿主细胞是原核细胞。
152.根据权利要求151的宿主细胞，其中所述宿主细胞是大肠杆菌。
153.根据权利要求152的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真核细胞。
154.根据权利要求153的宿主细胞，其中所述真核细胞选自原生生物细胞、动物细胞、植物细胞和真菌细胞。
155.根据权利要求154的宿主细胞，其中所述真核细胞是选自哺乳动物细胞、鸟类细胞和昆虫细胞的动物细胞。
156.根据权利要求155的宿主细胞，其中所述宿主细胞是CHO细胞。
157.根据权利要求155的宿主细胞，其中所述宿主细胞是COS细胞。
158.根据权利要求154的宿主细胞，其中所述真菌细胞是酿酒酵母。
159.根据权利要求155的宿主细胞，其中所述昆虫细胞是Sf9细胞。
160.—种产生结合人DLL4的结合蛋白的方法，其包括在足以产生结合人DLL4的结合蛋白的条件下，在培养基中培养权利要求150-159中任一项的宿主细胞。
161.—种结合蛋白，其根据权利要求160的方法产生。
162.一种结晶结合蛋白，其包括根据权利要求94-137任一项的结合蛋白，其中所述结合蛋白以晶体存在。
163.根据权利要求162的结晶结合蛋白，其中所述晶体是无载体的药学控释晶体。
164.根据权利要求162的结晶结合蛋白，其中所述结合蛋白具有比所述结合蛋白的可溶性配对物更长的体内半衰期。
165.根据权利要求162的结晶结合蛋白，其中所述结合蛋白保留生物学活性。
166.—种用于释放结合蛋白的组合物，所述组合物包括 (a)制剂，其中所述制剂包括根据权利要求162-165中任一项的结晶结合蛋白和成分； 和 (b)至少一种聚合载体。
167.根据权利要求166的组合物，其中所述聚合载体是选自下述中的一种或多种的聚合物聚丙烯酸、聚氰基丙烯酸酯、聚氨基酸、聚酐、聚酯肽、聚酯、聚乳酸、乳酸-乙醇酸共聚物或PLGA、聚b-羟基丁酸酯、聚己内酯、聚二氧杂环己酮、聚乙二醇、聚(羟丙基)甲基丙烯酰胺、聚有机磷腈、聚原酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、马来酐-烷基乙烯基醚共聚物、pluronic多元醇、清蛋白、藻酸盐、纤维素和纤维素衍生物、胶原、纤维蛋白、明胶、透明质酸、寡糖、糖胺聚糖、硫酸化多糖、掺合物及其共聚物。
168.根据权利要求166的组合物，其中所述成分选自清蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明胶、羟丙基-P -环糊精、甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇。
169.一种用于治疗哺乳动物的方法，其包括给哺乳动物施用有效量的根据权利要求·166的组合物的步骤。
170.—种药物组合物，其包含权利要求94-137中任一项的结合蛋白和药学可接受的载体。
171.权利要求170的药物组合物，其进一步包含用于治疗其中DLL4活性是有害的病症的至少一种另外的治疗剂。
172.权利要求172的药物组合物，其中所述另外的试剂选自血管发生抑制剂；激酶抑制剂；共刺激分子阻断剂；粘附分子阻断剂；抗细胞因子抗体或其功能片段；氨甲蝶呤；皮质类固醇；环孢菌素；雷帕霉素；FK506和非类固醇消炎药。
173.一种用于减少人DLL4活性的方法，其包括使人DLL4与权利要求94-137中任一项的结合蛋白接触，从而使得人DLL4活性减少。
174.一种用于减少患有其中DLL4活性是有害的病症的人受试者中的人DLL4活性的方法，其包括给所述人受试者施用权利要求94-137中任一项的结合蛋白，从而使得所述人受试者中的人DLL4活性减少。
175.一种用于治疗受试者的其中DLL4活性是有害的疾病或病症的方法，其通过下述实现给所述受试者施用权利要求94-137中任一项的结合蛋白，从而实现治疗。
176.权利要求176的方法，其中所述病症选自乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、口咽癌、下咽癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、胆囊癌、胆管癌、小肠癌、尿道癌、女性生殖道癌、男性生殖道癌、内分泌腺体癌、皮肤癌、血管瘤、黑色素瘤、肉瘤、脑瘤、神经癌、眼部肿瘤、脑膜癌、造血恶性肿瘤的实体肿瘤、肿瘤转移、眼部新生血管化、水肿、类风湿关节炎、多发性硬化症、动脉硬化斑块、克罗恩病、炎症性肠病、顽固性腹水、牛皮癣、结节病、动脉血管硬化、败血症、消化道溃疡、烧伤和胰腺炎、多囊性卵巢疾病(POD)、子宫内膜异位症、子宫肌瘤、良性前列腺增生和其他独立于和依赖于血管生成的疾病，其特征在于异常DLL4活性。
177.权利要求177的方法，其中所述病症是原发性和转移性癌症。
178.权利要求177的方法，其中所述尿道癌选自肾癌、膀胱癌和尿道上皮癌。
179.权利要求177的方法，其中所述的女性生殖道癌选自子宫颈癌、子宫癌、卵巢癌、绒毛膜癌和妊娠滋养细胞疾病。
180.权利要求177的方法，其中所述男性生殖道癌选自前列腺癌、精囊癌、睾丸癌和生殖细胞肿瘤。
181.权利要求177的方法，其中所述内分泌腺体癌选自甲状腺癌、肾上腺癌和脑垂体腺癌。
182.权利要求177的方法，其中所述肉瘤选自骨肉瘤/软组织肉瘤和卡波西氏肉瘤。
183.权利要求177的方法，其中所述脑膜癌选自星形胶质细胞瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、神经瘤、神经母细胞瘤,神经鞘瘤和脑膜瘤。
184.权利要求177的方法，其中所述造血恶性肿瘤的实体肿瘤是白血病、霍奇金氏白血病、非霍奇氏白血病、淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤。
185.权利要求83的方法，其中所述眼部新生血管化选自糖尿病失明、视网膜病变、年龄引起的黄斑变性和虹膜发红。
186.—种治疗患有其中DLL4是有害的病症的患者的方法，其包括在第二种试剂施用之前、同时或之后，施用权利要求94-137中任一项的结合蛋白的步骤，其中所述第二种试剂选自能够结合人VEGFR2的抗体或其片段；氨甲蝶呤；能够结合人TNF的抗体或其片段；皮质类固醇、环孢菌素、雷帕霉素、FK506和非类固醇消炎药。
全文摘要
描述了改进的DLL4结合蛋白，其包括抗体、CDR-嫁接的抗体、人抗体及其DLL4结合片段、具有高亲和力的结合DLL4的蛋白以及中和DLL4活性的DLL4结合蛋白。所述DLL4结合蛋白用于治疗或预防癌症和肿瘤以及特别用于治疗或预防肿瘤血管发生和/或其他血管发生依赖性疾病例如眼部新生血管化或血管发生非依赖性疾病(其特征在于异常DLL4表达或活性)例如自身免疫病其包括多发性硬化症。
文档编号C07K16/28GK102741288SQ201080049088
公开日2012年10月17日 申请日期2010年8月27日 优先权日2009年8月29日
发明者C-M·谢, E·R·博黑尔特, J·A·希克森, J·古, L·贝纳特伊尔, M·哈里斯, S·摩根-莱普, Y·库茨科瓦, Y·李, Z·刘 申请人:雅培制药有限公司