专利名称：一种分离纯化穗花杉双黄酮的方法
技术领域：
本发明涉及一种分离纯化穗花杉双黄酮的方法，特别是涉及一种高速逆流色谱从卷柏中分离纯化穗花杉双黄酮的方法。
背景技术：
穗花杉双黄酮是一种从卷柏科植物卷柏klaginella tamariscina(Beauv.) Spring 或垫状卷柏 Selaginella pulvinata(Hook, et Grev.)Maxim.中分离得到的双黄酮类化合物。卷柏在我国主要分布在广东、广西、福建、台湾、浙江、江苏、江西、湖南等地。穗花杉双黄酮具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、血管舒张等生理活性，是卷柏类药材的特征性成分。魏丽娜建立了初步纯化提取物的两步沉淀工艺，采用了制备型高效液相色谱、硅胶柱层析和低压柱层析对粗品进行了分离纯化。在中国申请号CN200410034002. 9公开的方法为，回流提取、真空浓缩、柱吸附纯化。在中国申请号CN200910012091.X用有机溶剂和/或水进行提取并且采用柱层析分离法进行分离得到的95%以上的穗花杉双黄酮。在中国申请号 CN200910064058. 1公开了一种卷柏提取物及其提取方法和应用，该方法将卷柏全草用溶剂重复冷浸2-4次，每次6-8天，过滤，合并滤液，用萃取剂萃取2-4次，得有效部位；将有效部位进行硅胶常压柱O00-300目)层析，经洗脱，TLC检测合并含有穗花衫双黄酮部分，在 Sephadex LH-20柱色谱以丙酮进行洗脱，得到单体化合物穗花衫双黄酮，得到的穗花杉双黄酮能降低CCl4小鼠肝损伤模型小鼠的血清谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)水平， 达到保肝降酶的作用。但是以上这些方法总结归纳起来主要采用柱色谱法，包括硅胶柱、 大孔吸附树脂柱、凝胶柱，这些柱色谱使用固体填料，易产生不可逆吸附，样品易损失、速度慢、分离步骤繁琐。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种分离纯化穗花杉双黄酮的方法，将卷柏提取物采用高速逆流色谱法进行分离纯化，制得高纯度的穗花杉双黄酮。本发明的技术方案是一种分离纯化穗花杉双黄酮的方法，其特征在于将卷柏加水或其他极性溶剂回流提取，所得到的提取物采用石油醚、乙酸乙酯、丙酮和水的混合溶液作为溶剂体系，经制备型高速逆流色谱仪进行分离纯化，即得穗花杉双黄酮。所述水或其他极性溶剂为水、甲醇、丙酮、乙醇中的一种或其中两种的混合溶液。所述溶剂体系由石油醚、乙酸乙酯、丙酮、水组成，组成比例为 0.5-3 4-6 4-6 1-4。所述高速逆流色谱仪为制备型TBE-1000A高速逆流色谱仪，主机转速为500rpm， 流速为 5. 0-10. Oml/min。本发明的有益效果是本发明采用高速逆流色谱法对卷柏提取物进行分离纯化， 得到高纯度的穗花杉双黄酮，用高速逆流色谱法制备穗花杉双黄酮可连续、高效、快速的液液分配色谱分离，分离量大、重复性好、样品无损失、分离环境缓和、节约溶剂，且制备工艺简单，易操作，适合于生产工艺放大。
具体实施例方式实施例1 (1)卷柏粗提物的制备取卷柏Ikg粉碎成粗粉，置于15L的提取罐中，用10L70%乙醇回流提取3次，每次 Ih,合并提取液，浓缩至膏状，得到卷柏粗提物。(2)分离纯化将体积比为1 :5:6: 1的石油醚、乙酸乙酯、丙酮和水置于分液漏斗中，振摇均勻，使两相达到平衡，静置分层后分离，上相为固定相，下相为流动相，分别对其超声脱气 30分钟后，冷却备用；称取IOOmg卷柏粗提物溶解于等体积的上相和下相的溶剂(各IOml) 中，过滤，得样品溶液；采用制备型TBE-1000A高速逆流色谱仪，将配制好的固定相溶剂充满聚四氟乙烯柱(柱容量为1000ml)，然后开启高速逆流色谱仪，调整主机转速为500rpm， 以5. Oml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样80ml ； 收集含穗花杉双黄酮的组分峰，冷冻干燥，得到穗花杉双黄酮固体，经HPLC分析，其纯度达到98%以上。实施例2:(1)卷柏粗提物的制备取卷柏Ikg粉碎成粗粉，置于15L的提取罐中，用9L80%丙酮回流提取2次，每次 Ih,合并提取液，浓缩至膏状，得到卷柏粗提物。(2)分离纯化将体积比为3 :4:6: 3的石油醚、乙酸乙酯、丙酮和水置于分液漏斗中，振摇均勻，使两相达到平衡，静置分层后分离，上相为固定相，下相为流动相，分别对其超声脱气 30分钟后，冷却备用；称取IOOmg卷柏粗提物溶解于等体积的上相和下相的溶剂(各IOml) 中，过滤，得样品溶液；采用制备型TBE-1000A高速逆流色谱仪，将配制好的固定相溶剂充满聚四氟乙烯柱(柱容量为1000ml)，然后开启高速逆流色谱仪，调整主机转速为500rpm， 以6. Oml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样80ml ； 收集含穗花杉双黄酮的组分峰，冷冻干燥，得到穗花杉双黄酮固体，经HPLC分析，其纯度达到98%以上。实施例3 (1)卷柏粗提物的制备取卷柏Ikg粉碎成粗粉，置于15L的提取罐中，用12L75%乙醇回流提取2次，每次 Ih,合并提取液，浓缩至膏状，得到卷柏粗提物。(2)分离纯化将体积比为0.5 :4:5: 2的石油醚、乙酸乙酯、丙酮和水置于分液漏斗中，振摇均勻，使两相达到平衡，静置分层后分离，上相为固定相，下相为流动相，分别对其超声脱气30分钟后，冷却备用；称取IOOmg卷柏粗提物溶解于等体积的上相和下相的溶剂(各 IOml)中，过滤，得样品溶液；采用制备型TBE-1000A高速逆流色谱仪，将配制好的固定相溶剂充满聚四氟乙烯柱(柱容量为1000ml)，然后开启高速逆流色谱仪，调整主机转速为 500rpm,以10. Oml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样80ml ；收集含穗花杉双黄酮的组分峰，冷冻干燥，得到穗花杉双黄酮固体，经HPLC分析，其纯度达到98%以上。实施例4 (1)卷柏粗提物的制备取卷柏Ikg粉碎成粗粉，置于15L的提取罐中，用10L60%甲醇回流提取3次，每次 Ih,合并提取液，浓缩至膏状，得到卷柏粗提物。(2)分离纯化将体积比为2 :6:4: 4的石油醚、乙酸乙酯、丙酮和水置于分液漏斗中，振摇均勻，使两相达到平衡，静置分层后分离，上相为固定相，下相为流动相，分别对其超声脱气 30分钟后，冷却备用；称取IOOmg卷柏粗提物溶解于等体积的上相和下相的溶剂(各IOml) 中，过滤，得样品溶液；采用制备型TBE-1000A高速逆流色谱仪，将配制好的固定相溶剂充满聚四氟乙烯柱(柱容量为1000ml)，然后开启高速逆流色谱仪，调整主机转速为500rpm， 以8. Oml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样80ml ； 收集含穗花杉双黄酮的组分峰，冷冻干燥，得到穗花杉双黄酮固体，经HPLC分析，其纯度达到98%以上。
权利要求
1.一种分离纯化穗花杉双黄酮的方法，其特征在于将卷柏加水或其他极性溶剂回流提取，所得到的提取物采用石油醚、乙酸乙酯、丙酮和水的混合溶液作为溶剂体系，经制备型高速逆流色谱仪进行分离纯化，即得穗花杉双黄酮。
2.根据权利要求1所述的一种分离纯化穗花杉双黄酮的方法，其特征在于溶剂体系由石油醚、乙酸乙酯、丙酮、水组成，组成比例为0.5-3 4-6 4-6 1-4。
3.根据权利要求1所述的一种分离纯化穗花杉双黄酮的方法，其特征在于所述高速逆流色谱仪为制备型TBE-1000A高速逆流色谱仪，主机转速为500rpm，流速为5. 0-10. Oml/mirio
全文摘要
本发明属于中药制药领域，涉及一种分离纯化穗花杉双黄酮的方法，特别是涉及一种利用高速逆流色谱法富集纯化穗花杉双黄酮的方法，其特点是采用两相互不混溶的溶剂系统在支撑管内高速行星运动的方式下进行分离纯化，适用于各种型号的逆流色谱仪分离穗花杉双黄酮，具有无不可逆吸附、样品无损失、无污染、高效快速、回收率高、分离环境缓和、产品纯度高和大制备量分离的优点，适合工业化生产。
文档编号C07D311/40GK102229590SQ201110117938
公开日2011年11月2日 申请日期2011年5月6日 优先权日2011年5月6日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司