专利名称：一种香蜂草苷的制备方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离领域，涉及一种香蜂草苷的制备方法，尤其是涉及一种应用大孔树脂色谱和高效液相制备色谱法制备香蜂菜苷的方法。
背景技术：
风轮菜为唇形科风轮菜属植物，1995版中国药典以“断血流”名称收载。风轮菜具有清热解毒、止血活血的功效，可用于治疗崩漏、子宫肌瘤出血、尿血、牙龈出血、创伤出血等症。风轮菜主要含黄酮、黄酮苷及三萜皂苷等化合物，其中黄酮类和皂苷类化合物为其主要活性成分。香蜂草苷为双氢黄酮苷类物质，临床广泛用于各种出血症的预防和治疗。中国专利(公开号为CN1872083A) “香蜂草苷在制备治疗或预防出血性疾病的药物中的应用”， 该发明提供了香蜂草苷在制备治疗或预防出血性疾病的药物中的应用，具体地提供了香蜂草苷在制备治疗或预防内出血、阴道出血、消化道出血、病理性出血及外出血的药物中的应用。目前，尚未见香蜂草苷的提取分离工艺方面的相关报道。
发明内容
本发明要解决技术问题是提供一种香蜂草苷的制备方法，该方法所用试剂无毒性，对环境无污染，制得产品含量高。本发明是通过以下技术方案实现的一种香蜂草苷的制备方法，其特征在于包含以下步骤(1)以风轮菜为原料，粉碎，加5-8倍量50-75 %的乙醇溶液超声提取2_4次，过滤，得到提取液；(2)将步骤⑴中得到的提取液浓缩至无醇味，上大孔树脂柱富集，先用蒸馏水洗脱杂质，再用4-6BV60%乙醇洗脱，收集洗脱液减压浓缩，干燥得到粗品；(3)将步骤(2)中得到的粗品用乙醇溶解，微滤，用制备型高效液相色谱仪进行分离纯化，紫外在线监测，检测波长为282nm，收集目标流分，浓缩至小体积，放置结晶；(4)将步骤(3)中得到的结晶用乙醇重结晶，滤出结晶，干燥即得香蜂草苷。所述步骤⑵中大孔树脂可选AB-8、SPD-300和LSA-40中的一种。所述步骤(3)中微滤所用滤膜的孔径为0. 45 μ m,高效液相色谱以C8或C18反相键合硅胶为固定相，55-65 %乙腈水溶液为流动相。本发明的积极效果是(1)所用的反相高效液相制备色谱，具有分离度高、重现性好、分离时间短、制备量大等优点，分离的到产品纯度可达98 %以上。(2)本发明使用的溶剂系统较为简单，还具有低成本，回收率高的优点。
下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1 以风轮菜为原料，取2kg，粉碎，加8倍量75%的乙醇溶液超声提取3次，过滤，得到提取液，浓缩至无醇味，上LSA-40大孔树脂柱富集，先用蒸馏水洗脱杂质，再用6BV60 % 乙醇洗脱，收集洗脱液减压浓缩，干燥得到粗品，用乙醇溶解，用0. 45 μ m微滤膜过滤，用制备型高效液相色谱仪进行分离纯化，以C18反相键合硅胶为固定相，55%乙腈水溶液为流动相，紫外在线监测，检测波长为282nm，收集目标流分，浓缩至小体积，放置结晶，过滤，结晶用乙醇回流溶解，放冷结晶，滤出结晶，干燥即得香蜂草苷3. 6g，含量为98. 3%。实施例2:以风轮菜为原料，取2kg，粉碎，加5倍量55 %的乙醇溶液超声提取4次，过滤，得到提取液，浓缩至无醇味，上AB-8大孔树脂柱富集，先用蒸馏水洗脱杂质，再用4BV60 %乙醇洗脱，收集洗脱液减压浓缩，干燥得到粗品，用乙醇溶解，用0. 45 μ m微滤膜过滤，用制备型高效液相色谱仪进行分离纯化，以C8反相键合硅胶为固定相，65%乙腈水溶液为流动相，紫外在线监测，检测波长为282nm，收集目标流分，浓缩至小体积，放置结晶，过滤，结晶用乙醇回流溶解，放冷结晶，滤出结晶，干燥即得香蜂草苷3. Ig,含量为98. 2%。实施例3 以风轮菜为原料，取5kg，粉碎，加8倍量50%的乙醇溶液超声提取2次，过滤，得到提取液，浓缩至无醇味，上AB-8大孔树脂柱富集，先用蒸馏水洗脱杂质，再用4BV60%乙醇洗脱，收集洗脱液减压浓缩，干燥得到粗品，用乙醇溶解，用0. 45 μ m微滤膜过滤，用制备型高效液相色谱仪进行分离纯化，以C18反相键合硅胶为固定相，60%乙腈水溶液为流动相，紫外在线监测，检测波长为282nm，收集目标流分，浓缩至小体积，放置结晶，过滤，结晶用乙醇回流溶解，放冷结晶，滤出结晶，干燥即得香蜂草苷9. 7g，含量为98. 7%。实施例4 以风轮菜为原料，取5kg，粉碎，加6倍量65%的乙醇溶液超声提取2次，过滤，得到提取液，浓缩至无醇味，上SPD-300大孔树脂柱富集，先用蒸馏水洗脱杂质，再用5BV60% 乙醇洗脱，收集洗脱液减压浓缩，干燥得到粗品，用乙醇溶解，用0. 45 μ m微滤膜过滤，用制备型高效液相色谱仪进行分离纯化，以C8反相键合硅胶为固定相，60%乙腈水溶液为流动相，紫外在线监测，检测波长为282nm，收集目标流分，浓缩至小体积，放置结晶，过滤，结晶用乙醇回流溶解，放冷结晶，滤出结晶，干燥即得香蜂草苷10. 4g，含量为98. 3%。实施例5 以风轮菜为原料，取10kg，粉碎，加5倍量70%的乙醇溶液超声提取2次，过滤，得到提取液，浓缩至无醇味，上LSA-40大孔树脂柱富集，先用蒸馏水洗脱杂质，再用6BV60% 乙醇洗脱，收集洗脱液减压浓缩，干燥得到粗品，用乙醇溶解，用0. 45 μ m微滤膜过滤，用制备型高效液相色谱仪进行分离纯化，以C8反相键合硅胶为固定相，65%乙腈水溶液为流动相，紫外在线监测，检测波长为282nm，收集目标流分，浓缩至小体积，放置结晶，过滤，结晶用乙醇回流溶解，放冷结晶，滤出结晶，干燥即得香蜂草苷26. 9g，含量为98. 8%。
权利要求
1.一种香蜂草苷的制备方法，其特征在于包含以下步骤(1)以风轮菜为原料，粉碎，加5-8倍量50-75%的乙醇溶液超声提取2-4次，过滤，得到提取液；(2)将步骤(1)中得到的提取液浓缩至无醇味，上大孔树脂柱富集，先用蒸馏水洗脱杂质，再用4-6BV60%乙醇洗脱，收集洗脱液减压浓缩，干燥得到粗品；(3)将步骤(2)中得到的粗品用乙醇溶解，微滤，用制备型高效液相色谱仪进行分离纯化，收集目标流分，浓缩至小体积，放置结晶；(4)将步骤(3)中得到的结晶用乙醇重结晶，滤出结晶，干燥即得香蜂草苷。
2.根据权利要求1所述的一种香蜂草苷的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中大孔树脂可选AB-8、SPD-300和LSA-40中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种香蜂草苷的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中微滤所用滤膜的孔径为0. 45 μ m,高效液相色谱以反相键合硅胶为固定相，乙腈水溶液为流动相。
全文摘要
本发明涉及一种香蜂草苷的制备方法，方法包括以风轮菜为原料，粉碎，加乙醇溶液提取，提取液浓缩至无醇味，上大孔树脂柱富集，先用蒸馏水洗脱杂质，再用4-6BV60％乙醇洗脱，收集洗脱液减压浓缩，干燥得到粗品，粗品采用制备型高效液相色谱仪进行分离纯化，收集目标流分，浓缩至小体积，放置结晶，乙醇重结晶，滤出结晶，干燥即得香蜂草苷。本发明获得的产品纯度可达到98％以上。
文档编号C07H17/07GK102234301SQ20111011785
公开日2011年11月9日 申请日期2011年5月6日 优先权日2011年5月6日
发明者万冬梅, 刘东锋, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司