本发明属于食用菌深加工技术领域，具体而言，涉及一种高纯度食用菌多糖的提取方法。
背景技术：
食用菌多糖提取在当今医药和保健食品中正逐渐被广泛使用。食用菌多糖是一种扶正固本的天然药物，被称为“生物应答调节剂”。是一种非特异性免疫增强剂和免疫激活剂，可以通过多种途径提高机体的免疫功能，而对机体没有副作用，主要有以下药理作用：一是能激活巨噬细胞，并能促进干扰素的合成，从而增强机体抗菌，抗肿瘤，排除机体老化细胞以及恢复机体放化疗后的免疫功能等作用，食用菌多糖还具有降低血糖和血脂、抗衰老、抗艾滋病病毒、抗疲劳、抗凝血，消除自由基和抗动脉粥样硬化等作用；二是可以增强老年人的抗体形成数目，延衰老，如灵芝多糖，银耳多糖，裂褶多糖等。三是降血脂、血压、抗血栓作用；四是还具有降血糖、抗感染、抗辐射、抗毒物损伤、抗水肿、抗晕、祛痰镇咳等方面的作用。
传统的食用菌多糖提取主要采用热水浸提法、酸浸提法、碱浸提法提取。酸或碱浸提法虽能提高提取率，但对设备要求高且极易破坏多糖的结构，还存在环境污染问题。目前使用最广泛的热水浸提法虽简单易行，但是多糖提取率比较低且提取的多糖样品中杂质多，纯度不到30％；另外该方法需要长时间高温处理，会破坏多糖链，而且提取时要加入2～4倍提取液体积的乙醇沉淀多糖，不仅造成资源的浪费，更增加了提取成本。
中国专利CN1765935A公开了一种分离香菇多糖及香菇菌多糖的新方法，取香菇的子实体、香菇的菌丝体、香菇柄、香菇菌发酵液中的任何一种或多种以上干燥后粉碎，加水，加热提取，滤去不溶物后浓缩提取液，加聚乙二醇，充分搅拌使聚乙二醇溶解，静置，将分离后的沉淀物用的有机溶剂反复洗涤后干燥即得。然而，该方法只适合提取香菇多糖，对于平菇、猴头菇、金针菇、杏鲍菇、双孢蘑菇、蛹虫草等其他食用菌提取不是非常适用，并且采用该方法的提取率较低，间接增加了香菇多糖的生产成本。
技术实现要素：
为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种高纯度高收率且适用于多种食用菌多糖的提取方法。
为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究并不懈探索，最终结合生物酶复合酶解、射频加热和超声处理手段大大提高食用菌多糖的溶出率；利用聚乙二醇沉淀食用菌多糖，获得高纯度食用菌多糖。具体地，本发明的技术方案概况如下:
一种高纯度食用菌多糖的提取方法，该方法包括如下步骤：
(1)将原料干燥后粉碎，加入10～30倍量的水浸泡，使粉末充分吸水膨胀，调节pH值为5.8～6.2，加入复合酶，酶的用量为每千克原料加入木瓜蛋白酶100～400万U、纤维素酶5～30万U及果胶酶10～50万U，36～37℃条件下酶解3～5h；
(2)将酶解液置于射频加热仪两电极板间，两电极板距离为9～11cm，通过光纤温度传感器控制温度，在射频工作频率20～30MHZ和70～95℃温度下提取4～6min；
(3)射频加热完成后，将酶解液进行超声处理，超声功率为300～350W,超声时间为3～6min；
(4)离心，上清液保留，滤渣中加入10～30倍量的水重复步骤(2)、(3)后取上清，合并两次上清液；
(5)将上清液浓缩后，加入聚乙二醇沉淀过夜，其中聚乙二醇的分子量为400～20000，聚乙二醇添加量为起始原料的0.5～2.0倍；
(6)离心获得多糖沉淀，沉淀用无水乙醇洗涤2～3次后真空干燥、粉碎，得高纯度食用菌多糖。
优选地，如上所述高纯度食用菌多糖的提取方法，其中的原料选自平菇、猴头菇、金针菇、杏鲍菇、双孢蘑菇、香菇、蛹虫草的子实体、菌丝体、菌柄和培养基中的任何一种或多种。
进一步优选地，如上所述高纯度食用菌多糖的提取方法，其中的原料选自平菇、猴头菇、金针菇、杏鲍菇、双孢蘑菇和香菇的一种或多种的菌柄或蛹虫草培养基。
优选地，如上所述高纯度食用菌多糖的提取方法，步骤(2)中所述的射频工作频率为25～30MHZ，温度控制在85～95℃。
优选地，如上所述高纯度食用菌多糖的提取方法，步骤(5)中所述的聚乙二醇的分子量为4000～10000，聚乙二醇添加量为起始原料的0.7～1.6倍。
与现有技术相比，本发明的有益效果和进步性体现在：结合生物酶复合酶解、射频加热和超声处理手段，使得食用菌多糖的溶出率提高20％以上，从而大幅度提高了产品收率；使用聚乙二醇作为多糖沉淀剂，用量只有乙醇的1/4～1/10，大大减少了乙醇的使用量，降低了成本；本发明提取的食用菌多糖纯度高达75％以上，不仅具有较高的保健价值，还可作为食用菌多糖片和注射剂的原料。
具体实施方式
通过以下实施例对本发明进行详细描述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，但并不以任何方式限制本发明。在不背离本发明的技术解决方案前提下，凡是利用本发明说明书内容所作的、本领域普通科技人员易于实现的任何改动或改变都将包括在本发明的专利保护范围内。
实施例1
从平菇菌柄中提取平菇多糖：平菇菌柄干燥后粉碎，过80目筛子。称取100g干粉，加20倍量水浸泡过夜，使粉末充分吸水膨胀。调节pH值至6.0，加入占原料质量2％的复合酶液(含0.4g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g；0.9g纤维素酶，酶活15000U/g；0.7g果胶酶，酶活50000U/g)，37℃条件下酶解4h。酶解结束后，将混合液置于射频加热仪两电极板间，两电极板距离固定为10cm，通过光纤温度传感器控制温度，在射频工作频率27MHZ和85℃下提取4min。完成后进行超声处理，超声波强度为350W，处理时间5min。混合液过滤后取上清，残渣中加20倍量水重复进行射频和超声处理，合并2次上清液，减压浓缩至400mL。加聚乙二醇(PEG6000)100g，充分搅拌使聚乙二醇完全溶解，静置过夜使多糖沉淀完全。离心获得多糖沉淀，沉淀用100mL无水乙醇洗涤2次后真空干燥、粉碎得白色粉末状固体5.1g，多糖纯度87.3％。
实施例2
从平菇子实体和菌丝体混合物中提取平菇多糖：平菇子实体和菌丝体混合物干燥后粉碎，过80目筛子。称取200g干粉，加20倍量水浸泡过夜，使粉末充分吸水膨胀。调节pH值至6.0，加入1.5％的复合酶液(含0.3g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g；0.7g纤维素酶，酶活15000U/g；0.5g果胶酶，酶活50000U/g)，37℃条件下酶解3h。酶解结束后，将混合液置于射频加热仪两电极板间，两电极板距离固定为10cm，通过光纤温度传感器控制温度，在射频工作频率27MHZ和90℃下提取5min。完成后进行超声处理，超声波强度为350W，处理时间5min。混合液过滤后取上清，残渣中加20倍量水重复进行射频和超声处理，合并2次上清液，减压浓缩至500mL。加聚乙二醇(PEG6000)150g，充分搅拌使聚乙二醇完全溶解，静置过夜使多糖沉淀完全。离心获得多糖沉淀，沉淀用100mL无水乙醇洗涤2次后真空干燥、粉碎得白色粉末状固体9.3g，多糖纯度85.0％。
对比例1：省略射频加热步骤
从平菇子实体和菌丝体混合物中提取平菇多糖：平菇子实体和菌丝体混合物干燥后粉碎，过80目筛子。称取200g干粉，加20倍量水浸泡过夜，使粉末充分吸水膨胀。调节pH值至6.0，加入1.5％的复合酶液(含0.3g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g；0.7g纤维素酶，酶活15000U/g；0.5g果胶酶，酶活50000U/g)，37℃条件下酶解3h。酶解结束后，将混合液超声处理，超声波强度为350W，处理时间5min。混合液过滤后取上清，残渣中加20倍量水重复进行超声处理，合并2次上清液，减压浓缩至500mL。加聚乙二醇(PEG6000)150g，充分搅拌使聚乙二醇完全溶解，静置过夜使多糖沉淀完全。离心获得多糖沉淀，沉淀用100mL无水乙醇洗涤2次后真空干燥、粉碎得白色粉末状固体3.0g，多糖纯度76.1％。
对比例2：省略超声处理步骤
从平菇子实体和菌丝体混合物中提取平菇多糖：平菇子实体和菌丝体混合物干燥后粉碎，过80目筛子。称取200g干粉，加20倍量水浸泡过夜，使粉末充分吸水膨胀。调节pH值至6.0，加入1.5％的复合酶液(含0.3g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g；0.7g纤维素酶，酶活15000U/g；0.5g果胶酶，酶活50000U/g)，37℃条件下酶解3h。酶解结束后，将混合液置于射频加热仪两电极板间，两电极板距离固定为10cm，通过光纤温度传感器控制温度，在射频工作频率27MHZ和90℃下提取5min。过滤后取上清，残渣中加20倍量水重复进行射频处理，合并2次上清液，减压浓缩至500mL。加聚乙二醇(PEG6000)150g，充分搅拌使聚乙二醇完全溶解，静置过夜使多糖沉淀完全。离心获得多糖沉淀，沉淀用100mL无水乙醇洗涤2次后真空干燥、粉碎得白色粉末状固体4.8g，多糖纯度80.3％。
实施例3
从猴头菇子实体中提取猴头菇多糖：猴头菇子实体干燥后粉碎，过80目筛子。称取50g干粉，加20倍量水浸泡过夜，使粉末充分吸水膨胀。调节pH值至6.0，加入2％的复合酶液(含0.2g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g；0.5g纤维素酶，酶活15000U/g；0.3g果胶酶，酶活50000U/g)，37℃条件下酶解3h。酶解结束后，将混合液置于射频加热仪两电极板间，两电极板距离固定为10cm，通过光纤温度传感器控制温度，在射频工作频率27MHZ和90℃下提取5min。完成后进行超声处理，超声波强度为350W，处理时间5min。混合液过滤后取上清，残渣中加20倍量水重复进行射频和超声处理，合并2次上清液，减压浓缩至300mL。加聚乙二醇(PEG4000)80g，充分搅拌使聚乙二醇完全溶解，静置过夜使多糖沉淀完全。离心获得多糖沉淀，沉淀用100mL无水乙醇洗涤2次后真空干燥、粉碎得白色粉末状固体2.2g，多糖纯度90.7％。
实施例4
从香菇子实体和菌柄混合物中提取香菇多糖：香菇子实体和菌柄混合物干燥后粉碎，过80目筛子。称取200g干粉，加20倍量水浸泡过夜，使粉末充分吸水膨胀。调节pH值至6.0，加入2％的复合酶液(含0.4g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g；0.9g纤维素酶，酶活15000U/g；0.7g果胶酶，酶活50000U/g)，37℃条件下酶解4h。将混合液置于射频加热仪两电极板间，两电极板距离固定为10cm，通过光纤温度传感器控制温度，在射频工作频率27MHZ和85℃下提取6min。完成后进行超声处理，超声波强度为350W，处理时间5min。混合液过滤后取上清，残渣中加20倍量水重复进行射频和超声处理，合并2次上清液，减压浓缩至500mL。加聚乙二醇(PEG4000)150g，充分搅拌使聚乙二醇完全溶解，静置过夜使多糖沉淀完全。离心获得多糖沉淀，沉淀用100mL无水乙醇洗涤2次后真空干燥、粉碎得灰色粉末状固体9.1g，多糖纯度91.4％。
实施例5
从金针菇菌柄废弃物中提取金针菇多糖：金针菇菌柄废弃物干燥后粉碎，过80目筛子。称取200g干粉，加20倍量水浸泡过夜，使粉末充分吸水膨胀。调节pH值至6.0，加入5％的复合酶液(含1.0g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g；2.25g纤维素酶，酶活15000U/g；1.75g果胶酶，酶活50000U/g)，37℃条件下酶解5h。将混合液置于射频加热仪两电极板间，两电极板距离固定为10cm，通过光纤温度传感器控制温度，在射频工作频率27MHZ和95℃下提取6min。完成后进行超声处理，超声波强度为350W，处理时间5min。混合液过滤后取上清，残渣中加20倍量水重复进行射频和超声处理，合并2次上清液，减压浓缩至500mL。加聚乙二醇(PEG6000)200g，充分搅拌使聚乙二醇完全溶解，静置过夜使多糖沉淀完全。离心获得多糖沉淀，沉淀用100mL无水乙醇洗涤2次后真空干燥、粉碎得白色粉末状固体5.6g，多糖纯度83.5％。
实施例6
从杏鲍菇子实体和菌柄混合物中提取杏鲍菇多糖：杏鲍菇子实体和菌柄混合物干燥后粉碎，过80目筛子。称取200g干粉，加20倍量水浸泡过夜，使粉末充分吸水膨胀。调节pH值至6.0，3％的复合酶液(含0.6g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g；1.35g纤维素酶，酶活15000U/g；1.05g果胶酶，酶活50000U/g)，37℃条件下酶解5h。将混合液置于射频加热仪两电极板间，两电极板距离固定为10cm，通过光纤温度传感器控制温度，在射频工作频率27MHZ和90℃下提取6min。完成后进行超声处理，超声波强度为350W，处理时间5min。混合液过滤后取上清，残渣中加20倍量水重复进行射频和超声处理，合并2次上清液，减压浓缩至500mL。加聚乙二醇(PEG10000)150g，充分搅拌使聚乙二醇完全溶解，静置过夜使多糖沉淀完全。离心获得多糖沉淀，沉淀用100mL无水乙醇洗涤2次后真空干燥、粉碎得白色粉末状固体7.8g，多糖纯度88.3％。
实施例7
从双孢蘑菇子实体中提取双孢蘑菇多糖：双孢蘑菇子实体干燥后粉碎，过80目筛子。称取100g干粉，加20倍量水浸泡过夜，使粉末充分吸水膨胀。调节pH值至6.0，加入2％的复合酶液(含0.2g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g；0.5g纤维素酶，酶活15000U/g；0.3g果胶酶，酶活50000U/g)，37℃条件下酶解3h。酶解结束后，将混合液置于射频加热仪两电极板间，两电极板距离固定为10cm，通过光纤温度传感器控制温度，在射频工作频率27MHZ和90℃下提取5min。完成后进行超声处理，超声波强度为350W，处理时间5min。混合液过滤后取上清，残渣中加20倍量水重复进行射频和超声处理，合并2次上清液，减压浓缩至300mL。加聚乙二醇(PEG6000)120g，充分搅拌使聚乙二醇完全溶解，静置过夜使多糖沉淀完全。离心获得多糖沉淀，沉淀用100mL无水乙醇洗涤2次后真空干燥、粉碎得白色粉末状固体4.9g，多糖纯度83.1％。
实施例8
从蛹虫草培养基中提取虫草多糖：虫草培养基干燥后粉碎，过80目筛子。称取200g干粉，加20倍量水浸泡过夜，使粉末充分吸水膨胀。调节pH值至6.0，加入5％的复合酶液(含1.0g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g；2.25g纤维素酶，酶活15000U/g；1.75g果胶酶，酶活50000U/g)，37℃条件下酶解5h。将混合液置于射频加热仪两电极板间，两电极板距离固定为10cm，通过光纤温度传感器控制温度，在射频工作频率27MHZ和95℃下提取4min。完成后进行超声处理，超声波强度为350W，处理时间5min。混合液过滤后取上清，残渣中加20倍量水重复进行射频和超声处理，合并2次上清液。向上清液中加入5％的α-淀粉酶，60℃酶解至遇碘液无显色反应。完成后将多糖溶液减压浓缩至400mL，加聚乙二醇(PEG10000)200g，充分搅拌使聚乙二醇完全溶解，静置过夜使多糖沉淀完全。离心获得多糖沉淀，沉淀用100mL无水乙醇洗涤2次后真空干燥、粉碎得灰色粉末状固体6.2g，多糖纯度78.2％。