金刚烷基喹唑啉化合物、组合物及其用途的制作方法

本发明本发明属医药技术领域，涉及通式(Ⅰ)所示金刚烷基喹唑啉化合物及其组合物，其中通式(Ⅰ)的各取代基如说明书中的定义。本发明还涉及所述金刚烷基喹唑啉化合物、组合物通过抑制酪氨酸激酶治疗肿瘤的用途。

背景技术：

蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTKs)通过控制细胞信号传导通路调节着细胞的生长、分化、凋亡等一系列生理生化过程。蛋白酪氨酸激酶功能的失调，特别是它们的异常表达不但导致细胞增殖调节发生紊乱，进而导致肿瘤发生，而且还与肿瘤的侵袭和转移，肿瘤新生血管的生成，肿瘤的放化疗抗性密切相关。受体型酪氨酸激酶是一类横跨细胞膜相对较大的激酶，其具有配体结合的胞外结构域、跨膜结构域和起激酶作用—在磷酸化特定酪氨酸残基并且由此影响细胞增殖的胞内结构域。在一般人类癌症中(如乳腺癌、胃肠道癌症、血癌、卵巢癌、支气管癌症或者肺癌)蛋白酪氨酸激酶均异常表达，其已成为抗肿瘤药物研发的重要靶点之一。

表皮生长因子受体酪氨酸激酶(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase，EGFR)是最早发现的蛋白酪氨酸激酶之一，EGFR的胞内区有ATP结合位点，EGFR抑制剂可以竞争性与ATP结合位点相结合，从而抑制EGFR的磷酸化过程，阻断下游信号的传导，进而抑制肿瘤细胞的生长、分化和转移。EGFR作为抗肿瘤靶点的生化过程已被阐明，其晶体结构和活性部位也已比较清楚，以此为靶点的药物吉非替尼(gefitinib)、埃罗替尼(erlotinib)、阿法替尼(afatinib)等已经应用于临床，且随着EGFR结构和活性关系的深入研究，许多效果更佳优秀的EGFR抑制剂(EP0566226、WO9961428、WO0051587、WO0375947、WO0132651、WO9633980、WO9630347、US7709479、US6716847、US6593333、US6251912、CN201080060451.4、CN201110191525.4等)已被发现。然而这些药物不可避免地存在着抗耐药性差的问题。研究表明：氨基酸The790到Met790的突变是此类药物产生耐药性的主要诱因。有临床案例数据显示，大约有50％的患者获得性耐药都源于T790M位点的突变所致。因此开发抗耐药性更强、毒性更小、活性更强的新型EGFR抑制剂具有非常重要现实价值。本发明以喹唑啉类EGFR抑制剂为基本骨架，通过计算机模拟技术发现，在喹唑啉母核的4-苯胺基部分引入疏水性金刚烷基，显著增强了与EGFR靶酶Met790位点的相互作用，因此设计合成了通式(Ⅰ)所示金刚烷基化合物。抗肿瘤活性筛选显示，大部分此类化合物具有较强的抑制非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖能力，部分化合物显示出比吉非替尼更加优良的抗EGFR活性，且部分化合物对EGFR产生的耐药性(T790M突变)也表现出了一定的效果。作为一类结构新颖的分子，本发明中的化合物具有开发成新型高效EGFR抑制剂的潜力，对治疗相关的肿瘤疾病有较大的应用价值。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是提供金刚烷基喹唑啉化合物、组合物，提供疗效更好的治疗肿瘤、癌症的药物和治疗方法。

本发明的目的是提供通式(Ⅰ)所示的化合物及其所有可能的异构体或其可药用的盐或水合物：

其中：

R¹选自3-吗啉丙基或2-甲氧乙基；

R²选自选自甲基或2-甲氧乙基；

R³选自氢、氟、氯、溴、甲基、乙基、甲氧基、氰基、三氟甲基或者前述基团中任意二者的组合；

X选自下述的A、B、C三种基团；

进一步的，本发明公开了优选的通式(Ⅰ)化合物：

(1)N-(1-金刚烷基)-3-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4喹唑啉基)胺)苯甲酰胺；

(2)N-(1-金刚烷基)-3-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4喹唑啉基)胺)-4-甲基苯甲酰胺；

(3)N-(1-金刚烷基)-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4喹唑啉基)胺)-4-甲基苯甲酰胺；

(4)N-(1-金刚烷基)-2-氯-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4喹唑啉基)胺)-4-甲基苯甲酰胺；

(5)N-(1-金刚烷基)-2-氰基-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4喹唑啉基)胺)-4-甲基苯甲酰胺；

(6)N-(1-金刚烷基)-4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4喹唑啉基)胺)-4-甲基苯甲酰胺；

(7)N-(3-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4喹唑啉基)胺)苯基-1-金刚烷基甲酰胺；

(8)N-(3-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉基丙氧基)-4喹唑啉基)胺)苯基-1-金刚烷基甲酰胺；

(9)N-(4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4喹唑啉基)胺)-3-甲基苯基-1-金刚烷基甲酰胺；

(10)N-(4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4喹唑啉基)胺)-2-甲基苯基-1-金刚烷基甲酰胺；

(11)N-(4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4喹唑啉基)胺)-2-甲氧基苯基-1-金刚烷基甲酰胺；

(12)N-(4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4喹唑啉基)胺)-2-氰基苯基-1-金刚烷 基甲酰胺；

(13)N-(1-金刚烷基)-2-(4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺；

(14)N-(1-金刚烷基)-2-(2-氯-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺；

(15)N-(1-金刚烷基)-2-(2-氰基-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺；

(16)N-(1-金刚烷基)-2-(2-甲氧基-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺；

(17)N-(1-金刚烷基)-2-(4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺；

(18)N-(1-金刚烷基)-2-(2-氰基4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺；

(19)N-(1-金刚烷基)-2-(2-甲基-4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺；

(20)N-(1-金刚烷基)-2-(2-氰甲氧基4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺；

(21)N-(1-金刚烷基)-2-(3-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺；

(22)N-(1-金刚烷基)-2-(3-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺；

(23)N-(1-金刚烷基)-2-(4-氯-3-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺；

(24)N-(1-金刚烷基)-2-(2-氯3-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺；

及其上述化合物所有可能的异构体或其可药用的盐或水合物。

进一步的，本发明的还公开了一种由通式(Ⅰ)所述化合物或其药学上可接受的盐或药学上可接受的载体组成的组合物；

本发明公开的通式(Ⅰ)的所述化合物为碱，其中所需盐形式通过本领域 已知的合适方法制备，包括用无机酸处理游离碱、有机酸处理游离碱。

进一步的，所述无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸；所述有机酸包括乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、羟基乙酸、水杨酸、吡喃糖苷酸(pyranosidyl acid)，例如葡糖醛酸或半乳糖醛酸，α-羟基酸，例如柠檬酸或酒石酸，氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸，芳香酸，例如苯甲酸或肉桂酸，磺酸，例如p-甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸等。药学上可接受的盐的实施例包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙酸盐(propiolates)、草酸盐、丙二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、苯基乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐(phenylbutrates)、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、羟基乙酸盐、酒石酸盐、苦杏仁酸盐和磺酸盐、例如二甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐和萘-2-磺酸盐。

进一步的，本发明公开的药物组合物含有至少一种前述公开的通式(Ⅰ)所示的化合物及其所有可能的异构体或其可药用的盐或水合物。

本文所用的“可药用赋形剂”是指包含在所给定形式中的或与所述组合物相容的原料、组合物或载体。当混合时，各种赋形剂必须与药物组合物的其它成分相容，使得给予患者时可能基本降低本发明的化合物的有效性的相互作用以及可能导致药物组合物不可药用的相互作用得以避免。另外，各种赋形剂必须当然具有足够高的纯度，以使之可药用。

进一步的，所述的药物组合物还包括赋形剂，所述赋形剂包括稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、粒化剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、悬浮剂、乳化剂、甜味剂、调味剂、味道掩蔽剂、着色剂、抗结块剂、湿润剂、螯合剂、増塑剂、粘度増加剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂中至少一种。

本领域技术人员将理解一些可药用赋形剂可适用于多于一种功能，并且可取决于所述赋形剂在所述制剂中的存在量以及其它成分存在于所述制剂中而适用于其它功能。

进一步的，本发明提供一种所述的药用组合物的用途：用于治疗EGFR酪氨酸激酶引起的疾病。

优选的，所述的药用组合物用于治疗非小细胞肺癌、小细胞肺癌、鳞状细胞癌、乳腺癌、胃癌。

本发明的有益效果在于提供一种新的金刚烷基喹唑啉化合物、组合物，提供疗效更好的治疗肿瘤的药物和治疗方法。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步描述，以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术实施例，而不能以此来限制本发明的保护范围。

化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移以δ(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，内标为四甲基硅烷(TMS)。

MS的测定用液相色谱质谱联用仪(生产商：AB SCIEX，型号：API3200)。

HPLC的测定使用安捷伦12OODAD高压液相色谱仪(SunfireC1815O×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(GiminiC1815O×4.6mm色谱柱)。

激酶平均抑制率及IC50值的测定用多功能酶标仪(生产商：Perkin Elmer，型号：Enspire2300)。

薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胺板采用的规格是0.15mm-0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm-0.5mm。

柱层析一般使用烟台黄海硅胶200-300目硅胶为载体。

本发明使用的原料主要购自可购买自国药集团化学试剂有限公司，北京偶合科技有限公司、阿拉丁化学试剂有限公司、达瑞化学品等公司。

实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。

实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃-30℃。

本发明采用的技术实施例如下：

实施例1

反应路径如下：

化合物(II)：

如上述反应方程式，化合物A1-6合成方法如下：

步骤1中间体2a-e的合成，反应条件为：(a)采用原料化合物1a-e与二氯亚砜为原料，恒温80℃，反应2h；

步骤2中间体3a-e的合成，反应条件为：(b)采用中间体2a-e与1-氨基金刚烷作为原料，在碳酸氢钠的丙酮溶液中回流2h；

步骤3中间体4a-e的合成，反应条件为：(c)采用中间体3a-e与氯化铵作为原料，铁粉为催化剂，在甲醇的水溶液中，恒温80℃，反应6h；

步骤3化合物A1-6的合成，反应条件为：(d)采用中间体4a-e与原料化合物(II)为原料，在甲醇溶剂中回流2h。

化合物A1-6取代基的选取如下：

通过上述方法制备的化合物A1-6的理化数据如下：

N-(1-金刚烷基)-3-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4喹唑啉基)胺)苯甲酰胺(A1)：

产量：622.5mg；灰白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.67(s，6H)，2.06(s，3H)，2.09(s，6H)，2.23-2.28(m，2H)，3.14(m，2H)，3.33(m，2H)，3.50(m，2H)，3.71(t，J＝11.6Hz，2H)，3.97(s，3H)，4.03(m，2H)，4.11(t，J＝6.0Hz，2H)，7.38(m，1H)，7.47(m，1H)，7.59(m，1H)，7.62(s，1H)，8.02(m，1H)，8.59(s，1H)，8.67(s，1H)，9.69(br，1H)，12.10(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ23.3，29.4(3C)，36.6(3C)，41.4(3C)，51.9(2C)，54.4，56.5，56.7，64.1(2C)，66.5，102.4，106.7，107.4，108.7，110.2，116.0，130.7，145.4，147.9，149.0，153.2，155.0，155.7，160.5，166.4；HRMS(ESI)for C₃₃H₄₁N₅O₄，[M+H]⁺计量值：572.3237，测量值：572.3216。N-(1-金刚烷基)-3-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4喹唑啉基)胺)-4-甲基苯甲 酰胺(A2)：

产量：821.9mg；类白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.64(s，6H)，2.07(s，3H)，2.12(s，6H)，2.19(s，3H)，2.20-2.23(m，2H)，3.13(m，2H)，3.31(m，2H)，3.52(m，2H)，3.67(t，J＝12.0Hz，2H)，3.91(s，3H)，4.03(m，2H)，4.18(t，J＝6.0Hz，2H)，7.12(d，J₁＝8.4Hz，1H)，7.43(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝1.6Hz，1H)，7.54(d，J₂＝1.6Hz，1H)，8.02(s，1H)，8.59(s，1H)，8.67(s，1H)，9.64(br，1H)，12.11(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ23.5，23.6，29.3(3C)，36.1(3C)，41.2(3C)，51.8(2C)，54.4，54.6，56.6，56.7，63.9(2C)，66.6，102.5，106.8，107.3，108.7，116.0，144.7，145.3，147.9，149.0，153.2，155.0，155.9，160.5，165.5；HRMS(ESI)for C₃₄H₄₃N₅O₄，[M+H]⁺计量值：576.3393，测量值：576.3224。

N-(1-金刚烷基)-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4喹唑啉基)胺)-4-甲基苯甲酰胺(A3)：

产量：353.4mg；黄白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.66(s，6H)，2.05(s，3H)，2.09(s，6H)，2.32-2.35(m，2H)，3.17(m，2H)，3.34(m，2H)，3.51(m，2H)，3.79(t，J＝11.6Hz，2H)，4.00(m，2H)，4.02(s，3H)，4.38(t，J＝6.0Hz，2H)，7.37(s，1H)，7.82(d，J＝8.8Hz，2H)，7.95(d，J＝8.8Hz，2H)，8.65(s，1H)，8.89(s，1H)，10.61(br，1H)，11.50(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ23.3，29.4(3C)，36.6(3C)，41.4(3C)，51.7(2C)，52.0，54.1，57.1，63.8(2C)，67.7，100.4，105.7107.8，124.3(2C)，128.4(2C)，133.9，136.2，139.5，149.3，149.6，157.0，158.6，165.8；HRMS(ESI)for C₃₃H₄₁N₅O₄，[M+H]⁺计量值：572.3237，测量值：572.3159。

N-(1-金刚烷基)-2-氯-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4喹唑啉基)胺)-4-甲基苯甲酰胺(A4)：

产量：399.4mg；黄白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.65(s，6H)，2.05(s，6H)，2.23(s，3H)，2.29-2.34(m，2H)，3.11(m，2H)，3.30(m，2H)，3.49(m，2H)，3.77(t，J＝10.4Hz，2H)，3.97(m，2H)，4.01(s，3H)，4.39(t，J＝6.0Hz，2H)，7.39(s，1H)，7.46(d，J₁＝8.4Hz，1H)，7.76(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝1.6Hz，1H)，7.94(d，J₂＝1.6Hz，1H)，8.60(s，1H)，8.91(s，1H)，10.77(br，1H)，11.79(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ23.4，29.3(3C)，36.5(3C)，41.4(3C)，51.6(2C)，52.2，54.0，56.7，63.7(2C)，66.7，100.2，107.1，107.9，115.5，123.4，125.6，130.1，136.0，138.7，148.4，149.6，155.4，158.8，159.8，165，5；HRMS(ESI)for C₃₃H₄₀ClN₅O₄，[M+H]⁺计量值：606.2847，测量值：606.2894。

N-(1-金刚烷基)-2-氰基-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4喹唑啉基)胺)-4-甲基苯甲酰胺(A5)：

产量：762.2mg；白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.74(s，6H)，1.96(s，6H)，2.11-2.15(s，3H)，2.24-2.31(m，2H)，3.17(m，2H)，3.36(m，2H)，3.51(m，2H)，3.75(m，J＝5.6Hz，2H)，3.97(m，2H)，3.99(s，3H)，4.33(t，J＝5.2Hz，2H)，7.49(s，1H)，7.46(d，J₁＝8.8Hz，1H)，8.08(dd，J₁＝8.8Hz，J₂＝2.0Hz，1H)，8.52(d，J₂＝2.0Hz，1H)，8.73(s，1H)，9.54(s，1H)，10.13(br，1H)，11.89(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ23.5，28.1(3C)，36.5(3C)，39.4(3C)，51.8(2C)，54.3，54.5，56.8，63.9(2C)，67.3，102.4，104.5，108.6，110.0，117.1，127.1，128.0，128.6，136.5，137.3，148.2，149.0，151.6，155.9，157.6，176.9；HRMS(ESI)for C₃₄H₄₀N₆O₄，[M+H]⁺计量值：597.3189，测量值：597.3114。

N-(1-金刚烷基)-4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4喹唑啉基)胺)-4-甲基苯甲酰胺(A6)：

产量：199.9mg；白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.67(s，6H)，2.07(s，3H)，2.09(s，6H)，3.35(s，3H)，3.36(s，3H)，3.77-3.80(m，4H)，4.33(t，J＝4.4Hz，2H)，4.40(t，J＝4.8Hz，2H)，7.42(s，1H)，7.64(s，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，2H)，7.88(d，J＝8.4Hz，2H)，8.44(s，1H)，8.84(s，1H)，11.53(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ29.4(3C)，36.6(3C)，41.4(3C)，52.0，58.8(7)，58.9(0)，69.3，69.6，70.3，70.4，101.3，105.7，108.0，124.2(2C)，128.3(2C)，133.8，136.3，139.7，149.2，150.0，156.2，158.5，165.9；HRMS(ESI)for C₃₁H₃₈N₄O₅，[M+H]⁺计量值：547.2920，测量值：547.2878。

实施例2

反应路径如下：

化合物(II)：

如上述反应方程式，化合物B1-6合成方法如下：

步骤1中间体6a-e的合成，反应条件为：(a)采用原料化合物5a-e与1-金刚烷酰氯为原料，在碳酸氢钠的丙酮溶液中回流2h；

步骤2中间体7a-e的合成，反应条件为：(b)采用中间体6a-e与氯化铵作为原料，铁粉为催化剂，在甲醇的水溶液中，恒温80℃，反应6h；

步骤3产物B1-6的合成，反应条件为：(c)采用中间体7a-e与原料化合物(II)为原料，在甲醇溶剂中回流2h。

化合物B1-6取代基的选取如下：

通过上述方法制备的化合物A1-6的理化数据如下：

N-(3-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4喹唑啉基)胺)苯基-1-金刚烷基甲酰胺(B1)

产量：310.5mg；乳白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.71(s，6H)，1.92(s，6H)，2.02(s，3H)，3.36(2)(s，3H)，3.36(4)(s，3H)，3.79(m，4H)，4.32-4.37(m，4H)，7.21-7.35(m，4H)，8.09(s，1H)，8.29(s，1H)，8.81(s，1H)，9.33(s，1H)，11.26(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ27.7(3C)，36.0(3C)，41.0(3C)，52.0，58.4，58.5，68.8，69.0，69.1，100.7，105.1，107.2，116.9，118.3，120.0，128.6，136.8，139.9，148.7，149.4，149.5，155.6，155.7，158.3，176.2；HRMS(ESI)for C₃₁H₃₈N₄O₅，[M+H]⁺计量值：547.2920，测量值：547.2892。

N-(3-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉基丙氧基)-4喹唑啉基)胺)苯基-1-金刚烷基甲酰胺(B2)

产量：666.0mg；类白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.74(s，6H)，1.91(m，2H)，2.02(s，3H)，2.32(s，6H)，3.14(m，4H)，3.32(m，4H)，3.63(t，J＝10.8Hz，2H)，4.03(s，3H)，4.52(t，J＝6.4Hz，2H)，7.36(m，1H)，7.43(m，1H)，7.60(m，1H)，7.64(m，1H)，8.05(s，1H)，8.81(s，1H)，8.91(s，1H)，9.43(s，1H)，11.20(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)： δ23.7，28.2(3C)，36.2(3C)，41.6(3C)，52.3(2C)，53.1，55.4，56.2，64.3(2C)，67.1，101.9，105.3，106.4，109.1，110.6，116.2，136.3，145.1，146.6，149.2，153.1，155.7，155.9，160.1，176.4；HRMS(ESI)for C₃₃H₄₁N₅O₄，[M+H]⁺计量值：572.3237，测量值：572.3321。

N-(4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4喹唑啉基)胺)-3-甲基苯基-1-金刚烷基甲酰胺(B3)

产量：248.6mg；黄白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.73(s，6H)，1.96(s，6H)，2.00(s，3H)，2.04(s，3H)，3.37(s，3H)，3.38(s，3H)，3.79-3.79(m，4H)，4.32-4.37(m，4H)，7.28(d，J₁＝8.8Hz，1H)，7.34(s，1H)，7.47(dd，J₁＝8.8Hz，J₂＝2.0Hz，1H)，7.51(s，1H)，8.24(d，J₂＝2.0Hz，1H)，8.81(s，1H)，8.87(s，1H)，11.17(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ17.8，27.7(3C)，36.1(3C)，40.6(3C)，58.4(2)，58.4(4)，58.5，68.8，68.9，69.8，69.9，101.3，104.8，107.2，122.3，126.2，127.0，134.1，134.2，134.8，136.0，149.1，149.4，155.6，158.1，176.0；HRMS(ESI)for C₃₂H₄₀N₄O₅，[M+H]⁺计量值：561.3077，测量值：561.3019。

N-(4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4喹唑啉基)胺)-2-甲基苯基-1-金刚烷基甲酰胺(B4)

产量：719.4mg；亮黄色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.73(s，6H)，1.94(s，6H)，1.99(s，3H)，2.04(s，3H)，3.37(s，3H)，3.38(s，3H)，3.79-3.81 (m，4H)，4.32-4.38(m，4H)，7.25-7.27(d，J₁＝2.0Hz，J₂＝8.8Hz，1H)，7.34(s，1H)，7.44(s，J₁＝2.0Hz，1H)，8.00(d，J₂＝8.8Hz，1H)，8.26(s，1H)，8.37(s，1H)，8.82(s，1H)，11.22(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ16.9，27.7(3C)，36.0(3C)，41.1(3C)，56.3，58.4，58.5，68.8，69.0，69.9，67.0，100.7，104.8，107.2，108.3，116.8，121.5，125.7，133.1，135.3，148.8，149.4，149.7，155.7，158.1，175.4；HRMS(ESI)for C₃₂H₄₀N₄O₅，[M+H]⁺计量值：561.3077，测量值：561.3033。

N-(4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4喹唑啉基)胺)-2-甲氧基苯基-1-金刚烷基甲酰胺(B5)

产量：220.1mg；黄色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.75(s，6H)，1.92(s，6H)，2.01(s，3H)，3.35(s，3H)，3.39(s，3H)，3.41(s，3H)，3.77-3.81(m，4H)，4.32-4.38(m，4H)，7.37(s，1H)，7.60(dd，J₁＝8.8Hz，J₂＝2.4Hz，1H)，7.78(d，J₁＝8.8Hz，1H)，7.81(d，J₂＝2.4Hz，1H)，8.31(s，1H)，8.79(s，1H)，9.30(s，1H)，11.30(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ27.7(3C)，36.1(3C)，38.3(3C)，41.1，58.4，58.5，58.7，68.8，69.0，69.8，70.0，100.6，105.0，107.1，120.3，122.3，123.9，124.9，131.7，135.1，137.7，148.7，149.4，155.6，158.0，176.1；HRMS(ESI)for C₃₂H₄₀N₄O₆，[M+H]⁺计量值：577.3026，测量值：577.2942。

N-(4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4喹唑啉基)胺)-2-氰基苯基-1-金刚烷基甲酰胺(B6)

产量：575.9mg；白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.73(s，6H)，1.95(s，6H)，2.05(s，3H)，3.35(s，3H)，3.36(s，3H)，3.78-3.80(m，8H)，7.29(s，1H)，7.51(d，J₁＝6.4Hz，1H)，8.00(dd，J₁＝6.4Hz，J₂＝2.4Hz，1H)，8.05(s，1H)，8.24(d，J₂＝2.4Hz，1H)，8.76(s，1H)，9.54(s，1H)，11.87(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ27.7(3C)，36.1(3C)，39.0(3C)，40.6，58.3，58.5，58.7，68.6，68.8，67.0，70.0，103.6，107.8，109.6，116.6，127.2，127.6，128.6，135.6，137.4，142.9，149.1，150.5，155.2，157.4，176.4；HRMS(ESI)for C₃₂H₃₇N₅O₅，[M+H]⁺计量值：572.2873，测量值：572.2811。

实施例3

反应路径如下：

化合物(II)：

如上述反应方程式，化合物C1-12合成方法如下：

步骤1中间体9a-e的合成，反应条件为：(a)采用原料化合物8a-e与溴乙酸乙酯、碳酸钾为原料，在丙酮溶剂中回流2h；后(b)加入1mol/L氢氧化钠溶液，常温下搅拌2h；

步骤2中间体10a-e的合成，反应条件为：(c)采用中间体9a-e与草酰氯作为原料，回流2h；后(d)加入1-金刚烷胺与碳酸钠，在丙酮中回流2h；

步骤3中间体11a-e的合成，反应条件为：(e)采用中间体10a-e与氯化铵作为原料，铁粉为催化剂，在甲醇的水溶液中，恒温80℃，反应6h；

步骤4产物C1-12的合成，反应条件为：(f)采用中间体11a-e与原料化合物(II)为原料，在甲醇溶剂中回流2h。。

化合物C1-6取代基的选取如下：

N-(1-金刚烷基)-2-(4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺(C1)

产量：353.4mg；黄白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.66(s，6H)，2.05(s，3H)，2.09(s，6H)，2.32-2.35(m，2H)，3.17(m，2H)，3.34(m，2H)，3.45(s，2H)，3.51(m，2H)，3.79(t，J＝11.6Hz，2H)，4.00(m，2H)，4.02(s，3H)，4.38(t，J＝6.0Hz，2H)，7.37(s，1H)，7.82(d，J＝8.8Hz，2H)，7.95(d，J＝8.8Hz，2H)，8.65(s，1H)，8.89(s，1H)，10.61(br，1H)，11.50(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ23.3，29.4(3C)，36.6(3C)，41.4(3C)，47.6，51.7(2C)，52.0，54.1，57.1，63.8(2C)，67.7，100.4，105.7107.8，124.3(2C)，128.4(2C)，133.9，136.2，139.5，149.3，149.6，157.0，158.6，165.8；HRMS(ESI)for C₃₄H₄₃N₅O₅，[M+H]⁺计量值：601.7357，测量值：601.3264。

N-(1-金刚烷基)-2-(2-氯-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺(C2)

产量：399.4mg；黄白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.65(s，6H)，2.05(s，6H)，2.23(s，3H)，2.29-2.34(m，2H)，3.11(m，2H)，3.30(m，2H)，3.45(s，2H)，3.49(m，2H)，3.77(t，J＝10.4Hz，2H)，3.97(m，2H)，4.01(s，3H)，4.39(t，J＝6.0Hz，2H)，7.39(s，1H)，7.46(d，J₁＝8.4Hz，1H)，7.76(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝1.6Hz，1H)，7.94(d，J₂＝1.6Hz，1H)，8.60(s，1H)，8.91(s，1H)，10.77(br，1H)，11.79(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ23.4，29.3(3C)，36.5(3C)，41.4(3C)，47.6，51.6(2C)，52.2，54.0，56.7，63.7(2C)，66.7，100.2，107.1，107.9，115.5，123.4，125.6，130.1，136.0，138.7，148.4，149.6，155.4，158.8，159.8，165，5；HRMS(ESI)for C₃₄H₄₂ClN₅O₅，[M+H]⁺计量值：636.1808，测量值：635.2874。

N-(1-金刚烷基)-2-(2-氰基-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺(C3)

产量：762.2mg；白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.74(s，6H)，1.96(s，6H)，2.11-2.15(s，3H)，2.24-2.31(m，2H)，3.17(m，2H)，3.36(m，2H)，3.45(s，2H)，3.51(m，2H)，3.75(m，J＝5.6Hz，2H)，3.97(m，2H)，3.99(s，3H)，4.33(t，J＝5.2Hz，2H)，7.49(s，1H)，7.46(d，J₁＝8.8Hz，1H)，8.08(dd，J₁＝8.8Hz，J₂＝2.0Hz，1H)，8.52(d，J₂＝2.0Hz，1H)，8.73(s，1H)，9.54(s，1H)，10.13(br，1H)，11.89(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ23.5，28.1(3C)，36.5(3C)，39.4(3C)，47.6，51.8(2C)，54.3，54.5，56.8，63.9(2C)，67.3，102.4，104.5，108.6，110.0，117.1，127.1，128.0，128.6，136.5，137.3，148.2，149.0，151.6，155.9，157.6，176.9；HRMS(ESI)for C₃₅H₄₂N₆O₅，[M+H]⁺计量值：626.7452，测量值：626.3217。

N-(1-金刚烷基)-2-(2-甲氧基-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺(C4)

产量：353.4mg；黄色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.66(s，6H)，2.05(s，3H)，2.09(s，6H)，2.32-2.35(m，2H)，3.17(m，2H)，3.34(m，2H)， 3.41(s，3H)，3.45(s，2H)，3.51(m，2H)，3.79(t，J＝11.6Hz，2H)，4.00(m，2H)，4.02(s，3H)，4.38(t，J＝6.0Hz，2H)，7.37(s，1H)，7.60(dd，J₁＝8.8Hz，J₂＝2.4Hz，1H)，7.78(d，J₁＝8.8Hz，1H)，7.81(d，J₂＝2.4Hz，1H)，8.65(s，1H)，8.89(s，1H)，10.61(br，1H)，11.50(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ23.3，29.4(3C)，36.6(3C)，41.4(3C)，47.6，51.7(2C)，52.0，54.1，57.1，58.7，63.8(2C)，67.7，100.4，105.7107.8，124.3(2C)，128.4(2C)，133.9，136.2，139.5，149.3，149.6，157.0，158.6，165.8；HRMS(ESI)for C₃₅H₄₅N₅O₆，[M+H]⁺计量值：631.7617，测量值：631.3370。

N-(1-金刚烷基)-2-(4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺(C5)

产量：199.9mg；白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.67(s，6H)，2.07(s，3H)，2.09(s，6H)，3.35(s，3H)，3.36(s，3H)，3.45(s，2H)，3.77-3.80(m，4H)，4.33(t，J＝4.4Hz，2H)，4.40(t，J＝4.8Hz，2H)，7.42(s，1H)，7.64(s，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，2H)，7.88(d，J＝8.4Hz，2H)，8.44(s，1H)，8.84(s，1H)，11.53(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ29.4(3C)，36.6(3C)，41.4(3C)，47.6，52.0，58.8(7)，58.9(0)，69.3，69.6，70.3，70.4，101.3，105.7，108.0，124.2(2C)，128.3(2C)，133.8，136.3，139.7，149.2，150.0，156.2，158.5，165.9；HRMS(ESI)for C₃₂H₄₀N₄O₆，[M+H]⁺计量值：576.6832，测量值：576.2948。

N-(1-金刚烷基)-2-(2-氰基4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺(C6)

产量：575.9mg；白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.73(s，6H)，1.95(s，6H)，2.05(s，3H)，3.35(s，3H)，3.36(s，3H)，3.45(s，2H)，3.78-3.80(m，8H)，7.29(s，1H)，7.51(d，J₁＝6.4Hz，1H)，8.00(dd，J₁＝6.4Hz，J₂＝2.4Hz，1H)，8.05(s，1H)，8.24(d，J₂＝2.4Hz，1H)，8.76(s，1H)，9.54(s，1H)，11.87(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ27.7(3C)，36.1(3C)，39.0(3C)，40.6，47.6，58.3，58.5，58.7，68.6，68.8，67.0，70.0，103.6，107.8，109.6，116.6，127.2，127.6，128.6，135.6，137.4，142.9，149.1，150.5，155.2，157.4，176.4；HRMS(ESI)for C₃₃H₃₉N₅O₆，[M+H]⁺计量值：601.6927，测量值：601.2900。

N-(1-金刚烷基)-2-(2-甲基-4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺(C7)

产量：719.4mg；黄色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.73(s，6H)，1.94(s，6H)，1.99(s，3H)，2.04(s，3H)，3.37(s，3H)，3.38(s，3H)，3.45(s，2H)，3.79-3.81(m，4H)，4.32-4.38(m，4H)，7.25-7.27(d，J₁＝2.0Hz，J₂＝8.8Hz，1H)，7.34(s，1H)，7.44(s，J₁＝2.0Hz，1H)，8.00(d，J₂＝8.8Hz，1H)，8.26(s，1H)，8.37(s，1H)，8.82(s，1H)，11.22(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ16.9，27.7(3C)，36.0(3C)，41.1(3C)，47.6，56.3，58.4，58.5，68.8，69.0，69.9，67.0，100.7，104.8，107.2，108.3，116.8，121.5，125.7，133.1，135.3，148.8，149.4，149.7，155.7，158.1，175.4；HRMS(ESI)for C₃₃H₄₂N₄O₆，[M+H]⁺计量值：590.7098，测量值：590.3104。

N-(1-金刚烷基)-2-(2-氰甲氧基4-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺(C8)

产量：220.1mg；黄白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.75(s，6H)，1.92(s，6H)，2.01(s，3H)，3.35(s，3H)，3.39(s，3H)，3.41(s，3H)，3.45(s，2H)，3.77-3.81(m，4H)，4.32-4.38(m，4H)，7.37(s，1H)，7.60(dd，J₁＝8.8Hz，J₂＝2.4Hz，1H)，7.78(d，J₁＝8.8Hz，1H)，7.81(d，J₂＝2.4Hz，1H)，8.31(s，1H)，8.79(s，1H)，9.30(s，1H)，11.30(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ27.7(3C)，36.1(3C)，38.3(3C)，41.1，47.6，58.4，58.5，58.7，68.8，69.0，69.8，70.0，100.6，105.0，107.1，120.3，122.3，123.9，124.9，131.7，135.1，137.7，148.7，149.4，155.6，158.0，176.1；HRMS(ESI)for C₃₃H₄₂N₄O₇，[M+H]⁺计量值：606.7092，测量值：606.3053。

N-(1-金刚烷基)-2-(3-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺(C9)

产量：310.5mg；灰白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.71(s，6H)，1.92(s，6H)，2.02(s，3H)，3.36(2)(s，3H)，3.36(4)(s，3H)，3.45(s，2H)，3.79(m，4H)，4.32-4.37(m，4H)，7.21-7.35(m，4H)，8.09(s，1H)，8.29(s，1H)，8.81(s，1H)，9.33(s，1H)，11.26(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ27.7(3C)，36.0(3C)，41.0(3C)，47.6，52.0，58.4，58.5，68.8，69.0，69.1，100.7，105.1，107.2，116.9，118.3，120.0，128.6，136.8，139.9，148.7，149.4，149.5，155.6，155.7，158.3，176.2；HRMS(ESI)for C₃₂H₄₀N₄O₆，[M+H]⁺计量值：576.6832，测量值：576.2948。

N-(1-金刚烷基)-2-(3-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺(C10)

产量：622.5mg；灰白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.67(s，6H)，2.06(s，3H)，2.09(s，6H)，2.23-2.28(m，2H)，3.14(m，2H)，3.33(m，2H)，3.45(s，2H)，3.50(m，2H)，3.71(t，J＝11.6Hz，2H)，3.97(s，3H)，4.03(m，2H)，4.11(t，J＝6.0Hz，2H)，7.38(m，1H)，7.47(m，1H)，7.59(m，1H)，7.62(s，1H)，8.02(m，1H)，8.59(s，1H)，8.67(s，1H)，9.69(br，1H)，12.10(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ23.3，29.4(3C)，36.6(3C)，41.4(3C)，47.6，51.9(2C)，54.4，56.5，56.7，64.1(2C)，66.5，102.4，106.7，107.4，108.7，110.2，116.0，130.7，145.4，147.9，149.0，153.2，155.0，155.7，160.5，166.4；HRMS(ESI)for C₃₄H₄₃N₅O₅，[M+H]⁺计量值：601.7357，测量值：601.3264。

N-(1-金刚烷基)-2-(4-氯-3-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺(C11)

产量：310.5mg；黄白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.71(s，6H)，1.92(s，6H)，2.02(s，3H)，3.36(2)(s，3H)，3.36(4)(s，3H)，3.45(s，2H)，3.79(m，4H)，4.32-4.37(m，4H)，7.46(d，J₁＝8.4Hz，1H)，7.76(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝1.6Hz，1H)，7.94(d，J₂＝1.6Hz，1H)，8.09(s，1H)，8.29(s，1H)，8.81(s，1H)，9.33(s，1H)，11.26(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ27.7(3C)，36.0(3C)，41.0(3C)，47.6，52.0，58.4，58.5，68.8，69.0，69.1，100.7，105.1，107.2，116.9，118.3，120.0，128.6，136.8，139.9，148.7，149.4，149.5，155.6，155.7，158.3，176.2；HRMS(ESI)for C₃₂H₃₉ClN₄O₆，[M+H]⁺计量值：611.2592，测量值：611.1283。

N-(1-金刚烷基)-2-(2-氯3-((6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉基)胺)苯氧基)乙酰胺(C12)

产量：622.5mg；类白色固体；¹H NMR(DMSO-d₆)：δ1.67(s，6H)，2.06(s，3H)，2.09(s，6H)，2.23-2.28(m，2H)，3.14(m，2H)，3.33(m，2H)，3.45(s，2H)，3.50(m，2H)，3.71(t，J＝11.6Hz，2H)，3.97(s，3H)，4.03(m，2H)，4.11(t，J＝6.0Hz，2H)，7.12(d，J₁＝8.4Hz，1H)，7.43(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝1.6Hz，1H)，7.54(d，J₂＝1.6Hz，1H)，8.02(m，1H)，8.59(s，1H)，8.67(s，1H)，9.69(br，1H)，12.10(s，1H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ23.3，29.4(3C)，36.6(3C)，41.4(3C)，47.6，51.9(2C)，54.4，56.5，56.7，64.1(2C)，66.5，102.4，106.7，107.4，108.7，110.2，116.0，130.7，145.4，147.9，149.0，153.2，155.0，155.7，160.5，166.4；HRMS(ESI)for C₃₄H₄₂ClN₅O₅，[M+H]⁺计量值：636.2908，测量值：636.1808。

上述实施例1-3中，各所述中间体的合成步骤描述如下：

制备N-金刚烷基苯甲酰胺中间体4a-e的步骤：

将二氯亚砜(2.17mL，0.030mol)慢慢滴加至硝基苯甲酸1a-e(0.010mol)中，然后升温至80℃反应2h，反应结束后，蒸除多余的二氯亚砜，得粗产品酰氯2a-e，未纯化，直接下一步反应。

将粗产品2a-e(0.010mol)溶于丙酮(20mL)中，再慢慢滴加至1-金刚烷胺(1.51g，0.010mol)，碳酸氢钠(2.52g，0.030mol)和丙酮(10mL)的混合溶液中，之后升温回流反应2小时，反应结束后，倒入水中(50mL)，用二氯甲烷(2×30mL)萃取三次，合并二氯甲烷层，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，得硝基中间体3a-e。

将中间体3a-e(0.010mol)和氯化铵(1.34g，0.025mol)溶于甲醇-水中(30mL，甲醇:水＝1:1)，然后升温至80℃，慢慢加入铁粉(2.23g，0.040mol)，加毕，于此温度下反应6h。反应结束后，趁热过滤，滤渣用DMSO(3×10mL)洗三次，滤液倒入水中(100mL)，抽滤，滤渣用水洗三次(3×20mL)，得粗品4a-e，直接下一步反应。

制备N-苯基金刚烷基甲酰胺(7a-e)的步骤：

将1-金刚烷基甲酰氯(1.99g，0.010mol)溶于丙酮中(10mL)，然后慢慢滴加至硝基苯胺(0.010mol)，碳酸氢钠(2.52g，0.030mol)和丙酮(10mL)的混合溶液中，加完后，升温回流反应2小时，之后，将反应液倒入水中(50mL)，析出白色固体，抽滤，得硝基中间体6a-e，未纯化直接下一步反应。

将化合物6a-e(0.010mol)和氯化铵(1.34g，0.025mol)溶于甲醇-水中(30mL，甲醇:水＝1:1)，升温至80℃，慢慢加入铁粉(2.23g，0.040mol)，之后于此温度下反应6小时。反应毕，趁热抽滤，滤渣用DMSO(3×10mL)洗三次，滤液倒入水中(100mL)，抽滤，滤渣用水洗三次(3×20mL)，得粗品7a-e，直接下一步反应。

制备N-金刚烷基苯氧乙酰胺中间体11a-e的步骤：

将溴乙酸乙酯(1.11mL，0.010mol)慢慢滴加至硝基苯酚8a-e(0.010mol)，碳酸钾(2.76g，0.020mol)和丙酮(10mL)的混合溶液中，之后升温回流反应2小时，反应结束后，蒸除残留的溴乙酸乙酯，加入氢氧化钠溶液(10mL，1mol/L)常温反应2小时，反应结束后，倒入水中(50mL)，用二氯甲烷(2×30mL)萃取三次，合并二氯甲烷层，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，得硝基苯氧乙酸中间体9a-e，未纯化直接下一步反应。

将草酰氯(2.36mL，0.030mol)慢慢滴加至硝基苯氧乙酸9a-e(0.010mol) 中，然后升温至60℃反应2h，反应结束后，蒸除多余的草酰氯，用丙酮(20mL)溶解所得粗产物，再慢慢滴加至1-金刚烷胺(1.51g，0.010mol)，碳酸氢钠(2.52g，0.030mol)和丙酮(10mL)的混合溶液中，之后升温回流反应2小时，反应结束后，倒入水中(50mL)，用二氯甲烷(2×30mL)萃取三次，合并二氯甲烷层，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，浓缩，得硝基中间体10a-e，未纯化直接下一步反应。

将中间体10a-e(0.010mol)和氯化铵(1.34g，0.025mol)溶于甲醇-水中(30mL，甲醇:水＝1:1)，然后升温至80℃，慢慢加入铁粉(2.23g，0.040mol)，加毕，于此温度下反应6h。反应结束后，趁热过滤，滤渣用DMSO(3×10mL)洗三次，滤液倒入水中(100mL)，抽滤，滤渣用水洗三次(3×20mL)，得粗品11a-e，直接下一步反应。

制备目标分子A1-6和B1-6和C1-12的步骤：

将4-氯喹唑啉母核(0.002mmol)，和苯胺中间体4a-e或7a-e或11a-e(0.002mmol)溶于甲醇中(10mL)，升温反应2h，反应结束后，将反应液倒入水中(50mL)，乙酸乙酯萃取三次(3×30mL)，合并有机层，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得褐色固体，硅胶层析柱层析分离(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝1:20)，得目标分子。

所述通式(Ⅰ)化合物目标分子成盐的方法：

有机酸盐的制备方法：取目标分子(1mmol)溶于10mL无水甲醇中，冰浴下，慢慢滴加有机酸(1mmol)的5mL无水甲醇溶液，滴加完毕，于此温度下搅拌30分钟，然后常温蒸除甲醇，即得目标分子的有机酸盐。通过该方法制备了化合物A4的盐酸盐(A4-1)、氢溴酸盐(A4-2)、硫酸盐盐(A4-3)，B3的盐酸盐(B3-1)、氢溴酸盐(B3-2)、硫酸盐盐(B3-3)和C7的盐酸盐(C7-1)、氢溴酸盐(C7-2)、硫酸盐盐(C7-3)

无机酸盐的制备方法：取目标分子(1mmol)溶于10mL无水甲醇中，冰浴下，慢慢滴加无机酸(1mmol)的5mL干燥乙醚，滴加完毕，于此温度下搅拌30分钟，然后常温蒸除溶剂，即得目标分子的无机酸盐。通过该方法制备了化合物A4的马来酸盐(A4-4)、琥珀酸盐(A4-5)、富马酸盐(A4-6)、草酸(A4-7)，B3的马来酸盐(B3-4)、琥珀酸盐(A4-5)、富马酸盐(A4-6)、草酸(A4-7)和C7的马来酸盐(C7-4)、琥珀酸盐(C7-5)、富马酸盐(C7-6)、草酸(C7-7)

目标分子组合物的制备

取等摩尔量(1mmol)的上述两个目标分子于5mL无水甲醇中，室温搅拌10分钟，常温蒸除溶剂，即得目标分子的组合物。通过该方法制备了A4-B3、A4-C7、B3-C7三个组合物。

活性测试

1.体外对受体酪氨酸激酶抑制活性测试方法

(1)制备激酶检测缓冲液

①在室温融解Kinase Detection Buffer，观察是否有沉淀。

②如果出现沉淀，就在37℃孵育Kinase Detection Buffer 15分钟并经常摇动，溶解沉淀。或者，小心吸走上清，去除沉淀。

(2)制备激酶检测试剂

①使用前在室温平衡Kinase Detection Buffer和Kinase Detection Substrate。

②将Kinase Detection Buffer全部倒进装有Kinase Detection Substrate的棕色瓶中，使冻干粉底物溶解。这样就制成了激酶检测试剂。

③轻轻震荡、涡旋或颠倒混匀，成为均质溶液。底物应在1分钟内溶解。

④激酶检测试剂配好后应立即使用，或分装存于-20℃。我们认为配好的试剂经过几次冻融后循环信号活性都没有损失。

(3)制作ATP转化成ADP的标准曲线

①用1x kinase reaction buffer稀释试剂盒提供的Ultra Pure ATP和ADP，制成90 0μL 50μM ATP和500μL 50μM ADP。

②将上一步配好的50μM ATP和50μM ADP溶液按表1所示在384孔板K1-12中混合，模拟每个转化百分比的ATP和ADP的浓度。混合好。

表1.制备50μM系列ATP+ADP标准品

③每孔加入5μL的ADP-Glo^TM试剂来终止激酶反应。在室温孵育40分钟。

④每孔加入10μL Kinase Detection Reagent将ADP转化成ATP，并引进萤光素酶和萤光素来检测ATP。

⑤在室温孵育30-60分钟，用多功能酶标仪测量萤光并记录萤光值。

⑥绘制ATP转化成ADP的标准曲线。

(4)确定激酶抑制物的IC₅₀值

①按照promega试剂盒说明书配制1x kinase reaction buffer，2.5x 50ng/μL激酶和2.5x 0.5μg/μL底物和125μM ATP。

②在无酶对照孔中加入3μL 1x kinase reaction buffer，2μL 2.5x 0.5μg/μL底物和125μM ATP。在阴性对照孔中加入1μL 1x kinase reaction buffer，2μL 2.5x50ng/μL激酶，2μL 2.5x 0.5μg/μL底物和125μM ATP。在测试孔中加入1μL 5x待测药物，2μL 2.5x 50ng/μL激酶，2μL 2.5x 0.5μg/μL底物和125μM ATP。

③混合好平板，孵育60分钟。

④每孔加入5μL的ADP-Glo^TM试剂来终止激酶反应。在室温孵育40分钟。

⑤每孔加入10μL Kinase Detection Reagent将ADP转化成ATP，并引进萤光素酶和萤光素来检测ATP。在室温孵育30-60分钟，用多功能酶标仪测量萤光并记录萤光值。

⑥结果分析

2.抑制EGFR高表达细胞生长实验(MTT检测法)

(1)细胞类型及选择：A431细胞(野生型EGFR高表达肺癌细胞)、H1975细胞(EGFR T790M高表达肺癌细胞)、HCC827细胞(EGFR del A750_E746高表达肺癌细胞)、A549细胞(野生型和K-Ras突变型高表达肺癌细胞)、MCF-7(EGFR高表达的乳腺癌细胞)、SGC-7901(EGFR高表达的胃癌细胞)。

(2)细胞接种：收集对数生长期细胞，调整细胞悬液浓度,以每孔7x 10³个细 胞,每孔体积100μL接种到96孔板，每组设4个复孔(边缘孔用无菌PBS填充)；

(3)细胞培养：细胞贴壁后，0％FBS RPMI-1640饥饿8h,对照组用10％FBS RPMI-1640培养,实验组分别用100μL不同浓度梯度的吉非替尼(2.5-40μmol/L)、厄洛替尼(2.5-40μmol/L)、各不同药物(2.5-40μmol/L)干预，37℃，5％CO₂培养箱中继续培养(按实验要求分别培养不同时间)；

(4)呈色：三组细胞分别于培养72h后加入10μL MTT溶液(5mg/ml)，4h后终止培养，每孔加入100μL三联液，于摇床上低速振荡10min，使结晶充分溶解；

(5)比色：在酶联免疫检测仪上测定各孔光度值(OD值)，选择570nm波长，以无细胞的即RPMl-1640培养液空白孔调零，测各孔的吸光度值。实验重复三次；

(6)记录结果：细胞生长抑制率＝(对照组吸光度值一实验组吸光度值)/对照组吸光度值x 100％，细胞增殖率＝(实验组吸光度值/对照组吸光度值)x 100；(7)绘制细胞生长曲线：以时间为横坐标，抑制率/增殖率为纵坐标绘制细胞生长曲线。

3.人肺腺癌NCI-H1975裸鼠皮下移植瘤的量效关系实验

挑选BALB/c裸小鼠(大连医科大学实验动物中心，SPF)，体重18-20g，雌性。收集对数生长期的NCI-H1975细胞。以0.2mL/只接种于小鼠腋窝下侧。 待测样品的配制见表2，每天灌胃给药一次，连续给药9天。通过测量肿瘤体积和体重，来评价待测化合物在人肺腺癌NCI-H1975裸鼠皮下移植瘤的抑制作用测量肿瘤体积和体重。

表2. NCI-H1975裸鼠抑制实验待测化合物的配制

结果与讨论

表3化合物A1-6和B1-6和C1-12体外抑制EGFR酪氨酸激酶(野生型和L858R/T790M突变)活性测试^a

^a数据代表至少三个独立的实验的平均值。²根据量效曲线所得浓度，代表至少抑制50％的EGFR酪氨酸激酶自磷酸化。

抑制EGFR^WT和EGFR^T790M酶水平的活性(见表3)显示，此类含金刚烷基的喹唑啉分子具有非常强的抑制酪氨酸激酶靶点活性。其中，大部分化合物对EGFR^WT酶的有效抑制浓度(IC₅₀)低于100nM,化合物A1，A3，A4， A5，A6，B1，B2，B3，B4，B5，B6及C1，C2的IC₅₀值均低于15nM,活性最强的三个化合物A3，B1和C7的IC₅₀值分别为2.01nM，1.63nM和1.93nM，比吉非替尼提高了7-9倍。此外，本发明中的分子对T790M突变的EGFR激酶也显示出了强的抑制效果(IC₅₀<710nM)，其中化合物A3，A4，A5，A6的IC₅₀值小于10nM,比先导物提高了150多倍。以上结果充分表明，此类分子为EGFR抑制剂，作用靶点清楚，作用效果明显。

本发明中的分子还从细胞水平考察了对非小细胞肺癌、乳腺癌和胃癌的抑制有效性(见表4)。选取EGFR^WT高表达的A431细胞系，EGFR^{delA750_E646T}高表达的HCC827细胞系，EGFR^T790MT高表达的H1975细胞系，及EGFR^WT和EGFR^K-ras高表达的A549细胞系，乳腺癌MCF-7细胞系和胃癌SGC7901细胞系。测试结果表明，含金刚烷基的喹唑啉分子对NSCLC细胞均表现出了一定的抑制效果。其中，大部分化合物对HCC827细胞的增殖效果最为明显，IC₅₀值基本都在1μM以下，其中化合物A2，A3，A4的IC₅₀值分别为14μM，9μM，9μM，与先导物吉非替尼相当(IC₅₀＝13μM)。抑制A431的活性结果发现，化合物A6(IC₅₀＝1.02μM)达到了先导物的水平(IC₅₀＝1.33nM)。尤为关注的是此类分子对耐药型细胞H1975的抗增殖活性，有近一半的化合物显示出比吉非替尼更强的抗耐药性，其中化合物A2(IC₅₀＝17.1μM)，A4(IC₅₀＝5.89μM)，A6(IC₅₀＝12.4μM)，B3(IC₅₀＝13.6μM)的抗耐药性明显优于吉非替尼，活性最强的化合物A6比吉非替尼的抗耐药性提高了5倍多。 此外，此类分子对A549的活性效果更为突出，化合物A2，A4，A6及B3，B4，B5，B6的活性小于10μM，优于先导物(IC₅₀＝13.1μM)，活性最强的化合物A6(IC₅₀＝1.25μM)的活性比先导物提高了近10倍。化合物对乳腺癌细胞MCF-7及胃癌细胞SGC7901也表现出了强的抑制效果，其中对肺癌效果最为明显的化合物A6对此两个细胞的抑制活性也最强，IC₅₀达到了1.25μM和6.31μM。成盐型化合物的抗肿瘤增殖实验结果(见表5)表明：化合物成盐后，基本保持了与原来分子相同的抗肿瘤活性，但鉴于成盐后，分子的水溶性增加，更利于改善分子的体内和药代动力学性质，有潜在的应用价值。以上结果充分证明，此类分子对EGFR高表达的肺癌、乳腺癌和胃癌有非常明显的抗增殖效果。

表4化合物A1-6和B1-6和C1-12的细胞抗增殖活性^a

表5成盐型化合物及组合物的细胞抗增殖活性^a

^a数据代表至少三个独立的实验的平均值。^b根据5个浓度绘制的量效曲线，IC₅₀值在微摩尔级达到至少抑制50％的细胞生长。

选取细胞水平(H1975细胞)活性最强的化合物A4进行NCI-H1975裸鼠体 内药效学评价。首先，对待测化合物进行灌胃准备，按表2配制各个待测化合物。挑选BALB/c裸小鼠(大连医科大学实验动物中心，SPF)，体重18-20g，雌性。收集对数生长期的NCI-H1975细胞。以0.2mL/只接种于小鼠腋窝下侧。每天灌胃给药一次，连续给药14天。测量裸鼠肿瘤体积和体重，可见，化合物A4具有显著的抑制肿瘤增殖效果，给药100mg/天和200mg/天均表现出比吉非替尼更好的抗肿瘤活性，而且随着给药剂量的增加，肿瘤体积明显减小，且在整个给药过程中，所有动物未出现严重腹泻及皮肤脱落现象，此结果进一步证明此类分子在抑制突变型NSCLC肺癌中的应用开发价值。

以上所述仅是本发明的优先实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。