专利名称：去除牛血清白蛋白中脂肪酸的生产方法
技术领域：
本发明涉及一种生物制剂的提纯方法，具体说是涉及一种去除牛血清白蛋白提取过程中残留脂肪酸的生产方法。
背景技术：
现在的牛血清白蛋白广泛用于诊断试剂行业，生物工程、细胞培养等科学研究领域。制备牛血清白蛋白的方法很多，但在制备过程中均需添加辛酸钠作为牛血清白蛋白的保护剂，产品存在制备纯度不高，脂肪酸残留量过高的弊端。一些生物医学研究要求使用不含游离脂肪酸的牛血清白蛋白，否则牛血清白蛋白所含高浓度的脂肪酸将影响细胞培养、分化、代谢反应、生化测定等。例如，在3T3-L1脂肪细胞分化过程中不能使用普通牛血清白蛋白试剂，否则影响分化和细胞代谢状态；在测定培养的组织细胞释放的游离脂肪酸浓度时，也必须用不含脂肪酸的牛血清白蛋白，否则难以准确测定甘油三酯水解和游离脂肪酸释放。因此，对传统工艺提取的牛血清白蛋白进行脱脂肪酸处理可提高牛血清白蛋白的纯度，扩大牛血清白蛋白产品的应用范围。发明内容本发明的目的在于提供一种去除牛血清白蛋白中脂肪酸的生产方法， 它用料少，成本低，工艺简单，用以解决传统工艺提取的牛血清白蛋白中脂肪酸含量过高， 不能适用于细胞培养、生物工程学实验的难题，提高产品品质。本发明的技术方案如下本发明的生产方法由如下步骤组成A、溶解，称取牛血清白蛋白放到容器中，加入其重量10倍的蒸馏水溶解，充分搅拌至溶液澄清，溶解温度在23 27°C ；B、解析，用浓度为0. 2N的HC1，调节PH至3 3. 5，将装有充分溶解后的牛血清白蛋白溶液的容器移置冰水混合物中进行冰水浴或冷却至0 4°C，同时持续搅拌，维持 30min ；C、吸附，加入步骤A溶液重量的4 5%的活性炭，混勻，得到混悬液，将装混悬液的容器置于冰水混合物中进行冰水浴或冷却至0 4°C，同时持续搅拌，维持1小时，D、过滤，将混悬液用定性滤纸过滤，收集滤液，滤渣回收后再利用；E、浓缩，将上一步骤滤液用0. 2N的NaOH调节PH值至7. 0，然后用10000 20000
分子量的超滤装置进行超滤浓缩；F、冻干，将浓缩液按冻干曲线冻干，即将超滤后的浓缩液迅速冷冻至-40°c，持续 50 70min，升到_25°C，持续10 20小时，再缓慢升温至0°C，维持1 4小时，升温至保存温度20°C，保持30 60分钟，分装为成品。上述步骤C中的冰水混合物的温度为0 4°C。本发明的优点在于1、用料少、成本低、工艺简单。本方法利用少量的活性炭在 0 4°C温度下搅拌吸附1小时即可完成。2、可操作性强、易于工业化生产。3、所产的成品纯度高，脂肪酸含量极微，可以满足细胞培养、生物工程实验要求的标准。4、本方法的回收率高，回收率可以达到90%。5、成本低、经济效益显著。表1用本发明方法处理前、后质量标准对比表
权利要求
1.一种去除牛血清白蛋白中脂肪酸的生产方法，其特征在于它由如下步骤组成A、溶解，称取牛血清白蛋白放到容器中，加入其重量10倍的蒸馏水溶解，充分搅拌至溶液澄清，溶解温度在23 27°C ；B、解析，用浓度为0.2N的HCl，调节PH至3 3. 5，将装有充分溶解后的牛血清白蛋白溶液的容器置于冰水混合物中进行冰水浴或冷却至0 4°C，同时持续搅拌，维持30min ；C、吸附，加入步骤A溶液重量的4 5%的活性炭，混勻，得到混悬液，将装混悬液的容器置于冰水混合物中进行冰水浴或冷却至0 4°C，同时持续搅拌，维持1小时；D、过滤，将混悬液用定性滤纸过滤，收集滤液，滤渣回收；E、浓缩，将上一步骤的滤液用0.2N的NaOH调节PH值至7. 0，然后用10000 20000分子量的超滤装置进行超滤浓缩；F、冻干，将浓缩液按冻干曲线冻干，即将超滤后的浓缩液迅速冷冻至-40V，持续50 70min，升到_25°C，持续10 20小时，再缓慢升温至0°C，维持1 4小时，升温至保存温度20°C，保持30 60分钟，分装为成品。
2.根据权利要求1所述的去除牛血清白蛋白中脂肪酸的生产方法，其特征在于它的步骤C中的冰水混合物的温度为0 4°C。
全文摘要
本发明公开了一种去除牛血清白蛋白中脂肪酸的生产方法，它由如下步骤组成溶解，称取牛血清白蛋白加入其重量10倍的蒸馏水溶解，温度在23～27℃；解析，用浓度为0.2N的HCl，调节PH至3～3.5，将溶液进行冷却；吸附，加入溶液重量的4～5％的活性炭，将混悬液冰水浴，搅拌，过滤，滤渣回收后再利用；浓缩，滤液用0.2N的NaOH调节pH值至7.0，然后20000分子量以下的超滤装置进行超滤浓缩；冻干，将浓缩液按冻干曲线冻干，分装为成品。本方法用料少、成本低、工艺简单，可操作性强、易于工业化生产。成品纯度高，脂肪酸含量极微，可以满足细胞培养、生物工程实验要求的标准。本方法的回收率高，回收率可以达到90％。
文档编号C07K1/22GK102241765SQ20111012436
公开日2011年11月16日 申请日期2011年5月18日 优先权日2011年5月18日
发明者刘雪梅, 王欣, 陈志强 申请人:内蒙古奇特生物高科技术(集团)有限公司