甘薯叶绿原酸与纳米氧化锌抑菌组合物的制作方法
【专利摘要】本发明公开了甘薯叶绿原酸与纳米氧化锌抑菌组合物，属于中药领域。抑菌组合物中绿原酸提取液与纳米氧化锌抑菌组合物两种药物的合用对抑制大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌起到协同的作用。本发明的一种甘薯叶中绿原酸的提取物与纳米氧化锌抑菌组合物与现有的技术相比，解决了常规抑菌方法中药物用量较大的问题，同时采用两种低剂量的抑菌物质减少了微生物耐药性的发生机率、降低了其对人体毒性，更加安全。
【专利说明】甘薯叶绿原酸与纳米氧化锌抑菌组合物
【技术领域】
[0001 ] 本发明属于中药领域，尤其涉及一种中药抑菌物。
【背景技术】
[0002]甘薯又名番薯、红薯等，是世界上最重要的粮食、饲料和工业原料，广泛种植于100多个国家。甘薯是药食同源食品，具有补中、和血、肥五脏、补虚气、益气力、健脾胃、强肾阴等多种保健功能。同时还具有消除活性氧、抑制皮肤老化、抑制胆固醇、预防肺气肿、防癌和益于心血管健康等作用。甘薯叶中除含有以上营养成分外，还富含活性多糖和绿原酸等化合物。现代药理学研究表明绿原酸具有抗菌、抗病毒的作用。除此之外，绿原酸还有对自由基的清除及抗脂质过氧化、保肝利胆、抗诱变及解痉等作用。绿原酸因其具有较高的药用和保健功能，广泛引起人们的关注。中药制剂浓缩液制成口服液或抑菌组合物等一次用剂量大，且长期使用影响人体健康。
【发明内容】
[0003]针对绿原酸抑菌组合物一次用量大和长期使用影响人体健康问题，本发明人经过大量实验，发现纳米氧化锌能有效增强绿原酸提取液抑菌性能，减少绿原酸抑菌剂的用量，且采用两种抑菌组合物，更加的安全。本发明的目的在于提供一种绿原酸纳米氧化锌抑菌组合物抑菌剂，减少绿原酸抑菌剂一次的用剂量和降低药品对人体的毒性。
[0004]本发明提供如下技术方案:
甘薯叶绿原酸与纳米氧化锌抑菌组合物，含有绿原酸提取液、纳米氧化锌。
[0005]所述的绿原酸提取液的制备包括如下步骤:每称取甘薯叶粉末6 g，按料液比lg: 12mL加入pH值为4的60%的乙醇溶液；水浴恒温80°C回流提取2.5h后趁热抽滤，滤渣重复I次后回流提取lh，抽滤、合并滤液。按2%左右的比例分2-3次加入活性炭进行脱色，每次脱色30min后抽滤,滤液于5000r/min条件下离心30min,收集上清液备用；
所述纳米氧化锌为10mg/mL的纳米氧化锌胶体溶液。
[0006]抑制大肠杆菌0157:H7时，所述绿原酸提取液中绿原酸浓度47.8 μ g/mL，纳米氧化锌的浓度为10 mg/mL，体积比70:3。
[0007]抑制金黄色葡萄球菌时，所述绿原酸提取液中绿原酸浓度47.8 μ g/mL,纳米氧化锌的浓度为10mg/mL，体积比25:1。
[0008]本发明还涉及，所述抑菌组合物在制备抑制大肠杆菌0157:H7药物中的应用。
[0009]抑菌组合物 在制备抑制金黄色葡萄球菌药物中的应用。
[0010]本发明的有益效果是:本发明纳米锌的应用能有效增强绿原酸抑菌性能，增加纳米氧化锌的溶解度，降低绿原酸抑菌剂的用量，更令人意想不到的是两种药物的合用对抑制大肠杆菌0157:H7和金黄色葡萄球菌菌起到协同作用，同时本抑菌组合物采用两种低剂量的抑菌物质，相对于使用高剂量的绿原酸或者纳米氧化锌，更加的安全，可以作为安全可靠地外用涂覆剂等。【具体实施方式】
[0011]实施例1
1，绿原酸提取液的制备包括如下步骤:准确称取甘薯叶粉末6g，按料液比lg:12mL加入pH值为4的60%的乙醇溶液；水浴恒温80°C回流提取2.5h后趁热抽滤，滤渣重复I次后回流提取lh，抽滤、合并滤液。按2%左右的比例分2-3次加入活性炭进行脱色，每次脱色30min后抽滤,滤液于5000r/min条件下离心30min,收集上清液备用。所得的提取液经紫外可见光光度计对绿原酸进行标准定量。提取液中绿原酸的含量为47.8yg /mL。
[0012]2，纳米氧化锌溶液依照下列方法制备:取上海阿拉丁有限公司生产的纳米氧化锌
0.01g溶于ImL的蒸懼水中，震荡混匀得到10mg/mL的纳米氧化锌胶体溶液,粒径为200nm.3，绿原酸提取液与纳米氧化锌的协同抑菌作用。
[0013]a细菌的培养
挑取LB琼脂培养基上的大肠杆菌0157的单菌落于IOmL LB肉汤培养基中，置于37°C培养箱中培养12 h，再按I %的接种量接种于5 mL的LB肉汤培养基中，37°C培养5h后，取I mL上述菌液用IxPBS水连续稀释2个梯度，最终的菌液大约为106CFU/mL。
[0014]b绿原酸与纳米 氧化锌在抑菌性能上的协同作用
分别取I mL上述已稀释好的菌液于1.5 mL灭菌的离心管中，向I号离心管中分别加70 μ L绿原酸提取液(绿原酸素的含量为47.8 μ g/mL，下同)，向2号离心管中加入3 μ L浓度10 mg/mL的纳米氧化锌，向3号离心管中加入35 μ L绿原酸提取液和1.5 μ L浓度为10 mg/mL的纳米氧化锌，不加入任何上述抑菌剂。为保证每管液体最终体积相等，差量用IxPBS水补齐。置于37°C培养2 h。每组实验平行三次。
[0015]c平板计数
将各组待测液用IxPBS连续稀释4个梯度，10_2、10' 10_4各中取出200 μ L于LB平板上。平板吹干后，37°C下倒置培养12h，长出菌落后计数，以30-300个菌落形成单位(CFU)为有效的计数范围。每毫升原菌液活菌数=平板计数*稀释倍数*6实验结果如下:
【权利要求】
1.甘薯叶绿原酸与纳米氧化锌抑菌组合物，其特征在于含有绿原酸提取液、纳米氧化锌； 如权利要求1所述的抑菌组合物，其特征在于所述的绿原酸提取液的制备包括如下步骤:每称取甘薯叶粉末6g，按料液比lg: 12mL加入pH值为4的60%的乙醇溶液；水浴恒温80°C回流提取2.5h后趁热抽滤,滤洛重复I次后回流提取Ih,抽滤、合并滤液。
2.按2%左右的比例分2-3次加入活性炭进行脱色，每次脱色30min后抽滤，滤液于5000r/min条件下离心30min，收集上清液备用，所得的提取液经紫外可见光分光光度计对绿原酸进行标准定量；所述纳米氧化锌为10mg/mL的纳米氧化锌胶体溶液。
3.如权利要求1所述的抑菌组合物，其特征在于抑制大肠杆菌0157:H7时，所述绿原酸提取液中绿原酸浓度47.8 μ g/mL，纳米氧化锌的浓度为10 mg/mL，体积比70:3。
4.如权利要求1所述的抑菌组合物，其特征在于抑制金黄色葡萄球菌时，所述绿原酸提取液中绿原酸浓度47.8 μ g/mL,纳米氧化锌的浓度为10mg/mL，体积比25:1。
5.如权利要求1-4任一所述抑菌组合物在制备抑制大肠杆菌0157:H7药物中的应用。
6.如权利要求1~4任一所述抑菌组合物在制备抑制金黄色葡萄球菌药物中的应用。
【文档编号】C07C69/732GK103977028SQ201410179567
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2014年4月30日 优先权日:2014年4月30日
【发明者】许恒毅, 况慧娟, 魏华, 熊勇华, 赖卫华 申请人:南昌大学