专利名称：硫酸软骨素钠盐的纯化方法
技术领域：
本发明涉及一种酸性粘多糖的纯化方法，尤其涉及一种从动物软骨中提 取的硫酸软骨素钠盐粗品的纯化方法，属于生物化学制药领域。
背景技术：
硫酸软骨素钠盐是从动物软骨中提取的一种酸性粘多糖，主要用于预防 和治疗心脑血管疾病，我国也将其用于预防链霉素引起的耳聋。现在市场上的硫酸软骨素一般有两个规格，即分别为90%和95%，两者 的蛋白质含量都较高，产品放置一段时间后就会变黄，变质，保质期在两年 以内，有可能产品用户还没服用就过了保质期了。现有的硫酸软骨素钠盐生产工艺一般是先稀碱处理动物软骨，再经酶解， 乙醇沉淀等步骤，可生产出90%左右含量的食品级产品，个别方法也有通过 超滤或钙盐转化法生产含量大于95%的医用级产品。但现有的各种方法均无 法做到大批量的生产含量大于99%，蛋白质含量低于1.0。^的硫酸软骨素钠 盐。有部份文献报道采用强碱性阴离子交换树脂可以试制蛋白质含量同样低 的产品，但仅限于实验室规模，不能扩大到大生产实际应用。迄今为止，缺 乏一种大规模，可批量的硫酸软骨素粗品的纯化方法。发明内容本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种大规模， 可批量生产的纯化硫酸软骨素钠盐的方法。本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的 一种硫酸软骨素钠盐的纯化方法，包括(1) 将粗品硫酸软骨素钠盐(90%含量)经水溶解后上强酸阳离子交换 树脂柱，收集过柱液；用纯水洗脱，收集洗脱液与过柱液合并，备用；(2) 将步骤(1)所收集的过柱液和洗脱液上大孔弱碱阳离子交换柱，依次用纯水、1-5°/。的氯化钠溶液洗脱杂质；(3)用7-10%的氯化钠溶液洗脱硫酸软骨素钠盐，收集洗脱液；过滤， 超滤脱盐，用乙醇沉淀，干燥，即得。 为了达到更好的纯化效果，优选的-步骤(1)中所收集的过柱液或洗脱液的pH值小于3.0; 步骤(2)中用3-5%的氯化钠溶液洗脱杂质；步骤(3)中用8%的氯化钠溶液洗脱硫酸软骨素钠盐；所述的过滤是将洗脱液板框过滤后再用0.2微米微孔滤膜过滤；所述的超滤脱盐是用10000分 子量超滤膜反复加纯水超滤至氯化钠浓度低于2.0%。本发明将粗品硫酸软骨素钠盐经水溶解，依次通过强酸阳离子交换树脂 转变成氢型游离硫酸软骨素，再通过羟型大孔阴离子交换柱或在反应罐中搅 拌吸附从而使产品交换吸附在大孔阴离子交换柱上。纯水洗涤数次，根据产 品要求的蛋白质限度用不同浓度氯化钠再进行洗脱，提高洗脱液氯化钠的浓 度有助于得到纯度更高，杂质更少的高纯度产品(最高几近纯品)。 一般做为口服级产品，硫酸软骨素含量达到99.0%以上，蛋白质含量低于0.5%已足够 了。最后用较高浓度(大于5.0%)的氯化钠洗下产品，超滤脱盐后，用乙醇 沉淀，8(TC以下干燥，得到纯度很高的硫酸软骨素钠盐。本发明的纯化硫酸软骨素钠盐主要具有以下几方面的优点1、 由本发明方法所纯化的硫酸软骨素钠盐纯度高，杂质少；现有方法除 强碱性阴离子交换树脂无一能将硫酸软骨素钠盐产品中的蛋白质含量降到l.O %以下。本发明方法通过提高氯化钠浓度洗脱杂质使蛋白质含量轻松达到0.5 %以下甚至更低水平，硫酸软骨素钠盐的纯度达到99.0%以上。2、 本发明方法产量大，可应用于工业化大规模生产；现有方法中采用强 碱性阴离子交换树脂虽然在产品质量上与本发明方法不相上下，但其单位体 积树脂产量不及本发明方法二十分之一，应用本发明方法IOOO升树脂每天可 提纯得到100公斤高纯度硫酸软骨素钠盐，而现有方法无法将蛋白质的含量 降到1.0%以下。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随 着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成 任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下 可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均 落入本发明的保护范围内。
实施例1
1、 按照以下方法预处理强酸性阳离子交换树脂732号(购自上海树脂厂) (1)用纯水浸泡新树脂24小时；(2)加入1N盐酸溶液浸泡树脂12小时，纯水洗至pH5.0; (3)加0.5N氢氧化钠溶液浸树脂12小时，纯水洗至pH8.0;(4)用柱床体积2倍1N盐酸溶液流经树脂柱床，流速为每小时1倍柱床体 积，盐酸合部加完后，加纯水洗至pH5.0备用；2、 按照以下方法预处理大孔弱碱阴离子交换树脂(鲁抗树脂厂生产，其 型号为D-845)， (l).用纯水浸泡新购树脂24小时；(2)加1N氢氧化钠溶液 浸泡树脂12小时，纯水洗至pH8.0; (3)力Q 0.5N盐酸溶液浸泡树12小时， 纯水洗至pH5.0; (4).用柱床体积2倍量1N氢氧化钠溶液流经树脂柱床，流 速为每小时l倍柱床体积，氢氧化钠完全加完后，加纯水洗至pH7.0备用；3、 按阴、阳树脂体积交换当量的三分之一计算(按树脂标示交换当量3/1 计算)出粗品硫酸软骨素的重量，加20倍纯水溶解，再用板框过滤得到澄清 溶液；4、 先步骤(3)所得到的澄清溶液通过阳离子交换树脂，收集pH3.0以 下部份溶液，最后用纯水洗脱，当pH高于3.0时，停止收集；树脂按常规方 法再生备下次使用；5、 将步骤(4)所收集溶液控制流速为每小时1倍柱床体积，通过大孔 弱碱阳离子交换柱，全部加注完成后先用纯水洗脱，再用3%氯化钠洗脱杂质；6、 继续用8.0%氯化钠洗脱，从硫酸软骨素钠盐流出开始收集至无产品 流出(或较少产品流出)；7、 将流出液板框过滤，0.2微米微孔滤膜过滤后，再用10000分子量超 滤膜反复加纯水超滤至氯化钠浓度低于2.0%或调整至2.0%。体积浓縮至硫 酸软骨素浓度为8.0 %左右时加2倍95 %乙醇沉淀。8、用85%和95%乙醇依次脱水，抽干，80。C以下干燥，得到硫酸软骨 素纯品；经检测，本纯化方法所得到的硫酸软骨素纯品的纯度为99.2%，蛋 白含量为0.5%，其它杂质约0.3%。 实施例21 、按照以下方法预处理强酸性阳离子交换树脂732号(购自上海树脂厂) (1).用纯水浸泡新树脂24小时；(2)加入1N盐酸溶液浸泡树脂12小时，纯水洗至pH5.0; (3)加0.5N氢氧化钠溶液浸树脂12小时，纯水洗至pH8.0; (4)用柱床体积2倍1N盐酸溶液流经树脂柱床，流速为每小时1倍柱床体积，盐酸合部加完后，加纯水洗至pH5.0备用；2、 按照以下方法预处理大孔弱碱阴离子交换树脂(鲁抗树脂厂生产，其 型号为D-845)， (l).用纯水浸泡新购树脂24小时；(2)加1N氢氧化钠溶液 浸泡树脂12小时，纯水洗至pH8.0; (3)加0.5N盐酸溶液浸泡树12小时， 纯水洗至pH5.0; (4).用柱床体积2倍量1N氢氧化钠溶液流经树脂柱床，流 速为每小时l倍柱床体积，氢氧化钠完全加完后，加纯水洗至pH7.0备用；3、 按阴、阳树脂体积交换当量的三分之一计算(按树脂标示交换当量3/1 计算)出粗品硫酸软骨素的重量，加20倍纯水溶解，再用板框过滤得到澄清 溶液；4、 先步骤(3)所得到的澄清溶液通过阳离子交换树脂，收集pH3.0以 下部份溶液，最后用纯水洗脱，当pH高于3.0时，停止收集；树脂按常规方 法再生备下次使用；5、 将步骤(4)所收集溶液控制流速为每小时1倍柱床体积，通过大孔 弱碱阳离子交换柱，全部加注完成后先用纯水洗脱，再用5%氯化钠洗脱杂质；6、 继续用8.0。Z氯化钠洗脱，从硫酸软骨素钠盐流出开始收集至无产品 流出(或较少产品流出)；7、 将流出液板框过滤，0.2微米微孔滤膜过滤后，再用10000分子量超 滤膜反复加纯水超滤至氯化钠浓度低于2.0% 。体积浓縮至硫酸软骨素浓度为 8.0%左右时加2倍95%乙醇沉淀；8、 用85%和95%乙醇依次脱水，抽干，8(TC以下干燥，得到硫酸软骨 素纯品。经检测，本纯化方法所得到的硫酸软骨素纯品的纯度为99.7%，蛋白含量为0.2%，其它杂质约0.1%。 实施例31 、按照以下方法预处理强酸性阳离子交换树脂732号(购自上海树脂厂): (1).用纯水浸泡新树脂24小时；(2)加入1N盐酸溶液浸泡树脂12小时，纯水洗至pH5.0; G)加0.5N氢氧化钠溶液浸树脂12小时，纯水洗至pH8.0; (4)用柱床体积2倍1N盐酸溶液流经树脂柱床，流速为每小时1倍柱床体积，盐酸合部加完后，加纯水洗至pH5.0备用；2、 按照以下方法预处理大孔弱碱阴离子交换树脂(鲁抗树脂厂生产，其 型号为D-845)， (l).用纯水浸泡新购树脂24小时；(2)加1N氢氧化钠溶液 浸泡树脂12小时，纯水洗至pH8.0; (3)加0.5N盐酸溶液浸泡树12小时， 纯水洗至pH5.0; (4).用柱床体积2倍量1N氢氧化钠溶液流经树脂柱床，流 速为每小时l倍柱床体积，氢氧化钠完全加完后，加纯水洗至pH7.0备用；3、 按阴、阳树脂体积交换当量的三分之一计算(按树脂标示交换当量3/1 计算)出粗品硫酸软骨素的重量，加20倍纯水溶解，再用板框过滤得到澄清 溶液；4、 先步骤(3)所得到的澄清溶液通过阳离子交换树脂，收集pH3.0以 下部份溶液，最后用纯水洗脱，当pH高于3.0时，停止收集；树脂按常规方 法再生备下次使用；5、 将步骤(4)所收集溶液控制流速为每小时1倍柱床体积，通过大孔 弱碱阳离子交换柱，全部加注完成后先用纯水洗脱，再用4%氯化钠洗脱杂质；6、 继续用8.0%氯化钠洗脱，从硫酸软骨素钠盐流出开始收集至无产品 流出(或较少产品流出)；7、 将流出液板框过滤，0.2微米微孔滤膜过滤后，再用10000分子量超 滤膜反复加纯水超滤至氯化钠浓度低于2.0%或调整至2.0% 。体积浓縮至硫 酸软骨素浓度为8.0%左右时加2倍95%乙醇沉淀。8、 用85%和95%乙醇依次脱水，抽干，80'C以下干燥，得到硫酸软骨 素纯品；经检测，本纯化方法所得到的硫酸软骨素纯品的纯度为99.4%，蛋 白含量为0.4%，其它杂质约0.2%。
权利要求
1、一种硫酸软骨素钠盐的纯化方法，包括(1)将粗品硫酸软骨素钠盐经水溶解后上强酸阳离子交换树脂柱，收集过柱液；用纯水洗脱，收集洗脱液与过柱液合并，备用；(2)将步骤(1)所收集的过柱液和洗脱液上大孔弱碱阳离子交换柱，依次用纯水、1-5％的氯化钠溶液洗脱杂质；(3)用7-10％的氯化钠溶液洗脱硫酸软骨素钠盐，收集洗脱液，过滤，超滤脱盐，用乙醇沉淀，干燥，即得。
2、 按照权利要求1的纯化方法，其特征在于步骤(1)中所收集的过 柱液或洗脱液的pH值小于3.0。
3、 按照权利要求1的纯化方法，其特征在于步骤(2)中用3-5%的氯 化钠溶液洗脱杂质。
4、 按照权利要求1的纯化方法，其特征在于步骤(3)中用8%的氯化 钠溶液洗脱硫酸软骨素钠盐。
5、 按照权利要求1的纯化方法，其特征在于步骤(3)中所述的过滤 是将洗脱液板框过滤后再用0.2微米微孔滤膜过滤。
6、 按照权利要求1的纯化方法，其特征在于步骤(2)中所述的超滤 脱盐是用10000分子量超滤膜反复加纯水超滤至氯化钠浓度低于2.0%。
全文摘要
本发明公开了一种硫酸软骨素钠盐的纯化方法，该纯化方法包括(1)将粗品硫酸软骨素钠盐经水溶解后上强酸阳离子交换树脂柱，收集过柱液；用纯水洗脱，收集洗脱液，备用；(2)将步骤(1)所收集的洗脱液上大孔弱碱阳离子交换柱，依次用纯水、氯化钠溶液洗脱，收集洗脱液；洗脱液过滤后，超滤脱盐，用乙醇沉淀，干燥，即得硫酸软骨素钠盐纯品。由本发明方法所纯化的硫酸软骨素钠盐纯度达到99.0％以上，杂质少，可蛋白质含量降到1.0％以下。应用本发明方法提纯，1000升树脂每天可得到100公斤高纯度硫酸软骨素钠盐，可实现大规模生产。
文档编号C08B37/08GK101215339SQ20081000063
公开日2008年7月9日 申请日期2008年1月11日 优先权日2008年1月11日
发明者张国志 申请人:张国志