替格瑞洛的抗体及其使用方法与流程

技术特征：

1.一种特异性结合具有化学式(Ia)的环戊基三唑嘧啶化合物的抗体：

其中

R₁选自下组，该组由以下各项组成：C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆烷硫基；

R₂选自下组，该组由以下各项组成：H、C₁-C₆烷基、取代的C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、和取代的C₃-C₆环烷基；且

R₃选自下组，该组由以下各项组成：H、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆烷醇。

2.根据权利要求1所述的抗体，其中该抗体在如化学式(IIa)由括号标记的化合物的部分内的表位处结合具有化学式(Ia)的环戊基三唑嘧啶化合物

3.根据权利要求1所述的抗体，其中该抗体在如化学式(IIIa)由括号标记的化合物的部分内的表位处结合具有化学式(Ia)的环戊基三唑嘧啶化合物

其中R’₁选自下组，该组由以下各项组成：C₁-C₄烷基。

4.一种特异性结合具有化学式(Ib)的环戊基三唑嘧啶化合物的抗体：

5.根据权利要求4所述的抗体，其中R₁是C₁-C₆烷硫基。

6.根据权利要求4所述的抗体，其中该具有化学式(Ib)的化合物是替格瑞洛((1S,2S,3R,5S)-3-[7-{[(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基}-5-(丙硫基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟基乙氧基)环戊烷-1,2-二醇)或其代谢物或衍生物。

7.根据权利要求4所述的抗体，其中该具有化学式(Ib)的化合物选自下组，该组由以下各项组成：

替格瑞洛；

替格瑞洛活性代谢物(TAM)；以及

替格瑞洛无活性代谢物(TIM)。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中该抗体选自多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、人抗体、单链Fv(scFv)、单结构域抗体、Fab、F(ab')₂、单链双抗体、抗体模拟物和抗体可变结构域。

9.根据权利要求8所述的抗体，其中该抗体包含scFv。

10.根据权利要求8所述的抗体，其中该抗体包含Fab。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体，其中该抗体以约200nM或更低的IC₅₀结合替格瑞洛或其代谢物或衍生物。

12.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体，其中该抗体以约100nM至约1nM范围的IC₅₀结合替格瑞洛或其代谢物或衍生物。

13.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体，其中该抗体以约10nM至约1nM范围的IC₅₀结合替格瑞洛或替格瑞洛的活性代谢物。

14.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体，其中该抗体以约50nM或更低的K_D结合替格瑞洛或其代谢物或衍生物。

15.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体，其中该抗体以约250pM至约1pM范围的K_D结合替格瑞洛或其代谢物或衍生物。

16.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体，其中该抗体以约100pM至约1pM范围的K_D结合替格瑞洛或替格瑞洛的活性代谢物。

17.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体，其中该抗体显示对于选自下组的化合物的不超过约50μM的IC₅₀，该组由以下各项组成：非诺贝特、尼伐地平、西洛他唑、布拉地新、瑞加诺生、环噻嗪、氟氯氰菊酯、洛伐他汀、利奈唑胺、辛伐他汀、坎格雷洛、泮托拉唑、腺苷、二磷酸腺苷、三磷酸腺苷、2-MeS二磷酸腺苷和2-MeS三磷酸腺苷。

18.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体，其中该抗体的体内半衰期为约12小时。

19.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体，其中该抗体中和替格瑞洛或替格瑞洛的活性代谢物的抗血小板作用。

20.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体，其中该抗体在给予约30分钟内中和替格瑞洛或替格瑞洛的活性代谢物的抗血小板作用。

21.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体，其中该抗体在替格瑞洛或替格瑞洛的活性代谢物的存在下恢复ADP诱导的血小板聚集。

22.一种特异性结合具有化学式(Ia)的环戊基三唑嘧啶化合物的抗体或其片段：

其中

R₁选自下组，该组由以下各项组成：C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆烷硫基；

R₂选自下组，该组由以下各项组成：H、C₁-C₆烷基、取代的C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、和取代的C₃-C₆环烷基；并且

R₃选自下组，该组由以下各项组成：H、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆烷醇；

该抗体或其片段包含

选自下组的重链可变区(VH)序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:72；以及

选自下组的轻链可变区(VL)序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:77。

23.根据权利要求22所述的抗体，其中该抗体包含VH和VL序列的组合，该组合选自下组，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:7；SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:17；SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:27；SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:37；SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:47；SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:57；SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:67；以及SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:77。

24.根据权利要求23所述的抗体，其中该抗体包含VH和VL的组合，所述VH和VL选自下组，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:57；SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:67；以及SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:77。

25.一种特异性结合具有化学式(Ia)的环戊基三唑嘧啶化合物的抗体或其片段：

其中

R₁选自下组，该组由以下各项组成：C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆烷硫基；

R₂选自下组，该组由以下各项组成：H、C₁-C₆烷基、取代的C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基、和取代的C₃-C₆环烷基；且

R₃选自下组，该组由以下各项组成：H、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆烷醇；

该抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区的框架区(FR)和互补决定区(CDR)1、2和3，其中该重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3序列包含，

SEQ ID NO:3(CDR1)、SEQ ID NO:4(CDR2)和SEQ ID NO:5(CDR3)；

SEQ ID NO:13(CDR1)、SEQ ID NO:14(CDR2)和SEQ ID NO:15(CDR3)；

SEQ ID NO:23(CDR1)、SEQ ID NO:24(CDR2)和SEQ ID NO:25(CDR3)；

SEQ ID NO:33(CDR1)、SEQ ID NO:34(CDR2)和SEQ ID NO:35(CDR3)；

SEQ ID NO:43(CDR1)、SEQ ID NO:44(CDR2)和SEQ ID NO:45(CDR3)；

SEQ ID NO:53(CDR1)、SEQ ID NO:54(CDR2)和SEQ ID NO:55(CDR3)；

SEQ ID NO:63(CDR1)、SEQ ID NO:64(CDR2)和SEQ ID NO:65(CDR3)；或者

SEQ ID NO:73(CDR1)、SEQ ID NO:74(CDR2)和SEQ ID NO:75(CDR3)；且

其中该轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3序列包含，

SEQ ID NO:8(CDR1)、SEQ ID NO:9(CDR2)和SEQ ID NO:10(CDR3)；

SEQ ID NO:18(CDR1)、SEQ ID NO:19(CDR2)和SEQ ID NO:20(CDR3)；

SEQ ID NO:28(CDR1)、SEQ ID NO:29(CDR2)和SEQ ID NO:30(CDR3)；

SEQ ID NO:38(CDR1)、SEQ ID NO:39(CDR2)和SEQ ID NO:40(CDR3)；

SEQ ID NO:48(CDR1)、SEQ ID NO:49(CDR2)和SEQ ID NO:50(CDR3)；

SEQ ID NO:58(CDR1)、SEQ ID NO:59(CDR2)和SEQ ID NO:60(CDR3)；

SEQ ID NO:68(CDR1)、SEQ ID NO:69(CDR2)和SEQ ID NO:70(CDR3)；或者

SEQ ID NO:78(CDR1)、SEQ ID NO:79(CDR2)和SEQ ID NO:80(CDR3)。

26.根据权利要求25所述的抗体，其中该抗体包含选自下组的CDR区的组合，该组由以下各项组成：

SEQ ID NO:53(VH CDR1)、SEQ ID NO:54(VH CDR2)、SEQ ID NO:55(VH CDR3)、SEQ ID NO:58(VL CDR1)、SEQ ID NO:59(VL CDR2)和SEQ ID NO:60(VL CDR3)；

SEQ ID NO:63(VH CDR1)、SEQ ID NO:64(VH CDR2)、SEQ ID NO:65(VH CDR3)、SEQ ID NO:68(VL CDR1)、SEQ ID NO:69(VL CDR2)和SEQ ID NO:70(VL CDR3)；以及

SEQ ID NO:73(VH CDR1)、SEQ ID NO:74(VH CDR2)、SEQ ID NO:75(VH CDR3)、SEQ ID NO:78(VL CDR1)、SEQ ID NO:79(VL CDR2)和SEQ ID NO:80(VL CDR3)。

27.根据权利要求22-26中任一项所述的抗体，其中该抗体选自多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、人抗体、单链Fv(scFv)、单结构域抗体、Fab、F(ab')₂、单链双抗体、抗体模拟物和抗体可变结构域。

28.根据权利要求27所述的抗体，其中该抗体包含scFv。

29.根据权利要求27所述的抗体，其中该抗体包含Fab。

30.根据权利要求22-29中任一项所述的抗体，其中该抗体以约100nM或更低的IC₅₀结合替格瑞洛或其代谢物或衍生物。

31.根据权利要求22-29中任一项所述的抗体，其中该抗体以约100nM至约1nM范围的IC₅₀结合替格瑞洛或其代谢物或衍生物。

32.根据权利要求22-29中任一项所述的抗体，其中该抗体以约100nM至约1nM范围的IC₅₀结合替格瑞洛或替格瑞洛的活性代谢物。

33.根据权利要求22-29中任一项所述的抗体，其中该抗体以约50nM或更低的K_D结合替格瑞洛或其代谢物或衍生物。

34.根据权利要求22-29中任一项所述的抗体，其中该抗体以约250pM至约1pM范围的K_D结合替格瑞洛或其代谢物或衍生物。

35.根据权利要求22-29中任一项所述的抗体，其中该抗体以约100pM至约1pM范围的K_D结合替格瑞洛或替格瑞洛的活性代谢物。

36.根据权利要求22-29中任一项所述的抗体，其中该抗体显示对于选自下组的化合物的不超过约50μM的IC₅₀，该组由以下各项组成：非诺贝特、尼伐地平、西洛他唑、布拉地新、瑞加诺生、环噻嗪、氟氯氰菊酯、洛伐他汀、利奈唑胺、辛伐他汀、坎格雷洛、泮托拉唑、腺苷、二磷酸腺苷、三磷酸腺苷、2-MeS二磷酸腺苷和2-MeS三磷酸腺苷。

37.根据权利要求22-29中任一项所述的抗体，其中该抗体的体内半衰期为约12小时。

38.根据权利要求22-29中任一项所述的抗体，其中该抗体中和替格瑞洛或替格瑞洛的活性代谢物的抗血小板作用。

39.根据权利要求22-29中任一项所述的抗体，其中该抗体在给予约30分钟内中和替格瑞洛或替格瑞洛的活性代谢物的抗血小板作用。

40.根据权利要求22-29中任一项所述的抗体，其中该抗体在替格瑞洛或替格瑞洛的活性代谢物的存在下恢复ADP诱导的血小板聚集。

41.一种治疗已经给予了替格瑞洛的患者中的急性出血的方法，该方法包括向该患者给予有效量的如权利要求1-40中任一项所述的抗体。

42.一种治疗已接受或正在接受外科手术并已经给予了替格瑞洛的患者中的严重出血的方法，该方法包括向该患者给予有效量的如权利要求1-40中任一项所述的抗体。

43.一种预防已经给予了替格瑞洛的患者中的出血的方法，该方法包括向该患者给予有效量的如权利要求1-40中任一项所述的抗体。

44.一种抑制替格瑞洛或其活性代谢物对患者的(P2Y₁₂)受体的作用的方法，该方法包括向该患者给予有效量的如权利要求1-40中任一项所述的抗体。

45.一种抑制替格瑞洛或其活性代谢物与患者中的P2Y₁₂受体结合的方法，该方法包括向该患者给予有效量的如权利要求1-40中任一项所述的抗体。

46.一种在已经给予了替格瑞洛的患者中激活ADP诱导的血小板聚集的方法，该方法包括向该患者给予有效量的如权利要求1-40中任一项的抗体。

47.根据权利要求43-46中任一项所述的方法，其中该患者被安排进行外科手术。

48.一种包含核酸分子的组合物，该核酸分子包含编码权利要求22-26中任一项所述的抗体的序列。

49.根据权利要求48所述的组合物，其中该核酸分子包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:71或SEQ ID NO:76。

50.一种包含核酸分子的载体，该核酸分子包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:71或SEQ ID NO:76。

51.一种包括如权利要求50所述的载体的宿主细胞。

52.根据权利要求1-10或22-29中任一项所述的抗体，其中该抗体不结合包含替格瑞洛的环戊基环上的羟乙基基团的表位。

53.根据权利要求1-10或22-29中任一项所述的抗体，其中该抗体结合包含替格瑞洛的环丙基-二氟苯基基团的表位。

54.根据权利要求1-10或22-29中任一项所述的抗体，其中该抗体结合包含替格瑞洛的环丙基-二氟苯基的表位，但不结合包含替格瑞洛的环戊基环上的羟乙基基团的表位。