一种硫酸软骨素的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种聚糖的制备方法，更具体地说，本发明涉及一种硫酸软骨素的制备方法，属于生物化工技术领域。
【背景技术】
[0002]硫酸软骨素是共价连接在蛋白质上形成蛋白聚糖的一类糖胺聚糖。硫酸软骨素广泛分布于动物组织的细胞外基质和细胞表面，糖链由交替的葡萄糖醛酸和N-乙酰半乳糖胺(又称N-乙酰氨基半乳糖)二糖单位组成，通过一个似糖链街区连接到核心蛋白的丝氨酸残基上。
[0003]硫酸软骨素存在于从线虫到人除植物外的所有生物中，发挥着许多重要的生理功能。虽然多糖的主链结构并不复杂，但就硫酸化程度、硫酸基和两种差异向异构糖醛酸再链内的分布来说，呈现高度的不均一性。硫酸软骨素的精细结构决定着功能的特异性和与多种蛋白质分子的相互作用。
[0004]国家知识产权局于2011.9.21公开了一件公开号为0附0219074(^，名称为“硫酸软骨素的制备方法”的发明专利，该专利公开了一种硫酸软骨素的制备方法，软骨加水浸没，碱调pH8-9，55-60°C保温4-6小时;加入2709碱性蛋白酶，搅拌6_8小时，升温至沸腾，过滤得硫酸软骨素溶液；向硫酸软骨素溶液中加入氯化钠，再加入溶液体积2-3倍的酒精，静止6小时，过滤得硫酸软骨素沉淀;将硫酸软骨素沉淀加入水中溶解，同时向水中加入氯化钠，调ρΗΙΟ-12，加入溶液重量1-3%双氧水氧化6小时，过滤得滤液;调节硫酸软骨素滤液pH5-6，加入滤液体积4-6倍的酒精二次沉淀，得硫酸软骨素沉淀;将二次硫酸软骨素沉淀倒入装有乳化机的脱水罐中，将硫酸软骨素沉淀体积3-5倍的酒精栗入脱水罐，抽滤，收集沉淀，干燥，得硫酸软骨素成品。本发明获得的硫酸软骨素质地疏松、颗粒细小、容易脱水和烘干，能耗低，有机溶剂残留极低，生产周期短。
[0005]国家知识产权局于2010.9.29公开了一件公开号为0附01845103々，名称为“一种硫酸软骨素的制备方法”的发明专利，该专利公开了一种硫酸软骨素的制备方法，属于生物工程领域。本方法采用超声波法包括预处理、提取、超声除杂、脱色、沉淀以及脱水等工艺步骤，可以保持生物活性，提高了破碎速度，缩短了破碎时间，可极大地提高提取效率，降低成本。
[0006]上述专利中的硫酸软骨素的制备方法原料成本和生产成本都很高，且制得的硫酸软骨素质量不理想，收率较低。
【发明内容】
[0007]本发明旨在解决上述现有技术中的问题，提供一种硫酸软骨素的制备方法，降低成本，简化工艺，提高硫酸软骨素收率和质量。
[0008]为了实现上述发明目的，其具体的技术方案如下:
一种硫酸软骨素的制备方法，其特征在于:包括以下工艺步骤: A、将90-120份猪喉软骨清洗干净，甩干多余水分，置于容器内，加入1200-1500份NaOH和200-400份NaCl，在室温下浸泡两次；
B、滤去不溶物，收集过滤溶液，调pH值至8.5-9.0，加入胰蛋白酶和胰脂肪酶，浸泡6-
8h；
C、滤出酶解液，加入8-15份滑石粉，缓慢搅拌1-2h，在80-120°C下过滤，再在过滤液中加入300-400份酒精，缓慢搅拌后静置；
D、滤出沉淀物，加入100-300份NaCl，缓慢搅拌后静置，过滤，于过滤液中加入20-30份活性炭脱色，过滤；
E、于滤液中加入350-450份酒精，沉淀，过滤，于60-80°C下烘干，得产硫酸软骨素。
[0009]本发明在步骤A中，所述的NaOH为0.1-0.3%的NaOH。
[0010]本发明在步骤A中，所述的NaCl为0.5-0.8%的NaCl。
[0011]本发明在步骤A中，所述的浸泡两次是指每次浸泡24小时。
[0012]本发明在步骤C中，所述的缓慢搅拌后静置是指静置2_3h。
[0013]本发明在步骤D中，所述的滤出沉淀物是采用超滤膜进行错流过滤。
[0014]本发明在步骤D中，所述的NaCl为1-2%的NaCl。
[0015]本发明在步骤D中，所述的缓慢搅拌后静置是指静置l_2h。
[0016]本发明带来的有益技术效果:
本发明解决了现有技术中硫酸软骨素制备方法原料成本和生产成本都很高，且制得的硫酸软骨素质量不理想，收率较低的问题。本发明在参照相关制备方法后，经过原料、制备工艺条件调节、后处理工艺改进，研究出一种新的硫酸软骨素制备方法，降低了成本，简化了工艺，提高了硫酸软骨素收率和质量。
【具体实施方式】
[0017]实施例1
一种硫酸软骨素的制备方法，包括以下工艺步骤:
A、将90份猪喉软骨清洗干净，甩干多余水分，置于容器内，加入1200份NaOH和200份NaCl，在室温下浸泡两次；
B、滤去不溶物，收集过滤溶液，调pH值至8.5，加入胰蛋白酶和胰脂肪酶，浸泡6h;
C、滤出酶解液，加入8份滑石粉，缓慢搅拌lh，在80°C下过滤，再在过滤液中加入300份酒精，缓慢搅拌后静置；
D、滤出沉淀物，加入100份NaCl，缓慢搅拌后静置，过滤，于过滤液中加入20份活性炭脱色，过滤；
E、于滤液中加入350份酒精，沉淀，过滤，于60°C下烘干，得产硫酸软骨素。
[0018]实施例2
一种硫酸软骨素的制备方法，包括以下工艺步骤:
A、将120份猪喉软骨清洗干净，甩干多余水分，置于容器内，加入1500份NaOH和400份NaCl，在室温下浸泡两次；
B、滤去不溶物，收集过滤溶液，调pH值至9.0，加入胰蛋白酶和胰脂肪酶，浸泡8h;
C、滤出酶解液，加入15份滑石粉，缓慢搅拌2h，在120°C下过滤，再在过滤液中加入400份酒精，缓慢搅拌后静置；
D、滤出沉淀物，加入300份NaCl，缓慢搅拌后静置，过滤，于过滤液中加入30份活性炭脱色，过滤；
E、于滤液中加入450份酒精，沉淀，过滤，于80°C下烘干，得产硫酸软骨素。
[0019]实施例3
一种硫酸软骨素的制备方法，包括以下工艺步骤:
A、将105份猪喉软骨清洗干净，甩干多余水分，置于容器内，加入1350份NaOH和300份NaCl，在室温下浸泡两次；
B、滤去不溶物，收集过滤溶液，调pH值至8.8，加入胰蛋白酶和胰脂肪酶，浸泡7h;
C、滤出酶解液，加入12份滑石粉，缓慢搅拌1.5h，在100°C下过滤，再在过滤液中加入350份酒精，缓慢搅拌后静置；
D、滤出沉淀物，加入200份NaCl，缓慢搅拌后静置，过滤，于过滤液中加入25份活性炭脱色，过滤；
E、于滤液中加入400份酒精，沉淀，过滤，于70°C下烘干，得产硫酸软骨素。
[0020]实施例4
一种硫酸软骨素的制备方法，包括以下工艺步骤:
A、将110份猪喉软骨清洗干净，甩干多余水分，置于容器内，加入1400份NaOH和390份NaCl，在室温下浸泡两次；
B、滤去不溶物，收集过滤溶液，调pH值至8.6，加入胰蛋白酶和胰脂肪酶，浸泡7.5h;
C、滤出酶解液，加入10份滑石粉，缓慢搅拌1.25h，在99°C下过滤，再在过滤液中加入310份酒精，缓慢搅拌后静置；
D、滤出沉淀物，加入250份NaCl，缓慢搅拌后静置，过滤，于过滤液中加入21份活性炭脱色，过滤；
E、于滤液中加入360份酒精，沉淀，过滤，于75°C下烘干，得产硫酸软骨素。
[0021]实施例5
在实施例1-4的基础上，优选的:
在步骤A中，所述的NaOH为0.1%的NaOH。
[0022]在步骤A中，所述的NaCl为0.5%的NaCl。
[0023]在步骤A中，所述的浸泡两次是指每次浸泡24小时。
[0024]在步骤C中，所述的缓慢搅拌后静置是指静置2h。
[0025]在步骤D中，所述的滤出沉淀物是采用超滤膜进行错流过滤。
[0026]在步骤D中，所述的NaCl为1%的NaCl。
[0027]在步骤D中，所述的缓慢搅拌后静置是指静置lh。
[0028]实施例6
在实施例1-4的基础上，优选的:
在步骤A中，所述的NaOH为0.3%的NaOH。
[0029]在步骤A中，所述的NaCl为0.8%的NaCl。
[0030]在步骤A中，所述的浸泡两次是指每次浸泡24小时。
[0031 ]在步骤C中，所述的缓慢搅拌后静置是指静置3h。
[0032]在步骤D中，所述的滤出沉淀物是采用超滤膜进行错流过滤。
[0033]在步骤D中，所述的NaCl为2%的NaCl。
[0034]在步骤D中，所述的缓慢搅拌后静置是指静置2h。
[0035]实施例7
在实施例1-4的基础上，优选的:
在步骤A中，所述的NaOH为0.2%的NaOH。
[0036]在步骤A中，所述的NaCl为0.6%的NaCl。
[0037]在步骤A中，所述的浸泡两次是指每次浸泡24小时。
[0038]在步骤C中，所述的缓慢搅拌后静置是指静置2.5h。
[0039]在步骤D中，所述的滤出沉淀物是采用超滤膜进行错流过滤。
[0040]在步骤D中，所述的NaCl为1.5%的NaCl。
[0041 ]在步骤D中，所述的缓慢搅拌后静置是指静置1.5h。
[0042]实施例8
在实施例1-4的基础上，优选的:
在步骤A中，所述的NaOH为0.15%的NaOH。
[0043]在步骤A中，所述的NaCl为0.7%的NaCl。
[0044]在步骤A中，所述的浸泡两次是指每次浸泡24小时。
[0045]在步骤C中，所述的缓慢搅拌后静置是指静置2.25h。
[0046]在步骤D中，所述的滤出沉淀物是采用超滤膜进行错流过滤。
[0047]在步骤D中，所述的NaCl为1.6%的NaCl。
[0048]在步骤D中，所述的缓慢搅拌后静置是指静置1.75h。
【主权项】
1.一种硫酸软骨素的制备方法，其特征在于:包括以下工艺步骤: A、将90-120份猪喉软骨清洗干净，甩干多余水分，置于容器内，加入1200-1500份NaOH和200-400份NaCl，在室温下浸泡两次；B、滤去不溶物，收集过滤溶液，调pH值至8.5-9.0，加入胰蛋白酶和胰脂肪酶，浸泡6-8h； C、滤出酶解液，加入8-15份滑石粉，缓慢搅拌l_2h，在80-120°C下过滤，再在过滤液中加入300-400份酒精，缓慢搅拌后静置； D、滤出沉淀物，加入100-300份NaCl，缓慢搅拌后静置，过滤，于过滤液中加入20-30份活性炭脱色，过滤； E、于滤液中加入350-450份酒精，沉淀，过滤，于60-80°C下烘干，得产硫酸软骨素。2.根据权利要求1所述的一种硫酸软骨素的制备方法，其特征在于:在步骤A中，所述的NaOH为0.1-0.3%的NaOH。3.根据权利要求1或2所述的一种硫酸软骨素的制备方法，其特征在于:在步骤A中，所述的 NaCl 为 0.5-0.8% 的 NaCl。4.根据权利要求1所述的一种硫酸软骨素的制备方法，其特征在于:在步骤A中，所述的浸泡两次是指每次浸泡24小时。5.根据权利要求1所述的一种硫酸软骨素的制备方法，其特征在于:在步骤C中，所述的缓慢搅拌后静置是指静置2_3h。6.根据权利要求1所述的一种硫酸软骨素的制备方法，其特征在于:在步骤D中，所述的滤出沉淀物是采用超滤膜进行错流过滤。7.根据权利要求1所述的一种硫酸软骨素的制备方法，其特征在于:在步骤D中，所述的NaCl为1-2%的NaCl。8.根据权利要求1所述的一种硫酸软骨素的制备方法，其特征在于:在步骤D中，所述的缓慢搅拌后静置是指静置l_2h。
【专利摘要】本发明涉及一种硫酸软骨素的制备方法，属于生物化工技术领域。本发明在参照相关制备方法后，经过原料、制备工艺条件调节、后处理工艺改进，研究出一种新的硫酸软骨素制备方法，降低了成本，简化了工艺，提高了硫酸软骨素收率和质量。
【IPC分类】C08B37/08
【公开号】CN105418800
【申请号】CN201510978048
【发明人】郭军
【申请人】德阳瑞泰科技有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月23日