专利名称：一种从空柄假牛肝中提取空柄牛肝素a的方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及一种从空柄假牛肝中提取空柄牛肝素A的方法。
背景技术：
空柄牛肝素A是一种二萜类化合物，分子式为C3tlH42O8,分子量为530. 66，主要存在于牛肝菌科空柄假牛肝的子实体中。药理研究表明，空柄牛肝素A具有抗真菌活性。目前，对空柄牛肝素A的研究较少，经检索，尚未发现适宜于大量制备空柄牛肝素 A的工业化方法的公开报道。
发明内容
针对上述情况，本发明的目的是提供一种从空柄假牛肝中提取空柄牛肝素A的方法。本发明是通过如下技术方案实现的
(1)将空柄假牛肝原料粉碎成粗粉，以75-90%乙醇为提取溶媒进行回流提取1-2次，过滤得到提取液；
(2)提取液加活性炭搅拌，40-60°C温度下保温脱色20-60min，过滤，得到脱色液；
(3)脱色液浓缩至相对密度为1.05-1.12，通过3000-10000道尔顿的中空纤维超滤膜， 操作压力为0. 1-0. 3MPa ；
(4)透过液经预处理好的大孔吸附树脂吸附，先用水和15-30%乙醇溶液洗脱，再用 3-6BV60-75%乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得到粗品；
(5)粗品用甲醇溶解，注入制备型高效液相色谱仪，紫外在线监测，检测波长209nm，收集目标流分，真空干燥得到空柄牛肝素A。所述步骤(2)中活性炭为药用活性炭，加入量为药材量的0. 5-洲。所述步骤(4)中大孔吸附树脂型号可选AB-8、HP20、HZ841或LDA-10型等。所述步骤(5)中流动相为乙腈-水，体积比为(48-55) (52-45)，流速20-50ml/
mirio本发明的有益效果是采用大孔树脂吸附洗脱，提高了产品的纯度；采用反相高效液相色谱法精制纯化，纯度高达98%以上，所得产品可作为对照品使用，同时可进行大量制备；本发明工艺稳定，可用于工业化生产。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明进行进一步说明。实施例1:
将空柄假牛肝原料粉碎，称取lOOOg，加入相当于原料量3倍的80%乙醇溶液回流提取 2次，每次池，过滤得到提取液，加活性炭搅拌，45°C温度下保温脱色40min，过滤，得到脱色液，浓缩至相对密度为1. 12，通过10000道尔顿的中空纤维超滤膜，操作压力为0. 3MPa，透过液上AB-8大孔吸附树脂柱，依次用水洗脱至洗脱液流出无色、用20%乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，最后用3BV75%乙醇溶液洗脱，收集75%乙醇洗脱液，浓缩干燥得到粗品。将空柄牛肝素A粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，乙腈-水(48:52) 为流动相，流速35ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长209nm，连续进样，收集含有空柄牛肝素A的高纯度流分，浓缩干燥得产品liang，含量为98. 6%。实施例2:
将空柄假牛肝原料粉碎，称取lOOOg，加入相当于原料量5倍的75%乙醇溶液浸回流提取2次，每次lh，过滤得到提取液，加活性炭搅拌，50°C温度下保温脱色40min，过滤，得到脱色液，浓缩至相对密度为1. 10，通过6000道尔顿的中空纤维超滤膜，操作压力为0. 3MPa，透过液上HZ841大孔吸附树脂柱，依次用水洗脱至洗脱液流出无色、用30%乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，最后用5BV75%乙醇溶液洗脱，收集70%乙醇洗脱液，浓缩干燥得到粗品。将空柄牛肝素A粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，乙腈-水(48:52) 为流动相，流速20ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长209nm，连续进样，收集含有空柄牛肝素A的高纯度流分，浓缩干燥得产品107mg，含量为98. 9%。实施例3:
将空柄假牛肝原料粉碎，称取lOOOg，加入相当于原料量4倍的90%乙醇溶液回流提取 2次，每次lh，过滤得到提取液，加活性炭搅拌，40°C温度下保温脱色60min，过滤，得到脱色液，浓缩至相对密度为1.08，通过3000道尔顿的中空纤维超滤膜，操作压力为0. 2MPa，透过液上HP20大孔吸附树脂柱，依次用水洗脱至洗脱液流出无色、用20%乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，最后用5BV65%乙醇溶液洗脱，收集65%乙醇洗脱液，浓缩干燥得到粗品。将空柄牛肝素A粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，乙腈-水(50 50 )为流动相，流速50ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长209nm，连续进样，收集含有空柄牛肝素A的高纯度流分，浓缩干燥得产品14;3mg，含量为98. 4%。实施例4:
将空柄假牛肝原料粉碎，称取lOOOg，加入相当于原料量3倍的80%乙醇溶液回流提取 2次，每次lh，过滤得到提取液，加活性炭搅拌，40°C温度下保温脱色50min，过滤，得到脱色液，浓缩至相对密度为1. 10，通过3000道尔顿的中空纤维超滤膜，操作压力为0. 3MPa，透过液上HP20大孔吸附树脂柱，依次用水洗脱至洗脱液流出无色、用15%乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，最后用5BV65%乙醇溶液洗脱，收集65%乙醇洗脱液，浓缩干燥得到粗品。将空柄牛肝素A粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，乙腈-水(49:51)为流动相，流速45ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长209nm，连续进样，收集含有空柄牛肝素A的高纯度流分，浓缩干燥得产品120mg，含量为98. 0%。实施例5:
将空柄假牛肝原料粉碎，称取lOOOg，加入相当于原料量6倍的75%乙醇溶液回流提取2h，过滤得到提取液，加活性炭搅拌，60°C温度下保温脱色20min，过滤，得到脱色液，浓缩至相对密度为1.05，通过3000道尔顿的中空纤维超滤膜，操作压力为0. IMPa，透过液上 LDA-10大孔吸附树脂柱，依次用水洗脱至洗脱液流出无色、用30%乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，最后用6BV60%乙醇溶液洗脱，收集60%乙醇洗脱液，浓缩干燥得到粗品。将空柄牛肝素A粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，乙腈-水(52:48)为流动相，流速35ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长209nm，连续进样，收集含有空柄牛肝素A的高纯度流分，浓缩干燥得产品156mg，含量为98. 7%。
权利要求
1.一种从空柄假牛肝中提取空柄牛肝素A的方法，其特征在于包括以下步骤(1)将空柄假牛肝原料粉碎成粗粉，以75-90%乙醇为提取溶媒进行回流提取1-2次，过滤得到提取液；(2)提取液加活性炭搅拌，40-60°C温度下保温脱色20-60min，过滤，得到脱色液；(3)脱色液浓缩至相对密度为1.05-1.12，通过3000-10000道尔顿的中空纤维超滤膜， 操作压力为0. 1-0. 3MPa ；(4)透过液经预处理好的大孔吸附树脂吸附，先用水和15-30%乙醇溶液洗脱，再用 3-6BV60-75%乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得到粗品；(5)粗品用甲醇溶解，注入制备型高效液相色谱仪，紫外在线监测，检测波长209nm，收集目标流分，真空干燥得到空柄牛肝素A。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中活性炭为药用活性炭，加入量为药材量的0. 5-洲。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(4)中大孔吸附树脂型号可选 AB-8、HP20、HZ841 或 LDA-10 型等。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(5)中高效液相色谱流动相为乙腈-水，体积比为(48-55) (52-45)，流速 20_50ml/min。
全文摘要
本发明提供一种从空柄假牛肝中提取空柄牛肝素A的方法，包括以下步骤将空柄假牛肝原料粉碎成粗粉，加入溶媒提取，提取液中加活性炭脱色，脱色液通过3000-10000道尔顿的超滤膜，透过液经预处理好的大孔吸附树脂吸附，乙醇水溶液洗脱，得到的洗脱液浓缩干燥得到粗品，采用制备型高效液相色谱分离得到空柄牛肝素A。本发明工艺简单，得率高，产品质量好、纯度高。
文档编号C07C69/593GK102503822SQ20111030372
公开日2012年6月20日 申请日期2011年10月10日 优先权日2011年10月10日
发明者万冬梅, 刘东锋 申请人:南京泽朗医药科技有限公司