含有蘑菇多糖体的组合物及其制备方法

专利名称：：含有蘑菇多糖体的组合物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及蘑菇多糖体的制备方法及蘑菇多糖体的应用。
背景技术：
：近年来有许多研究发现蘑菇菌丝体或子实体中含有相当多的生理活性成分，如多糖体(P-Glucan)、超氧化物岐化酶、三鹏类(Triterpenoids)等物质，具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等作用。而其中以多糖体研究最为深入且为最具潜力的抗肿瘤及免疫调节物质。已知多糖体如13-葡聚糖，为一种良好的免疫促进剂，可有效剌激免疫细胞，不仅能增强生物体专一性免疫反应，同时也提升了非专一性免疫反应。此外，P-葡聚糖能使生物体抵抗细菌、真菌、病毒及寄生虫的感染，以及抑制肿瘤的生长。近年来多糖体在伤口愈合的研究领域中备受瞩目，许多研究指出多糖体可以通过活化巨噬细胞，进而剌激胶原蛋白再生作用，帮助伤口复原。2001年的研究中(KougiasP等人，Normalhumanfibroblastsexpresspatternrecognitionreceptorsforfungal(1—3)-P-D-glucans.Infectl匪nity69:3933-3938，2001)，发现除了在免疫细胞上具有多糖体受体外，第一次在人类纤维母细胞(normalhumandermalfibroblast)上也发现多糖体受体，可使纤维母细胞直接接收来自多糖体的分子信息；代表多糖体促进伤口愈合的机理不仅是通过活化巨噬细胞，可能也与纤维母细胞有相关机制。深入研究纤维母细胞与伤口愈合之间的机制，可发现纤维母细胞受到多糖体剌激后，通过活化纤维母细胞的两种转录因子AP-l(活化子蛋白-1，Activatorprotein-1)、SPl(专一性蛋白-1，Specificprotein-1)，以及两种信息传导途径NF-KB(Nuclearfactor-KB)、NF_1(Nuclearfactor-1)，可以强化伤口部位的免疫反应，促使多种细胞激素的增生及胶原蛋白前驱物基因(Procollagengenes)的表现，进而生成胶原蛋白，达到伤口复原的效果。多糖体在伤口愈合的应用上也有实际成效，不但可以降低病人在手术之后感染细菌的机率，使用多糖体与胶原蛋白基质的合成物更可以促进局部深度烫伤皮肤的复原，对于减轻患者疼痛也有具有疗效(DelatteSJ等人，Effectivenessofbeta-glucancollagenfortreatmentofpartial—thicknessburnsinchildren.JPediatrSurg36:113-118，2001)。因此，在伤口愈合方面，已渐渐朝向将多糖体作为伤口敷料以及人工皮肤的领域发展。以往多糖体的研究多个着眼于酵母菌多糖体的生理活性，因此，在伤口愈合效用的研究领域大多使用酵母菌多糖体。近年来蘑菇多糖体(mushroomP-glucan)逐渐受到重视，主要原因在于蘑菇多糖体的分支度、分子量、水溶性以及结构稳定性都比酵母菌多糖体高出许多，具有较高的免疫促进能力。因此，开发具有良好伤口愈合效力的蘑菇多糖体仍有其必要性。然而，蘑菇类含有的成分复杂，如多糖、蛋白质、多肽类、三萜类、多种氨基酸、生物碱、酯类和有机酸等，所以萃取蘑菇多糖体物需经繁琐的步骤，如热萃取、碱萃取、酸萃取等3方式，故易残留有机溶剂、氨基酸与蛋白质，这些残留物遂可能对人体产生剌激性免疫反应。为解决上述问题，本发明提供了新型的含蘑菇P-葡聚糖的组合物及其制备方法。
发明内容鉴于上述现有技艺的缺陷，本发明的主要目的是提供一种能促进皮肤伤口愈合的蘑菇多糖体组合物。本发明的另一目的是提供一种能增进免疫活性的组合物。本发明的再一目的是提供一种蘑菇多糖体的制备方法，能利用简单的培养基与简单的分离纯化步骤，获得蘑菇多糖体供本发明的组合物所用。为达上述及其他目的，本发明提供促进皮肤伤口愈合的组合物，包含蘑菇多糖体及载体。磨过多糖体可选自所有食用蘑菇类与医药用蘑菇类的多糖体。蘑菇包括，举例但非限制，裂褶菌(Schizophyll獄o匪e)、巴西蘑菇(Agaricsblaze)、冬虫夏草(Cordyc印ssinensis)、灵芝(Ganodermalucidum)、云芝(Coriolusversicolor)、樟芝(Anthodiacamphorate)、桑黄(Phelli皿slinteus)、珊瑚燕(Pleurotuscitrinopileatus)、香燕(Xenti皿laedodes)、柳松燕(Agrocybeaegerita)、猴头燕(Herici咖erinaceus)、杏鲍燕(Pleurotuseryngiig)、花辧葺(Sparrasiscrispa)、木葺(Auriculariaauricula)、金针燕(Flammulinavelutipes)或上述蘑燕的组合。本发明组合物的优选实施例为含有萃取自多种蘑菇的多糖体。本发明组合物的更优选实施例为，组合物包括20_35%萃取自裂褶菌与灵芝的多糖体；25-45%萃取自冬虫夏草、樟芝、云芝与巴西蘑菇的多糖体；以及20-35%萃取自桑黄、珊瑚菇、香菇、柳松菇、猴头菇、杏鲍菇、花瓣茸、木茸与金针菇的多糖体。本发明的组合物作为外用药物，可直接涂敷至伤口，可单独使用或与其他药物结合使用。组合物的载体可为液态、固态或半固态，且为药学上可接受的载体。在优选实施例中，载体为水。在另一优选实施例中，载体为羟乙基纤维素(HEC)。本发明还提供一种增进细胞免疫活性的组合物，其包含蘑菇多糖体及载体。蕈菇多糖体可选自所有食用蘑菇类与医药用蘑菇类的多糖体。蘑菇包括，举例但非限制，裂褶菌、巴西蘑燕、冬虫夏草、灵芝、云芝、樟芝、桑黄、珊瑚燕、香燕、田头燕属如柳松燕、猴头燕、杏鲍菇、花瓣茸、木茸、金针菇或上述蘑菇的组合。本发明组合物的优选实施例为含有萃取自多种蘑菇的多糖体。本发明组合物的更优选实施例为，组合物包括20_35%萃取自裂褶菌与灵芝的多糖体；25-45%萃取自冬虫夏草、樟芝、云芝与巴西蘑菇的多糖体；以及20-35%萃取自桑黄、珊瑚菇、香菇、柳松菇、猴头菇、杏鲍菇、花瓣茸、木茸与金针菇的多糖体。本发明的组合物可提高目标对象体内的自然杀伤细胞(naturalkillercell)、吞噬细胞、巨噬细胞及胶原纤维母细胞(fibroblast)的活性，达到增进免疫活性的效果。组合物可经由口服和/或直接涂敷，以提供给有需要的对象，优选方式为直接涂敷至皮肤，可单独使用或与其他药物结合使用。组合物的载体可为液态、固态或半固态，且为药学上可接受的载体。在优选实施例中，载体为水。在另一优选实施例中，载体为羟乙基纤维素。本发明还提供一种蘑菇多糖体的制备方法，包括(a)将蘑菇菌丝体于培养液中培养，而形成蘑菇菌液，(b)在高速下，以超声波粉碎步骤(a)所得的蘑菇菌液，(c)将粉碎的蘑菇菌液高速离心并收取上清液，(d)以乙醇沉淀上清液，而得沉淀物，(e)以水溶解沉淀物，而得水溶液及(f)藉薄膜分离水溶液，以获得蘑菇多糖体。且所得蘑菇多糖体可应用于前述的本发明组合物。培养液包括葡萄糖、酵母菌萃取物与黄豆胜肽，其中各成分以重量百分比表示，培养液优选为包含1_15%葡萄糖、0.1-1%酵母菌萃取物与1_10%黄豆胜肽；更优选为包含5_10%葡萄糖、0.5%酵母菌萃取物与2_5%黄豆胜肽。根据本发明，培养液与菌丝体中均含有蘑菇多糖体。根据本发明，步骤(d)所使用的乙醇为浓度95%的乙醇，而步骤(f)采用薄膜分离技术，用以将残留的乙醇及其他低分子量物质除去。本发明所使用蕈菇可选自所有食用蘑菇类与医药用蘑菇类，包括，举例但非限制，裂褶菌、巴西蘑菇、冬虫夏草、灵芝、云芝、樟芝、桑黄、珊瑚菇、香菇、田头菇属如柳松菇、猴头菇、杏鲍菇、花瓣茸、木茸、金针菇或上述蘑菇的组合。图1是本发明蘑菇多糖体制备方法的流程图；图2是条形图，其根据本发明的实施例，显示本发明多糖体组合物对于大白鼠背部全深度伤口愈合过程的面积变化图(数量=5)。对照对照组的生理盐水组；HEC:对照组的空白凝胶组；Glucan:蘑菇多糖体溶液组；HEC+Glucan:蘑菇多糖体凝胶组。图3是根据本发明的实施例，显示大白鼠背部全深度伤口的愈合过程记录(第1天至第9天)。对照对照组的生理盐水组；HEC:对照组的空白凝胶组；Glucan:蘑燕多糖体溶液组；HEC+Glucan:蘑菇多糖体凝胶组。图4是根据本发明的实施例，显示大白鼠背部全深度伤口的愈合过程记录(第11天至第19天)。对照对照组的生理盐水组；HEC:对照组的空白凝胶组；Glucan:蘑燕多糖体溶液组；HEC+Glucan:蘑菇多糖体凝胶组。图5是根据本发明的实施例，显示大白鼠背部全深度伤口的愈合过程记录(第21天至第29天)。对照对照组的生理盐水组；HEC:对照组的空白凝胶组；Glucan:蘑燕多糖体溶液组；HEC+Glucan:蘑菇多糖体凝胶组。图6是根据本发明的实施例，显示术后第3天大白鼠背部的伤口组织，以Masson染色的胶原纤维生长及分布情形(比例尺=100微米)。对照对照组的生理盐水组；HEC:对照组的空白凝胶组；Glucan:蘑菇多糖体溶液组；HEC+Glucan:蘑菇多糖体凝胶组。C:胶原纤维；E:表皮层；F:纤维母细胞。图7根据本发明的实施例，显示术后第14天大白鼠背部的伤口组织，以Masson染色的胶原纤维生长及分布情形(比例尺=100微米)。对照对照组的生理盐水组；HEC:对照组的空白凝胶组；Glucan:蘑菇多糖体溶液组；HEC+Glucan:蘑菇多糖体凝胶组。C:胶原纤维；E:表皮层；F:纤维母细胞。图8根据本发明的实施例，显示术后第29天大白鼠背部的伤口组织，以Masson染色的胶原纤维生长及分布情形(比例尺=100微米)。对照对照组的生理盐水组；HEC:对照组的空白凝胶组；Glucan:蘑菇多糖体溶液组；HEC+Glucan:蘑菇多糖体凝胶组。C:胶原纤维；E:表皮层；F:纤维母细胞。图9是条形图，其根据本发明的实施例，显示本发明的高分子多糖体对于大白鼠体内自然杀伤细胞活性的影响。图10是条形图，其是根据本发明的实施例，显示本发明的高分子多糖体对于小白鼠体内巨噬细胞吞噬活性的影响。具体实施例方式以下通过特定的具体实施例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭示的内容了解本发明的其他优点与功效。1.蘑菇菌种培养本发明可使用的蘑菇菌株如裂褶菌、巴西蘑菇、冬虫夏草、灵芝、云芝、樟芝、桑黄、珊瑚菇、香菇、田头菇属如柳松菇、猴头菇、杏鲍菇、花瓣茸、木茸、金针菇等，但不限于上述菌株。将菌种接种于预培养基(预培养基包含0.3%(w/w)酵母菌萃取物、0.3%麦芽抽出物、0.5%蛋白胨(p印tone)、1.0X葡萄糖、1.5X琼脂)上，于28°C培养箱中培养5-7天。将培养于YM培养基上的菌丝接种于装有液态培养基(培养基成分为5_10%葡萄糖、0.5-1%酵母菌萃取物与2-5%黄豆胜肽)的培养皿中，在2『C静置约1-2星期。将上述液态培养基中培养完成的菌丝体，转接至含800毫升灭菌培养基的广口瓶，在2『C下应用振荡培养法，发酵1-2星期，使菌丝体与高分子多糖体聚合完成。2.制备含蘑菇多糖体的组合物步骤如图3所示，将上述发酵后含高分子多糖体及菌丝体的蘑菇菌液，以超高速均质机及超声波振荡机分别处理10分钟，以振碎菌丝体细胞壁。通过高速离心(每分钟6，0008，000转)，收取上清液。加入与上清液等量的95%乙醇以萃取高分子多糖体并使之沉淀，然后收取沉淀物。将沉淀物均匀溶解于二次蒸馏水中，再利用分离膜系统(MembraneS印arationSystem)除去乙醇及剩余的小分子物质，即获得本发明的蘑燕多糖体组合物。本发明组合物可包含萃取自一种或多种蘑菇的多糖体。当本发明组合物包括两种以上的蘑菇多糖体时，蘑菇培养液可个别制备为多糖体组合物后再混合；或可将蘑菇培养液先行混合再进行多糖体组合物的制备。依据本实施例所得的组合物包括约20_35%萃取自裂褶菌与灵芝的多糖体；约25-45%萃取自冬虫夏草、樟芝、云芝与巴西蘑菇的多糖体；以及约20-35%萃取自桑黄、珊瑚菇、香菇、柳松菇、猴头菇、杏鲍菇、花瓣茸、木茸与金针菇的多糖体。依据本实施例所得的蘑菇多糖体组合物，萃取自不同蘑菇的多糖体所占多糖体总量之比例如下裂褶菌为16%、灵芝为16%、冬虫夏草为14%、樟芝为13%、云芝为8%、巴西蘑菇为6%、桑黄为3%、珊瑚菇为3%、香菇为3%、柳松菇为3%、猴头菇为3%、杏鲍菇为3%、6花瓣茸为3%、木茸为3%与金针菇为3%。组合物进一步应用于下列实施例中。3.蘑菇多糖体组合物的分析多糖体分析以胶体渗透层析仪(GelPermeationChromatogr即hy;GPC)分析，显示组合物含有五种不同分子量的多糖体分子，其分子量的范围为8万600万不等，分别为80988、392520、1294489、2049436与6130521。再进行蛋白质分析，证实组合物不包含氨基酸或蛋白质。并且，多糖体的主要结构式为(1—3)-P-D-葡聚糖(glucan)或(1—3)，(1—6)-|3-D-葡聚糖。组合物中蘑菇多糖体含量分析利用苯酚-硫酸法测量多糖体含量，方法及步骤如下在离心管中倒入l毫升蘑菇多糖体组合物，再加入4毫升95%乙醇，充分混合。在室温下，以转速750g离心15分钟。保留沉淀物并烘干，以蒸馏水将体积调成1毫升溶液。取0.5毫升待测溶液和0.5毫升5%苯酚混合后，再加入2.5毫升浓硫酸，静置10分钟后振荡，使其充分混合。静置30分钟后，以分光光度计(A=490nm)测量吸光值。结果显示，组合物的多糖体浓度为5毫克/毫升。4.蘑菇多糖体的伤口愈合效力测试将蘑菇多糖体组合物制备成不同剂型，其使用如下所述蘑菇多糖体溶液(以下以Glucan表示)距离伤口5公分处喷洒本发明蘑菇多糖体组合物，喷洒量约为1.7毫升。蘑燕多糖体凝胶(以下以HEC+Glucan表示)将2克羟乙基纤维素(HEC)粉末加入ioo毫升的蘑菇多糖体组合物中，加热搅拌均匀后，静置冷却即成凝胶状。使用时将凝胶状的蘑菇多糖体组合物覆盖住整块皮肤缺损的空间。并以生理盐水作为对照组，如下所述生理盐水(以下以Control表示)距离伤口5公分处喷洒生理盐水，喷洒量约为1.7毫升。空白凝胶(以下以HEC表示)将2克羟乙基纤维素(HEC)粉末加入100毫升的生理盐水中，加热搅拌均匀后，静置冷却即成凝胶状，经灭菌后保存于4t:冰箱。使用时将空白凝胶覆盖住整块皮肤缺损的空间。动物模式选用雄性Wistar大白鼠(来源台湾大学动物中心)，重量为380450克。实验前将大白鼠分别单独饲养，室温控制于25t:，光暗循环时间为12D:12L，待适应两星期后才开始进行实验。将大白鼠分为两组，A组5只，B组10只，总共15只。A组于手术后每两天换药一次，并观察背部伤口的愈合情形直到完全愈合为止。B组于手术后每两天换药一次，并分别在第3、5、7、14天及伤口完全愈合后牺牲，进行伤口的组织切片采样。实验前先将大白鼠秤量体重并记录，进行全身麻醉(Ketamine75150毫克/公斤)。以脊柱为中线，在第十二对肋骨及荐骨关节之间，左右两侧距离中线1公分处，使用2.4公分X2.4公分的印章，标示出4个对称伤口的照相区域；再以1.5公分X1.5公分的印章标示出每个伤口的取皮范围。消毒背部皮肤后切除取皮范围内的皮肤，深度达深肌膜层(Panniculuscarnosus)，制作出四个全深度伤口。清洗伤口后，将消毒过的透明塑料袋贴附于伤口，以签字笔描绘原始伤口面积。分别使用蘑菇多糖体溶液、蘑菇多糖体凝胶、生理盐水、与空白凝胶处理四个伤口，再将伤口覆盖固定。手术后每两天换药一次，并描绘伤口面积大小，详细记录伤口复原情形，并拍照记录。所有实验数据皆以平均值±标准差(Mean士S.D.)表示，并以单因子变异分析(One-wayanalysisofvariance;A丽A)进行实验结果的分析，再以LSD(Theleastsignificantdifferent)检定差异显著性。当p<0.01，视为具有统计上的显著差异。1多糖体组合物对伤口愈合的效果手术后(第l天)起，每两天观察一次伤口的面积变化情形，直到伤口完全愈合为止，结果如表1所示。表1以原始伤口面积为100%，换算伤口愈合过程中各时期的面积百分比，其所得的数据皆以平均值±标准差表示。最后，再将伤口面积数据经过统计分析之后，绘制成图2。并将大白鼠背部伤口愈合的影像纪录显示于图3至图5。图2显示，HEC组和HEC+Glucan组的伤口面积在术后第3天起即明显縮小；而Glucan组则在术后第5天起有明显差异。若比较各组伤口的面积变化，HEC+Glucan组在术后第7天起愈合速度较HEC组为佳，且在术后第3天起较Glucan组为佳，皆具显著差异性(p<0.01)。如图3至图5所示，伤口完全愈合所需时间，对照组于术后第29天愈合，Glucan组和HEC组于术后第23天愈合，较对照组提早了6天。HEC+glucan组是愈合最迅速者，于术后第19天就已完全愈合，相比于对照组提早了10天，也较HEC组和HEC+Glucan组提早了4天。表1显示不同处理对大白鼠背部全深度伤口愈合过程的面积变化表1<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>2多糖体组合物对伤口的皮肤组织影响以胶原纤维母细胞为例，正常皮肤组织在受伤第三天后，伤口部位的巨噬细胞会分泌细胞激素吸引纤维母细胞聚集，剌激其分泌胶原蛋白沈积在肉芽组织组成的暂时性基质中，当肉芽组织趋近成熟状态后，胶原蛋白水解酶会分解此暂时性基质，再由新生的胶原蛋白替补，形成新生皮肤组织的胞外基质。经过数周至数月不等的时间，新生的胶原蛋白会逐渐依照张力线的方向进行重新排列，使伤口愈合后的外观接近原先的正常组织。因此，以Masson染色的病理组织切片，可观察到呈蓝色网状波纹的胶原纤维，即为纤维母细胞所产生的胶原蛋白聚集成纤维束状，其生长和分布情形可用以评估伤口愈合状况。图6为术后第3天的病理组织切片，显示Glucan组和HEC+Glucan组的伤口部位皆出现纤维母细胞聚集，且HEC+Glucan组的胶原纤维生长情况较好。术后第14天，如图7所示，四组伤口皆布满新生胶原纤维。一般新生胶原纤维较细且排列较为紧密，需要一段时间才能接近正常皮肤的胶原纤维较粗且排列较为松散的状态。HEC+Glucan组相比于其他三组，已可观察到较粗的胶原纤维，显示伤口的复原情形较好。术后第29天，如图8所示，伤口外观已愈合，但内部胶原纤维仍持续排列中，Control组的胶原纤维较细，但排列较松散；HEC组及Glucan组的胶原纤维略粗，但排列较紧密；而HEC+Glucan组的胶原纤维最粗，排列密度最为适中，显然为四组处理组中最接近正常皮肤组织的。3多糖体组合物对伤口愈后皮肤的影响观察各组伤口愈后状况，于术后第50天时，检视大白鼠背部皮肤外观，HEC+Glucan组除了伤口愈合最迅速之外，愈后外观也与正常皮肤一致，没有明显疤痕。HEC组和Glucan组的伤口愈合时间无显著差异，愈后外观没有明显疤痕。对照组伤口恢复最为缓慢，且愈后外观留下较明显的疤痕。因此，证实本发明组合物除了可有效促进皮肤伤口的愈合作用之外，亦具有避免疤痕残留的功效。5.蘑菇多糖体提高免疫细胞活性效力测试(1)自然杀伤细胞活性测试如上述实例的动物模式，以本发明多糖体组合物每天涂于大白鼠的背部两次，并使用LIVE/DEADCell-MediatedCytotoxicity试剂盒(MolecularProbes)测定血液中自然杀伤细胞活性，实验步骤如下将YAC-1细胞浓度调成1Xl()6细胞/毫升。依比例加入DI0C18(10iiLDI0C18/毫升YAC-1细胞悬浮液)并混和均匀。于37t:培养20分钟。将细胞浓度调成1X106cell/以RPMI1640培养基(Hyclone)将淋巴球细胞调成细胞浓度2X106cell/毫升。将染色后的YAC-1细胞20微升加入的脾脏淋巴球悬浮液200微升中，并加入220微升的PI溶液(40微克/毫升)染色，以1000Xg离心30秒后，再于37t:培养2小时。以流式细胞仪测量淋巴球活性。实验结果如图9所示，显示3天后自然杀伤细胞活性提高到20%，而未以组合物处理的大白鼠(对照组)的自然杀伤细胞活性则为7%;实验持续进行，每天涂抹2次，至第6天时，大白鼠的自然杀伤细胞活性提升到24%，而控制组则仅为8%。故由本实验可知，于大白鼠的表面涂抹本发明所制备的高分子多糖体可以有效提升体内自然杀伤细胞的活性。(2)巨噬细胞活性测试如上述实例的动物模式，以本发明多糖体组合物每天涂于大白鼠的背部两次，并使用PHAGO-TEST试剂盒(ORPEGEN，Phama，F.R.G.)测定血液中吞噬细胞的活性，步骤如下取100微升含肝素的全血冰浴10分钟，加入20微升目标细胞(FITC-labeledE.coli)，以37t:预热水浴10分钟；置于冰上终止吞噬作用，并加入100微升骤冷液(quenchingsolution)(锥虫蓝)，混匀后冰浴2分钟。冲洗细胞后以离心除去上清液。加入2毫升的裂解液(lysingsolution)并混和均匀，于室温下作用20分钟，再以离心除去上清液。加入200微升DNA染色液，混和冰浴且避光10分钟。利用流式细胞仪，分析颗粒球与单核球的吞噬能力。实验结果如图10所示，2天后小白鼠颗粒白血球的吞噬活性，多糖体组合物处理组为15%，而未经组合物处理的对照组则为12%;以同样处理进行至第5天后，组合物处理组的颗粒白血球吞噬活性为22%，而对照组仅为13%。故由本实验的结果可知，应用本发明所制备的多糖体组合物，可经由皮肤的路径，有效提升实验动体内颗粒白血球的吞噬能力。上述实例充分显示，由蘑菇所萃取的多糖体制备的组合物可以有效提升使用动物的细胞免疫能力及促进皮肤的愈合能力，由此实验可了解本发明的多糖体组合物确可有效应用作为皮肤医疗或保养用品。上述实施例仅例示性说明本发明的组合物与制备方法，而非用于限制本发明。任何本领域技术人员均可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰与改变。因此，本发明的权利保护范围如权利要求所载。权利要求一种促进皮肤伤口愈合的组合物，其包含载体；和蘑菇多糖体，其中，蘑菇选自裂褶菌、巴西蘑菇、冬虫夏草、灵芝、云芝、樟芝、桑黄、珊瑚菇、香菇、柳松菇、猴头菇、杏鲍菇、花瓣茸、木茸、金针菇或上述蘑菇的组合。2.根据权利要求1所述的组合物，其中，蘑菇多糖体包括20至35%萃取自裂褶菌与灵芝的多糖体；25至45%萃取自冬虫夏草、樟芝、云芝与巴西蘑菇的多糖体；以及20至35%萃取自桑黄、珊瑚菇、香菇、柳松菇、猴头菇、杏鲍菇、花瓣茸、木茸与金针菇的多糖体。3.根据权利要求l所述的组合物，其作为外用药物。4.根据权利要求1所述的组合物，其中，载体为液态、固态或半固态。5.根据权利要求l所述的组合物，其中，载体为水。6.根据权利要求1所述的组合物，其中，载体为羟乙基纤维素。7.—种提高免疫细胞活性的组合物，其包含载体；和蘑菇多糖体，其中，蘑菇选自裂褶菌、巴西蘑菇、冬虫夏草、灵芝、云芝、樟芝、桑黄、珊瑚菇、香菇、柳松菇、猴头菇、杏鲍菇、花瓣茸、木茸、金针菇或上述蘑菇的组合。8.根据权利要求7所述的组合物，其中，蘑菇多糖体包括20至35%萃取自裂褶菌与灵芝的多糖体；25至45%萃取自冬虫夏草、樟芝、云芝与巴西蘑菇的多糖体；以及20至35%萃取自桑黄、珊瑚菇、香菇、柳松菇、猴头菇、杏鲍菇、花瓣茸、木茸与金针菇的多糖体。9.根据权利要求7所述的组合物，其可经由口服和/或直接涂敷的方式，向有需要的对象使用。10.根据权利要求7所述的组合物，其中载体为液态、固态或半固态。11.根据权利要求7所述的组合物，其中，载体为水。12.根据权利要求7所述的组合物，其中，载体为羟乙基纤维素。13.根据权利要求7所述的组合物，其可提高自然杀伤细胞、吞噬细胞、巨噬细胞及胶原纤维母细胞的活性。14.一种制备蘑菇多糖体的方法，包括(a)将蘑菇菌丝体于培养液中培养；(b)在高速下，以超声波粉碎步骤(a)所得的蘑菇菌液；(c)将步骤(b)粉碎的蘑菇菌液离心并取得上清液；(d)以乙醇沉淀上清液，而得沉淀物；(e)以水溶解沉淀物，而得水溶液；禾口(f)以薄膜分离水溶液，以获得蘑菇多糖体。15.根据权利要求14所述的方法，其中培养液包括葡萄糖、酵母菌萃取物与黄豆胜肽。16.根据权利要求15所述的方法，其中培养液包括1至15%葡萄糖、0.1至1%酵母菌萃取物与1至10%黄豆胜肽。17.根据权利要求14所述的方法，其中，蘑菇选自裂褶菌、巴西蘑菇、冬虫夏草、灵芝、云芝、樟芝、桑黄、珊瑚菇、香菇、柳松菇、猴头菇、杏鲍菇、花瓣茸、木茸、金针菇或上述蘑菇的组合。18.根据权利要求14所述的方法，其中，乙醇浓度为95%。全文摘要本发明提供一种含有蘑菇多糖体的组合物及其制备方法，组合物包含蘑菇多糖体和载体，其中，蘑菇选自裂褶菌(Schizophyllumcommue)、巴西蘑菇(Agaricsblaze)、冬虫夏草(Cordycepssinensis)、灵芝(Ganodermalucidum)、云芝(Coriolusversicolor)、樟芝(Anthodiacamphorate)、桑黄(Phellinuslinteus)、珊瑚菇(Pleurotuscitrinopileatus)、香菇(Lentinulaedodes)、柳松菇(Agrocybeaegerita)、猴头菇(Hericiumerinaceus)、杏鲍菇(Pleurotuseryngiig)、花瓣茸(Sparrasiscrispa)、木茸(Auriculariaauricula)、金针菇(Flammulinavelutipes)或上述蘑菇的组合。文档编号C08B37/00GK101766656SQ20081018774公开日2010年7月7日申请日期2008年12月31日优先权日2008年12月31日发明者陈秀男申请人:陈秀男