专利名称：酶解法分离提取山豆根多糖的生产工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种酶解法分离提取山豆根多糖的生产工艺。
背景技术：
山豆根多糖(Sophora subprosrate polysaccharide)作为猪的疫苗免疫增强齐[J, 可显著提高疫苗的保护率和抗病力，应用前景广阔。然而，目前分离提取山豆根多糖的水提 醇沉法存在多糖得率低和总糖含量低的问题，以致于生产效率低、供应不足，难以满足市场需求。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种粗多糖得率高和总糖含量高的酶解法分离 提取山豆根多糖的生产工艺。为解决上述技术问题采用如下技术方案A)准确称取粉碎的山豆根，按质量体 积比1 15加入蒸馏水，浸泡0.5h;B)调节步骤A)中浸泡液的pH至5.0 7.0，加入 木瓜蛋白酶使其质量体积浓度为 4%，充分混勻后，置于50°C 60°C的水浴中反应 120min 180min，过滤，滤液备用，残渣按质量体积比1 15加入蒸馏水，置沸水中水浴， 过滤，滤液备用；C)合并步骤B)中两次滤液，将滤液蒸馏浓缩，加入体积5倍于浓缩液的 95%乙醇使醇浓度达80%，充分混勻后，低温静置过夜，倾出上清液，离心得沉淀；D)取步 骤C)中沉淀按质量体积比1 5加蒸馏水溶解，静置，离心，倾出上清液备用；E)取步骤 D)中上清液，加入体积5倍于上清液的95%乙醇沉淀，低温静置过夜，离心，沉淀部分加入 95%乙醇搅拌，离心除去乙醇得山豆根粗多糖湿品；F)将步骤E)中山豆根粗多糖湿品冷冻 干燥，得山豆根粗多糖干品。本发明的酶解法分离提取山豆根多糖的生产工艺的粗多糖得率和总糖含量明显 高于目前的水提醇沉法，应用于生产山豆根多糖可提高效率、满足市场需求。
具体实施例方式以下为用本发明的酶解法分离提取山豆根多糖的实施例实施例1A)准确称取粉碎的山豆根4g，加入蒸馏水60mL，浸泡0. 5h ；B)调节步骤A)中浸 泡液的PH至5. 0，加入木瓜蛋白酶使其质量体积浓度为4%，充分混勻后，置于60°C的水浴 中反应150min，过滤，滤液备用；残渣加入60mL蒸馏水，置沸水中水浴，过滤，滤液备用；C) 合并步骤B)中两次滤液，将滤液蒸馏浓缩，加入体积5倍于浓缩液的95%乙醇使醇浓度达 80%，充分混勻后，低温静置过夜12h以上，倾出上清液，3000r/min离心lOmin得沉淀；D) 取步骤C)中沉淀按质量体积比1 5加蒸馏水溶解，静置，3000r/min离心lOmin，倾出上 清液备用；E)取步骤D)中上清液，加入5倍量的95%乙醇沉淀，低温静置过夜12h以上， 3000r/min离心lOmin，沉淀部分加入95 %乙醇搅拌，离心除去乙醇得山豆根粗多糖湿品；F)将步骤E)中山豆根粗多糖湿品在-20°C冰箱中冷冻12h以上至冻硬，然后放入冷冻干燥 机中冻干，即得山豆根粗多糖干品。实施例2其他条件同实施例1，pH为6，木瓜蛋白酶质量体积浓度为1 %，水浴温度为55 °C， 水浴时间为150min。实施例3其他条件同实施例l，pH为7，木瓜蛋白酶质量体积浓度为2%，水浴温度为50°C， 水浴时间为150min。实施例4其他条件同实施例l，pH为7，木瓜蛋白酶质量体积浓度为4%，水浴温度为55°C， 水浴时间为120min。实施例5其他条件同实施例l，pH为5，木瓜蛋白酶质量体积浓度为2%，水浴温度为55°C， 水浴时间为180min。以下为用常规的水提醇沉法分离提取山豆根多糖的生产工艺的对照例①称取山豆根100g，加入1200ml蒸馏水煮沸1. 5h，用纱布过滤，滤渣加入1200ml 蒸馏水继续煮沸1. 5h，重复3次，将滤液合并后用布氏漏斗过滤；②将滤液置入不锈钢盆 中，在水浴锅中蒸发浓缩滤液至100ml左右；③醇沉浓缩滤液冷却后，缓慢加入5倍量 95%乙醇，边加边搅拌，充分混勻后，置4°C冰箱静置12h以上；④再次醇沉取出醇沉12h 以上的溶液，2000r/min离心lOmin，弃去上清，收集沉淀称量，加入50倍蒸馏水充分溶解， 静置后2000r/min离心lOmin，收集上清，浓缩到100ml左右，加入5倍量95%乙醇充分混 勻后，置4°C冰箱静置12h以上；⑤分离、脱色、干燥取出醇沉12h以上的溶液，2000r/min 离心lOmin，弃去上清，收集沉淀，将沉淀用适量95%乙醇溶解完全，2000r/min离心lOmin， 收集沉淀，加入适量无水乙醇充分溶解，2000r/min离心lOmin，将沉淀用适量丙酮溶解， 2000r/min离心lOmin，收集沉淀后用适量乙醚充分溶解，2000r/min离心lOmin，将沉淀收 集在研钵中，研成泡沫状，让其自然挥发干燥，即得山豆根粗多糖干品。上述各实施例及对照例的山豆根多糖测定结果列表如下 可见，采用酶解法分离提取山豆根多糖，显著地提高了粗多糖得率和总糖含量，为 今后规模化生产山豆根多糖提供了很好的工艺路线，可有效保证猪的疫苗免疫增强剂的市 场供应。
权利要求
一种酶解法分离提取山豆根多糖的生产工艺，其特征在于该工艺包括如下步骤A)准确称取粉碎的山豆根，按质量体积比1∶15加入蒸馏水，浸泡0.5h；B)调节步骤A)中浸泡液的pH至5.0～7.0，加入木瓜蛋白酶使其质量体积浓度为1％～4％，充分混匀后，置于50℃～60℃的水浴中反应120min～180min，过滤，滤液备用，残渣按质量体积比1∶15加入蒸馏水，置沸水中水浴，过滤，滤液备用；C)合并步骤B)中两次滤液，将滤液蒸馏浓缩，加入体积5倍于浓缩液的95％乙醇使醇浓度达80％，充分混匀后，低温静置过夜，倾出上清液，离心得沉淀；D)取步骤C)中沉淀按质量体积比1∶5加蒸馏水溶解，静置，离心，倾出上清液备用；E)取步骤D)中上清液，加入体积5倍于上清液的95％乙醇沉淀，低温静置过夜，离心，沉淀部分加入95％乙醇搅拌，离心除去乙醇得山豆根粗多糖湿品；F)将步骤E)中山豆根粗多糖湿品冷冻干燥，得山豆根粗多糖干品。
全文摘要
本发明公开了一种酶解法分离提取山豆根多糖的生产工艺，包括如下步骤A)按质量体积比1∶15加水浸泡0.5h；B)调节浸泡液的pH至5.0～7.0，加入木瓜蛋白酶使其质量体积浓度为1～4％，置于50～60℃的水浴中反应120～180min，过滤，残渣按质量体积比1∶15加水，置沸水中水浴，过滤；C)合并两次滤液，蒸馏浓缩，加入95％乙醇使醇浓度达80％，倾出上清液，离心得沉淀；D)取沉淀按质量体积比1∶5加水溶解，静置，离心；E)取上清液，加入95％乙醇沉淀，离心后沉淀部分加入95％乙醇搅拌，离心除去乙醇得山豆根粗多糖湿品；F)冷冻干燥得干品。本发明显著地提高了山豆根粗多糖提取率和总糖含量。
文档编号C08B37/00GK101857643SQ20101018071
公开日2010年10月13日 申请日期2010年5月24日 优先权日2010年5月24日
发明者孙蓉, 曾芸, 胡庭俊, 苏子杰, 韦英益 申请人:广西大学