一种比伐卢定的高效合成方法与流程

文档序号:12162366阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种比伐卢定的高效合成方法,其特征在于,包括如下具体步骤:

(1)、以2-Cl Resin为起始树脂载体,通过固相合成法,以Fmoc-保护氨基酸为缩合原料,依次缩合比伐卢定序列中相对应的氨基酸,缩合产物采用特异性微波技术反应,反应结束后脱除保护基,纯化并冻干,得到比伐卢定-2-Cl-Resin;

(2)、将比伐卢定-2-Cl-Resin进行切割、沉降反应,得到比伐卢定粗肽;

(3)、将比伐卢定粗肽进行反相高效液相色谱法纯化,冻干,得到比伐卢定纯品。

2.根据权利要求1所述的一种比伐卢定的高效合成方法,其特征在于:步骤(1)中所述2-Cl Resin的取代度为0.64mmol/g。

3.根据权利要求1所述的一种比伐卢定的高效合成方法,其特征在于:所述步骤(1)中缩合反应以DIC/HOBt为活化剂和缩合剂,缩合反应时间为25-30min。

4.根据权利要求1所述的一种比伐卢定的高效合成方法,其特征在于:步骤(1)中所述特异性微波反应技术步骤为:缩合反应进行15-20min后,将Fmoc-比伐卢定-2-Cl Resin使用特异性的微波合成反应20s。

5.根据权利要求1所述的一种比伐卢定的高效合成方法,其特征在于:步骤(1)中所述固相合成法缩合的Fmoc-保护氨基酸为:Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asn(trt)-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-D-Phe-OH,缩合反应中氨基酸投料量为2-3倍所投树脂摩尔数,缩合反应温度为25℃。

6.根据权利要求1所述的一种比伐卢定的高效合成方法,其特征在于:步骤(1)中所述脱除保护基反应中脱保护试剂为20%哌啶/DMF溶液,洗脱时间为20min。

7.根据权利要求1所述的一种比伐卢定的高效合成方法,其特征在于:步骤(2)所述切割沉降反应步骤为:树脂切割两次,将切割试剂吹入到冰乙醚中,离心沉淀去上清,重复操作3次,得到比伐卢定粗肽产品。

8.根据权利要求7所述的一种比伐卢定的高效合成方法,其特征在于:所述切割试剂为TFA、水和TIS的混合溶液,其中,所述TFA、水和TIS的体积比为38:1:1,所述切割试剂体积为反应器容积的1/2。

9.根据权利要求1所述的一种比伐卢定的高效合成方法,其特征在于:步骤(3)所述反相高效液相色谱法纯化,纯化选用C18,10um制备柱,以A相:0.1%TFA/水,B相:0.1%TFA/乙腈为流动相,以B.Cone/%(2→55),Time.0→30min的梯度程序进行多肽的分离提纯。

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