专利名称：一种东方唐松草苷的制备方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种东方唐松草苷的制备方法。
背景技术：
天葵子别称紫背天葵根、千年老鼠屎(《纲目拾遗》)等，块根入药，味甘、苦，性寒， 有小毒；具清热解毒，消肿散结之功效；用于瘰疠、臃肿、疔疮、跌打损伤、毒蛇咬伤等症。经过研究，天葵子对金黄色葡萄球菌等有抑制作用；临床上用天葵子或其复方治疗急性软组织损伤及骨关节结核、急性乳腺炎、子宫肌瘤、原发性肝癌、胃癌等。东方唐松草苷为天葵子中的硝基酚苷类成分。在一般植物中比较少见，但在天葵子中的量最高。目前主要采用传统的柱色谱法从天葵子中分离东方唐松草苷，如牛锋采用5倍量95 %乙醇提取，提取液浓缩，分别用醋酸乙酯和正丁醇萃取，再经AB-8大孔吸附树脂柱分离，收集30 %乙醇洗脱部位，浓缩，反复上kphadex LH-20，甲醇-水(1 1)洗脱，除去色素，甲醇重结晶得到东方唐松草苷，该方法分离过程时间长，操作繁琐，样品损失较大，有机溶剂使用量大。高速逆流色谱技术已被广泛用于天然产物的分离，该技术不需要固态的吸附剂， 而且不会对样品产生不可逆吸附，并得到非常高的样品回收率。目前还没有将高速逆流色谱技术应用于分离天葵子中的东方唐松草苷的相关研究报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用高速逆流色谱技术制备东方唐松草苷的方法。为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下一种东方唐松草苷的制备方法，其特征在于，包括两大步骤(1)天葵子粗提物的制备取过60-80目的天葵子药材粗粉，投入提取罐中，用8-15倍量(V/W)的去离子水超声或加热回流提取1-2小时，合并提取液，加入活性炭回流脱色后，滤除活性炭，浓缩得到沉淀物；(2)用高速逆流色谱将沉淀物分离制备东方唐松草苷将a、b、c、d组分按体积比3 5 2 4 2 4 4 8组成的溶剂系统的上相作为固定相，下相为流动相，将沉淀物溶于下相得样品溶液，经两次分离得到高纯度的东方唐松草苷。步骤O)中所述a组分为正丁醇或异丁醇，b组分为乙酸乙酯，c组分为甲醇，d组分为0. 5-1%的氨水溶液。步骤O)中所述的高速逆流色谱仪的柱体积是200-300ml。本发明的优势在于1、本发明采用高速逆流色谱分离制备技术，被分离对象在两相液体中进行分配，不需要固相载体，客服了固相载体对样品吸附、损失、污染等缺点，具有回收率高、快速、分离纯化与制备同步完成的特点，因而有利于天葵子中东方唐松草苷的分离制备；2、本发明可节省大量有机溶剂，产品纯度高，可直接制备对照品、用于药理实验或商业用途。
具体实施例方式以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。实施例1 A.将天葵子粉碎过80目标准筛，取2kg投入小型不锈钢提取罐，加入20L去离子水超声提取1小时，放出滤液，再分别加20L去离子水提取2次，合并三次提取液，加入IOOg 活性炭回流脱色0. 5小时，滤出活性炭，减压浓缩得到沉淀物。B.选取正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-0.5%氨水按体积比3 :4:4: 8将上述溶剂组分置于分液漏斗中，摇勻后静置分层。待两相溶剂平衡后将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相，采用半制备型高速逆流色谱仪，柱容积为^Oml，称取300mg沉淀物溶解于IOOml下相中得样品溶液I，备用。以lOml/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定螺旋柱线圈的旋转速度为850r/min，使螺线管顺时针旋转，当达到设定转速时，以3ml/min的流速泵入流动相，当流动相从主机口流出时，开始进样品溶液I，进样量为10ml，尾端流出的洗脱液用紫外光谱仪在220nm的波长处检测，收集获得的东方唐松草苷含量达到82%。C.将第一次高速逆流色谱分离所获得的东方唐松草苷溶于50ml的下相中得样品溶液II，备用。以lOml/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定螺旋柱线圈的旋转速度为900r/min，使螺线管顺时针旋转，当达到设定转速时，以3ml/min的流速泵入流动相，当流动相从主机口流出时，开始进样品溶液II，进样量为10ml，尾端流出的洗脱液用紫外光谱仪在220nm的波长处检测，收集获得的东方唐松草苷含量为97. 3%。实施例2:A.将天葵子粉碎过60目标准筛，取2kg投入小型不锈钢提取罐，加入30L去离子水加热回流提取2小时，放出滤液，再分别加30L去离子水提取2次，合并三次提取液，加入 70g活性炭回流脱色1小时，滤出活性炭，减压浓缩得到沉淀物。B.选取异丁醇-乙酸乙酯-甲醇-0.1%氨水按体积比5 :3:2: 7将上述溶剂组分置于分液漏斗中，摇勻后静置分层。待两相溶剂平衡后将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相，采用半制备型高速逆流色谱仪，柱容积为200ml，称取300mg沉淀物溶解于IOOml下相中得样品溶液I，备用。以lOml/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定螺旋柱线圈的旋转速度为800r/min，使螺线管顺时针旋转，当达到设定转速时，以2ml/min的流速泵入流动相，当流动相从主机口流出时，开始进样品溶液I，进样量为10ml，尾端流出的洗脱液用紫外光谱仪在220nm的波长处检测，收集获得的东方唐松草苷含量达到80%。C.将第一次高速逆流色谱分离所获得的东方唐松草苷溶于50ml的下相中得样品溶液II，备用。以lOml/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定螺旋柱线圈的旋转速度为850r/min，使螺线管顺时针旋转，当达到设定转速时，以2ml/min的流速泵入流动相，当流动相从主机口流出时，开始进样品溶液II，进样量为10ml，尾端流出的洗脱液用紫外光谱仪在220nm的波长处检测，收集获得的东方唐松草苷含量为96. 6%。实施例3
A.将天葵子粉碎过80目标准筛，取2kg投入小型不锈钢提取罐，加入16L去离子水超声提取2小时，放出滤液，再加16L去离子水提取1次，合并两次提取液，加入80g活性炭回流脱色0. 5小时，滤出活性炭，减压浓缩得到沉淀物。B.选取正丁醇-乙酸乙酯-甲醇-0.5%氨水按体积比4 :3:4: 6将上述溶剂组分置于分液漏斗中，摇勻后静置分层。待两相溶剂平衡后将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相，采用半制备型高速逆流色谱仪，柱容积为MOml，称取300mg沉淀物溶解于IOOml下相中得样品溶液I，备用。以lOml/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定螺旋柱线圈的旋转速度为850r/min，使螺线管顺时针旋转，当达到设定转速时，以3ml/min的流速泵入流动相，当流动相从主机口流出时，开始进样品溶液I，进样量为10ml，尾端流出的洗脱液用紫外光谱仪在220nm的波长处检测，收集获得的东方唐松草苷含量达到81%。C.将第一次高速逆流色谱分离所获得的东方唐松草苷溶于50ml的下相中得样品溶液II，备用。以lOml/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定螺旋柱线圈的旋转速度为900r/min，使螺线管顺时针旋转，当达到设定转速时，以3ml/min的流速泵入流动相，当流动相从主机口流出时，开始进样品溶液II，进样量为10ml，尾端流出的洗脱液用紫外光谱仪在220nm的波长处检测，收集获得的东方唐松草苷含量为97. 1%。实施例4 A.将天葵子粉碎过60目标准筛，取2kg投入小型不锈钢提取罐，加入18L去离子水加热回流提取1小时，放出滤液，再分别加18L去离子水提取2次，合并三次提取液，加入 90g活性炭回流脱色1小时，滤出活性炭，减压浓缩得到沉淀物。B.选取异丁醇-乙酸乙酯-甲醇-0.5%氨水按体积比5 :2:3: 4将上述溶剂组分置于分液漏斗中，摇勻后静置分层。待两相溶剂平衡后将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相，采用半制备型高速逆流色谱仪，柱容积为200ml，称取300mg沉淀物溶解于IOOml下相中得样品溶液I，备用。以lOml/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定螺旋柱线圈的旋转速度为800r/min，使螺线管顺时针旋转，当达到设定转速时，以2ml/min的流速泵入流动相，当流动相从主机口流出时，开始进样品溶液I，进样量为10ml，尾端流出的洗脱液用紫外光谱仪在220nm的波长处检测，收集获得的东方唐松草苷含量达到81%。C.将第一次高速逆流色谱分离所获得的东方唐松草苷溶于50ml的下相中得样品溶液II，备用。以lOml/min的流速泵入固定相，待固定相充满管道后，打开主机设定螺旋柱线圈的旋转速度为850r/min，使螺线管顺时针旋转，当达到设定转速时，以2ml/min的流速泵入流动相，当流动相从主机口流出时，开始进样品溶液II，进样量为10ml，尾端流出的洗脱液用紫外光谱仪在220nm的波长处检测，收集获得的东方唐松草苷含量为98. 1%。
权利要求
1.一种东方唐松草苷的制备方法，其特征在于，包括两大步骤(1)天葵子粗提物的制备取过60-80目的天葵子药材粗粉，投入提取罐中，用8-15倍量(V/W)的去离子水超声或加热回流提取1-2小时，合并提取液，加入活性炭回流脱色后，滤除活性炭，浓缩得到沉淀物；(2)用高速逆流色谱将沉淀物分离制备东方唐松草苷将a、b、c、d组分按体积比3 5 2 4 2 4 4 8组成的溶剂系统的上相作为固定相，下相为流动相，将沉淀物溶于下相得样品溶液，经两次分离得到高纯度的东方唐松草苷。
2.如权利要求1所述的一种东方唐松草苷的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述a 组分为正丁醇或异丁醇，b组分为乙酸乙酯，c组分为甲醇，d组分为0. 5-1%的氨水溶液。
3.如权利要求1所述的一种东方唐松草苷的制备方法，其特征在于步骤O)中所述的高速逆流色谱仪的柱体积是200-300ml。
全文摘要
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种东方唐松草苷的制备方法，包括两大步骤第一，天葵子粗提物的制备取天葵子药材粗粉，用8-15倍量(V/W)的去离子水提取1-2小时，提取液加入活性炭脱色后，浓缩得到沉淀物；第二，用高速逆流色谱将沉淀物分离制备目标化合物东方唐松草苷，经两次分离得到高纯度的东方唐松草苷。本发明可节省大量有机溶剂，分离过程较短，产品纯度高，可直接用于色谱标样或商业用途等。
文档编号C07H1/08GK102229629SQ20111011793
公开日2011年11月2日 申请日期2011年5月6日 优先权日2011年5月6日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司