一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法与流程

文档序号:12341817阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:

步骤一、粗提液的制备:

用天平称取5.0 g雨生红球藻藻粉,加入浓度为0.5-0.7 mg/mL的纤维素酶液200 mL,酶反应pH为4.0-5.0,在45-50 oC的条件下破壁25-30 min,然后在5000 rpm条件下离心5 min,弃上清后,将500 mL的丙酮加入藻粉中,浸提40 min,再次离心后,弃去下层沉淀,制得粗提液;将所述粗提液浓缩蒸干,充氮,于-20 oC条件下保存,备用;

步骤二、溶剂系统的建立:

按体积比4:1:2配制正己烷-乙腈-甲醇溶剂系统;分别按照上述比例配制溶剂系统溶液1500 mL,置于分液漏斗中,剧烈振荡充分混合后静置分层,平衡后将上下两相分开,以下相作为流动相,上相作为固定相,在使用前上下相分别超声脱气30 min;

步骤三、高速逆流色谱纯化:

打开泵,将超声脱气后的上相作为固定相以30 mL/min的流速泵入到高速逆流色谱仪中,直至上相充满整个HSCCC分离管中,暂停泵,将进液端放到流动相的试剂瓶中,打开主机的电源,设定转速850r/min,启动泵;在出液端用干净的量筒接液,在474nm波长下采集数据,收集洗脱时间为31-40min的目标成分,初步用TLC分析流出物,合并相同组分,制得化合物,即虾青素十六碳二烯酸单酯。

2.如权利要求1所述的一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法,其特征在于:还包括步骤四、纯化物的鉴定:采用高效液相色谱HPLC法或采用ESI-MS法分析所述化合物,或采用高效液相色谱HPLC法分析皂化后的所述化合物。

3.如权利要求2所述的一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法,其特征在于:所述采用高效液相色谱HPLC法:将所述化合物配成2 mg/mL的样品溶液,高效液相的条件:进样量5 μL,柱温35 oC,检测波长474 nm,流速0.2 mL/min;分析所述化合物的保留时间和特征吸收峰,判断所述述化合物的保留时间是否为44.5min,特征吸收峰是否为408nm。

4.如权利要求2所述的一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法,其特征在于:所述ESI-MS法采用正离子模式;参数设置如下:氮气干燥流量10.0 L/min,雾化压力为20 psi,毛细管电压+5000 V,端板电压+4000 V,毛细管出口电压80 V,干燥温度200 oC,雾化室温度50 oC,干燥气体压力20 psi,雾化气体压力50 psi;判断一级质谱m/z是否为 832.4。

5.如权利要求2所述的一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法,其特征在于:采用高效液相色谱HPLC法分析皂化后的所述化合物:将所述化合物12.5 mg溶解在150 mL的二氯甲烷溶液中,作为每组试验的样品溶液,然后加入含质量体积浓度为15.6%的NaOH的甲醇溶液,在磁力搅拌条件下,15.14℃温度下反应9.17min后,终止反应;加入蒸馏水直至溶液出现分层,上层漂浮有白色泡沫,下层呈红色的澄清溶液,离心弃去上清后,将下层溶液完全蒸干得到皂化产物,用HPLC法分析产物的保留时间和特征吸收峰,判断皂化后的所述述化合物的保留时间是否为12.7min。

6.如权利要求1所述的一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法,其特征在于:所述步骤一中,加入浓度为0.6mg/mL的纤维素酶液200 mL,在50 oC的条件下破壁30 min。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1