一种土拉霉素残留标示物的合成方法
【专利摘要】本发明属于化学合成【技术领域】，具体涉及一种土拉霉素残留标示物，名称为3-脱克拉定糖-9-脱氧-9-二氢-9a-氮杂-9a-同型红霉素A的化学合成方法。本发明的特征是，以红霉素A(E)肟为原料，经过贝克曼重排反应得到红霉素A6,9-亚胺醚，经硼氢化钠还原即得氮红霉素，然后在酸性条件下水解脱掉克拉定糖得到3-脱克拉定糖-9-脱氧-9-二氢-9a-氮杂-9a-同型红霉素A粗品，经反复重结晶后制得其纯品，HPLC纯度达99.5％以上。本发明工艺简便，反应产率高，产品纯度高，可以作为土拉霉素残留标示物的标准物质候选物。
【专利说明】一种土拉霉素残留标示物的合成方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于化学合成【技术领域】，具体涉及一种一种土拉霉素残留标示物的合成方 法该代谢物的化学名称为3-脱克拉定糖-9-脱氧-9-二氢_9a_氮杂_9a_同型红霉素 A。
【背景技术】
[0002] 土拉霉素，商品名瑞可新，由美国辉瑞动物保健公司开发的最新动物专用半合成 大环内酯类抗生素，我国农业部2008年首次批准了该药的使用。土拉霉素是广谱抗菌药， 对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抗菌活性，对引起猪呼吸系统疾病的病原菌尤其敏 感，如溶血性巴氏杆菌、出血败血性巴氏杆菌、睡眠嗜血杆菌、支原体、类胸膜肺炎的放线杆 菌、支气管败血波氏杆菌、副猪嗜血杆菌等，对引起牛传染性角膜结膜炎的牛莫拉菌也具有 很好的抗菌活性。其抑菌机理是通过选择性结合到细菌核糖体50S亚基上，通过刺激肽酰 tRNA在移位过程中从核糖体分解，抑制细菌必需蛋白质的合成，从而起到杀菌、抑菌的作 用。治疗效果优于泰乐菌素、替米考星等。该药具有用量少，单次给药，生物利用度高，半衰 期长，低残留等特点在临床上使用较为广泛。
[0003] 随着该药在临床上广泛使用，不遵从休药期现象严重，使该药物在动物性食品中 残留。有文献报道给药的动物，会出现组织变色，流涎、腹泻、心肌变性等，因此对人体健 康具有潜在危害。土拉霉素在动物体内经过几种方式代谢，如土拉霉素脱氧糖胺部分发 生N-去甲基，N-氧化，C3位二脱氧甲基己糖（即克拉定糖）部分水解，大环内酯水解等， 其中以3-脱克拉定糖-9-脱氧-9-二氢-9a-氮杂-9a-同型红霉素 A (化学名：二脱氧甲 基己糖水解的代谢物（2R，3S，4R，5R，8R，10R，11R，12S，13S，14R)-2-乙基-3, 4, 10, 13-四 羟基-3, 5, 8, 10, 12, 14-六甲基-11-[[3, 4, 6-三脱氧-3-(二甲氨基）-β-D-木-己吡喃 糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮）在动物组织中残留浓度最高，残留时间最 久，而被食品添加剂联合专家委员会（JECFA)和欧洲药物评审组织（EMEA)规定为残留标示 物，做为土拉霉素在动物性食品中残留的监控对象（Committee for veterinary medical products Tulathromycin EMEA/MRL/894/04-Final· January. 2004)，其中并规定牛、猪等 动物肝、肾、皮脂中的最大残留限量分别为3000 μ g/kg、3000 μ g/kg和100 μ g/kg。
[0004] 残留标示物标准物质是动物性食品安全监控技术和兽药残留检测技术的标准对 照物质，关系到动物性食品安全级兽药残留监控结果的可靠性。而国内外尚未有公司出售 TUM标准品，不利于土拉霉素药理、毒理学研究，以及该药物在食品动物中的残留监控。
[0005] 目前有关TUM合成的文献未见报道，分析其化学结构可以看出与氮红霉素脱掉克 拉定糖的结构一致，目前合成氮红霉素的文献报道较多，合成方法也很成熟，通常是以红霉 素为原料，经过肟化，贝克曼重排和还原而得到。本发明将借鉴文献方法合成氮红霉素，然 后经过酸水解脱除克拉定糖即可得到目标产物。
[0006] 目前氮红霉素的合成方法有以下文献报道：
[0007] (l)Bingwei V. Yang(1997)选用红霉素 A(E)肟为原料，采用两步反应，在吡啶溶 液中经过贝克曼重排、氢化还原得到氮红霉素。反应过程中用到吡啶等有毒有害的试剂，金 属催化剂 Pt02#格昂贵，增加了成本（Bingwei V.Y. Intermediate for azithromycin. US 005686587A, 1997)。反应式如下所示：
[0008]
【权利要求】
1. 一种土拉霉素残留标不物，名称为3-脱克拉定糖-9-脱氧-9-二氢_9a_氮 杂-9a_同型红霉素 A的化学合成方法，其特征在于如下步骤： (1) 在反应器中依次加入红霉素 A(E)肟，碳酸氢钠以及丙酮-水的混合溶液， 在-15°C?15°C下搅拌溶解，滴加对甲苯磺酰氯，反应完毕后用20%氢氧化钠溶液调pH至 10?12,过滤，得产物红霉素 A6, 9-亚胺醚； (2) 将步骤（1)所得产物，与溶剂和还原剂在-20°C?25°C下混合，在此温度下搅拌反 应；反应完全后加入有机酸或无机酸进行水解lh，得氮红霉素； (3) 将步骤（2)所得产物溶于甲醇、丙酮或水中，于-5°C?30°C下搅拌溶解，加入盐酸 或硫酸，搅拌反应2-12h，反应完毕后用20 %氢氧化钠调节溶液pH至碱性，用二氯甲烷萃取 3次，收集滤液，浓缩，得3-脱克拉定糖_9_脱氧_9_二氢_9a_氮杂_9a_同型红霉素 A ; (4) 将步骤（3)所得产物，用混合有机溶剂重结晶3?5次，真空干燥箱中干燥后即得 1?纯度3-脱克拉定糖_9_脱氧_9_二氢_9a_氮杂_9a_同型红霉素 A ; 其中： 步骤⑴所述红霉素 A(E)肟、磺酰化试剂、碳酸氢钠摩尔比为1:1. 5:5;反应时间为 3h ； 步骤（2)所述还原剂为硼氢化钠或硼氢化钾，反应时间10?14h，酸为10%硫酸，盐酸 或柠檬酸； 步骤（3)所述盐酸或硫酸的浓度为2?8mol/L，反应时间为4?8h ; 步骤（4)中重结晶所用混合有机溶剂为丙酮与石油醚，体积比为3 :1?8:1。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3)中盐酸或者硫酸的浓度为4? 6mol/L〇
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4)中重结晶所用的丙酮与石油醚， 体积比为4?6:1。
【文档编号】C07H1/00GK104119413SQ201410366468
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2014年7月29日 优先权日:2014年7月29日
【发明者】袁宗辉, 赵雅, 潘源虎, 王玉莲, 黄玲利, 周波, 陶燕飞, 陈冬梅, 谢书宇, 王旭, 刘振利, 谢长清 申请人:华中农业大学