由人巨细胞病毒感染的细胞制造“致密体”（db）的制作方法
【专利摘要】本发明涉及“致密体”（DB）的制造和含有DB的药学组合物。
【专利说明】由人巨细胞病毒感染的细胞制造“致密体”(DB)
【技术领域】
[0001]本发明涉及“致密体”(DB)的制造和含有DB的药学组合物。
【背景技术】
[0002]还被称为人类疱疫病毒5的人巨细胞病毒(HCMV)为一种覆膜的双股DNA病毒,其属于疱疹病毒。HCMV对于健康的成人是通常无害的。然而在妊娠中该病毒是特别危险的，并且可以对未出生的胎儿甚至是危及生命的。对于具有虚弱的免疫系统的人，也可能由被HCMV感染发展成严重的疾病。因此，特别有危险的是艾滋病患者、移植受者、干细胞移植后的白血病患者、以细胞抑制剂治疗的患者等等。
[0003]对于具有虚弱的免疫系统的患者，在HCMV感染时使用病毒抑制剂，例如更昔洛韦、勝甲酸、西多福韦、并且也可能是阿昔洛韦。
[0004]此外，从多年前起已经致力于抗HCMV的痘苗或疫苗的发展。因此例如尝试了，以削弱的或减毒的活痘苗引发所期望的免疫力。然而由此仅仅可以获得有限的保护。
[0005]另外的方式在于，借助于所谓的“致密体”(DB)实现接种疫苗。在这种情况下涉及由HCMV派生出的、在电子显微镜中可见的结构。DB为在其被膜中膜围绕的亚病毒颗粒，被膜由细胞脂质膜派生而出、嵌入病毒糖蛋白。这些病毒蛋白很有可能以天然的构象存在于病毒脂质膜中。类似于病毒颗粒，DB在被感染的细胞的细胞质中形成并且最终由细胞排出。DB的90%DB蛋白质量由病毒编码为所谓的PP65(UL83)蛋白组成。此外在DB中，还可以探测到病毒蛋白PP150 (UL32)、gH (UL75)、gM (UL100)以及gB (UL55)。因为DB不含有病毒DNA和病毒壳体，所以其是非感染性的。
[0006]在现有技术中描述`了，DB由于其高度近似于HCMV抗原特性的抗原特性，适合作为抗HCMV感染或在HCMV感染时作用的痘苗。这种痘苗被证明是特别有效的。因为DB是非感染性的，所以风险方面和副作用与活痘苗的情况相比明显较少受批评的。因此，含有DB的、名称为“VMP2001”的痘苗已经存在于临床试验中。以DB接种疫苗的原则和优点例如在W000/5372中进行了描述。
[0007]由于DB在HCMV的正常侵染循环中:i)仅以微小的量形成并且因此仅以有限的量提供；并且ii) DB制剂可能在一定情况下被感染性的HCMV污染，存在对以下方法的需求，即，通过该方法DB的形成可以有针对性地提高并且防止通过感染性的HCMV而污染。
[0008]Reefschlaeger 等(2001，Journal of Antimicrobial Chemotherapy (抗菌化学疗法杂志)48，757-767)和 Buerger 等(2001，Journal of Virology (病毒学杂志)75，9077-9086)描述了一种名称为BAY38-4766的物质，其应当提升所形成的DB的量。
[0009]Hwang 等(2007，Journal of Viro logy81，11604-11611 )和 Hwang 等(2009, Antimicrobial Agents and Chemotherapy (抗微生物制剂与化学疗法)53，5095-5101)描述了苯并咪唑基-D核糖核苷，其同样能够适用于所形成的DB的量的提升。
[0010]然而，迄今所描述的用于DB形成优化的所谓适用的物质都没有在实践中得以证明。
【发明内容】
[0011]在这个背景下，本发明的任务在于:提供另外的物质，该物质作为在生产DB时的添加物i)防止DB制剂被感染性的HCMV污染；ii)在DB生产的范畴下提升DB的产率。
[0012]这个任务通过如下物质的用途解决，该物质选自以下物质:
[0013]`
【权利要求】
1.物质的用来制造“致密体”(DB)的用途，其特征在于，所述物质选自以下物质:
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，利用所述物质在适当的介质中培养以人巨细胞病毒(HCMV)感染的生物细胞。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述生物细胞为原代细胞。
4.根据权利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述生物细胞选自由以下所构成的组:人成纤维细胞、人内皮细胞、人树突状细胞、人上皮细胞和人巨噬细胞。
5.根据权利要求2至4中任一所述的用途，其特征在于，所述培养在所述物质的浓度为约lnmol/1到约lOOiimol/l的介质中进行。
6.根据权利要求2至5中任一所述的用途，其特征在于，所述培养进行I天到14天的持续时间，优选进行3至10天，最优选地进行5天。
7.根据权利要求2至6中任一所述的用途，其特征在于，在所述培养之后进行所述致密体的分离。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述分离通过借助离心从无细胞的所述介质中分出致密体进行。
9.一种制造“致密体”(DB)的方法，所述方法包括以下步骤: (1)提供在适当的介质中的、以人巨细胞病毒(HCMV)感染的生物细胞，以及 (2)利用物质培养感染的生物细胞， 其特征在于，所述物质选自以下物质:
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述生物细胞为原代细胞。
11.根据权利要求9或10所述的方法，其特征在于，所述生物细胞选自由以下所构成的组:人内皮细胞、人成纤维细胞、人树突状细胞、人上皮细胞和人巨噬细胞。
12.根据以上权利要求中任一所述的方`法，其特征在于，步骤(2)在所述物质的浓度为约lnmol/1到约liimol/1的介质中进行。
13.根据以上权利要求中任一所述的方法，其特征在于，步骤(2)进行I天到14天的持续时间，优选进行3至10天，最优选地进行5天。
14.根据以上权利要求中任一所述的方法，其特征在于，在步骤(2)后接着为另外的步骤: (3)分离所述致密体。
15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中所述致密体通过离心无细胞的介质从所述介质中分出。
16.一种用于制造药学组合物的方法，所述方法具有以下步骤: (1)制造“致密体”(DB); (2)提供在步骤(1)中制造的所述致密体；以及 (3)把在步骤(2)中提供的所述致密体配制到药学上能接受的载体中，其特征在于，步骤(1)中的制造根据权利要求9至15中任意一项所述的方法进行。
17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，所述药学组合物为疫苗。
18.根据权 利要求16或17所述的方法制造的药学组合物。
【文档编号】C07D413/04GK103764164SQ201280034022
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2012年5月3日 优先权日:2011年5月10日
【发明者】彼得·利施卡, 克里斯蒂安·辛兹格尔 申请人:艾库里斯有限及两合公司