从洋刀豆中提取具有抗肿瘤作用的血球凝集素的工艺方法
【专利摘要】从洋刀豆中提取具有抗肿瘤作用的血球凝集素的工艺方法，包括以下步骤：1）将洋刀豆干品拣去杂质，先以自来水冲洗3遍，去灰尘泥土等；2）再以蒸馏水冲洗3-5遍，用75-80%乙醇浸泡30分钟后，置35-37℃恒温箱内24-28小时，烘干备用；3）在无菌条件下将烘干的洋刀豆粉碎成100-150目细粉，加2-3倍生理盐水于5℃下放置24-28小时；4）离心分离，去渣，取离心液；在离心液中加入固体硫酸铵，5℃下冷藏12小时，离心，分出上清液，去除沉淀；5）上清液上凝胶柱分离，以1MNaCl溶液洗脱分离，收集洗脱液，检测合格后即为所需要的ConA；所得到的ConA制成冻干粉，临床上用于肿瘤的治疗。
【专利说明】从洋刀豆中提取具有抗肿瘤作用的血球凝集素的工艺方法
[0001](-)【技术领域】:本发明属于药物提取工艺，具体是一种从洋刀豆中提取具有抗肿瘤作用的血球凝集素的工艺方法。
[0002](二)【背景技术】:洋刀豆Canavalia ensiformis (L.)DC.,原产西印度，我国亦有少数栽培，喜生于热带地区。其种子亦同等入药。洋刀豆与本土刀豆在植物各部分器官形态上极为相似，两者的区别点:刀豆为缠绕性草本，种脐长约为种子的3/4，而洋刀豆为直立性草本，种脐长约为种子的1/2。现代研究表明:洋刀豆内含洋刀豆血球凝集素(ConcanavalinA,简称ConA)等多种球蛋白。其他尚有尿素酶、糖甙酶、转氨基琥珀酸酶、转氨酸酶、刀豆酸、刀豆氨酸、L-高丝氨酸等。近来因洋刀豆血球凝集素对肿瘤细胞的特殊作恶而受到重视。
[0003]研究表明，洋刀豆血球凝集素是植物血球凝集素的一种，具抗肿瘤作用。洋刀豆血球凝集素可引起人淋巴细胞的变形(即淋巴细胞受到刺激而转变为淋巴母细胞)，但并不产生相应的细胞毒素，还可抑制其他PHA引起的细胞毒素。用金田鼠胚作试验，洋刀豆血球凝集素对用病毒或化学致癌剂处理后而得的变形细胞的毒性大于对正常细胞的毒性。洋刀豆血球凝集素(经胰蛋白酶处理)还能使肿瘤细胞(变形后之小鼠纤维母细胞)重新恢复到正常细胞的生长状态。洋刀豆血球凝集素及麦芽、大豆中的糖蛋白对YAC细胞皆可凝集之，但只有洋刀豆血球凝集素对YAC细胞有显著的毒性。在体外试验中，以125微克的洋刀豆血球凝集素与此种细胞共孵24小时。可使95%细胞溶解；在体内试验中，给成年小鼠腹腔注射YAC细胞后I小鼠、2天、5天再腹腔注射洋刀豆血球凝集素I毫克，可分别抑制肿瘤70%、50%及20%。洋刀豆血球凝集素可凝集由各种致癌剂所引起的变形细胞，而对正常细胞，只有在用胰蛋白酶处理后，方能凝集。此种凝集皆可由α-甲基-D-甘露糖甙加以竞争性拮抗。因此设想，洋刀豆血球凝集素是与变形细胞表面膜上的葡萄糖或甘露糖样的部位结合而起作用的，而在正常细胞，此部位是被掩盖着的。
[0004]因此，寻找一种有效提取分离洋刀豆中血球凝集素的工艺方法，提高收得率，具有非常重要的价值。
[0005]曰
【发明内容】
:本发明的目的就是提供一种从洋刀豆中提取具有抗肿瘤作用的血球凝集素的工艺方法；本方法工艺简单，操作方便，收率高。
[0006]本发明方法包括下述工艺步骤:
1)将洋刀豆干品拣去杂质，先以自来水冲洗3遍，去灰尘泥土；
2)以蒸馏水冲洗3-5遍，用75-80%乙醇浸泡30分钟后，置35-37°C恒温箱内24-28小时，烘干备用；
3)在无菌条件下将烘干的洋刀豆粉碎成100-150目细粉，加2-3倍生理盐水于5°C低温下放置24-28小时；
4)离心分离，去渣，取离心液；在离心液中加入固体硫酸铵，5°C下冷藏12小时，离心，分出上清液，去除沉淀；
5)上清液上凝胶柱分离，以IMNaCl溶液洗脱分离，收集洗脱液，检测合格后即为所需要的ConA。[0007]所得到的ConA可制得注射用冻干粉，临床上用于肿瘤治疗。
[0008]㈣【具体实施方式】: 实施例1
1)将洋刀豆干品拣去杂质，先以自来水冲洗3遍，去灰尘泥土；
2)以蒸馏水冲洗5遍，用75%乙醇浸泡30分钟后，置37°C恒温箱内24小时，烘干备
用；
3)在无菌条件下将烘干的洋刀豆粉碎成100目细粉，加2倍生理盐水于5°C下放置28小时；
4)离心分离，去渣，取离心液；在离心液中加入固体硫酸铵，5°C下冷藏12小时，离心，分出上清液，去除沉淀；
5)上清液上凝胶柱分离，以IMNaCl溶液洗脱分离，收集洗脱液，检测合格后即为所需要的ConA。
[0009]收率可达到75%，比现有工艺高3%_5%。
【权利要求】
1.从洋刀豆中提取具有抗肿瘤作用的血球凝集素的工艺方法，包括以下步骤: 1)将洋刀豆干品拣去杂质，先以自来水冲洗3遍，去灰尘泥土； 2)以蒸馏水冲洗3-5遍，用75-80%乙醇浸泡30分钟后，置35-37°C恒温箱内24-28小时，烘干备用； 3)在无菌条件下将烘干的洋刀豆粉碎成100-150目细粉，加2-3倍生理盐水于5°C下放置24-28小时； 4)离心分离，去渣，取离心液；在离心液中加入固体硫酸铵，5°C下冷藏12小时，离心，分出上清液，去除沉淀； 5)上清液上凝胶柱分离，以IMNaCl溶液洗脱分离，收集洗脱液，检测合格后即为所需要的ConA。`
【文档编号】C07K1/30GK103570814SQ201210280973
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2012年8月9日 优先权日:2012年8月9日
【发明者】程海英 申请人:程海英