专利名称：一种纯化紫穗槐螺酮的方法
技术领域：
本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种采用高速逆流色谱技术纯化紫穗槐螺酮方法。
背景技术：
紫穗槐螺酮来源于豆科紫穗槐Ufflor/^a fruticosa Z.)的干燥叶。紫穗槐原产美国。广布于中国东北、华北、河南、华东、湖北、四川等省(区)，是黄河和长江流域很好的水土保持植物。紫穗槐叶主要有效成分为黄酮类化合物，以紫穗槐螺酮单体为主要活性成分。紫穗槐螺酮具有细胞毒活性，有显著的选择性细胞毒活性，对KB和RPMI-7951细胞的ED5tl分别为(μ g/ml)0. 58和0. 61。对TPA诱导的EB病毒早期抗原(EBV-EA)有显著抑制作用，其活性于VA酸和甘草次酸相当。目前，尚未发现制备高含量紫穗槐螺酮的方法报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种纯化紫穗槐螺酮方法。为了实现上述目的，本发明的技术方案如下
一种纯化紫穗槐螺酮的方法，其特征在于取紫穗槐叶粉碎，加7-10倍量70-80%乙醇回流提取2-3次，提取液静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩，注入高速逆流色谱仪，根据紫外检测器图谱收集目标成分，浓缩，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥即得紫穗槐螺酮。所述的回流温度为70-100°C。所述的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统体积比为3-5 2-4 4-7 2-5,上相为固定相，下相为流动相。本发明优势在于采用高速逆流色谱分离，分离过程无产品损失，制备周期短，制备量大，易操作，克服了传统填充柱分离过程中样品死吸附、工艺繁琐、重现性差的技术缺陷。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1:
取紫穗槐叶粉碎，取^g，加7倍量80%乙醇溶液，在70°C温度下回流提取3次，合并两次提取液，静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩作为样品溶液，取正己烷、 乙酸乙酯、甲醇、水按体积比为3:2:4:2混合，静置分层，以上相为固定相，下相为流动相， 取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为700rpm，同时以lOml/min的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为2ml/min，注入样品溶液，紫外检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥得到紫穗槐螺酮6. 6g，经HPLC检测，含量为95. 4%。实施例2:
取紫穗槐叶粉碎，取^g，加8倍量75%乙醇溶液，在80°C温度下回流提取3次，合并两次提取液，静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩作为样品溶液，取正己烷、 乙酸乙酯、甲醇、水按体积比为5:4:7:5混合，静置分层，以上相为固定相，下相为流动相， 取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为800 rpm,同时以lOml/min 的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为3ml/min，注入样品溶液，紫外检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥得到紫穗槐螺酮6. 8g，经HPLC检测，含量95. 1%。实施例3:
取紫穗槐叶粉碎，取^g，加8倍量75%乙醇溶液，在100°C温度下回流提取2次，合并两次提取液，静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩作为样品溶液，取正己烷、 乙酸乙酯、甲醇、水按体积比为3:4:7:2混合，静置分层，以上相为固定相，下相为流动相， 取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为750rpm，同时以lOml/min 的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为1. 5ml/min，注入样品溶液，紫外检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥得到紫穗槐螺酮7. 2g，经HPLC检测，含量93. 8%。实施例4:
取紫穗槐叶粉碎，取10kg，加10倍量75%乙醇溶液，在70°C温度下回流提取3次，合并两次提取液，静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩作为样品溶液，取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比为3:4:6:3混合，静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为800rpm，同时以IOml/ min的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为2. 5ml/min，注入样品溶液，紫外检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥得到紫穗槐螺酮13. Ig,经HPLC检测，含量97. 8%。实施例5:
取紫穗槐叶粉碎，取15kg，加10倍量70%乙醇溶液，在100°C温度下回流提取2次，合并两次提取液，静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩作为样品溶液，取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比为4:3:5:2混合，静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为700rpm，同时以IOml/ min的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为2ml/min，注入样品溶液， 紫外检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥得到紫穗槐螺酮20. 3g，经HPLC检测，含量为94. 4%。
权利要求
1.一种纯化紫穗槐螺酮的方法，其特征在于取紫穗槐叶粉碎，加7-10倍量70-80%乙醇回流提取2-3次，提取液静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩，注入高速逆流色谱仪，根据紫外检测器图谱收集目标成分，浓缩，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥即得紫穗槐螺酮。
2.根据权利要求1所述纯化紫穗槐螺酮的方法，其特征在于所述的回流温度为 70-100°C。
3.根据权利要求1所述纯化紫穗槐螺酮的方法，其特征在于所述的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统体积比为3-5:2-4:4-7:2-5，上相为固定相，下相为流动相。
全文摘要
本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种纯化紫穗槐螺酮的方法，其特征在于取紫穗槐叶粉碎，加7-10倍量70-80%乙醇回流提取2-3次，提取液静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩，注入高速逆流色谱仪，根据紫外检测器图谱收集目标成分，浓缩，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥即得紫穗槐螺酮。采用本发明制备紫穗槐螺酮，工艺简单易操作，收率高，产品含量高，适合规模化制备。
文档编号C07D493/20GK102391282SQ20111030371
公开日2012年3月28日 申请日期2011年10月10日 优先权日2011年10月10日
发明者万冬梅, 刘东锋 申请人:南京泽朗医药科技有限公司