专利名称：一种提取纯化银椴苷的方法
技术领域：
本发明属于天然植物提纯制备领域，具体涉及一种提取纯化银椴苷的方法。
背景技术：
银椴苷(Tiliroside)，又名山奈酚-3-0-i3-D_(6’，-0-反式-对羟基桂皮酰基) 吡喃葡萄糖苷，是一种黄酮苷类化合物，为黄色针晶，mp. 246 248°C，分子式C3tlH26O13，分子量594.52。研究显示银椴苷在植物中分布较为普遍，在结香花、地桃花、巴西甘薯叶、 蜀葵花、白头翁地上部分等植物中均有分离得到，其中结香花中含量最高，高达1. 56%。据报道，银椴苷具有较强的抗氧化活性、清除自由基活性和抗炎活性，对补体系统的传统途径显示出非常有潜力的抗补体活性(IC5Q=5.4X1(^M)，其活性甚至比公认的补体系统抑制剂迷迭香酸活性还强。另有文献报道银椴苷及全乙酰化衍生物均具有一定的对白血病癌细胞的毒性作用。银椴苷还具有强的护肝作用。筱雅研究了从意大利蜡菊Widrj^/ i tali cum {Roth) Q. Don Fil中分得的银椴苷和鼠尾草黄素对由铜诱导的人LDL氧化改变的抑制作用，发现两种成分能够抑制人低密度脂蛋白氧化。银椴苷的提取分离方法一般都采用95%乙醇回流提取、浓缩后用水混悬，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等非极性溶剂萃取，萃取部分反复进行硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等多步骤，分离得到银椴苷，这些分离纯化工艺都需经过反复柱层析步骤，存在分离时间长、重现性差、使用大量有毒溶剂、不易工业化等缺点。中国专利(公开号 CN1733788A) “一种从结香花中提取分离银椴苷的方法”，采用60-100%甲醇或乙醇溶液浸提或回流提取，提取液水洗后用脂溶性溶剂回流萃取，得到的滤饼重结晶得到产品，用到毒害性有机溶剂，造成溶剂残留，产品质量差。
发明内容
本发明的目的在于提供一种成本低、工艺简单、易于工业化生产的银椴苷的提取纯化方法。为了实现上述目的，本发明提供了一种提取纯化银椴苷的方法，该方法包括以下步骤
(1)银椴苷的提取
取结香花粉碎后加沸水微波提取10-60分钟，其中料液比为1:8-15 (kg/L)，提取2-4 次，过滤，得银椴苷提取液；
(2)银椴苷提取液的脱色
将银椴苷提取液加入总液量2%-6%的硅藻土，搅拌，过滤，得银椴苷脱色液；
(3)银椴苷的分离
将银椴苷脱色液用大孔吸附树脂柱以0. 5-2. OBV/h的流速吸附，然后先用水洗脱，再用体积百分比为20%-50%的乙醇溶液洗脱，采用TLC跟踪检测，收集银椴苷洗脱液；
将洗脱液浓缩至无醇味，采用聚酰胺柱层析以甲醇水混合溶液进行梯度洗脱，用TLC快速定性检测，收集相应的银椴苷溶液； (4)结晶
将银椴苷溶液浓缩至小体积，放置结晶，加乙醇水溶液溶解，过滤，重结晶3-5次，得到纯度95%以上的银椴苷晶体。步骤(2)中大孔吸附树脂可选自AB-8、S-8或ZTC-I型大孔吸附树脂中的一种或几种。步骤(2 )中甲醇水混合溶液梯度洗脱顺序依次为2-3BV30%-40%甲醇 —3-4BV50%-60%甲醇一80%-90%甲醇洗脱有效成分。步骤(4)中乙醇水溶液为60%_80%乙醇溶液。本发明的有益技术效果是本发明采用微波提取银椴苷粗提取物，采用大孔树脂和聚酰胺树脂分离纯化，方法简单，适合大规模工业化生产。
具体实施例方式实施例1
取结香花1kg，加10倍量沸水微波提取30分钟，滤出液体，再加10倍量沸水微波提取 30分钟，合并提取液加入4%的硅藻土，搅拌，过滤，滤液加入大孔吸附树脂柱(装有250gS-8 大孔吸附树脂)以1. 5BV/h流速进行吸附，先以水洗至无色，再用30%乙醇溶液洗脱，采用 TLC跟踪检测，收集洗脱液浓缩至无醇味，加入聚酰胺树脂柱(装有600g聚酰胺树脂，)，依次用2BV30%甲醇、3BV60%甲醇和85%甲醇洗脱，TLC快速定性检测，收集相应的银椴苷溶液，浓缩至小体积，放置结晶，滤出结晶，用60%乙醇回流溶解，过滤，重结晶4次，滤出真空低温干燥即得银椴苷晶体11.84g，经HPLC法检测(色谱条件:C18 ；流动相甲醇水=7:3 ； 检测波长2Mnm ；流速0. 6ml/min)其含量为96. 4%。实施例2:
取结香花1kg，加12倍量沸水微波提取50分钟，滤出液体，再加12倍量沸水微波提取50分钟，合并提取液加入m的硅藻土，搅拌，过滤，滤液加入大孔吸附树脂柱(装有 250gAB-8大孔吸附树脂)以2. OBV/h流速进行吸附，先以水洗至无色，再用20%乙醇溶液洗脱，采用TLC跟踪检测，收集洗脱液浓缩至无醇味，加入聚酰胺树脂柱(装有600g聚酰胺树脂)，依次用2BV30%甲醇、3BV50%甲醇和90%甲醇洗脱，TLC快速定性检测，收集相应的银椴苷溶液，浓缩至小体积，放置结晶，滤出结晶，用70%乙醇回流溶解，过滤，重结晶3次，滤出真空低温干燥即得银椴苷晶体11. 39g，经HPLC法检测(色谱条件C18 ；流动相甲醇水 =7:3 ；检测波长:254nm ；流速0. 6ml/min)其含量为96. 2%。实施例3:
取结香花1. 5kg,加8倍量沸水微波提取20分钟，滤出液体，再加8倍量沸水微波提取 20分钟，如此反复提取3次，合并提取液加入3%的硅藻土，搅拌，过滤，滤液加入大孔吸附树脂柱(装有370gZTC-l大孔吸附树脂)以0. 5BV/h流速进行吸附，先以水洗至无色，再用 30%乙醇溶液洗脱，采用TLC跟踪检测，收集洗脱液浓缩至无醇味，加入聚酰胺树脂柱(装有 900g聚酰胺树脂)，依次用:3BV40%甲醇、4BV60%甲醇和80%甲醇洗脱，TLC快速定性检测， 收集相应的银椴苷溶液，浓缩至小体积，放置结晶，滤出结晶，用75%乙醇回流溶解，过滤， 重结晶5次，滤出真空低温干燥即得银椴苷晶体17. 22g，经HPLC法检测(色谱条件C18 ；流动相甲醇水=7:3 ；检测波长:254nm ；流速0. 6ml/min)其含量为95. 8%。实施例4:
取结香花^g，加15倍量沸水微波提取10分钟，滤出液体，再加15倍量沸水微波提取 10分钟，，如此反复提取4次，合并提取液加入5%的硅藻土，搅拌，过滤，滤液加入大孔吸附树脂柱(装有500gS-8大孔吸附树脂)以1.0BV/h流速进行吸附，先以水洗至无色，再用 40%乙醇溶液洗脱，采用TLC跟踪检测，收集洗脱液浓缩至无醇味，加入聚酰胺树脂柱(装有 600g聚酰胺树脂)，依次用:3BV30%甲醇、3BV50%甲醇和80%甲醇洗脱，TLC快速定性检测， 收集相应的银椴苷溶液，浓缩至小体积，放置结晶，滤出结晶，用80%乙醇回流溶解，过滤， 重结晶4次，滤出真空低温干燥即得银椴苷晶体22. 97g，经HPLC法检测(色谱条件C18 ；流动相甲醇水=7:3 ；检测波长2Mnm ；流速0. 6ml/min)其含量为96. 1%。实施例5:
取结香花2. 5kg,加9倍量沸水微波提取60分钟，滤出液体，再加9倍量沸水微波提取 60分钟，如此反复提取3次，合并提取液加入6%的硅藻土，搅拌，过滤，滤液加入大孔吸附树脂柱(装有625gAB-8大孔吸附树脂)以1. 5BV/h流速进行吸附，先以水洗至无色，再用50%乙醇溶液洗脱，采用TLC跟踪检测，收集洗脱液浓缩至无醇味，加入聚酰胺树脂柱(装有1. 5kg 聚酰胺树脂)，依次用2BV40%甲醇、4BV60%甲醇和90%甲醇洗脱，TLC快速定性检测，收集相应的银椴苷溶液，浓缩至小体积，放置结晶，滤出结晶，用65%乙醇回流溶解，过滤，重结晶5 次，滤出真空低温干燥即得银椴苷晶体29. 54g,经HPLC法检测(色谱条件C18 ；流动相甲醇水=7:3 ；检测波长:254nm ；流速0. 6ml/min)其含量为96. 7%。实施例6:
取结香花^g，加10倍量沸水微波提取40分钟，滤出液体，再加10倍量沸水微波提取 40分钟，如此反复提取4次，合并提取液加入3%的硅藻土，搅拌，过滤，滤液加入大孔吸附树脂柱(装有1. 2kggZTC-l大孔吸附树脂)以1. OBV/h流速进行吸附，先以水洗至无色，再用 40%乙醇溶液洗脱，采用TLC跟踪检测，收集洗脱液浓缩至无醇味，加入聚酰胺树脂柱(装有 3kg聚酰胺树脂)，依次用:3BV40%甲醇、4BV55%甲醇和85%甲醇洗脱，TLC快速定性检测，收集相应的银椴苷溶液，浓缩至小体积，放置结晶，滤出结晶，用80%乙醇回流溶解，过滤，重结晶3次，滤出真空低温干燥即得银椴苷晶体59. ^g，经HPLC法检测(色谱条件C18 ；流动相甲醇水=7:3 ；检测波长:254nm ；流速0. 6ml/min)其含量为96. 3%。
权利要求
1.一种提取纯化银椴苷的方法，其特征在于(1)银椴苷的提取取结香花粉碎后加沸水微波提取10-60分钟，其中料液比为1:8-15 (kg/L)，提取2-4 次，过滤，得银椴苷提取液；(2)银椴苷提取液的脱色将银椴苷提取液加入总液量2%-6%的硅藻土，搅拌，过滤，得银椴苷脱色液；(3)银椴苷的分离将银椴苷脱色液用大孔吸附树脂柱以0. 5-2. OBV/h的流速吸附，然后先用水洗脱，再用体积百分比为20%-50%的乙醇溶液洗脱，采用TLC跟踪检测，收集银椴苷洗脱液；将洗脱液浓缩至无醇味，采用聚酰胺柱层析以甲醇水混合溶液进行梯度洗脱，用TLC 快速定性检测，收集相应的银椴苷溶液；(4)结晶将银椴苷溶液浓缩至小体积，放置结晶，加乙醇水溶液溶解，过滤，重结晶3-5次，得到纯度95%以上的银椴苷晶体。
2.如权利要求1所述的提取纯化银椴苷的方法，其特征在于所述步骤(2)中大孔吸附树脂可选自AB-8、S-8或ZTC-I型大孔吸附树脂中的一种或几种。
3.如权利要求1所述的提取纯化银椴苷的方法，其特征在于所述步骤(2)中甲醇水混合溶液梯度洗脱顺序依次为2-;3BV30%-40%甲醇一3-4BV50%-60%甲醇一80%-90%甲醇洗脱有效成分。
4.如权利要求1所述的提取纯化银椴苷的方法，其特征在于所述步骤(4)中乙醇水溶液为60%-80%乙醇溶液。
全文摘要
本发明公开了一种提取纯化银椴苷的方法，将结香花粉碎，微波提取银椴苷，将银椴苷提取液加硅藻土脱色，脱色液用大孔吸附树脂柱以20-50%乙醇溶液洗脱，洗脱液浓缩至无醇味，再用聚酰胺柱层析分离，可得纯度95%以上的银椴苷产品。本发明包括结香中银椴苷的提取、大孔树脂和聚酰胺柱分离、结晶等工艺，该方法具有成本低、操作简单、易于产业化等优点。
文档编号C07H17/07GK102304161SQ20111018774
公开日2012年1月4日 申请日期2011年7月6日 优先权日2011年7月6日
发明者刘东锋, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司