本发明涉及NAG校准液领域，尤其涉及一种全自动β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的液态校准液。
背景技术：
：β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)是一种高分子量(140,000d)的糖蛋白酸性水解酶，广泛存在于各组织器官的溶酶体中，尤其以肾脏近端上皮细胞中NAG含量特别丰富。但因其分子量较大，血清中的NAG一般不能通过肾小球滤过，因此在肾单位中含量较高，特别是在近曲小管上皮细胞中。在肾小管早期的损伤或轻微病变时，肾小管细胞对NAG的过滤及吸收作用发生了变化，引发尿液中NAG的活性明显升高，并且其改变远早于酐尿素氮、尿肌、尿β2-微球蛋白等浓度的异常。研究表明，在肾小管间质性肾炎和急性肾功能不全患者中，其尿液中NAG的活性明显增高，由此可知，NAG是早期肾损伤的标志物，β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的活性已成为临床上肾小管疾病诊断的重要指标。目前测定NAG大多采用荧光分光光度法或者紫外动力学分析法，在上述测定方法中采用的校准液为冻干的粉末，每次使用前需要复溶，对保存条件也较为苛刻，因而对使用者造成了诸多不便，也增加了此类生化诊断试剂的使用成本。技术实现要素：为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种液态NAG校准液，其克服了传统校准液需要冻干储存的缺点，改善了校准液的储存条件，为医疗领域的项目检测提供了方便。本发明的另一目的在于提供了该液态NAG校准液的制备方法。本发明的目的采用以下技术方案实现：一种液态NGA校准液，由如下组分配制而成：二水合磷酸二氢钠0.13-13g/L、十二水合磷酸氢二钠1.26-12.6g/L、氯化钠0.1-20g/L、氯化钾0.05-3g/L、BSA0.5-10g/L、表面活性剂0.1-10g/L、防腐剂0.1-3g/L，蛋白稳定剂50-200g/L、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶45U/L；所述NGA校准液的pH值为6.0-8.0。本发明中，所述蛋白稳定剂是一种复合物，是由氨基修饰过、一端含有羟基的低分子碳链羟基化合物，能够相当稳定存在于pH值为5.0-8.5的缓冲溶液中，不容易降解分解，也不会破坏蛋白的结构，能与大部分蛋白较好的共存，对蛋白及其多肽有很好的保护作用，另一方面，蛋白稳定剂可以增加蛋白在给定pH下的溶解度，并可提高其稳定性。优选的，所述的液态NGA校准液由按如下组分配制而成：二水合磷酸二氢钠1.3-6.5g/L、十二水合磷酸氢二钠2.52-7.56g/L、氯化钠5-10g/L、氯化钾0.05-2g/L、BSA0.5-5g/L、表面活性剂0.1-5g/L、防腐剂0.1-2g/L，蛋白稳定剂100-200g/L、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶45U/L；所述NGA校准液的pH值为6.3-7.6。优选的，二水合磷酸二氢钠的添加量为1.903g/L。优选的，十二水合磷酸氢二钠的添加量为2.793g/L。优选的，氯化钠的添加量为8.766g/L，氯化钾的添加量为0.1g/L。优选的，表面活性剂的添加量为5g/L，防腐剂的添加量为0.5g/L。优选的，BSA的添加量为5g/L，蛋白稳定剂的添加量为150g/L。优选的，所述表面活性剂为TritonX-100和吐温-20中的一种，所述防腐剂为Proclin-300和叠氮钠中的一种。优选的，所述的液态NGA校准液由如下组分配制而成：二水合磷酸二氢钠1.903g/L、十二水合磷酸氢二钠2.793g/L、氯化钠8.766g/L、氯化钾0.1g/L、BSA5g/L、TritonX-1005g/L、叠氮钠0.5g/L，蛋白稳定剂150g/L、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶45U/L；所述NGA校准液的pH值为7.40。本发明所述的液态NGA校准液的制备方法，包括下述步骤：1)称取二水合磷酸二氢钠、十二水合磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾、BSA、表面活性剂、防腐剂和蛋白稳定剂，加入去离子水溶解，混匀，调节pH值，得到NGA校准液稀释液；2)称取β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶，加入到NGA校准液稀释液中，混匀，即得本发明所述的液态NGA校准液。相比现有技术，本发明的有益效果在于：本发明研制的液态NAG校准液，配制简单、使用方便，储存稳定。与固态的NAG校准有较好的相关性，从检测数据的准确性、精密性和重复性方面均达到或超过固态NAG校准液，且校准的稳定性好，无需复溶，均一性好，瓶间差异小，能适用于配套的生化分析仪的检测，具有较大的社会效益和经济效益。具体实施方式下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述：以下实施方式中，BSA购自罗氏制药，型号为罗氏FractionV，β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶购自SigmaAldrich。实施例1配置1L本发明液态NAG校准液，方法如下：按下述配方称取各组分：将上述各组分溶于900mL去离子水中，充分搅拌溶解后，调节pH值至7.4，得到NAG校准液稀释液；再向NAG校准液稀释液中加入45Uβ-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶，并用去离子水定容到1L，即得NAG校准液；经0.22μm滤膜过滤后，于2～8℃下保存。实施例2配置1L本发明液态NAG校准液，方法如下：按下述配方称取各组分：将上述各组分溶于900mL去离子水中，充分搅拌溶解后，调节pH值至6.3，得到NAG校准液稀释液，再向NAG校准液稀释液中加入45Uβ-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶，并用去离子水定容到1L，即得NAG校准液；经0.22μm滤膜过滤后，于2～8℃下保存。实施例3配置1L本发明液态NAG校准液，方法如下：按下述配方称取各组分：将上述各组分溶于900mL去离子水中，充分搅拌溶解后，调节pH值至7.6，得到NAG校准液稀释液，再向NAG校准液稀释液中加入45Uβ-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶，并用去离子水定容到1L，即得NAG校准液；经0.22μm滤膜过滤后，于2～8℃下保存。实施例4配置1L本发明液态NAG校准液，方法如下：按下述配方称取各组分：将上述各组分溶于900mL去离子水中，充分搅拌溶解后，调节pH值至6.0，得到NAG校准液稀释液，再向NAG校准液稀释液中加入45Uβ-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶，并用去离子水定容到1L，即得NAG校准液；经0.22μm滤膜过滤后，于2～8℃下保存。实施例5配置1L本发明液态NAG校准液，方法如下：按下述配方称取各组分：将上述各组分溶于900mL去离子水中，充分搅拌溶解后，调节pH值至8.0，得到NAG校准液稀释液，再向NAG校准液稀释液中加入45Uβ-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶，并用去离子水定容到1L，即得NAG校准液，经0.22μm滤膜过滤后，于2～8℃下保存。实验例11、准确度的对比试验：取实施例1制备的NAG校准液，按照NAG生化试剂检测操作步骤，对NAG校准液的值进行检测，检测的主副波长分别为340nm、450nm，实验结果如表1所示。表1准确度实验结果2、精密度试验方法：按照实施例1配置2批NAG校准液，分别为第1批和第2批，将第1批NAG校准液重复检测20次，计算批内变异系数，结果见表2；同时将第2批NAG校准液重复测定20次，检测相同的项目，计算批间变异系数，结果见表3。表2批内变异系数结果表3批间变异系数结果3、稳定性试验：按照实施例1配制1LNAG校准液，分成37瓶，取其中30瓶放入2-8℃冰箱保存，7瓶放入37℃恒温箱中保存，随后每天抽取一瓶进行检测并记录数据，观察其变异系数(CV)，所得结果如表4和表5所示。表4稳定性测试结果(2-8℃)表5稳定性测试结果(37℃)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天平均值CV45.545.244.744.945.147.447.644.90.85％实验例21、准确度的对比试验：取实施例2制备的NAG校准液，按照NAG生化试剂检测操作步骤，对NAG校准液的值进行检测，检测的主副波长分别为340nm、450nm，实验结果如表6所示。表6准确度实验结果2、精密度试验方法：按照实施例2配置2批NAG校准液，分别为第1批和第2批，将第1批NAG校准液重复检测20次，计算批内变异系数，结果见表7；同时将第2批NAG校准液重复测定20次，检测相同的项目，计算批间变异系数，结果见表8。表7批内变异系数结果表8批间变异系数结果3、稳定性试验：按照实施例2配制1LNAG校准液，分成37瓶，取其中30瓶放入2-8℃冰箱保存，7瓶放入37℃恒温箱中保存，随后每天抽取一瓶进行检测并记录数据，观察其变异系数(CV)，所得结果如表9和表10所示。表9稳定性测试结果(2-8℃)表10稳定性测试结果(37℃)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天平均值CV45.144.745.643.944.646.347.145.32.23％实验例31、准确度的对比试验：取实施例3制备的NAG校准液，按照NAG生化试剂检测操作步骤，对NAG校准液的值进行检测，检测的主副波长分别为340nm、450nm，实验结果如表11所示。表11准确度实验结果2、精密度试验方法：按照实施例3配置2批NAG校准液，分别为第1批和第2批，将第1批NAG校准液重复检测20次，计算批内变异系数，结果见表12；同时将第2批NAG校准液重复测定20次，检测相同的项目，计算批间变异系数，结果见表13。表12批内变异系数结果表13批间变异系数结果3、稳定性试验：按照实施例3配制1LNAG校准液，分成37瓶，取其中30瓶放入2-8℃冰箱保存，7瓶放入37℃恒温箱中保存，随后每天抽取一瓶进行检测并记录数据，观察其变异系数(CV)，所得结果如表14和表15所示。表14稳定性测试结果(2-8℃)表15稳定性测试结果(37℃)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天平均值CV44.943.845.244.345.346.446.645.22.09％实验例41、准确度的对比试验：取实施例4制备的NAG校准液，按照NAG生化试剂检测操作步骤，对NAG校准液的值进行检测，检测的主副波长分别为340nm、450nm，实验结果如表16所示。表16准确度实验结果2、精密度试验方法：按照实施例4配置2批NAG校准液，分别为第1批和第2批，将第1批NAG校准液重复检测20次，计算批内变异系数，结果见表17；同时将第2批NAG校准液重复测定20次，检测相同的项目，计算批间变异系数，结果见表18。表17批内变异系数结果表18批间变异系数结果3、稳定性试验：按照实施例4配制1LNAG校准液，分成37瓶，取其中30瓶放入2-8℃冰箱保存，7瓶放入37℃恒温箱中保存，随后每天抽取一瓶进行检测并记录数据，观察其变异系数(CV)，所得结果如表19和表20所示。表19稳定性测试结果(2-8℃)表20稳定性测试结果(37℃)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天平均值CV44.645.144.945.345.646.447.144.61.80％实验例51、准确度的对比试验：取实施例5制备的NAG校准液，按照NAG生化试剂检测操作步骤，对NAG校准液的值进行检测，检测的主副波长分别为340nm、450nm，实验结果如表21所示。表21准确度实验结果2、精密度试验方法：按照实施例5配置2批NAG校准液，分别为第1批和第2批，将第1批NAG校准液重复检测20次，计算批内变异系数，结果见表22；同时将第2批NAG校准液重复测定20次，检测相同的项目，计算批间变异系数，结果见表23。表22批内变异系数结果表23批间变异系数结果3、稳定性试验：按照实施例5配制1LNAG校准液，分成37瓶，取其中30瓶放入2-8℃冰箱保存，7瓶放入37℃恒温箱中保存，随后每天抽取一瓶进行检测并记录数据，观察其变异系数(CV)，所得结果如表24和表25所示。表24稳定性测试结果(2-8℃)表25稳定性测试结果(37℃)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天平均值CV44.545.144.945.345.246.146.445.41.36％由以上结果计算得知，校准液的不准确度为0.22-1.11％，说明本发明的NAG校准液具有较高的准确度，精密度高。此外，本发明的校准液，批内变异系数(CV)<5％，批间变异系数(CV)<6％，符合一般诊断试剂的批内变异系数小于5％，批间变异系数小于6％的要求。以上结果说明本发明校准液的精密性和重复性良好。最后，本发明的NAG校准液，在2-8℃和37℃的条件下，30天的批内变异系数(CV)<5％，符合一般诊断试剂的变异系数小于5％的规定，说明本发明的NAG校准液的稳定性良好。综上：本发明的液态NAG校准液重复性好，稳定性好，精密度高，达到了普通固态NAG校准液的水平，且制备工艺简单，使用方便，无需复溶。对本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及形变，而所有的这些改变以及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。当前第1页1 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