本发明涉及一种L-对氯苯丙氨酸的制备方法。
背景技术：
现在工业上常用的酰胺化酶，都不能长时间的耐受高温，拆分的温度一般都采用37度，以达到酶的最高效率。对一些芳香族和侧链较大溶解度不好的氨基酸，因溶解度小，反应的体积较大，导致工业上浓缩成本的增加和回收的得率偏低。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服上述不足，提供一种成本低、收率高、方法简单的L-对氯苯丙氨酸的制备方法。
本发明的目的是这样实现的：
一种L-对氯苯丙氨酸的制备方法，所述方法包括如下步骤：
一、乙酰化D,L-对氯苯丙氨酸的合成：
D,L-对氯苯丙氨酸，溶于水，用碱调节pH到10，温度控制在0-5℃，滴加乙酸酐，反应过程用5N的氢氧化钠控制pH，反应液用茚三酮显色，直到氨基酸不再显色，说明氨基酸全部被乙酰化。加盐酸调节pH到1-2，有大量沉淀的产物出现，过滤收晶体，酸水洗涤，烘干，得率为90%。
二、将乙酰化的D,L-对氯苯丙氨酸，在80℃溶解，浓度可达0.7M,加入纯化的L-耐高温酰化酶，反应，48小时，用液相检测拆分的程度，L-对氯苯丙氨酸被去乙酰化效率可达99%。冷却，加入盐酸到pH1-2,有大量的沉淀出现。过滤去除乙酰化的D-对氯苯丙氨酸，剩下的L-对氯苯丙氨酸，用阳离子交换纯化，得到含量99%以上，EE值99%以上的高质量L-对氯苯丙氨酸。
所述的纯化的L-耐高温酰化酶的制备时采用基因重组的方法，在大肠杆菌里表达并纯化制备。
所述L-耐高温酰化酶为耐高温L-氨基酰化酶，其在80℃、24小时还有50%的活性。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
我们采用基因重组的方法，在大肠杆菌里表达并纯化制备L-耐高温的酰化酶，用于一些溶解度较低的氨基酸的拆分。本专利以D,L-对氯苯丙氨酸为原料，进行乙酰化，然后用纯化的L-耐高温酰化酶拆分制备L-对氯苯丙氨酸，酶的特异性好，效率高，高温酶适用于溶解度较低的芳香族氨基酸的拆分，拆分温度高可以增加底物的溶剂度，可在较高的底物浓度下进行拆分。该方法成本低、收率高、方法简单。
具体实施方式
一种L-对氯苯丙氨酸的制备方法，所述方法包括如下步骤：
一、乙酰化D,L-对氯苯丙氨酸的合成：
D,L-对氯苯丙氨酸，溶于水，用碱调节pH到10，温度控制在0-5℃，滴加乙酸酐，反应过程用5N的氢氧化钠控制pH，反应液用茚三酮显色，直到氨基酸不再显色，说明氨基酸全部被乙酰化。加盐酸调节pH到1-2，有大量沉淀的产物出现，过滤收晶体，酸水洗涤，烘干，得率为90%。
二、将乙酰化的D,L-对氯苯丙氨酸，在80℃溶解，浓度可达0.7M,加入纯化的L-耐高温酰化酶，反应，48小时，用液相检测拆分的程度，L-对氯苯丙氨酸被去乙酰化效率可达99%。冷却，加入盐酸到pH1-2,有大量的沉淀出现。过滤去除乙酰化的D-对氯苯丙氨酸，剩下的L-对氯苯丙氨酸，用阳离子交换纯化，得到含量99%以上，EE值99%以上的高质量L-对氯苯丙氨酸。
所述的纯化的L-耐高温酰化酶的制备时采用基因重组的方法，在大肠杆菌里表达并纯化制备。
所述L-耐高温酰化酶为耐高温L-氨基酰化酶，其在80℃、24小时还有50%的活性。