长春新碱及硫酸长春新碱的合成方法
【专利摘要】本发明公开了长春新碱及硫酸长春新碱的合成方法，合成长春新碱的方法包括如下步骤：1)长春花碱的制备；2)长春新碱的合成、纯化和精制。在合成长春新碱方法的基础上，将合成的长春新碱与硫酸乙醇进行反应，得到硫酸长春新碱粗品，将硫酸长春新碱粗品进行精制，得到硫酸长春新碱。在合成长春新碱时，采用一步合成法合成长春新碱，简化了长春新碱的合成路线，工艺路线简单，生产成本低，合成的长春新碱经精制后纯度高达96％以上。在合成长春新碱方法基础上合成硫酸长春新碱，由于合成长春新碱的工艺简单，因而大幅度简化了硫酸长春新碱的合成路线，工艺路线简单，生产成本低，且经精制后纯度达96％以上。
【专利说明】长春新碱及硫酸长春新碱的合成方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及长春新碱及硫酸长春新碱的合成方法，属于生物碱制剂的【技术领域】。技术背景
[0002]长春新碱是吲哚类化合物，其化学结构为一个含有吲哚核的稠合四元环与另一个含有二氢吲哚核的稠合五元环以碳碳键直接连接而成，共有9个不对称中心。长春新碱具有使细胞分裂(有丝分裂)在中期停止的作用，与秋水仙素一样可以与微管蛋白结合而抑制其生物活性，但结合部位不同，且作用比秋水仙素更强。长春新碱与秋水仙素不同的是对微管蛋白以外的蛋白质如肌动蛋白及10纳米细丝蛋白等也起作用，特别是对造血器官的肿瘤比较有效，长春新碱在临床医学上作为抗癌剂之一而被应用。长春新碱能抗癌，疗效比长春碱约高10倍。可用于治疗急性淋巴细胞性白血病,疗效较好,对其他急性白血病、何杰金氏病、淋巴肉瘤、网状细胞肉瘤和乳腺癌也有疗效。硫酸长春新碱能抗癌，主要用于治疗急性淋巴细胞白血病、何杰金氏病、恶性淋巴肿瘤、小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、消化道癌等。目前，国内外合成硫酸 长春新碱的原料主要为长春新碱，因此，合成硫酸长春新碱的最关键的一步还是合成长春新碱。
[0003]目前，国内外研究合成长春新碱的技术也很多，虽然能得到长春新碱，但都存在各种各样的问题。
[0004]中国发明专利《一种生产长春碱和/或长春新碱的方法》(申请号:200810117768.1)公开了一种生产长春碱和/或长春新碱的方法，该方法是将长春花多倍体细胞株接种于合成培养基中，于20~29°C，培养3~7天得到富含长春碱和长春新碱的细胞。该方法用到细胞和培养基技术，成本高，工艺复杂，且生产周期长，不利于大规模生产。
[0005]合成长春新碱最常见的是以长春花碱硫酸盐为原料合成的。以长春花碱硫酸盐合成长春新碱的具体方法如下:第一步，先将长春花碱硫酸盐溶解在水中，调节溶液的PH值至酸性，置于冰浴(_70°C)中，加铬酸进行氧化反应，反应15分钟后，再加浓氨水进行碱化，用二氯甲烷提取，回收溶剂至干，得到浓缩物；第二步，将第一步得到的浓缩物物加入甲酸中，进行甲酰化，然后用二氯甲烷提取，回收有机溶剂至干，再上氧化铝柱进行层析，收集含长春新碱流份，合并相同流份，回收有机溶剂至干，进一步成盐和精制，干燥即得长春新碱。该方法采用两步合成法合成长春新碱，工艺步骤复杂，生产成本高。
【发明内容】
[0006]为克服现有技术存在的问题，本发明提供了长春新碱及硫酸长春新碱的合成方法，在合成长春新碱时，采用一步合成法合成长春新碱，简化了长春新碱的合成路线，工艺路线简单，生产成本低，合成的长春新碱经精制后纯度高达96%以上。在合成长春新碱方法基础上合成硫酸长春新碱，由于合成长春新碱的工艺简单，因而大幅度简化了硫酸长春新碱的合成路线，工艺路线简单，生产成本低，且经精制后纯度达96%以上。[0007]实现本发明目的所采取的技术方案为:
[0008]—种长春新碱的合成方法，包括如下步骤:
[0009]I)长春花碱的制备
[0010]将长春花碱硫酸盐加入水中，配制成浓度为0.2~0.26g/mL的长春花碱硫酸盐溶液，然后加入氨水调节长春花碱硫酸盐溶液的pH值至7.5~8，再加入足量的二氯甲烷进行萃取，分层后，去掉上层清液，将下层有机相旋干，真空中抽干，得到长春花碱；
[0011]2)长春新碱的合成
[0012]将长春花碱溶解于四氢呋喃中，配制成浓度为0.02~0.025g/mL的长春花碱四氢呋喃溶液，然后将盛有长春花碱四氢呋喃溶液的反应容器置于低温恒温反应浴中，将乙酸加入长春花碱四氢呋喃溶液中，其中长春花碱与乙酸的质量体积比为长春花碱:乙酸=
0.25~0.3g/mL,，当低温恒温反应浴的温度降至一 63~一 67°C时，保温，在恒温条件下以10~15mL/min的速度滴加浓度为0.15~0.2g/mL的重铬酸钠溶液，其中长春花碱与重铬酸钠的质量比为长春花碱:重铬酸钠=1:1.60,反应完毕后向反应所得物中滴加氨水,调节pH值至3.5~4，生成沉淀物，将反应容器移出低温恒温反应浴后，向反应容器中加纯化水溶解沉淀物，再加入氨水调节PH值至8~9，又生成沉淀物，加入三氯甲烷溶解沉淀物，过滤得滤液，将滤液静置分层，去除上层清液，将下层有机相旋干，在真空中抽干，得到深棕色长春新碱粗品。
[0013]将长春新碱粗品进行纯化，得到长春新碱纯化品，长春新碱粗品的纯化包括如下步骤:
[0014]①按体积比三氯甲烷:无水甲醇=99.5:0.5，将三氯甲烷与无水甲醇混合均匀配制成洗脱剂1，先向层析柱中加入部分洗脱剂I润洗层析柱，再称取200~300目的柱层层析硅胶，将柱层层析硅胶加入到剩余的洗脱剂I中，搅拌均匀后装入层析柱中，待层析柱完全走透后关闭旋塞；
[0015]②按体积比三氯甲烷:无水甲醇=99:1，将三氯甲烷与无水甲醇混合均匀配制洗脱剂2,按质量体积比长春新碱粗品:三氯甲烧=0.56g/mL~0.7g/mL,将长春新碱粗品加入三氯甲烷中，完全溶解后加入层析柱中，将洗脱剂2以45~55mL/min的流速对层析柱进行洗脱，直至样品色带下至层析柱底部，接收瓶出现颜色为止；
[0016] ③更换样品色带，按体积比三氯甲烷:无水甲醇=98.5:1.5，将三氯甲烷与无水甲醇混合均匀配制成洗脱剂3，将洗脱剂3以45~55mL/min的流速对层析柱进行洗脱，直至样品色带下至柱子底部，更换接收瓶；再以体积为层析柱体积的洗脱剂4以45~55mL/min的流速重复对层析柱进行洗脱，以洗脱剂3为基准，每次重复洗脱层析柱时，洗脱剂4中无水甲醇的体积百分含量较上一次洗脱时无水甲烷的含量递增0.5%，三氯甲烷的体积百分含量较上一次洗脱时三氯甲烷的含量递减0.5%，同时开始接收层析柱流出的液体，层析柱流出的液体即为接收液，并检测接收液中长春新碱的纯度，当接收液中长春新碱的纯度^ 60%时，开始收集接收液，当接收液中长春新碱的纯度〈60%时，停止收集接收液；
[0017]④将收集的接收液进行旋蒸浓缩，旋蒸温度为26~30°C，压强为-0.1MPa~一
0.08MPa，旋蒸至回流管中3秒内没有回流溶剂滴下为止，此时旋蒸后的浓缩物呈粘绸状，停止旋蒸，然后将浓缩物真空抽干，得到长春新碱纯化品。
[0018]上述步骤③中检测接收液中长春新碱的纯度的方法如下:[0019]按体积比石油醚:三氯甲烷:丙酮:二乙胺=6:3:0.5:0.6，将石油醚、三氯甲烷、丙酮和二乙胺混合均匀作为展开剂，将纯度>70%的长春新碱溶于三氯甲烷后得到的长春新碱三氯甲烷溶液作为对照，将接收液和长春新碱三氯甲烷溶液用薄层层析法进行分析，用三用紫外分析仪观察接收液和长春新碱三氯甲烷溶液在薄层层析板上分离后的色带分布情况，当两者在薄层层析板上分离后的色带分布相同时，将该接收液用高效液相色谱法检测该接收液中长春新碱的纯度，当该接收液中长春新碱的纯度> 60%时，立即收集接收液，当用三用紫外分析仪观察到两者在薄层层析板上分离后的色带分布有差异时，此时长春新碱样品点淡化，杂质点较浓，再将该接收液用高效液相色谱法检测该接收液中长春新碱的纯度，当该接收液中长春新碱的纯度〈60%时(纯度小于60%的接收液如何处理)，停止收集接收液；
[0020]将长春新碱纯化品进行精制，得到长春新碱，长春新碱纯化品的精制包括如下步骤:
[0021]按质量体积比长春新碱纯化品:无水甲醇=1:2，将长春新碱纯化品加入无水乙醇中，在38~42 °C水浴条件下溶解，完全溶解后用超声波超声，有沉淀析出后在-20~-30°C下 冷藏，直至沉淀析出完全，用溶剂过滤器抽滤，将滤饼用无水甲醇洗涤，再将洗涤后的滤饼用足量的二氯甲烷溶解，溶解后旋干，真空抽干，将抽干所得物在-20~-30°C下用无水甲醇进行重结晶，至少重结晶5次，得到白色的长春新碱。
[0022]将抽干所得物在-20~_30°C条件下用无水甲醇进行重结晶5次，每次重结晶时加入的无水甲醇的体积依次为抽干所得物质量的2.2,2.4,2.8,2.6和3倍。
[0023]本发明还提供了一种基于长春新碱合成的方法合成硫酸长春新碱的方法，包括如下步骤:
[0024]I)长春花碱的制备
[0025]将长春花碱硫酸盐加入水中，配制成浓度为0.2~0.26g/mL的长春花碱硫酸盐溶液，然后加入氨水调节长春花碱硫酸盐溶液的pH值至7.5~8，再加入足量的二氯甲烷进行萃取，分层后，去掉上层清液，将下层有机相旋干，真空中抽干，得到长春花碱；
[0026]2)长春新碱的合成
[0027]将长春花碱溶解于四氢呋喃中，配制成浓度为0.02~0.025g/mL的长春花碱四氢呋喃溶液，然后将盛有长春花碱四氢呋喃溶液的反应容器置于低温恒温反应浴中，将乙酸加入长春花碱四氢呋喃溶液中，其中长春花碱与乙酸的质量体积比为长春花碱:乙酸=
0.25~0.3g/mL,，当低温恒温反应浴的温度降至一 63~一 67°C时，保温，在恒温条件下以10~15mL/min的速度滴加浓度为0.15~0.2g/mL的重铬酸钠溶液，其中长春花碱与重铬酸钠的质量比为长春花碱:重铬酸钠=1:1.60,反应完毕后向反应所得物中滴加氨水,调节pH值至3.5~4，生成沉淀物，将反应容器移出低温恒温反应浴后，向反应容器中加纯化水溶解沉淀物，再加入氨水调节PH值至8~9，又生成沉淀物，加入三氯甲烷溶解沉淀物，过滤得滤液，将滤液静置分层，去除上层清液，将下层有机相旋干，在真空中抽干，得到深棕色长春新碱粗品。
[0028]3)硫酸长春新碱的合成
[0029]将长春新碱粗品进行纯化和精制后所得的长春新碱溶解于乙醇中得到长春新碱乙醇溶液，其中长春新碱与乙醇的质量体积比为长春新碱:乙醇=1:3g/mL，在搅拌条件下以20~30mL/min的速度向长春新碱乙醇溶液中滴加体积百分比浓度为5%的硫酸乙醇溶液，产生白色沉淀，当溶液的PH值为3.8~4.1时加入质量为长春新碱质量30倍的沸乙醇，再在-20~_30°C下冷藏至沉淀完全，抽滤，将滤饼用冰乙醇洗涤，真空抽干后，进行常温减压干燥得干燥物，将干燥物进一步精制，得到白色的硫酸长春新碱。
[0030]步骤3)中干燥物的精制包括如下步骤:
[0031]将干燥物用足量的纯化水溶解，然后置于冷冻干燥机冷阱内，在-53~_57°C下预冷后，减压干燥，得到白色的硫酸长春新碱。
[0032]在本发明提供的长春新碱合成方法中，首先将长春花碱硫酸盐进行游离得到长春花碱，此步骤为一种简单的中和处理，然后再将长春花碱在乙酸和重铬酸钾存在的条件下进行氧化还原反应，直接得到长春新碱，此步骤将长春花碱进行一步氧化还原反应，得到长春新碱。本发明还提供了硫酸长春新碱的合成方法，该方法在合成长春新碱的基础上合成硫酸长春新碱，将合成的长春新碱与硫酸乙醇进行反应，得到硫酸长春新碱。
[0033]本发明与现有技术相比，其有益效果和优点在于:
[0034]I)该方法采用一步合成即可得到长春新碱，工艺路线简单，大大节省了生产成本，适合大规模生产；以本发明合成的长春新碱为原料合成硫酸长春新碱，由于合成长春新碱的工艺简单，成本低，因此将会大幅度降低合成硫酸长春新碱的成本，简化合成硫酸长春新碱的工艺流程。
[0035]2)该方法采用一步合成方法合成长春新碱，大大缩短合成长春新碱的时间，在此方法合成长春新碱的基础上合成硫酸长春新碱，整个硫酸长春新碱的生产周期只需12小时，与现有技术相比，大幅度减少了硫酸长春新碱的生产周期。
[0036]3)该方法使用的试剂为常用试剂，使用的仪器为普通仪器，因此，该方法的生产成本低。
[0037]4)该方法合成的长春新碱和硫酸长春新碱纯度高，长春新碱的质量百分含量≥96 %，单杂< I %，总杂< 4.0 %，硫酸长春新碱的质量百分含量≥96 %，单杂≤ I %，总杂≤4.0%。
【具体实施方式】
[0038]下面结合具体实施例对本发明作进一步的具体说明。
[0039]实施例1
[0040]称取长春花碱硫酸盐100g,加入500mL纯化水中，完全溶解后,加入16.5mL氨水调节溶液的PH值至7.5，再加入足量的二氯甲烷进行萃取，分层后，去掉上层清液，将下层有机相用旋转蒸发仪浓缩、旋干，再用真空油泵抽干，得到85g淡黄色粉末长春花碱。
[0041]称取50g长春花碱，加入2500mL四氢呋喃中，配制成浓度为0.02g/mL的长春花碱溶液，然后将长春花碱四氢呋喃溶液置于低温恒温反应浴中，向长春花碱溶液中滴加187.5mL乙酸，当低温恒温反应浴的温度降至一 65°C时,保温，以12mL/min的速度滴加445mL浓度为0.18g/mL的重铬酸钠溶液，滴加完毕后继续反应2小时，向反应所得物中滴加氨水，调节pH值至3.8，生成沉淀物，移出低温恒温反应浴，加1000mL纯化水溶解沉淀物，再加入氨水调节PH值至8，又生成沉淀物，加入1000mL三氯甲烷溶解沉淀物，过滤得滤液，将滤液静置分层，用旋转蒸发仪浓缩、旋干，用真空油泵抽干，得到长春新碱粗品57.5g。[0042]按体积比三氯甲烷:无水甲醇=99.5:0.5，将三氯甲烷与无水甲醇混合均匀配制成洗脱剂1，共配制4L。取规格为04 u英寸X 1000mm的层析柱，先向层析柱柱中加入IL洗脱剂I润洗层析柱，称取2kg200目的柱层层析硅胶，向柱层层析硅胶中加入3L洗脱剂1，搅拌均匀后装入层析柱中，待层析柱完全走透后关闭旋塞。
[0043]按体积比三氯甲烷:无水甲醇=99:1，将三氯甲烷与无水甲醇混合均匀配制成洗脱剂2，称取长春新碱粗品140g，将长春新碱粗品加入230mL三氯甲烷中，完全溶解后加入层析柱中，将洗脱剂2以50mL/min的流速对层析柱进行洗脱，直至样品色带下至层析柱底部，接收瓶出现颜色为止。
[0044]更换样品色带，按体积比三氯甲烷:无水甲醇=98.5:1.5，将三氯甲烷和无水甲醇混合均匀配制洗脱剂3,共配制4L,将洗脱剂3以50mL/min的流速对层析柱进行洗脱，直至样品色带下至柱子底部，更换接收瓶，再以体积为12L的洗脱剂4以45mL/min的流速重复对层析柱进行洗脱，以洗脱剂3为基准，每次重复洗脱层析柱时，洗脱剂4中无水甲醇的体积百分含量较上一次洗脱时无水甲醇的含量递增0.5%，三氯甲烷的体积百分含量较上一次洗脱时三氯甲烷的含量递减0.5%，同时开始接收层析柱流出的液体，层析柱流出的液体即为接收液，按体积比石油醚:三氯甲烷:丙酮:二乙胺=6:3:0.5:0.6，将石油醚、三氯甲烷、丙酮和二乙胺混合均匀作为展开剂，将纯度> 70%的长春新碱溶于三氯甲烷后得到的长春新碱三氯甲烷溶液作为对照，将接收液和长春新碱三氯甲烷溶液用薄层层析法进行分析，用三用紫外分析仪观察接收液和长春新碱三氯甲烷溶液在薄层层析板上分离后的色带分布情况，当两者在薄层层析板上分离后的色带分布相同时，将此时的接收液用高效液相色谱法检测该接收液中长春新碱的纯度，当该接收液中长春新碱的纯度> 60%时，立即收集接收液，当用三用紫外分析仪观察到两者在薄层层析板上分离后的色带分布有差异时，此时长春新碱样品点淡化，杂质点较浓，再将此时的接收液用高效液相色谱法检测该接收液中长春新碱的纯度，当该接收液中长春新碱的纯度〈60%时，停止收集接收液；
[0045]将收集的接收液用三角漏斗转移至IL单口烧瓶中，开始旋蒸，旋蒸温度为29°C，压强为-0.09MPa，旋蒸至回流管中3秒内没有回流溶剂滴下为止，此时旋蒸后的浓缩物呈粘绸状，停止旋蒸，然后将浓缩物用旋片式真空泵抽2小时，得到长春新碱纯化品。
[0046]称取长春新碱纯化品180g，加入到360mL无水甲醇中，并在40°C水浴中溶解，完全溶解后用超声波超声，有沉淀析出后在_24°C下冷藏2小时，直至有大量白色沉淀大量析出。用IL溶剂过滤器抽滤，将滤饼用50mL无水甲醇洗涤，再将洗涤后的滤饼用500mL 二氯甲烷溶解，溶解后用旋转蒸发仪旋干，再用真空油泵抽干2小时，将抽干所得物在-24°C下用无水甲醇进行重结晶，重结晶5次，每次重结晶时加入的无水甲醇的体积依次为抽干所得物质量的2.2,2.4,2.8,2.6和3倍，得到白色的长春新碱。经检测，所得长春新碱的质量百分含量为97.8%，单杂为0.7%，总杂为2.2%。
[0047]称取长春新碱纯化品103g,溶解于309mL无水乙醇中后,搅拌,先以20mL/min的速度滴加体积百分比浓度为5%的硫酸乙醇，直至有大量的白色沉淀析出，当溶液的pH值为 3.8时加入质量为长春新碱质量30倍沸乙醇，再在_25°C条件下低温冷藏2小时，抽滤，将滤饼用冰乙醇洗涤，真空抽干，转移至真空干燥箱中常温减压干燥3小时，得到干燥物，将干燥物用体积为干燥物质量6倍的纯化水溶解，然后置于冷冻干燥机冷阱内，在_56°C条件下预冷5小时后，减压干燥24小时，得到白色的硫酸长春新碱。经检测，硫酸长春新碱的质量百分含量为97.7%，单杂为0.68%，总杂为2.3%。
[0048]实施例2
[0049]称取长春花碱硫酸盐100g，加入380mL纯化水中，完全溶解后，加入18mL氨水调节溶液的pH值至8，再加入足量的二氯甲烷进行萃取，分层后，去掉上层清液，将下层有机相用旋转蒸发仪浓缩、旋干，再用真空油泵抽干，得到81g淡黄色粉末长春花碱。
[0050]称取50g长春花碱，加入2000mL四氢呋喃中，配制成浓度为0.025g/mL的长春花碱溶液，然后将长春花碱四氢呋喃溶液置于低温恒温反应浴中，向长春花碱溶液中滴加187.5mL乙酸，当低温恒温反应浴的温度降至一 63°C时,保温，以14mL/min的速度滴加445mL浓度为0.18g/mL的重铬酸钠溶液，滴加完毕后继续反应2.2小时，向反应所得物中滴加氨水，调节PH值至3.6，生成沉淀物，移出低温恒温反应浴，加900mL纯化水溶解沉淀物，再加入氨水调节PH值至8.5，又生成沉淀物，加入900mL三氯甲烷溶解沉淀物，过滤得滤液，将滤液静置分层，用旋转蒸发仪浓缩、旋干，用真空油泵抽干，得到长春新碱粗品54.2g。
[0051]按体积比三氯甲烷:无水甲醇=99.5:0.5，将三氯甲烷与无水甲醇混合均匀配制成洗脱剂I，共配制4.2L。取规格力04 5英寸X 1000mm层析柱，向层析柱柱中加入1.2L洗脱剂1，称取1.9kg300目的柱层层析硅胶，向柱层层析硅胶中加入3.2L洗脱剂I，搅拌均匀后装入层析柱中，待层析柱完全走透后关闭旋塞。
[0052]按体积比三氯甲烷:无水甲醇=99:1，将三氯甲烷与无水甲醇混合均匀配制成洗脱剂2。称取长春新碱粗品135g，将长春新碱粗品加入220mL三氯甲烷中，完全溶解后加入层析柱中，将洗脱剂2以52mL/min的流速对层析柱进行洗脱，直至样品色带下至层析柱底部，接收瓶出现颜色为 止。
[0053]更换样品色带，按体积比三氯甲烷:无水甲醇=98.5:1.5，将三氯甲烷和无水甲醇混合均匀配制洗脱剂3，共配制4L，将洗脱剂3以52mL/min的流速对层析柱进行洗脱，直至样品色带下至柱子底部，更换接收瓶，再以体积为12L的洗脱剂4以55mL/min的流速重复对层析柱进行洗脱，以洗脱剂3为基准，每次重复洗脱层析柱时，洗脱剂4中无水甲醇的体积百分含量较上一次洗脱时无水甲醇的含量递增0.5%，三氯甲烷的体积百分含量较上一次洗脱时三氯甲烷的含量递减0.5%，同时开始接收层析柱流出的液体，层析柱流出的液体即为接收液，按体积比石油醚:三氯甲烷:丙酮:二乙胺=6:3:0.5:0.6，将石油醚、三氯甲烷、丙酮和二乙胺混合均匀作为展开剂，将纯度> 70%的长春新碱溶于三氯甲烷后得到的长春新碱三氯甲烷溶液作为对照，将接收液和长春新碱三氯甲烷溶液用薄层层析法进行分析，用三用紫外分析仪观察接收液和长春新碱三氯甲烷溶液在薄层层析板上分离后的色带分布情况，当两者在薄层层析板上分离后的色带分布相同时，将此时的接收液用高效液相色谱法检测该接收液中长春新碱的纯度，当该接收液中长春新碱的纯度> 60%时，立即收集接收液，当用三用紫外分析仪观察到两者在薄层层析板上分离后的色带分布有差异时，此时长春新碱样品点淡化，杂质点较浓，再将此时的接收液用高效液相色谱法检测该接收液中长春新碱的纯度，当该接收液中长春新碱的纯度〈60%时，停止收集接收液。
[0054]将收集的接收液用三角漏斗转移至IL单口烧瓶中，开始旋蒸，旋蒸温度为29°C，压强为-0.095MPa，旋蒸至回流管中3秒内没有回流溶剂滴下，此时旋蒸后的浓缩物呈粘绸状，停止旋蒸，然后将浓缩物真空抽干，得到长春新碱纯化品。
[0055]称取长春新碱纯化品175g，加入到350mL的无水甲醇中，并在41 °C水浴中溶解，完全溶解后用超声波超声，有沉淀析出后在_22°C下冷藏2小时，直至有大量白色沉淀大量析出。用IL溶剂过滤器抽滤，将滤饼用50mL无水甲醇洗涤，再将洗涤后的滤饼用500mL 二氯甲烷溶解，用旋转蒸发仪旋干，真空抽干2.2小时，将抽干所得物在_24°C下用无水甲醇进行重结晶，重结晶5次，每次重结晶时加入的无水甲醇的体积依次为抽干所得物质量的
2.2,2.4,2.8,2.6和3倍，得到白色的长春新碱。经检测，所得长春新碱的质量百分含量为98.0%，单杂为0.66%,总杂为2.0%。
[0056]称取长春新碱纯化品105g,溶解于315mL无水乙醇中后,搅拌,先以25mL/min的速度滴加体积百分比浓度为5%的硫酸乙醇，直至有大量的白色沉淀析出，当溶液的pH值为3.8时加入质量为长春新碱质量30倍沸乙醇，再在_26°C下冷藏2小时，抽滤，将滤饼用冰乙醇洗涤，真空抽干，转移至真空干燥箱中常温减压干燥2小时，得到干燥物，将干燥物用体积为干燥物质量6倍的纯化水溶解，然后置于冷冻干燥机冷阱内，在_56°C条件下预冷5小时后，减压干燥23小时，得到白色的硫酸长春新碱。经检测，硫酸长春新碱的质量百分含量为98.5%，单杂为0. 6%，总杂为2.4%。
[0057]实施例3
[0058]称取长春花碱硫酸盐100g,加入450mL纯化水中，完全溶解后,加入16mL氨水调节溶液的PH值至8.0，再加入足量的二氯甲烷进行萃取，分层后，去掉上层清液，将下层有机相用旋转蒸发仪浓缩、旋干，再用真空油泵抽干，得到82.6g淡黄色粉末长春花碱。
[0059]称取50g长春花碱，加入2250mL四氢呋喃中，配制成浓度为0.022g/mL的长春花碱溶液，然后将长春花碱四氢呋喃溶液置于低温恒温反应浴中，向长春花碱溶液中滴加187.5mL乙酸，当低温恒温反应浴的温度降至一 67°C时,保温，以12mL/min的速度滴加445mL浓度为0.18g/mL的重铬酸钠溶液，滴加完毕后继续反应2.3小时，向反应所得物中滴加氨水，调节PH值至3.5，生成沉淀物，移出低温恒温反应浴，加850mL纯化水溶解沉淀物，再加入氨水调节PH值至8.6，又生成沉淀物，加入SOOmL三氯甲烷溶解沉淀物，过滤得滤液，将滤液静置分层，用旋转蒸发仪浓缩、旋干，用真空油泵抽干，得到长春新碱粗品52.5g。
[0060]将体积比三氯甲烷:无水甲醇=99.5:0.5，将三氯甲烷与无水乙醇混合均匀配制洗脱剂1，共配制4L，取规格为04.5英寸XlOOOmm的层析柱，向层析柱柱中加入IL洗脱剂1，称取2kg200目的柱层层析硅胶，向柱层层析硅胶中加入3L洗脱剂1，搅拌均匀后装入层析柱中，待层析柱完全走透后关闭旋塞。
[0061]按体积比三氯甲烷:无水乙醇=99:1，将三氯甲烷与无水甲醇混合均匀配制成洗脱剂2，称取长春新碱粗品138g，将长春新碱粗品加入240mL三氯甲烷中，完全溶解后加入层析柱中，将洗脱剂2以49mL/min的流速对层析柱进行洗脱，直至样品色带下至层析柱底部，接收瓶出现颜色为止。
[0062]更换样品色带，按体积比三氯甲烷:无水甲醇=98.5:1.5，将三氯甲烷和无水甲醇混合均匀配制洗脱剂3,共配制4L,将洗脱剂3以49mL/min的流速以50mL/min的流速对层析柱进行洗脱，直至样品色带下至柱子底部，更换接收瓶，再以体积为12L的洗脱剂4重复对层析柱进行洗脱，以洗脱剂3为基准，每次重复洗脱层析柱时，洗脱剂4中无水甲醇的体积百分含量较上一次洗脱时无水甲醇的含量递增0.5%，三氯甲烷的体积百分含量较上一次洗脱时三氯甲烷的含量递减0.5%，同时开始接收层析柱流出的液体，层析柱流出的液体即为接收液，按体积比石油醚:三氯甲烷:丙酮:二乙胺=6:3:0.5:0.6，将石油醚、三氯甲烷、丙酮和二乙胺混合均匀作为展开剂，将纯度>70%的长春新碱溶于三氯甲烷后得到的长春新碱三氯甲烷溶液作为对照，将接收液和长春新碱三氯甲烷溶液用薄层层析法进行分析，用三用紫外分析仪观察接收液和长春新碱三氯甲烷溶液在薄层层析板上分离后的色带分布情况，当两者在薄层层析板上分离后的色带分布相同时，将此时的接收液用高效液相色谱法检测该接收液中长春新碱的纯度，当该接收液中长春新碱的纯度> 60%时，立即收集接收液，当用三用紫外分析仪观察到两者在薄层层析板上分离后的色带分布有差异时，此时长春新碱样品点淡化，杂质点较浓，再将此时的接收液用高效液相色谱法检测该接收液中长春新碱的纯度，当该接收液中长春新碱的纯度〈60%时，停止收集接收液。
[0063]将收集的接收液用三角漏斗转移至IL单口烧瓶中，开始旋蒸，旋蒸温度为28.5°C，压强为-0.085MPa，旋蒸至回流管中3秒内没有回流溶剂滴下，此时旋蒸后的浓缩物呈粘绸状，停止旋蒸，然后将浓缩物真空抽干，得到长春新碱纯化品。
[0064]称取长春新碱纯化品138g，加入的276mL无水甲醇中，并在41°C水浴中溶解，完全溶解后用超声波超声，有沉淀析出后在_25°C下冷藏2小时，直至有大量白色沉淀大量析出。用IL溶剂过滤器抽滤，将滤饼用50mL无水甲醇洗涤，再将洗涤后的滤饼用500mL二氯甲烷溶解，用旋转蒸发仪旋干，用真空油泵抽干2小时，将抽干所得物在_25°C下用无水甲醇进行重结晶，重结晶5次，每次重结晶时加入的无水甲醇的体积依次为抽干所得物质量的2.2,2.4,2.8,2.6和3倍，得到白色的长春新碱。所得长春新碱的质量百分含量为98.4%，单杂为0.58%，总杂为L6%。
[0065]称取长春新碱纯化品105g,溶解于315mL乙醇中后,搅拌,先以30mL/min的速度滴加体积百分比浓度为5% 的硫酸乙醇，直至有大量的白色沉淀析出，当溶液的pH值为3.9时加入质量为长春新碱质量30倍沸乙醇，再在_25°C条件下低温冷藏2小时，抽滤，将滤饼用冰乙醇洗涤，真空抽干后，转移至真空干燥箱中常温减压干燥2小时，得到干燥物，将干燥物用体积为干燥物质量6倍的纯化水溶解，然后置于冷冻干燥机冷阱内，在_54°C下预冷5小时后，减压干燥23小时，得到白色的硫酸长春新碱。经检测，硫酸长春新碱的质量百分含量为98.5%，单杂为0.56%，总杂为1.5%。
【权利要求】
1.一种长春新碱的合成方法，其特征在于包括如下步骤: 1)长春花碱的制备 将长春花碱硫酸盐加入水中，配制成浓度为0.2~0.26g/mL的长春花碱硫酸盐溶液，然后加入氨水调节长春花碱硫酸盐溶液的PH值至7.5~8，再加入足量的二氯甲烷进行萃取，分层后，去掉上层清液，将下层有机相旋干，真空中抽干，得到长春花碱； 2)长春新碱的合成 将长春花碱溶解于四氢呋喃中，配制成浓度为0.02~0.025g/mL的长春花碱四氢呋喃溶液，然后将盛有长春花碱四氢呋喃溶液的反应容器置于低温恒温反应浴中，将乙酸加入长春花碱四氢呋喃溶液中，其中长春花碱与乙酸的质量体积比为长春花碱:乙酸=0.25~0.3g/mL,，当低温恒温反应浴的温度降至一 63~一 67°C时，保温，在恒温条件下以10~15mL/min的速度滴加浓度为0.15~0.2g/mL的重铬酸钠溶液，其中长春花碱与重铬酸钠的质量比为长春花碱:重铬酸钠=1:1.60,反应完毕后向反应所得物中滴加氨水,调节pH值至3.5~4，生成沉淀物，将反应容器移出低温恒温反应浴后，向反应容器中加纯化水溶解沉淀物，再加入氨水调节PH值至8~9，又生成沉淀物，加入三氯甲烷溶解沉淀物，过滤得滤液，将滤液静置分层，去除上层清液，将下层有机相旋干，在真空中抽干，得到深棕色长春新碱粗品。
2.根据权利要求1所述长春新碱的合成方法，其特征在于:将长春新碱粗品进行纯化，得到长春新碱纯化品，长春新碱粗品的纯化包括如下步骤: ①按体积比三氯甲烷:无水甲醇=99.5:0.5，将三氯甲烷与无水甲醇混合均匀配制成洗脱剂1，先向层析柱中加入部分洗脱剂I润洗层析柱，再称取200~300目的柱层层析硅胶，将柱层层析硅胶加入到剩余的洗脱剂I中，搅拌均匀后装入层析柱中，待层析柱完全走透后关闭旋塞； ②按体积比三氯甲烷:无水甲醇=99:1，将三氯甲烷与无水甲醇混合均匀配制洗脱剂2,按质量体积比长春新碱粗品:三氯甲烧=0.56g/mL~0.7g/mL,将长春新碱粗品加入三氯甲烷中，完全溶解后加入层析柱中，将洗脱剂2以45~55mL/min的流速对层析柱进行洗脱，直至样品色带下至层析柱底部，接收瓶出现颜色为止； ③更换样品色带，按体积比三氯甲烷:无水甲醇=98.5:1.5，将三氯甲烷与无水甲醇混合均匀配制成洗脱剂3，将洗脱剂3以45~55mL/min的流速对层析柱进行洗脱，直至样品色带下至柱子底部，更换接收瓶；再以体积为层析柱体积的洗脱剂4以45~55mL/min的流速重复对层析柱进行洗脱，以洗脱剂3为基准，每次重复洗脱层析柱时，洗脱剂4中无水甲醇的体积百分含量较上一次洗脱时无水甲醇的含量递增0.5%，三氯甲烷的体积百分含量较上一次洗脱时三氯甲烷的含量递减0.5 %，同时开始接收层析柱流出的液体，层析柱流出的液体即为接收液，并检测接收液中长春新碱的纯度，当接收液中长春新碱的纯度^ 60%时，开始收集接收液，当接收液中长春新碱的纯度〈60%时，停止收集接收液； ④将收集的接收液进行旋蒸浓缩，旋蒸温度为26~30°C，压强为-0.1MPa~一0.08MPa，旋蒸至回流管中3秒内没有回流溶剂滴下为止，此时旋蒸后的浓缩物呈粘绸状，停止旋蒸，然后将浓缩物真空抽干，得到长春新碱纯化品。
3.根据权利要求2所述长春新碱的合成方法，其特征在于步骤③中检测接收液中长春新碱的纯度的方法如下:按体积比石油醚:三氯甲烷:丙酮:二乙胺=6:3:0.5:0.6，将石油醚、三氯甲烷、丙酮和二乙胺混合均匀作为展开剂，将纯度≥70%的长春新碱溶于三氯甲烷后得到的长春新碱三氯甲烷溶液作为对照，将接收液和长春新碱三氯甲烷溶液用薄层层析法进行分析，用三用紫外分析仪观察接收液和长春新碱三氯甲烷溶液在薄层层析板上分离后的色带分布情况，当两者在薄层层析板上分离后的色带分布相同时，将该接收液用高效液相色谱法检测该接收液中长春新碱的纯度，当该接收液中长春新碱的纯度> 60%时，开始收集接收液，当用三用紫外分析仪观察到两者在薄层层析板上分离后的色带分布有差异时，此时长春新碱样品点淡化，杂质点较浓，再将该接收液用高效液相色谱法检测该接收液中长春新碱的纯度，当该接收液中长春新碱的纯度〈60%时，停止收集接收液。
4.根据权利要求2所述长春新碱的合成方法，其特征在于:将长春新碱纯化品进行精制，得到长春新碱，长春新碱纯化品的精制包括如下步骤: 按质量体积比长春新碱纯化品:无水甲醇=l:2g/mL，将长春新碱纯化品加入无水乙醇中，在38~42 °C水浴条件下溶解，完全溶解后用超声波超声，有沉淀析出后在-20~-30°C下冷藏，直至沉淀析出完全，用溶剂过滤器抽滤，将滤饼用无水甲醇洗涤，再将洗涤后的滤饼用足量的二氯甲烷溶解，溶解后旋干，真空抽干，将抽干所得物在-20~_30°C下用无水甲醇进行重结晶，至少重结晶5次，得到白色的长春新碱。
5.根据权利要求4所述长春新碱的合成方法，其特征在于:将抽干所得物在-20~_30°C条件下用无水甲醇进行重结晶5次，每次重结晶时加入的无水甲醇的体积依次为抽干所得物质量的2.2,2.4,2.8,2.6和3倍。
6.一种基于权利要求1所述方法合成硫酸长春新碱的方法，其特征在于包括如下步骤: 1)长春花碱的制备 将长春花碱硫酸盐加入水中，配制成浓度为0.2~0.26g/mL的长春花碱硫酸盐溶液，然后加入氨水调节长春花碱硫酸盐溶液的PH值至7.5~8，再加入足量的二氯甲烷进行萃取，分层后，去掉上层清液，将下层有机相旋干，真空中抽干，得到长春花碱； 2)长春新碱的合成 将长春花碱溶解于四氢呋喃中，配制成浓度为0.02~0.025g/mL的长春花碱四氢呋喃溶液，然后将盛有长春花碱四氢呋喃溶液的反应容器置于低温恒温反应浴中，将乙酸加入长春花碱四氢呋喃溶液中，其中长春花碱与乙酸的质量体积比为长春花碱:乙酸=0.25~.0.3g/mL，，当低温恒温反应浴的温度降至一 63~一 67°C时，保温，在恒温条件下以10~15mL/min的速度滴加浓度为0.15~0.2g/mL的重铬酸钠溶液，其中长春花碱与重铬酸钠的质量比为长春花碱:重铬酸钠=1:1.60,反应完毕后向反应所得物中滴加氨水,调节pH值至3.5~4，生成沉淀物，将反应容器移出低温恒温反应浴后，向反应容器中加纯化水溶解沉淀物，再加入氨水调节PH值至8~9，又生成沉淀物，加入三氯甲烷溶解沉淀物，过滤得滤液，将滤液静置分层，去除上层清液，将下层有机相旋干，在真空中抽干，得到深棕色长春新喊粗品； 3)硫酸长春新碱的合成 将长春新碱粗品进行纯化和精制后所得的长春新碱溶解于乙醇中得到长春新碱乙醇溶液，其中长春新碱与乙醇的质量体积比为长春新碱:乙醇=1:3g/mL，在搅拌条件下以20~30mL/min的速度向长春新碱乙醇溶液中滴加体积百分比浓度为5%的硫酸乙醇溶液，产生白色沉淀，当溶液的PH值为3.8~4.1时加入质量为长春新碱质量30倍的沸乙醇，再在-20~_30°C下冷藏至沉淀完全，抽滤，将滤饼用冰乙醇洗涤，真空抽干后，进行常温减压干燥得干燥物，将干燥物进一步精制，得到白色的硫酸长春新碱。
7.根据权利要求6所述基于权利要求1所述方法合成硫酸长春新碱的方法，其特征在于步骤3)中干燥物的精制包括如下步骤: 将干燥物用足量的纯化水溶解，然后置于冷冻干燥机冷阱内，在-53~-57°C下预冷后，减压干燥，得到白色的硫酸长春新碱。
【文档编号】C07D519/04GK103965219SQ201410203281
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2014年5月14日 优先权日:2014年5月14日
【发明者】张文凯, 何福彪, 何绍春 申请人:湖北宏中药业有限公司