专利名称：一种百子莲皂苷a的提取分离方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离领域，尤其涉及一种百子莲皂苷A的提取分离方法。
背景技术：
百子莲皂苷A (Agapanthussaponin A)属甾体皂苷类，分子式为C45H74O19,分子量 919. 07，溶于正丁醇、甲醇、乙醇，不溶于丙酮。百子莲皂苷A对cAMP磷酸二酯酶呈抑制作用，IC5tl为7 μ M。百子莲皂苷A主要来源于百合科闭口百子莲J^aA^iAM inapertus的地下部分。目前，国内尚未见百子莲皂苷A的工业提取纯化方法的相关文献和专利的报道。高速逆流色谱法(High-speed Countercurrent Chromatography，简称HSCCC)，是一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术，与其它色谱技术不同的是它不需任何固态载体，因此能避免固相载体表面与样品发生反应而导致样品的污染、失活、变性和不可逆吸附等不良影响。同时它也具有适用范围广、快速、进样量大、费用低、回收率高等优点。因此， 在生物、医药、食品、材料、化妆品和环保等领域获得了广泛的应用，尤其是在天然产物活性成分的分离纯化领域。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种百子莲皂苷A的提取分离方法，该方法操作
简单，产品含量高。本发明是采用以下技术方案来实现的
(1)取闭口百子莲原料粉碎，加生物酶酶解1-3天，得酶解原料；
(2)酶解原料中加8-15倍量50-70%甲醇常温浸泡提取1-3次，过滤得到提取液；
(3)提取液浓缩至浸膏，加适量水分散后，加入1-3倍量的水饱和正丁醇萃取1-4次，合并萃取液加0. 5-1倍量丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗品；
(4)以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(5-8 2-4 3-5 3_5)作为两相溶剂系统，混勻后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将粗品粉末用下相溶解，注入高速逆流色谱仪，收集高含量百子莲皂苷A流分，浓缩干燥即得百子莲皂苷A产品。所述步骤(1)中生物酶可选果胶酶、纤维素酶和淀粉酶中的任一种，用量为原料重量的 0. 3-1%。所述步骤(4)中高速逆流色谱仪转速750-950r/min，流动相流速1. 8-3. Oml/min。本发明的积极效果是
1)采用生物酶解分解物质组织结构，提高了提取率，缩短了提取时间，而且采用常温提取提取杂质少，能耗低；
2)高速逆流色谱法分离无需使用载体，减少了操作过程中样品的损失，分离效果好， 制备量大。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。
具体实施例方式实施例1:
闭口百子莲原料粉碎，过40目筛，称取3kg，加30g的果胶酶混合均勻，酶解3天，酶解原料加ML50%甲醇常温浸泡提取2次，每次4小时，过滤得到提取液，浓缩至浸膏，加800ml 水分散，再加800ml水饱和正丁醇萃取2次，合并萃取液，加800ml丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(5 2 3 3)作为两相溶剂系统，混勻后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将粗品粉末用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以2. Oml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为850r/min，通过进样阀进样，每次进样量为150mg，收集高含量百子莲皂苷A流分，浓缩干燥即得百子莲皂苷A产品0. 7g，含量99. 3%。实施例2:
闭口百子莲原料粉碎，过60目筛，称取3kg，加30g的淀粉酶混合均勻，酶解2天，酶解原料加45L70%甲醇常温浸泡提取8小时，过滤得到提取液，浓缩至浸膏，加900ml水分散， 再加IOOOml水饱和正丁醇萃取1次，合并萃取液，加IOOOml丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(6 4 5 5)作为两相溶剂系统，混勻后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将粗品粉末用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以2. Oml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为750r/min，通过进样阀进样，每次进样量为150mg，收集高含量百子莲皂苷A流分，浓缩干燥即得百子莲皂苷A产品 l.Og，含量 98. 6%。实施例3:
闭口百子莲原料粉碎，过20目筛，称取3kg，加9g的纤维素酶混合均勻，酶解2天，酶解原料加30L70%甲醇常温浸泡提取2次，每次5小时，过滤得到提取液，浓缩至浸膏，加800ml 水分散，再加500ml水饱和正丁醇萃取4次，合并萃取液，加IOOOml丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(8 4 5 5)作为两相溶剂系统，混勻后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将粗品粉末用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以2. Oml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为800r/min，通过进样阀进样，每次进样量为150mg，收集高含量百子莲皂苷A流分，浓缩干燥即得百子莲皂苷A产品1.3g，含量98. 1%。实施例4:
闭口百子莲原料粉碎，过40目筛，称取10kg，加30g的淀粉酶混合均勻，酶解2天，酶解原料加80L60%甲醇常温浸泡提取2次，每次6小时，过滤得到提取液，浓缩至浸膏，加IL 水分散，再加400ml水饱和正丁醇萃取3次，合并萃取液，加900ml丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(6 3 5 5)作为两相溶剂系统，混勻后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将粗品粉末用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以1. 8ml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为850r/min，通过进样阀进样，每次进样量为250mg，收集高含量百子莲皂苷A流分，浓缩干燥即得百子莲皂苷A产品2. 6g，含量99. 5%。
实施例5:
闭口百子莲原料粉碎，过40目筛，称取20kg，加60g的果胶酶混合均勻，酶解1天，酶解原料加160L65%甲醇常温浸泡提取2次，每次8小时，过滤得到提取液，浓缩至浸膏，加4L 水分散，再加2L水饱和正丁醇萃取2次，合并萃取液，加2L丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(7:4:5:5)作为两相溶剂系统，混勻后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将粗品粉末用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以3. Oml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为950r/min，通过进样阀进样，每次进样量为200mg，收集高含量百子莲皂苷A流分，浓缩干燥即得百子莲皂苷A产品 6. 9g，含量 98. 9%。
权利要求
1.一种百子莲皂苷A的提取分离方法，其特征在于包含以下步骤(1)取闭口百子莲原料粉碎，加生物酶酶解1-3天，得酶解原料；(2)酶解原料中加8-15倍量50-70%甲醇常温浸泡提取1-3次，过滤得到提取液；(3)提取液浓缩至浸膏，加适量水分散后，加入1-3倍量的水饱和正丁醇萃取1-4次，合并萃取液加0. 5-1倍量丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗品；(4)以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(5-8 2-4 3-5 3_5)作为两相溶剂系统，混勻后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将粗品粉末用下相溶解，注入高速逆流色谱仪，收集高含量百子莲皂苷A流分，浓缩干燥即得百子莲皂苷A产品。
2.如权利要求1所述的百子莲皂苷A的提取分离方法，其特征在于所述步骤(1)中生物酶可选果胶酶、纤维素酶和淀粉酶中的任一种，用量为原料重量的0. 3-1%。
3.如权利要求2所述的百子莲皂苷A的提取分离方法，其特征在于所述步骤(4)中高速逆流色谱仪转速750-950r/min，流动相流速1. 8-3. Oml/min。
全文摘要
本发明涉及一种百子莲皂苷A的提取分离方法，方法是将百子莲药材粉碎，加生物酶酶解1-3天，酶解原料加8-15倍量50-70%甲醇常温浸泡提取1-3次，提取液浓缩至浸膏，加适量水分散后，加入水饱和正丁醇萃取2-4次，合并萃取液加丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗品，再采用高速逆流色谱法对粗品进行分离纯化，得到百子莲皂苷A。本方法制备量大，样品损失少，产品含量高。
文档编号C07J71/00GK102391354SQ20111030370
公开日2012年3月28日 申请日期2011年10月10日 优先权日2011年10月10日
发明者万冬梅, 刘东锋 申请人:南京泽朗医药科技有限公司