制备DNA探针的方法、试剂盒及其应用与流程

本发明涉及生物医药领域，具体地，本发明涉及制备dna探针的方法、试剂盒及其应用，更具体地，本发明涉及制备dna探针的方法、试剂盒、检测生物制品中大肠杆菌dna含量的方法以及确定生物制品生产工艺的方法。
背景技术：
：为了确保治疗性重组dna药物的产品质量，欧美药监局和国家食品药品监督管理总局都对生物制品中宿主细胞dna残留量提出了明确要求。原核生物其dna残留量应不高于10ng/剂量，cho细胞dna残留量应不高于100pg/剂量。但由于外源dna宿主种类繁多，片段大小不一，属于微量杂质，测定时干扰因素较多，如何对其进行特异、灵敏、快速、准确的检测是一项困难的工作。技术实现要素：本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出了一种制备dna探针的方法，该方法制备的dna探针用于检测生物制品中大肠杆菌dna残留量，具有特异、灵敏、快速、准确的优点。在本发明的第一方面，本发明提出了一种制备dna探针的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：(1)将大肠杆菌细胞基因组dna进行超声破碎处理，其中，在所述超声破碎处理中，所述大肠杆菌细胞基因组dna的浓度为20微克/毫升；以及(2)将所述超声破碎处理的产物与标记试剂进行孵育处理，以便获得dna探针，所述dna探针携带所述标记。利用根据本发明实施例的方法所制备的dna探针，能够特异、灵敏、快速、准确地检测生物制品(包括中间样品、半成品、成品)中大肠杆菌dna的残留量。根据本发明的实施例，上述制备dna探针的方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：根据本发明的实施例，所述超声破碎处理是在400w的条件下进行3h。发明人经过实验发现，超声破碎处理在上述条件下，获得的基因组片段完全弥散，且片段大小集中在250bp～1000bp,孵育处理后获得的探针应用检测生物制品中大肠杆菌dna的残留量，其准确性显著提高。根据本发明的实施例，所述标记为地高辛。地高辛标记dna探针采用的方法是利用末端转移酶在单链3′-羟基端直接添加dig-11-dutp，从而使地高辛掺入到序列末端,达到标记的目的。地高辛标记为非放射性标记、且标记探针的特异性高，地高辛标记后的探针应用检测生物制品中大肠杆菌dna的残留量，其安全性高，且检测的灵敏性、特异性和准确性进一步提高。根据本发明的实施例，将0.32μg～0.64μg的所述超声破碎处理的产物与0.64ng～1.28ng所述地高辛进行孵育处理。发明人发现，在上述量的孵育处理条件下，所述超声破碎处理产物的标记效率显著提高。根据本发明的实施例，所述地高辛来自dighighprimednalabelinganddetectionstarterkitl中的vial1试剂。发明人通过与来自其他试剂盒的标记试剂对比发现，利用dighighprimednalabelinganddetectionstarterkitl中的vial1试剂与超声破碎处理的产物进行孵育处理，地高辛的标记效率更高。根据本发明的实施例，基于0.32μg～0.64μg的所述超声破碎处理的产物，所述vial1试剂的用量为4微升～8微升。根据前面所述，大肠杆菌细胞基因组dna的浓度为20微克/毫升，则含有0.32μg～0.64μg的超声破碎处理产物的试剂的量为16微升～32微升，依据dighighprimednalabelinganddetectionstarterkitl中的vial1试剂的用量指示(5倍稀释)，则vial1试剂的用量为4微升～8微升，地高辛的标记效率更高。在本发明的第二方面，本发明提出了一种制备dna探针的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：1)将大肠杆菌细胞基因组dna标准品用纯化水稀释至20μg/ml，用超声仪进行超声破碎处理，所述超声破碎处理是在400w的条件下进行3h，2)将经过超声破碎处理的基因组dna置于100℃下水浴10min、冰浴10min，3)将来自dighighprimednalabelinganddetectionstarterkitl中4μl～8μl的vial1试剂与16μl～32μl经过超声破碎处理的基因组dna混合，并短暂离心，37℃水浴孵育过夜，4)加入2μl浓度为0.5m、ph为8.0的edta终止孵育反应，5)加入2.5μl浓度为3m、ph为5.2的醋酸钠和75μl预冷无水乙醇，-20℃放置2h以上，12000rpm的条件下离心15min，弃上清，6)加入500μl预冷的70％乙醇，12000rpm的条件下离心5min，弃上清，获得沉淀，7)室温晾干所述沉淀，并用50μlte溶解沉淀，获得所述探针dna，任选地，进一步包括将50μl所述探针dna加入预热的3.5ml杂交液，所述杂交液来自roche试剂盒，以便获得含有所述探针的杂交液。利用根据本发明实施例的方法所制备的dna探针，能够特异、灵敏、快速、准确地检测生物制品(包括中间样品、半成品、成品)中大肠杆菌dna的残留量。在本发明的第三方面，本发明提出了一种试剂盒。根据本发明的实施例，所述试剂盒包含dna探针，所述dna探针是利用前面所述的方法制备的。根据本发明的实施例，所述试剂盒能够应用于对生物制品(包括中间样品、半成品、成品)中大肠杆菌dna残留量的特异、灵敏、快速、准确地检测。在本发明的第四方面，本发明提出了一种检测生物制品中大肠杆菌dna含量的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：1)将待测生物制品、大肠杆菌基因组dna阳性对照样品进行变性和稀释处理，所述稀释处理是在鲑鱼精dna稀释液中进行的；以及2)利用dna探针检测生物制品中大肠杆菌的dna含量，所述dna探针是利用前面所述的方法制备的。根据本发明的实施例，利用上述方法，能够实现对生物制品(包括中间样品、半成品、成品)中大肠杆菌dna含量的特异、灵敏、快速、准确地检测。根据本发明的实施例，上述检测生物制品中大肠杆菌dna含量的方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：根据本发明的实施例，所述鲑鱼精dna稀释液是通过如下方式制备的：i)0.1g的鲑鱼精dna溶于10ml的te缓冲液，ii)将溶于te缓冲液的鲑鱼精dna进行剪切处理，iii)将经过剪切处理的鲑鱼精dna进行200倍的稀释处理，所述稀释处理是在te缓冲液中进行的，以便获得所述鲑鱼精dna稀释液。发明人发现，通过上述方式获得的鲑鱼精dna稀释液能够将待测生物制品或阳性对照样品中与dna探针非特异性结合的物质覆盖，进而进一步提高利用本发明实施例的检测生物制品中大肠杆菌dna含量方法的特异性、灵敏性和准确性。根据本发明的实施例，所述剪切处理是通过如下方式实现的：利用7号针头将溶于te缓冲液的鲑鱼精dna进行反复抽打处理。发明人发现，利用7号针头对鲑鱼精dna进行反复抽打处理，可将硅鱼精dna温柔地剪切成小分子，而不对硅鱼精dna的性能造成损伤，以利于硅鱼精dna稀释液更好地将待测生物制品或阳性对照样品中与dna探针非特异性结合的物质覆盖。根据本发明的实施例，利用dna探针检测生物制品中大肠杆菌的dna含量是通过如下方式实现的：比较第一杂交斑点的灰度和第二杂交斑点的灰度，进而确定待测生物制品中大肠杆菌的dna含量，其中，所述第一杂交斑点是通过所述dna探针和所述待测生物制品进行杂交获得的，所述第二杂交斑点是通过所述dna探针和所述大肠杆菌基因组dna阳性对照样品进行杂交获得的。通过比较杂交斑点的灰度，在已知大肠杆菌基因组dna阳性对照样品的量的前提下，可计算出待测生物制品中大肠杆菌dna的相对含量。根据本发明的实施例，所述大肠杆菌基因组dna阳性对照样品稀释后的浓度分别为2ug/ml、0.2ug/ml、0.02ug/ml，所述待测生物样品稀释后的浓度为100ug/ml。发明人经过大量的实验发现，将阳性对照样品稀释到上述浓度梯度，并将待测生物样品稀释到100ug/ml，在相同上样量，如100微升的前提下，待测生物制品的杂交斑点的灰度基本均介于2ug/ml和0.02ug/ml的阳性对照样品的杂交斑点的灰度之间，进而可通过比较杂交斑点的相对灰度，判断待测生物制品中大肠杆菌dna的含量的准确度进一步提高。根据本发明的实施例，所述第一杂交斑点的灰度低于所述第二杂交斑点的灰度是待测生物制品中大肠杆菌的dna含量小于0.2质量％的指示，其中，所述第二杂交斑点是稀释后浓度为0.2ug/ml的阳性对照样品与所述dna探针进行杂交获得的。发明人发现，通过上述比较方式，可更加快速地对待测生物制品中大肠杆菌dna含量做出定性判定。在本发明的第五方面，本发明提出了一种确定生物制品生产工艺的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：(1)采用候选工艺，制备生物制品；(2)利用前面所述的方法确定所述生物制品中大肠杆菌dna含量；以及(3)基于所述生物制品中大肠杆菌dna含量，确定最终生物制品的生产工艺。利用根据本发明实施例的方法，可快速、准确地确定生物制品的生产工艺。根据本发明的实施例，上述确定生物制品生产工艺的方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：根据本发明的实施例，在步骤(3)中，当所述生物制品中大肠杆菌dna含量小于0.2质量％，则选择所述候选工艺为最终生物制品的生产工艺。发明人发现，生物制品中大肠杆菌dna含量小于0.2质量％，是保证生物制品临床用药安全性的指标，当所述生物制品中大肠杆菌dna含量小于0.2质量％，则候选工艺可作为最终生物制品的生产工艺。根据本发明的实施例，当所述生物制品中大肠杆菌dna含量不小于0.2质量％，则对所述候选工艺进行优化处理，并重复步骤(1)～(3)直至所述生物制品中大肠杆菌dna含量小于0.2质量％。如上所述，发明人发现，生物制品中大肠杆菌dna含量小于0.2质量％，是保证生物制品临床用药安全性的指标，如果生物制品中大肠杆菌dna含量不小于0.2质量％，则应对生产工艺进行调整，以适应生产出的生物制品中大肠杆菌dna含量小于0.2质量％。根据本发明的实施例，所述优化处理包括对下列处理至少之一的参数进行调整：发酵工艺、裂解工艺、澄清工艺、纯化工艺和浓缩工艺。发明人发现，在生物制品的生产过程中，发酵工艺、裂解工艺、澄清工艺、纯化工艺和浓缩工艺是影响生物制品中大肠杆菌dna含量的关键参数，对上述参数的至少之一进行调整，能更加有效地优化生物制品的生产工艺。附图说明图1是根据本发明实施例1条件1下的凝胶电泳结果图；图2是根据本发明实施例1条件2下的凝胶电泳结果图；图3是根据本发明实施例1条件3下的凝胶电泳结果图；图4是根据本发明实施例1条件4下的凝胶电泳结果图；图5是根据本发明实施例2条件1下的检测杂交结果图；图6是根据本发明实施例2条件2下的检测杂交结果图；图7是根据本发明实施例2条件3下的检测杂交结果图；图8是根据本发明实施例2条件4下的检测杂交结果图；以及图9是根据本发明实施例3的检测杂交结果图。具体实施方式下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。在以下实施例中，所用试剂、样品及仪器的信息如表1～表3所示。表1：表2：名称批号规格供试品20140301原液、中间过程或成品表3：名称型号厂家紫外-可见光分光光度计uv2600shimadzu凝胶成像系统chemidocxrs+bio-rad实施例1探针dna的制备发明人前期制备探针dna时摸索了多种试验条件，以便将大肠杆菌基因组dna打碎为合适大小片段，使其片段大小适于dna杂交和探针标记。具体地，发明人对大肠杆菌基因组dna超声处理条件进行了大量筛选，最终筛选出适于探针dna制备的试验条件，并成功应用于重组生物制品宿主dna含量的检测，确保了临床用药的安全性。条件1：(1)将基因组dna标准品(136μg/ml)用纯化水稀释至40μg/ml，用超声仪进行超声处理，超声参数见表4。表4：基因组dna浓度超声功率超声时间40μg/ml400w2h(2)琼脂糖凝胶电泳检测(0.8％琼脂糖凝胶，上样量为2μl/泳道，80v电泳45min)，进而确认基因组dna超声打碎的片段化范围，使其片段大小适合于dna杂交和探针标记。凝胶电泳结果如图1所示。图1结果显示基因组dna超声后片段未完全弥散，片段大小大部分集中在2000bp以上。(3)将上述超声处理的基因组dna置于100℃水浴10min，立即冰浴10min。(4)将市购商品化试剂盒dighighprimednalabelinganddetectionstarterkitl中vial1试剂4μl(5*conc.)与16μl上述模板基因组dna(0.64μg)混合，并短暂离心，37℃水浴过夜。(5)加入2μl0.5medta(ph8.0)终止反应。(6)加入2.5μl3m醋酸钠(ph5.2)和75μl预冷无水乙醇，-20℃放置2h以上，12000rpm15min，弃上清。(7)加入500μl预冷的70％乙醇，12000rpm5min，弃上清。(8)室温晾干，用50μlte溶解，即为制备的探针dna。(9)将上述50μl探针dna加入预热的3.5ml杂交液(来自roche试剂盒)中，即制备成含探针的杂交液(用于供试品的杂交)，分装，1ml/管，-20℃保存备用。条件2：(1)将基因组dna标准品(136μg/ml)用纯化水稀释至40μg/ml，用超声仪进行超声处理，超声参数见表5。表5：基因组dna浓度超声功率超声时间40μg/ml400w3h(2)琼脂糖凝胶电泳检测(0.8％琼脂糖凝胶，上样量为2μl/泳道，80v电泳45min)，进而确认基因组dna超声打碎的片段化范围，使其片段大小适合于dna杂交和探针标记。凝胶电泳结果如图2所示。图2结果显示基因组dna超声后片段大部分已弥散，片段大小大部分集中在2000bp以上。(3)将上述超声处理的基因组dna置于100℃水浴10min，立即冰浴10min。(4)将市购商品化试剂盒dighighprimednalabelinganddetectionstarterkitl中vial1试剂4μl(5*conc.)与16μl上述模板基因组dna(0.64μg)混合，并短暂离心，37℃水浴过夜。(5)加入2μl0.5medta(ph8.0)终止反应。(6)加入2.5μl3m醋酸钠(ph5.2)和75μl预冷无水乙醇，-20℃放置2h以上，12000rpm15min，弃上清。(7)加入500μl预冷的70％乙醇，12000rpm5min，弃上清。(8)室温晾干，用50μlte溶解，即为制备的探针dna。(9)将上述50μl探针dna加入预热的3.5ml杂交液(来自roche试剂盒)中，即制备成含探针的杂交液(用于供试品的杂交)，分装，1ml/管，-20℃保存备用。条件3：(1)将基因组dna标准品(136μg/ml)用纯化水稀释至20μg/ml，用超声仪进行超声处理，超声参数见表6。表6：基因组dna浓度超声功率超声时间20μg/ml400w3h(2)琼脂糖凝胶电泳检测(0.8％琼脂糖凝胶，上样量为2μl/泳道，80v电泳45min)，进而确认基因组dna超声打碎的片段化范围，使其片段大小适合于dna杂交和探针标记。凝胶电泳结果如图3所示。图3结果显示基因组dna超声后片段已完全弥散，且片段大小集中在250bp～1000bp范围。(3)将上述超声处理的基因组dna置于100℃水浴10min，立即冰浴10min。(4)将市购商品化试剂盒dighighprimednalabelinganddetectionstarterkitl中vial1试剂4μl(5*conc.)与16μl上述模板基因组dna(0.32μg)混合，并短暂离心，37℃水浴过夜。(5)加入2μl0.5medta(ph8.0)终止反应。(6)加入2.5μl3m醋酸钠(ph5.2)和75μl预冷无水乙醇，-20℃放置2h以上，12000rpm15min，弃上清。(7)加入500μl预冷的70％乙醇，12000rpm5min，弃上清。(8)室温晾干，用50μlte溶解，即为制备的探针dna。(9)将上述50μl探针dna加入预热的3.5ml杂交液(来自roche试剂盒)中，即制备成含探针的杂交液(用于供试品的杂交)，分装，1ml/管，-20℃保存备用。条件4：(1)将基因组dna标准品(136μg/ml)用纯化水稀释至20μg/ml，用超声仪进行超声处理，超声参数见表7。表7：(2)琼脂糖凝胶电泳检测(0.8％琼脂糖凝胶，上样量为2μl/泳道，80v电泳45min)，进而确认基因组dna超声打碎的片段化范围，使其片段大小适合于dna杂交和探针标记。凝胶电泳结果如图4所示。如图4所示。图4结果显示基因组dna超声后片段已完全弥散，且片段大小集中在250bp～1000bp范围。(3)将上述超声处理的基因组dna置于100℃水浴10min，立即冰浴10min。(4)将市购商品化试剂盒dighighprimednalabelinganddetectionstarterkitl中vial1试剂8μl(5*conc.)与32μl上述模板基因组dna(0.64μg)混合，并短暂离心，37℃水浴过夜。(5)加入4μl0.5medta(ph8.0)终止反应。(6)加入5μl3m醋酸钠(ph5.2)和150μl预冷无水乙醇，-20℃放置2h以上，12000rpm15min，弃上清。(7)加入500μl预冷的70％乙醇，12000rpm5min，弃上清。(8)室温晾干，用50μlte溶解，即为制备的探针dna。(9)将上述50μl探针dna加入预热的3.5ml杂交液(来自roche试剂盒)中，即制备成含探针的杂交液(用于供试品的杂交)，分装，1ml/管，-20℃保存备用。实施例2重组生物制品宿主(大肠杆菌)dna残留检测发明人采用实施例1不同条件下制备的dna探针，对重组生物制品宿主dna残留量进行了检测对比分析，以研究不同条件下制备的dna探针杂交效率和检测效果，以筛选出最优方法用于重组生物制品宿主dna残留量的质量控制，确保临床用药的安全性。条件1：发明人采用实施例1条件1制备的探针dna，对重组生物制品宿主dna残留量进行了检测分析(来源于roche试剂盒)，检测步骤包括对供试品和阳性对照的变性、稀释(阳性对照gdna采用鲑鱼精dna稀释液稀释至2ug/ml、0.2ug/ml、0.02ug/ml；供试品采用鲑鱼精dna稀释液稀释至100ug/ml)、点膜(阳性对照gdna和供试品点膜上样量都为100ul)、烤膜、预杂交、杂交、洗膜和显色。其中供试品合格的判定标准为：供试品100ug/ml斑点颜色深度应浅于阳性对照gdna0.2ug/ml斑点颜色深度，则供试品判定合格。检测结果如图5所示。图5结果表明，采用实施例1条件1制备的探针dna，标记效率低，重组生物制品宿主dna残留量检测结果图显色较浅(仅有阳性对照200ng有斑点颜色)，无法判定供试品中宿主dna含量。因此，采用实施例1条件1制备的探针dna不适于供试品宿主dna含量检测。条件2：发明人采用实施例3.1条件2制备的探针dna，对重组生物制品宿主dna残留量进行了检测分析(来源于roche试剂盒)，检测步骤包括供试品和阳性对照的变性、稀释(阳性对照gdna采用鲑鱼精dna稀释液稀释至2ug/ml、0.2ug/ml、0.02ug/ml；供试品采用鲑鱼精dna稀释液稀释至100ug/ml)、点膜(阳性对照gdna和供试品点膜上样量都为100ul)、烤膜、预杂交、杂交、洗膜和显色。其中供试品合格的判定标准为：供试品100ug/ml斑点颜色深度应浅于阳性对照gdna0.2ug/ml斑点颜色深度，则供试品判定合格。检测结果如图6所示。图6结果表明，采用实施例1条件2制备的探针dna，标记效率低，重组生物制品宿主dna残留量检测结果图显色较浅(仅有阳性对照200ng和20ng有斑点颜色)，无法判定供试品中宿主dna含量，或供试品判定结果呈现假阴性，造成误判。因此，采用实施例1条件2制备的探针dna不适于供试品宿主dna含量检测。条件3：发明人采用实施例1条件3制备的探针dna，对重组生物制品宿主dna残留量进行了检测(来源于roche试剂盒)，检测步骤包括供试品和阳性对照的变性、稀释(阳性对照gdna采用鲑鱼精dna稀释液稀释至4ug/ml、0.4ug/ml、0.04ug/ml；2ug/ml、0.2ug/ml、0.02ug/ml；1ug/ml、0.1ug/ml、0.01ug/ml；供试品采用鲑鱼精dna稀释液稀释至200ug/ml、100ug/ml和50ug/ml)、点膜(阳性对照gdna和供试品点膜上样量都为100ul)、烤膜、预杂交、杂交、洗膜和显色。其中供试品合格的判定标准为：供试品100ug/ml斑点颜色深度应浅于阳性对照gdna0.2ug/ml斑点颜色深度，则供试品判定合格(＜0.2％)。检测结果如图7所示。图7结果表明，采用实施例1条件3制备的探针dna，标记效率高，重组生物制品宿主dna残留量检测结果较理想，阴性对照未显色或显色深度低于阳性对照最低点1ng，不同浓度阳性对照gdna(4ug/ml、0.4ug/ml、0.04ug/ml；2ug/ml、0.2ug/ml、0.02ug/ml；1ug/ml、0.1ug/ml、0.01ug/ml)呈现良好颜色梯度，系统适用性合格，表明在实施例1条件3制备的探针dna标记和杂交效率高，可用于供试品的宿主dna含量检测。并且，供试品中宿主dna含量小于0.2％，符合判定标准规定，供试品合格。条件4：发明人采用实施例1条件4制备的探针dna，对重组生物制品宿主dna残留量进行了检测(来源于roche试剂盒)，检测步骤包括供试品和阳性对照的变性、稀释(阳性对照gdna采用鲑鱼精dna稀释液稀释至2ug/ml、0.2ug/ml、0.02ug/ml；1ug/ml、0.1ug/ml、0.01ug/ml；供试品采用鲑鱼精dna稀释液稀释至100ug/ml和5ug/ml)、点膜(阳性对照gdna和供试品点膜上样量都为100ul)、烤膜、预杂交、杂交、洗膜和显色。其中供试品合格的判定标准为：供试品100ug/ml斑点颜色深度应浅于阳性对照gdna0.2ug/ml斑点颜色深度，则供试品判定合格(＜0.2％)。检测结果如图8所示。图8结果表明，采用实施例1条件4制备的探针dna，标记效率高，重组生物制品宿主dna残留量检测结果较理想，阳性对照gdna呈现不同颜色梯度(200ng、20ng、2ng；10ng、1ng、0.1ng)，阴性对照未显色或显色深度低于阳性对照最低点2ng，混标溶液【20ng(阳性对照)+10ug(供试品)】和【1ng(阳性对照)+0.5ug(供试品)】显色深度高于对应的阳性对照和本底溶液，表明在实施例1条件4制备的探针dna标记和杂交效率高；且供试品稀释至该浓度下，无基质效应，准确度高，可用于供试品的宿主dna含量检测。并且，供试品中宿主dna含量小于0.2％，符合判定标准规定，供试品合格。实施例3重组生物制品宿主dna残留检测中样品稀释液的对比研究发明人前期在进行方法开发时，阳性对照gdna和供试品均采用纯化水或te缓冲液进行稀释，导致试验结果失真，杂交斑点不在一个色系，无法判定，不宜用于生物制品宿主dna残留量的测定。发明人后期经过筛选优化，发现选用鲑鱼精dna稀释液进行稀释，采用实施例1条件3或4制备的探针dna进行杂交，试验结果稳定可靠。采用不同稀释液在生物制品宿主dna残留量的测定时的结果如图9所示。图9结果显示，采用鲑鱼精dna稀释液稀释阳性对照gdna和供试品，杂交显色斑点颜色均一稳定，便于供试品与阳性对照的对比判定；而采用te缓冲液或纯化水进行稀释，斑点颜色失真，杂交斑点不在一个色系，不便于供试品与阳性对照的对比判定。因此，在进行供试品宿主dna的含量检测时，必须采用鲑鱼精dna稀释液进行稀释。综合实施例1～3可以看出，采用实施例1条件3或4制备的探针dna，并用鲑鱼精dna稀释液对阳性对照gdna和供试品进行稀释，可实现供试品宿主(大肠杆菌)dna的含量检测，适用于重组生物制品(以大肠杆菌为宿主的重组生物制品)中dna残留量的半定量分析，可用于该类药物的质量控制领域。在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。当前第1页12