一种卡贝缩宫素的制备方法与流程

文档序号:12162234阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种卡贝缩宫素的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)将氨基树脂溶胀、脱保护并洗涤,并与活化的保护氨基酸溶液置于恒温震荡器中反应,依次接入从树脂起算第1-8个氨基酸相对应的保护氨基酸以及N末端的丁酸,得到卡贝缩宫素前体肽Ⅰ-氨基树脂,其中,所述的保护氨基酸为:Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Tyr(Me)-OH,所述的丁酸为4-氯基丁酸;

(2)将卡贝缩宫素前体肽Ⅰ-氨基树脂脱保护并洗涤后抽干至颗粒状,加入切割试剂进行切割反应、沉降后,得到卡贝缩宫素前体肽Ⅱ;

(3)将卡贝缩宫素前体肽Ⅱ溶于溶剂中,经反相高效液相色谱法纯化除杂,在固定的碱性条件下用乙腈水溶液进行液相环化,乙腈与水体积比为2:1,得到卡贝缩宫素粗肽Ⅲ;

(4)将卡贝缩宫素粗肽Ⅲ用反相高效液相色谱法纯化、冻干,得到卡贝缩宫素纯品多肽。

2.根据权利要求1所述的卡贝缩宫素的制备方法,其特征在于,步骤(1)氨基树脂取代度为0.35~0.5mmol/g;所述的溶胀是指将氨基树脂浸没在DCM溶剂中2h。

3.根据权利要求1所述的卡贝缩宫素的制备方法,其特征在于,步骤(1)活化的保护氨基酸溶液制备方法为:将保护氨基酸和HOBt加入到离心管中,加入DMF将其溶解,再用滴管向溶液中加入DIC,混合使其完全溶解得到活化的保护氨基酸溶液。

4.根据权利要求1所述的卡贝缩宫素的制备方法,其特征在于,步骤(1)和(2)所述的脱保护并洗涤是指:将溶液抽干后,加入1/3-1/2反应器体积的20%哌啶与DMF混合溶液,置于30r/min的脱色摇床上振摇反应20min,然后用真空泵将溶液抽干;再加入1/3-1/2反应器体积的DMF溶液,置于脱色摇床上振摇1min,用真空泵将溶液抽干,再次加入DMF溶液洗涤树脂,重复操作3次。

5.根据权利要求1所述的卡贝缩宫素的制备方法,其特征在于,步骤(2)所述的切割试剂100ml配置方法为:87.5ml TFA+5ml茴香硫醚+5ml H2O+2.5ml EDT+5g苯酚;切割反应条件为:置于20r/min的脱色摇床上切割反应90-100min;所述的沉降选用-20℃低温预冷的无水乙醚,离心沉降3次。

6.根据权利要求1所述的卡贝缩宫素的制备方法,其特征在于,步骤(3)所述的溶剂是浓度为15%的乙腈水溶液,所述的固定碱性条件为用DIEA调节反应溶液pH至9.0,环化反应条件为室温反应,环化反应时间为48h。

7.根据权利要求1所述的卡贝缩宫素的制备方法,其特征在于,步骤(3)和步骤(4)所述的纯化选用十八烷基硅烷键合硅胶C18柱,5um制备柱进行反相高效液相色谱纯化,以B.Cone/%(2→50),0→60min的梯度程序进行多肽的分离提纯。

8.一种权利要求1-7所述的方法制备的卡贝缩宫素纯品多肽。

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