本发明涉及天然产物制备技术领域，特别涉及一种从金合欢树皮中提取花旗松素的方法。
背景技术：
花旗松素（Taxifolin）花旗松素又称二氢槲皮素，分子式为C15H12O7，是全球稀缺，且极为珍贵的药品及保健食品成分，其抗氧化性是目前文献报道的最强的天然活性成分之一，具有改善免疫功能，防止心血管疾病，提高人的记忆力，同时还具美白、保湿等护肤效果。
花旗松素主要来源于紫杉、黄杉、落叶松属植物花旗松及金合欢树等，因紫杉和黄杉已列入全球濒危树种禁止采伐，而落叶松属只分布在气候寒冷的高纬度地区，生长周期较长，所以可利用生产花旗松素的资源极为稀少和匮乏。金合欢树树皮中花旗松素的含量较高，且金合欢树具有来源广、原材料丰富的特点，故而可从金合欢树树皮中提取花旗松素。
当前国内外对花旗松素的主要提取方法包括溶剂浸提法、合成法等。但溶剂提取法存在提取时间长、产率低等缺陷，如金建忠等人从落叶松中提取的花旗松素提取率仅0.3%；王萍等人从刺玫蔷薇茎中提取的花旗松素提取率仅为1.5 - 2.5%。合成法有以儿茶素为原料合成，花旗松素浓度不高于4 %，且存在原料价格昂贵、副产品多的问题；以苯乙酮和苯甲醛出发进行全合成，花旗松素浓度在3.5%左右，存在原料毒性大，环境污染，产品稳定性差的问题。此外，还有光延反应法、微波萃取法、超滤法、吸附精制法等，但这些都因成本高、工艺复杂，无法实现工业化生产。
调查数据显示，花旗松素的全球需求量每年50吨，但是花旗松素的全球年产量不足20吨，我国花旗松素产量不足5吨，面临如此严峻的形势下，提高花旗松素的产量显得尤为重要。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明提供一种从金合欢树皮中提取花旗松素的方法，该方法具有提取率高的优点。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：一种从金合欢树皮中提取花旗松素的方法，其特征在于包括如下步骤：
1）取巴氏芽孢杆菌菌株（Sporosarcina pasteurii；ATCC11859）2-3环，接种于每升水加入酪蛋白栋15.0 - 20.0 g、豆粕蛋白胨5.0 - 8.0 g、卡索琼脂15 - 20 g/L、氯化钠4.0 -7.0 g、尿素15 - 25 g的灭菌培养基上，灭菌培养基的pH 为7.0 - 7.3；置于摇床上，在25 - 32℃条件下，以100 - 150 r/min的振荡速度培养12 - 24 h，得活性种子液，活性种子液中巴氏芽孢杆菌菌浓度为1×105 - 1×106 CFU/ml；
2）将金合欢树皮，用蒸馏水洗净，切至段长3 - 5 cm ，置于50℃烘箱中烘12 h，至水分含量低于3%，粉碎后过100目筛，避光存放于相对湿度65%环境下；称取金合欢树树皮按照干重与水的质量比为1:3 - 1:5混合均匀，接入步骤1）所述活性种子液进行微生物发酵，接种量为体积比15 - 30%，温度25 - 32℃，以100 - 150 r/min的振荡速度培养12 - 24 h，控制pH 7.0 - 7.3，将发酵液干燥得到花旗松素提取物。所得花旗松素提取物可作为提取更高纯度花旗松素的原料使用。
本发明所用巴氏芽孢杆菌（Sporosarcina pasteurii）购买于美国标准生物品收藏中心（ATCC），保藏编号ATCC11859；所述酪蛋白栋购于上海抚生实业有限公司；所述豆粕蛋白胨购于环凯微生物科技；所述卡索琼脂购于德国Merck；所述摇床为DHA-DA 卧式恒温摇床；所述金合欢树树皮购于西安瑞林生物科技；所述微生物发酵罐购于南京润泽生物工程设备有限公司，型号RZY-XGX；所述HPD200A型大孔树脂购于北京麦瑞博生物科技有限公司。
经计算，本发明制备的花旗松素提取物的提取率为40-50%，经HPLC测定花旗松素的纯度为10-20%，即花旗松素的提取率为4-10%，相对于现有技术的1.5 - 2.5%，有显著提高。
具体实施方式
实施例1：
一种从金合欢树皮中提取花旗松素的方法，包括以下步骤：
1）取巴氏芽孢杆菌菌株2环，接种于每升水加入酪蛋白栋15.0 g，豆粕蛋白胨5.0 g，卡索琼脂15 g/L，氯化钠4.0 g，尿素15 g的灭菌培养基上；置于摇床上，在25℃条件下，以100 r/min的振荡速度培养12 h，灭菌培养基的pH 为7.0，得到其活性种子液，活性种子液中巴氏芽孢杆菌菌浓度为1*105CFU/ml；
2）将金合欢树皮，用蒸馏水洗净，切至段长3 - 5 cm ，置于50℃烘箱中烘12 h，至水分含量低于3%，粉碎后过100目筛，避光存放于相对湿度65%条件。称取5 g金合欢树树皮粉末，按照干重与水的质量比为1:3混合均匀，接入步骤1）中巴氏芽孢杆菌的种子液，进行微生物发酵，接种量15 %（体积比），温度25℃，以100 r/min的振荡速度培养12 h，控制pH 7.0，得到含有花旗松素的提取液，将发酵液干燥得到花旗松素提取物。经计算，所制备的花旗松素提取物的提取率为40%，经HPLC测定花旗松素的纯度为10%，花旗松素的提取率为4%。
实施例2：
一种从金合欢树皮中提取花旗松素的方法，包括以下步骤：
1）取巴氏芽孢杆菌菌株2环，接种于每升水加入酪蛋白栋16 g，豆粕蛋白胨5.50 g，卡索琼脂16 g/L，氯化钠4.0 g，尿素16 g的灭菌LB培养基上；置于摇床上，在26℃条件下，以110 r/min的振荡速度培养13 h，灭菌培养基的pH为 7.1，得到其活性种子液，活性种子液中巴氏芽孢杆菌菌浓度为3*105 CFU/ml；
2）将金合欢树皮，用蒸馏水洗净，切至段长3 - 5 cm ，置于50℃烘箱中烘12 h，至水分含量低于3%，粉碎后过100目筛，避光存放于相对湿度65%条件；称取8 g金合欢树树皮粉末，按照干重与水的质量比为1:3.5混合均匀，接入步骤1）中巴氏芽孢杆菌的种子液，进行微生物发酵，接种量16%（体积比），温度26，以120 r/min的振荡速度培养14 h，控制pH 7.1，得到含有花旗松素的提取液，将发酵液干燥得到花旗松素提取物。经计算，所制备的花旗松素提取物的提取率为43%，经HPLC测定花旗松素的纯度为12%，花旗松素的提取率为5.5%。
实施例3：
1）取巴氏芽孢杆菌菌株2环，接种于每升水加入酪蛋白栋17 g，豆粕蛋白胨6.5 g，卡索琼脂17 g/L，氯化钠5.0 g，尿素16 g的灭菌LB培养基上；置于摇床上，在28℃条件下，以130 r/min的振荡速度培养16 h，灭菌培养基的pH为7.2，得到其活性种子液，活性种子液中巴氏芽孢杆菌菌浓度为4*105 CFU/ml；
2）将金合欢树皮，用蒸馏水洗净，切至段长3 - 5 cm ，置于50℃烘箱中烘12 h，至水分含量低于3%，粉碎后过100目筛，避光存放于相对湿度65%条件；称取100 g金合欢树树皮粉末，按照干重与水的质量比为1:4混合均匀，接入步骤1）中巴氏芽孢杆菌的种子液，进行微生物发酵，接种量18 %（体积比），温度28℃，以130 r/min的振荡速度培养18 h，控制pH 7.2，得到含有花旗松素的提取液，将发酵液干燥得到花旗松素提取物。经计算，所制备的花旗松素提取物的提取率为45%，经HPLC测定花旗松素的纯度为15%，花旗松素的提取率为7%。
实施例4：
一种从金合欢树皮中提取花旗松素的方法，包括以下步骤：
1）取巴氏芽孢杆菌菌株3环，接种于每升水加入酪蛋白栋18 g，豆粕蛋白胨7.0 g，卡索琼脂18 g/L，氯化钠6.0 g，尿素20 g的灭菌LB培养基上；置于摇床上，在29℃条件下，以125 r/min的振荡速度培养18 h，灭菌培养基的pH为7.2，得到其活性种子液，活性种子液中巴氏芽孢杆菌菌浓度为1*106 CFU/ml；
2）将金合欢树皮，用蒸馏水洗净，切至段长3 - 5 cm ，置于50℃烘箱中烘12 h，至水分含量低于3%，粉碎后过100目筛，避光存放于相对湿度65%条件；称取500 g金合欢树树皮粉末，按照干重与水的质量比为1:4混合均匀，接入步骤1）中巴氏芽孢杆菌的种子液，进行微生物发酵，接种量25%（体积比），温度28℃，以130 r/min的振荡速度培养19 h，控制pH 7.2，得到含有花旗松素的提取液，将发酵液干燥得到花旗松素提取物。经计算，所制备的花旗松素提取物的提取率为50%，经HPLC测定花旗松素的纯度为20%，花旗松素的提取率为10%。
实施例5：
一种从金合欢树皮中提取花旗松素的方法，包括以下步骤：
1）取巴氏芽孢杆菌菌株3环，接种于每升水加入酪蛋白栋20.0 g，豆粕蛋白胨8.0 g，卡索琼脂20 g/L，氯化钠7.0 g，尿素25 g的灭菌LB培养基上；置于摇床上，在32℃条件下，以150 r/min的振荡速度培养24 h，灭菌培养基的pH为7.3，得到其活性种子液，活性种子液中巴氏芽孢杆菌菌浓度为8*105 CFU/ml；
2）将金合欢树皮，用蒸馏水洗净，切至段长3 - 5 cm ，置于50℃烘箱中烘12 h，至水分含量低于3%，粉碎后过100目筛，避光存放于相对湿度65%条件；称取2 kg金合欢树树皮粉末，按照干重与水的质量比为1:5混合均匀，接入步骤1）中巴氏芽孢杆菌的种子液，进行微生物发酵，接种量30%（体积比），温度32℃，以150 r/min的振荡速度培养24 h，控制pH 7.3，得到含有花旗松素的提取液，将发酵液干燥得到花旗松素提取物。经计算，所制备的花旗松素提取物的提取率为48%，经HPLC测定花旗松素的纯度为18%，花旗松素的提取率为8.5%。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所做的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。