专利名称：反向沉淀生产硫酸软骨素的方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种硫酸软骨素的生产工艺改进。
背景技术：
硫酸软骨素，英文名chondroitin sulfate，是以动物(猪、牛、马、羊、鸡、鲨鱼等) 的软骨为原料的一种高分子酸性粘多糖，其分子结构为β -D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半 乳糖通过β 1 — 3糖苷键形成的重复二 糖单位所组成的多糖链。它是一种白色或微黄色粉 末，吸水性强，易溶于水而成粘稠液体，不溶于酒精、丙酮、乙醚和氯仿等有机溶剂。其盐类 对热较稳定。目前，硫酸软骨素通常提取方法是采用碱-酶解提取法，主要包括以下步骤1)碱提、酶解原料(软骨)加水浸没，用氢氧化钠调ΡΗ8.5，升温至55-60°C，保 温4-6小时，然后加入2%的碱性蛋白酶，保持PH8. 5，保温55-60°C搅拌6_8小时，升温至沸 腾15分钟左右，过滤，得滤液；2)酒精沉淀滤液中加入3%重量的氯化钠，降温至室温，按体积的2. 5倍加入 95 %酒精，静止8小时，取沉淀。3)氧化按沉淀水的重量比为1 10的比例混合水，同时加入3%重量的氯化 钠，调PH10-12，加入2 %重量双氧水氧化8小时，过滤，取滤液。4)酒精沉淀、干燥滤液调PH6，加入体积的2. 5倍量酒精第二次沉淀，沉淀再用 95%酒精脱水两次，干燥粉碎得到硫酸软骨素成品。由于硫酸软骨素溶液比较粘稠，在醇沉时传统的做法是将酒精加入到硫酸软骨素 溶液中使硫酸软骨素结晶析出沉淀下来，这样产生的硫酸软骨素沉淀结晶体容易结块而且 粘稠，结晶体中包含的有机溶剂在脱水干燥过程中由于颗粒形状较大且坚硬致密，不容易 挥发，致使产品的溶剂残留偏高(2%以上)，影响产品质量，满足不了客户要求。其次由于 沉淀结块粘稠，使得脱水、烘干、粉碎等操作变得困难，浪费能耗。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种反向沉淀生产硫酸软骨素的方法，产生的硫 酸软骨素沉淀质地疏松、颗粒细小、容易脱水和烘干，产品不需要粉碎，能耗低，产品中有机 溶剂残留极低，产品质量好。本发明采取以下技术方案予以实现反向沉淀生产硫酸软骨素的方法，包括下列步骤(1)碱提、酶解软骨原料加水浸没，用碱调PH至8-9，升温至55-60°C，保温4-6小 时，然后加入碱性蛋白酶，保持PH8-9，保温55-60°C搅拌6-8小时，升温至沸腾12-18分钟， 过滤得到硫酸软骨素溶液；(2)酒精沉淀将步骤(1)得到的硫酸软骨素溶液降至室温，在搅拌状态下，向溶 液中加入氯化钠，使溶液含氯化钠重量浓度为1_4%，再加入溶液体积2-3倍的重量浓度为90%以上的酒精，静止6小时以上，过滤得到硫酸软骨素沉淀；(3)氧化将步骤(2)得到的硫酸软骨素沉淀加入水中溶解，同时向水中加入氯化钠，使其含氯化钠重量浓度为1_4%，含硫酸软骨素重量浓度为3-5%，调PH至10-12，加入 溶液重量的1-3%双氧水或过锰酸钾氧化6小时以上，过滤得滤液；(4)反向沉淀调节步骤(3)得到的硫酸软骨素溶液PH至5-6，温度控制在 15-20°C，在搅拌状态下，将硫酸软骨素溶液缓慢加入到是其体积4-6倍的、重量浓度为 90%以上的酒精中，加完后继续搅拌0. 5-1. 5小时，再静止沉淀10小时以上；(5)脱水烘干沉淀结束后弃去上层酒精，收集沉淀，进入脱水干燥工序，即得硫 酸软骨素成品。本发明进一步改进方案是，所述酒精的重量浓度为95%、或95%以上。其中步骤 (4)的溶液含酒精的重量浓度始终保持在75%、或75%以上。本发明取得的效果是一、本发明将经过氧化得到的硫酸软骨素溶液，调节PH至5-6，温度控制在 15-20°C，缓慢加入到搅拌中的95%酒精中，整个过程中酒精重量浓度始终保持在75%及 其以上。经沉淀得到的硫酸软骨素质地酥松，容易脱水、烘干。二、产品的色泽好，质量稳定，硫酸软骨素的含量在98%以上。
三、产品的有机溶剂残留极少，低于0. 2 %。四、生产工序短、操作简单，得到的硫酸软骨素由于质地酥松、颗粒细小，不需要粉碎，具有节约能源、节约生产成本的优点。
具体实施例方式(1)碱提、酶解原料(软骨)100Kg加水浸没，用氢氧化钠调PH至8. 5，升温至 55-60°C，保温5小时，然后加入2Kg的碱性蛋白酶，保持PH8. 5，保温55_60°C搅拌7小时， 升温至沸腾15分钟左右，过滤，得滤液500L ；(2)酒精沉淀将步骤⑴得到的硫酸软骨素溶液降至室温，在搅拌状态下，向溶 液中加入氯化钠15Kg，再加入溶液体积2. 5倍的重量浓度为95%的酒精1250L，静止8小 时，过滤得到硫酸软骨素沉淀；(3)氧化将步骤(2)得到的硫酸软骨素沉淀加入200L水中溶解，同时向水中加 入6Kg氯化钠，使其含氯化钠重量浓度为3 %，含硫酸软骨素重量浓度为5 %，用氢氧化钠调 PH至11，加入4Kg重量浓度为20%双氧水氧化8小时，过滤得滤液；(4)反沉淀调节步骤(3)得到的硫酸软骨素溶液PH至5-6，温度控制在17°C左 右，在搅拌状态下，将硫酸软骨素溶液缓慢加入到重量浓度为95%的1000L酒精中，加完后 继续搅拌1小时，再静止沉淀16小时；(5)脱水烘干沉淀结束后弃去上层酒精，收集沉淀，进入脱水干燥工序，即得硫 酸软骨素成品13. 6Kg，含量98%，得率为13.3%。
权利要求
反向沉淀生产硫酸软骨素的方法，其特征在于包括下列步骤(1)碱提、酶解软骨原料加水浸没，用碱调PH至8-9，升温至55-60℃，保温4-6小时，然后加入碱性蛋白酶，保持PH8-9，保温55-60℃搅拌6-8小时，升温至沸腾12-18分钟，过滤得到硫酸软骨素溶液；(2)酒精沉淀将步骤(1)得到的硫酸软骨素溶液降至室温，在搅拌状态下，向溶液中加入氯化钠，使溶液含氯化钠重量浓度为1-4％，再加入溶液体积2-3倍的重量浓度为90％以上的酒精，静止6小时以上，过滤得到硫酸软骨素沉淀；(3)氧化将步骤(2)得到的硫酸软骨素沉淀加入水中溶解，同时向水中加入氯化钠，使其含氯化钠重量浓度为1-4％，含硫酸软骨素重量浓度为3-5％，调PH至10-12，加入溶液重量的1-3％双氧水或过锰酸钾氧化6小时以上，过滤得滤液；(4)反向沉淀调节步骤(3)得到的硫酸软骨素溶液PH至5-6，温度控制在15-20℃，在搅拌状态下，将硫酸软骨素溶液缓慢加入到是其体积4-6倍的、重量浓度为90％以上的酒精中，加完后继续搅拌0.5-1.5小时，再静止沉淀10小时以上；(5)脱水烘干沉淀结束后弃去上层酒精，收集沉淀，进入脱水干燥工序，即得硫酸软骨素成品。
2.如权利要求1所述的反向沉淀生产硫酸软骨素的方法，其特征在于所述酒精的重 量浓度为95%、或95%以上。
3.如权利要求1所述的反向沉淀生产硫酸软骨素的方法，其特征在于其中步骤(4) 的溶液含酒精的重量浓度始终保持在75%、或75%以上。
全文摘要
本发明公开了反向沉淀生产硫酸软骨素的方法，本发明将经过氧化得到的硫酸软骨素溶液，调节pH至5-6，温度控制在15-20℃，缓慢加入到搅拌中的95％酒精中，整个过程中酒精重量浓度始终保持在75％及其以上。经沉淀得到的硫酸软骨素质地酥松，容易脱水、烘干，不需要粉碎，具有节约能源、节约生产成本的优点。产品的色泽好，质量稳定，硫酸软骨素的含量在98％以上。产品的有机溶剂残留极少，低于0.2％。
文档编号C08B37/08GK101824446SQ201010112838
公开日2010年9月8日 申请日期2010年2月24日 优先权日2010年2月24日
发明者刘榜惠, 张志斌, 袁红英 申请人:淮安麦德森化学有限公司