高纯度鲎素提存方法与流程

文档序号:12573224阅读:来源:国知局

技术特征:

1.高纯度鲎素提存方法,其特征在于,包括如下步骤:

步骤1,采用心房取血方式对活体鲎进行鲎血采集,同时加入抗凝血剂;

步骤2,将步骤1取得的鲎血与20mmol/L Tris-HCl、pH8.0、含50mmol/L的NaCl缓冲液混合后进行超声波破碎,低温高速离心,收集沉淀;

步骤3,沉淀与含20mmol/L的HCl缓冲液混合均质,将均质液低温高速离心,收集上清液;

步骤4,用截留分子量大于等于1000ku透析袋透析上清液后冷冻干燥,即得鲎素粗品;

步骤5,将步骤4获得的鲎素粗品配置成母液,上样于平衡过的SephadexG-50层析柱,洗脱、收集以核酸蛋白仪于280nm处记录图形,收集最后一个峰形较好的峰,透析后冷冻干燥;

步骤6,二次纯化,将初次纯化后的产品配置成母液,上样于平衡过的CM-Sepharose CL-6B层析柱,洗脱、收集以核酸蛋白仪于280nm处记录图形,收集最后一个峰形较好的峰,透析后冷冻干燥。

2.根据权利要求1所述的高纯度鲎素提存方法,其特征在于:所述步骤1中取血量为活体鲎血量的约1/3。

3.根据权利要求1所述的高纯度鲎素提存方法,其特征在于:所述步骤2中鲎血与缓冲液的比例为1:5。

4.根据权利要求1或3所述的高纯度鲎素提存方法,其特征在于:所述步骤2重复两次操作后,将两次收集的沉淀合并。

5.根据权利要求1所述的高纯度鲎素提存方法,其特征在于:所述步骤3中沉淀与20mmol/L的HCl缓冲液的比例为1:5。

6.根据权利要求1或5所述的高纯度鲎素提存方法,其特征在于:所述步骤3重复两次操作后,合并上清液。

7.根据权利要求1所述的高纯度鲎素提存方法,其特征在于:所述步骤2、步骤3中高速离心的速率为9000r/min、温度为4℃、离心时间20-25min。

8.根据权利要求1所述的高纯度鲎素提存方法,其特征在于:所述步骤5中,采用20mmol/L的HCl溶液对Sephadex G-50层析柱洗脱。

9.根据权利要求1所述的高纯度鲎素提存方法,其特征在于:所述步骤6中,采用20mmol/L的NaAc(pH6.0)的溶液对CM-Sepharose CL-6B层析柱洗脱。

10.根据权利要求8、9所述的高纯度鲎素提存方法,其特征在于:所述洗脱流速为1mL/min。

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