用于肿瘤早期筛查的肿瘤血小板RNA定量检测模型及方法与流程

本发明涉及分子生物学和医学领域，尤其是涉及一种用于肿瘤早期筛查的肿瘤血小板RNA定量检测模型及方法。
背景技术：
：随着癌症发病率和死亡率的增加，癌症不仅是中国人死亡的主要原因，也是严重威胁人类健康和制约经济社会发展的重大公共健康问题。肿瘤的早期诊断意味着可以提早干预治疗，对患者的预后意义重大。目前，用于肿瘤的诊断主要依赖于传统的肿瘤组织临床病征、放射影像、生化检测和病理等方面的，而且其中大部分方法有创的，给患者带来痛苦，且对实施此项技术的医师有较高要求。对肿瘤的无创检查方法主要是血清肿瘤标志物，例如AFP、癌胚抗原CEA、CA199等，但是诊断的灵敏度和特异性较低。因此，寻找具有较高灵敏度和特异性的肿瘤标志物对肿瘤患者的早诊早治具有重要意义。为了降低获取的肿瘤组织局限性，基于血液的液体活检方法对组织样本分析成为近些年的流行趋势，目前主要包括血浆游离DNA（cfDNA）和循环肿瘤细胞(CTC)的检测。迄今为止，对于肿瘤进行早期筛查的液体活检方法尚未完全成熟，原因是血液中的分子无法特异性描述原发性肿瘤的特征。近年来的研究显示，对肿瘤相关血小板(tumoreducatedplatelet)的检测可能会使基于肿瘤血液的癌症诊断变得更有效率。血小板，是外周血中第二丰富的细胞类型，来源于骨髓巨核细胞的循环无核碎片，它的显著特征是可止血和促进伤口愈合。现有技术中，还没有对应成熟的技术利用肿瘤相关血小板对肿瘤进行较为准确的诊断。技术实现要素：为了解决上述现有技术中存在的不足，本发明提供了一种用于肿瘤早期筛查的肿瘤血小板RNA定量检测模型及方法，不仅可作为肿瘤早期诊断和罹患风险评估的生物标志物组合，检测可获得良好的肿瘤诊断价值，同时能够实现肿瘤早期筛查、辅助肿瘤病理鉴定及临床诊断，提高患者的生存率。为了实现上述发明目的，本发明提供的技术方案如下：一种用于肿瘤早期筛查的肿瘤血小板RNA定量检测模型，该模型包括PCR检测特异性引物，所述PCR检测特异性引物包括SEQIDNO.1的F端引物和RT引物、SEQIDNO.2的F端引物和RT引物、SEQIDNO.3的F端引物和RT引物、SEQIDNO.4的F端引物和RT引物、SEQIDNO.5的F端引物和RT引物、SEQIDNO.6的F端引物和RT引物、SEQIDNO.7的F端引物和RT引物、SEQIDNO.8的F端引物和RT引物以及SEQIDNO.9的F端引物和RT引物。进一步地，所述PCR检测特异性引物用以临床诊断肿瘤血小板RNA生物标志物组合，所述肿瘤血小板RNA生物标志物组合包括以下血小板RNA：CD79A(ENSG00000105369),CD81(ENSG00000110651),SYTL1(ENSG00000142765),CENPC(ENSG00000145241),TTN(ENSG00000155657),RHOH(ENSG00000168421),ZNF101(ENSG00000181896),TRABD2A(ENSG00000186854)和TRAC(ENSG00000229164)。进一步地，所述肿瘤血小板RNA生物标志物组合在使用时按照以下公式系数进行分配，所述公式为：Y=0.0148108×ACD79A(ENSG00000105369)+0.07848907×BCD81(ENSG00000110651)+0.1531495×CSYTL1(ENSG00000142765)+0.08874548×DCENPC(ENSG00000145241)+0.05914998×ETTN(ENSG00000155657)+0.22891517×FRHOH(ENSG00000168421)+0.5210493×GZNF101(ENSG00000181896)+0.05066299×HTRABD2A(ENSG00000186854)+0.31206518×ITRAC(ENSG00000229164)；其中，ACD79A(ENSG00000105369)是CD79A(ENSG00000105369)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，BCD81(ENSG00000110651)是CD81(ENSG00000110651)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，CSYTL1(ENSG00000142765)是SYTL1(ENSG00000142765)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，DCENPC(ENSG00000145241)是CENPC(ENSG00000145241)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，ETTN(ENSG00000155657)是TTN(ENSG00000155657)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值),FRHOH(ENSG00000168421)是RHOH(ENSG00000168421)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，GZNF101(ENSG00000181896)是ZNF101(ENSG00000181896)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值),HTRABD2A(ENSG00000186854)是TRABD2A(ENSG00000186854)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)ITRAC(ENSG00000229164)是TRAC(ENSG00000229164)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)。本发明还包括一种用于肿瘤早期筛查的肿瘤血小板RNA定量检测方法，该方法包括以下步骤：1)制备样本：制备待测人血浆样本，以健康人血浆样本作为正常对照；2)提取RNA：提取血小板总RNA；3)逆转录：将血小板总RNA逆转录成cDNA；4)PCR检测：以cDNA为模板，在PCR检测特异性引物和实时定量嵌合荧光法PCR检测试剂盒的联合应用下进行实时荧光定量PCR技术检测SEQIDNO.1—SEQIDNO.9在待测人血小板和健康人血小板中的表达量，并采用2ΔCt表示待测样本中目的RNA表达量相对于管家基因GAPDH(ENSG00000111640)变化的倍数；5)用算式计算Y值：Y=0.0148108×ACD79A(ENSG00000105369)+0.07848907×BCD81(ENSG00000110651)+0.1531495×CSYTL1(ENSG00000142765)+0.08874548×DCENPC(ENSG00000145241)+0.05914998×ETTN(ENSG00000155657)+0.22891517×FRHOH(ENSG00000168421)+0.5210493×GZNF101(ENSG00000181896)+0.05066299×HTRABD2A(ENSG00000186854)+0.31206518×ITRAC(ENSG00000229164)；其中，ACD79A(ENSG00000105369)是CD79A(ENSG00000105369)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，BCD81(ENSG00000110651)是CD81(ENSG00000110651)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，CSYTL1(ENSG00000142765)是SYTL1(ENSG00000142765)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，DCENPC(ENSG00000145241)是CENPC(ENSG00000145241)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，ETTN(ENSG00000155657)是TTN(ENSG00000155657)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值),FRHOH(ENSG00000168421)是RHOH(ENSG00000168421)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，GZNF101(ENSG00000181896)是ZNF101(ENSG00000181896)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值),HTRABD2A(ENSG00000186854)是TRABD2A(ENSG00000186854)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)ITRAC(ENSG00000229164)是TRAC(ENSG00000229164)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)；ITRAC(ENSG00000229164)是TRAC(ENSG00000229164在血小板中的表达量(2ΔCt值)，ΔCt=目的基因的Ct值–内参基因(GAPDH)平均Ct值,目的基因Ct值为用实时荧光定量PCR技术检测到的目的CD79A(ENSG00000105369),CD81(ENSG00000110651),SYTL1(ENSG00000142765),CENPC(ENSG00000145241),TTN(ENSG00000155657),RHOH(ENSG00000168421),ZNF101(ENSG00000181896),TRABD2A(ENSG00000186854)和TRAC(ENSG00000229164)基因的Ct值；6)结果评判：当Y值小于5.28时判为阳性(罹患肿瘤)，反之为阴性(未罹患肿瘤)。基于上述技术方案，相比于现有技术本发明具有以下优点：本发明不仅可以作为肿瘤早期诊断和罹患风险评估的生物标志物组合，检测可获得良好的肿瘤诊断价值，同时可以实现肿瘤早期筛查、辅助肿瘤病理鉴定及临床诊断，提高患者的生存率。附图说明图1为本发明的工作流程图。图2为本发明中肿瘤血小板RNA生物标志物组合联合检测的ROC曲线图。图3为肿瘤患者和健康人的Y值分布图。具体实施方式下面结合附图和具体的实施例来对本发明用于肿瘤早期筛查的肿瘤血小板RNA定量检测模型及方法做进一步地详细阐述，以求更为清楚明了地理解其结构类型和使用方式，但不能以此来限定本发明专利的保护范围。一种用于肿瘤早期筛查的肿瘤血小板RNA定量检测模型，该模型包括PCR检测特异性引物，所述PCR检测特异性引物包括SEQIDNO.1的F端引物和RT引物、SEQIDNO.2的F端引物和RT引物、SEQIDNO.3的F端引物和RT引物、SEQIDNO.4的F端引物和RT引物、SEQIDNO.5的F端引物和RT引物、SEQIDNO.6的F端引物和RT引物、SEQIDNO.7的F端引物和RT引物、SEQIDNO.8的F端引物和RT引物以及SEQIDNO.9的F端引物和RT引物。所述PCR检测特异性引物用以临床诊断肿瘤血小板RNA生物标志物组合，所述肿瘤血小板RNA生物标志物组合包括以下血浆：CD79A(ENSG00000105369),CD81(ENSG00000110651),SYTL1(ENSG00000142765),CENPC(ENSG00000145241),TTN(ENSG00000155657),RHOH(ENSG00000168421),ZNF101(ENSG00000181896),TRABD2A(ENSG00000186854)和TRAC(ENSG00000229164)。所述肿瘤血小板RNA生物标志物组合在使用时按照以下公式系数进行分配，所述公式为：Y=0.0148108×ACD79A(ENSG00000105369)+0.07848907×BCD81(ENSG00000110651)+0.1531495×CSYTL1(ENSG00000142765)+0.08874548×DCENPC(ENSG00000145241)+0.05914998×ETTN(ENSG00000155657)+0.22891517×FRHOH(ENSG00000168421)+0.5210493×GZNF101(ENSG00000181896)+0.05066299×HTRABD2A(ENSG00000186854)+0.31206518×ITRAC(ENSG00000229164)；其中，ACD79A(ENSG00000105369)是CD79A(ENSG00000105369)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，BCD81(ENSG00000110651)是CD81(ENSG00000110651)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，CSYTL1(ENSG00000142765)是SYTL1(ENSG00000142765)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，DCENPC(ENSG00000145241)是CENPC(ENSG00000145241)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，ETTN(ENSG00000155657)是TTN(ENSG00000155657)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值),FRHOH(ENSG00000168421)是RHOH(ENSG00000168421)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，GZNF101(ENSG00000181896)是ZNF101(ENSG00000181896)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值),HTRABD2A(ENSG00000186854)是TRABD2A(ENSG00000186854)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)ITRAC(ENSG00000229164)是TRAC(ENSG00000229164)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)。表1所述RNA的SEQ-ID以及其正反向引物SEQ-ID基因名ForwardprimerReverseprimer1CD79A(ENSG00000105369)CATTGATGGTGAGCCTGGGTCGGCTGTGATGATTCGGT2CD81(ENSG00000110651)GTATCTGGAGCTGGGAGACAATTGGCGATCTGGTCCTTGTT3SYTL1(ENSG00000142765)TCTCTCGACCGCATGCTCATCGTAGTGCAGCGCGAAGT4CENPC(ENSG00000145241)TCCGGTTTTCAACGAGACTCTTTCAACTTCGCCCAGAAAGA5TTN(ENSG00000155657)CCTTCGAATTCCGCCTAAAATTTTTCAATGTGGAACCTCCC6RHOH(ENSG00000168421)TTTCTTCGGCATTCTGCAACCCTCCAAAGCCTAGTCTTCAA7ZNF101(ENSG00000181896)TGCTGGACACAAACGATCTGATTGGTGTTACTGTGCGCCGT8TRABD2A(ENSG00000186854)TGCTCCCCAGGGACATCTACTTCCGGCAATAGCATTGAAGA9TRAC(ENSG00000229164)TCAGCGATTCAGCCTCCTATCAGGCCAGACAGTCAACTGA如图1所示，一种用于肿瘤早期筛查的肿瘤血小板RNA定量检测方法，该方法包括以下步骤：1)制备样本：制备待测人血浆样本，以健康人血浆样本作为正常对照；2)提取RNA：提取血小板总RNA；3)逆转录：将血小板总RNA逆转录成cDNA；4)PCR检测：以cDNA为模板，在PCR检测特异性引物和实时定量嵌合荧光法PCR检测试剂盒的联合应用下进行实时荧光定量PCR技术检测SEQIDNO.1—SEQIDNO.9在待测人血小板和健康人血小板中的表达量，并采用2ΔCt表示待测样本中目的RNA表达量相对于管家基因GAPDH(ENSG00000111640)变化的倍数；5)用算式计算Y值：Y=0.0148108×ACD79A(ENSG00000105369)+0.07848907×BCD81(ENSG00000110651)+0.1531495×CSYTL1(ENSG00000142765)+0.08874548×DCENPC(ENSG00000145241)+0.05914998×ETTN(ENSG00000155657)+0.22891517×FRHOH(ENSG00000168421)+0.5210493×GZNF101(ENSG00000181896)+0.05066299×HTRABD2A(ENSG00000186854)+0.31206518×ITRAC(ENSG00000229164)；其中，ACD79A(ENSG00000105369)是CD79A(ENSG00000105369)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，BCD81(ENSG00000110651)是CD81(ENSG00000110651)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，CSYTL1(ENSG00000142765)是SYTL1(ENSG00000142765)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，DCENPC(ENSG00000145241)是CENPC(ENSG00000145241)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，ETTN(ENSG00000155657)是TTN(ENSG00000155657)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值),FRHOH(ENSG00000168421)是RHOH(ENSG00000168421)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)，GZNF101(ENSG00000181896)是ZNF101(ENSG00000181896)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值),HTRABD2A(ENSG00000186854)是TRABD2A(ENSG00000186854)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)ITRAC(ENSG00000229164)是TRAC(ENSG00000229164)在肿瘤血小板中的表达量(2ΔCt值)；ITRAC(ENSG00000229164)是TRAC(ENSG00000229164在血小板中的表达量(2ΔCt值)，ΔCt=目的基因的Ct值–内参基因(GAPDH)平均Ct值,目的基因Ct值为用实时荧光定量PCR技术检测到的目的CD79A(ENSG00000105369),CD81(ENSG00000110651),SYTL1(ENSG00000142765),CENPC(ENSG00000145241),TTN(ENSG00000155657),RHOH(ENSG00000168421),ZNF101(ENSG00000181896),TRABD2A(ENSG00000186854)和TRAC(ENSG00000229164)基因的Ct值；6)结果评判：当Y值小于5.28时判为阳性(罹患肿瘤)，反之为阴性(未罹患肿瘤)。实施例采用上述的肿瘤血小板RNA肿瘤诊断的检测方法对50例肿瘤患者及20健康人(正常对照)血浆中目的肿瘤血小板RNA的表达量进行检测，即CD79A(ENSG00000105369),CD81(ENSG00000110651),SYTL1(ENSG00000142765),CENPC(ENSG00000145241),TTN(ENSG00000155657),RHOH(ENSG00000168421),ZNF101(ENSG00000181896),TRABD2A(ENSG00000186854),TRAC(ENSG00000229164)的表达量(2△Ct值)。具体检测方法，包括以下步骤:1.肿瘤血小板RNA的采集与保存采集受试者静脉血4ml于EDTA抗凝管中，轻轻颠倒数次后静置10min（室温环境下在1h内离心分离血浆），于室温120g离心20min，分两层，吸取上层血浆（透明淡黄色液体，血脂高的样本为乳浊样），每400μl转移至一个新无RNAseEP管中，-80℃保存。将保存的血浆置于冰上溶解，室温下360g离心20min，吸取上层血浆（即血小板）300μl并转移至含30μl的RNAlater（LifeTechnologies）管中，4℃孵育过夜。用mirVanaRNA提取试剂盒(LifeTechnologies)按说明书提取。下层血浆5000rmp离心10min后，-80°C冻存待用，方法简述如下：(1)将血浆与等体积2XDenaturingSolution混合，在冰水浴中孵育5min。(2)加入与混合液体等体积的Acid-Phenol:Chloroform，涡旋30～60s混匀，12000r/min离心20min，分三层，吸取上层透明液体500μl，转移至新的无RNAseEP管中。(3)加入1.25倍体积的100%乙醇，混匀后转移到离心柱中（≤700μl）并装载到收集管上，4000r/min离心30s，弃收集液，重复此步骤使所有液体通过离心柱。(4)加入洗液1700μl到离心柱上，静置1min，离心15s。(5)加入洗液2/3500μl到离心柱上，静置1min，离心15s，重复一次。(6)加入热激后的ElutionSolution50μl到离心柱上，静置1min，离心1min，收集离心液。(7)RNA6000Picochip(Agilent)对RNA的浓度和质量进行测定。2.cDNA合成按照试剂盒操作说明规定的标准操作步骤，对所提取的RNA样本进行逆转录，获取cDNA；取干净EP管中加1μLrandom6mers,1μLdNTP,7μLRNasefreedH2O,1μLTempRNA,吹匀，放入PCR仪中，设定程序：65℃,5min；再加4μL5*buffer,0.5μLRNaseinhibitor,1μLRTase,4.5μLRNasefreedH2O,吹匀，放入PCR仪中，设定程序：30℃,10min42℃,50min95℃,5min。3.RT-QPCR使用Takara公司的SYBR@PremixExTaqTM(TliRNaseHPlus)试剂盒，按照试剂盒操作说明所规定的标准操作步骤：30μL体系，15μLSYBRMIX+0.6μLprimer-R+11.8μLddH2O+2μLcDNA，标准两步法反应程序为：95℃预变性10min40cycles95℃15s60℃1min；之后根据2△Ct的方法计算所有组织中9条目的RNA和内参mRNAGAPDH的表达量。4.结果分析如图2和图3所示，其中，例举上述RNA基因联合检测应用在个人的肿瘤诊断中，其九条RNA的表达量分别是：CD79A(ENSG00000105369)=4.367212,CD81(ENSG00000110651)=3.154837,SYTL1(ENSG00000142765)=7.553681,CENPC(ENSG00000145241)=6.658126,TTN(ENSG00000155657)=6.224972,RHOH(ENSG00000168421)=5.448671,ZNF101(ENSG00000181896)=5.385524,TRABD2A(ENSG00000186854)=3.559716,TRAC(ENSG00000229164)=6.235487。利用利Y值计算公式可得：Y=8.6155大于5.28，则表明此志愿者未患有肿瘤。通过受试工作者曲线(ROC)分析RNA的联合诊断效能，利用公式Y=0.0148108×ACD79A(ENSG00000105369)+0.07848907×BCD81(ENSG00000110651)+0.1531495×CSYTL1(ENSG00000142765)+0.08874548×DCENPC(ENSG00000145241)+0.05914998×ETTN(ENSG00000155657)+0.22891517×FRHOH(ENSG00000168421)+0.5210493×GZNF101(ENSG00000181896)+0.05066299×HTRABD2A(ENSG00000186854)+0.31206518×ITRAC(ENSG00000229164)拟合9个RNA检测数据得到的ROC曲线如图2所示，ROC曲线下面积为92.5%，诊断效能高。采用2△Ct对定量法分析数据，Logistic回归方程(判断公式)：Y=0.0148108×ACD79A(ENSG00000105369)+0.07848907×BCD81(ENSG00000110651)+0.1531495×CSYTL1(ENSG00000142765)+0.08874548×DCENPC(ENSG00000145241)+0.05914998×ETTN(ENSG00000155657)+0.22891517×FRHOH(ENSG00000168421)+0.5210493×GZNF101(ENSG00000181896)+0.05066299×HTRABD2A(ENSG00000186854)+0.31206518×ITRAC(ENSG00000229164)，其中ACD79A(ENSG00000105369)是CD79A(ENSG00000105369)在血浆中的表达量(2ΔCt值),BCD81(ENSG00000110651)是CD81(ENSG00000110651)在血浆中的表达量(2ΔCt值),CSYTL1(ENSG00000142765)是SYTL1(ENSG00000142765)在血浆中的表达量(2ΔCt值),DCENPC(ENSG00000145241)是CENPC(ENSG00000145241)在血浆中的表达量(2ΔCt值),ETTN(ENSG00000155657)是TTN(ENSG00000155657)在血浆中的表达量(2ΔCt值),FRHOH(ENSG00000168421)是RHOH(ENSG00000168421)在血浆中的表达量(2ΔCt值),GZNF101(ENSG00000181896)是ZNF101(ENSG00000181896)在血浆中的表达量(2ΔCt值),HTRABD2A(ENSG00000186854)是TRABD2A(ENSG00000186854)在血浆中的表达量(2ΔCt值),ITRAC(ENSG00000229164)是TRAC(ENSG00000229164在血浆中的表达量(2ΔCt值)，ΔCt=目的基因Ct值–内参基因Ct值，目的基因Ct值指的是实时荧光定量PCR技术检测到的目的基因的Ct值，目的基因是指CD79A(ENSG00000105369),CD81(ENSG00000110651),SYTL1(ENSG00000142765),CENPC(ENSG00000145241),TTN(ENSG00000155657),RHOH(ENSG00000168421),ZNF101(ENSG00000181896),TRABD2A(ENSG00000186854)和TRAC(ENSG00000229164)。结果50例肿瘤患者和20例健康人(正常对照)的Y值如表2所示，可见71%肿瘤患者的Y值均小于5.28。因此，当Y<5.28时，即预测概率值<5.28时才判为阳性(患肿瘤)，反之为阴性(未患肿瘤)，证明对上述基因的联合检测可获得良好的肿瘤诊断价值，因此CD79A(ENSG00000105369),CD81(ENSG00000110651),SYTL1(ENSG00000142765),CENPC(ENSG00000145241),TTN(ENSG00000155657),RHOH(ENSG00000168421),ZNF101(ENSG00000181896),TRABD2A(ENSG00000186854)，TRAC(ENSG00000229164)组合可作为肿瘤早期诊断和罹患风险评估的生物标志物。表250例肿瘤患者和20例健康人（正常对照）的Y值编号评分(Y值)组别12.428121肿瘤患者22.48863肿瘤患者32.503916肿瘤患者42.799115肿瘤患者52.849653肿瘤患者62.97098肿瘤患者72.997302肿瘤患者83.065475肿瘤患者93.170404肿瘤患者103.296256肿瘤患者113.323515肿瘤患者123.352802肿瘤患者133.356327健康人143.379242肿瘤患者153.406207肿瘤患者163.468006肿瘤患者173.489337肿瘤患者183.500599肿瘤患者193.502231肿瘤患者203.580153肿瘤患者213.598405肿瘤患者223.611938肿瘤患者233.716721肿瘤患者243.781669肿瘤患者253.852145肿瘤患者263.857838肿瘤患者273.919833肿瘤患者283.932668健康人293.941747肿瘤患者303.985031肿瘤患者314.092127肿瘤患者324.096202肿瘤患者334.106992肿瘤患者344.141384肿瘤患者354.14155肿瘤患者364.365938肿瘤患者374.375088肿瘤患者384.516429肿瘤患者394.564401肿瘤患者404.588491肿瘤患者414.633284肿瘤患者424.7872肿瘤患者434.793377肿瘤患者444.79555肿瘤患者454.815989肿瘤患者464.869563肿瘤患者474.933796肿瘤患者485.046824肿瘤患者495.211091肿瘤患者505.256569肿瘤患者515.285875健康人526.790469健康人536.876531健康人547.083108肿瘤患者557.151574健康人567.553954健康人577.56079健康人587.772101健康人597.80082健康人608.036599健康人618.310503健康人628.670087肿瘤患者639.05824健康人649.270311健康人659.615263健康人669.858009健康人679.939603健康人6810.3842健康人6910.6205健康人7010.88067健康人目前临床常用生物标志物如CEA等用于肿瘤诊断的灵敏度仅为4.7～20.8%，即使联合使用其它标志物时的灵敏度也只有69.1%(HeCZ,ZhangKH,LiQ,etal.CombineduseofAFP,CEA,CA125andCA19-9improvesthesensitivityforthediagnosisofgastriccancer.BMCGastroenterol2013.13:87.)。以上数据表明，使用RNA联合标志物诊断肿瘤的灵敏度能达到92.5%，高于目前临床常用生物标志物灵敏度。尽管有2名肿瘤患者和2名正常人被此方法检测的数据出现偏差，但考虑到肿瘤的异质性和个体之间的差异(如临床中经常有如下情况：正常人CEA值高于正常上限，肿瘤患者CEA值却在正常范围内)，这种结果符合临床医学规律，表明本发明标志物组合联合筛选方法真实、有效，可以被接受和实施。毫无疑问，本发明用于肿瘤早期筛查的肿瘤血小板RNA定量检测模型及方法除了上述实施例中讲述的类型和方式以外，还包括其他类似的结构组成方式和使用方式。总而言之，本发明还包括其他对于本领域技术人员显而易见的变换和替代。<110>上海厚承医学科技有限公司<120>用于肿瘤早期筛查的肿瘤血小板RNA定量检测模型及方法<130>（编号：）<160>10<210>1<211>19<212>DNA<213>CD79A<214>人工合成<220>正向引物<400>1CATTGATGGTGAGCCTGGG<220>反向引物TCGGCTGTGATGATTCGGT<210>2<211>21<212>DNA<213>CD81<214>人工合成<220>正向引物<400>2GTATCTGGAGCTGGGAGACAA<220>反向引物TTGGCGATCTGGTCCTTGTT<210>3<211>19<212>DNA<213>SYTL1<214>人工合成<220>正向引物<400>3TCTCTCGACCGCATGCTCA<220>反向引物TCGTAGTGCAGCGCGAAGT<210>4<211>21<212>DNA<213>CENPC<214>人工合成<220>正向引物<400>4TCCGGTTTTCAACGAGACTCT<220>反向引物TTCAACTTCGCCCAGAAAGA<210>5<211>21<212>DNA<213>TTN<214>人工合成<220>正向引物<400>5CCTTCGAATTCCGCCTAAAAT<220>反向引物TTTTCAATGTGGAACCTCCC<210>6<211>20<212>DNA<213>RHOH<214>人工合成<220>正向引物<400>6TTTCTTCGGCATTCTGCAAC<220>反向引物CCTCCAAAGCCTAGTCTTCAA<210>7<211>21<212>DNA<213>ZNF101<214>人工合成<220>正向引物<400>7TGCTGGACACAAACGATCTGA<220>反向引物TTGGTGTTACTGTGCGCCGT<210>8<211>21<212>DNA<213>TRABD2A<214>人工合成<220>正向引物<400>8TGCTCCCCAGGGACATCTACT<220>反向引物TCCGGCAATAGCATTGAAGA<210>9<211>19<212>DNA<213>TRAC<214>人工合成<220>正向引物<400>9TCAGCGATTCAGCCTCCTA<220>反向引物TCAGGCCAGACAGTCAACTGA当前第1页1 2 3