本发明涉及一种硫酸酯化香菇多糖的制备方法。
背景技术：
近年来发现的硫酸酯多糖具有抗艾滋病病毒(HIV)的活性，使多糖硫酸酯化的研究成为热点。日本学者报道，从香菇子实体中获得的一种具有良好抗肿瘤作用的葡聚糖的硫酸化衍生物具有较好的抑制HIV的活性。我国学者王顺春、方积年对该类衍生物的结构进行了研究，制备了一系列的不同硫酸取代度的硫酸酯化香菇多糖，制备的硫酸酯化香菇多糖经验证具有良好的抗HIV活性。但相对于多糖的研究来说有关多糖硫酸酯化研究报道仍然较少，且缺乏后续的一系列相关试验研究。
技术实现要素：
本发明提出一种硫酸酯化香菇多糖的制备方法。
一种硫酸酯化香菇多糖的制备方法，包括以下步骤：
（1）取香菇多糖，用蒸馏水将粗多糖溶解，将Sevage试剂加入多糖液中，振荡，离心，重复5-8次直至有机层没有絮状沉淀为止；
（2）取步骤（1）上清液，将上清液在pH8下滴加双氧水至淡黄色或无色，在50℃下保温2h，然后浓缩，装入透析袋中用双蒸水透析，每8h换一次水，透析3～5d至离子强度不变为止；
（3）用EAE-纤维素柱层析，经梯度洗脱，收集占较大部分的多糖组分，然后用SephadexG-200柱进一步纯化香菇多糖，增大上样量，收集其中占较大部分的组分；
（4）将无水毗啶置于附有冷凝管和搅拌装置的三颈烧瓶中，经冰盐浴冷却后，剧烈搅拌下，按氯磺酸：吡啶比例为1:2-1:4缓慢滴加氯磺酸；
（5）用无水甲酰胺溶解，然后加入0.5g多糖粉末，在45-60℃搅拌反应4h，反应液经中和、离心后，用蒸馏水透析，减压浓缩，加入乙醇，静置过夜后离心，收集沉淀物，干燥后得到硫酸酯化产物。
优选地，所述步骤（4）的氯磺酸：吡啶比例为1:2。
优选地，所述步骤（5）的搅拌温度为60℃。
本发明所述方法制备的硫酸酯化香菇多糖水溶性较好，活性强，具有良好的抗HIV性能，本发明所述方法步骤简单，可工业化生产，实用性强。
具体实施方式
实施例1。
一种硫酸酯化香菇多糖的制备方法，包括以下步骤：
（1）取香菇多糖，用蒸馏水将粗多糖溶解，将Sevage试剂加入多糖液中，振荡，离心，重复5-8次直至有机层没有絮状沉淀为止；
（2）取步骤（1）上清液，将上清液在pH8下滴加双氧水至淡黄色或无色，在50℃下保温2h，然后浓缩，装入透析袋中用双蒸水透析，每8h换一次水，透析3～5d至离子强度不变为止；
（3）用EAE-纤维素柱层析，经梯度洗脱，收集占较大部分的多糖组分，然后用SephadexG-200柱进一步纯化香菇多糖，增大上样量，收集其中占较大部分的组分；
（4）将无水毗啶置于附有冷凝管和搅拌装置的三颈烧瓶中，经冰盐浴冷却后，剧烈搅拌下，按氯磺酸：吡啶比例为1:2-1:4缓慢滴加氯磺酸；
（5）用无水甲酰胺溶解，然后加入0.5g多糖粉末，在45-60℃搅拌反应4h，反应液经中和、离心后，用蒸馏水透析，减压浓缩，加入乙醇，静置过夜后离心，收集沉淀物，干燥后得到硫酸酯化产物。
（6）优选地，所述步骤（4）的氯磺酸：吡啶比例为1:2。
实施例2。
一种硫酸酯化香菇多糖的制备方法，包括以下步骤：
（1）取香菇多糖，用蒸馏水将粗多糖溶解，将Sevage试剂加入多糖液中，振荡，离心，重复5-8次直至有机层没有絮状沉淀为止；
（2）取步骤（1）上清液，将上清液在pH8下滴加双氧水至淡黄色或无色，在50℃下保温2h，然后浓缩，装入透析袋中用双蒸水透析，每8h换一次水，透析3～5d至离子强度不变为止；
（3）用EAE-纤维素柱层析，经梯度洗脱，收集占较大部分的多糖组分，然后用SephadexG-200柱进一步纯化香菇多糖，增大上样量，收集其中占较大部分的组分；
（4）将无水毗啶置于附有冷凝管和搅拌装置的三颈烧瓶中，经冰盐浴冷却后，剧烈搅拌下，按氯磺酸：吡啶比例为1:2-1:4缓慢滴加氯磺酸；
（5）用无水甲酰胺溶解，然后加入0.5g多糖粉末，在45-60℃搅拌反应4h，反应液经中和、离心后，用蒸馏水透析，减压浓缩，加入乙醇，静置过夜后离心，收集沉淀物，干燥后得到硫酸酯化产物。
（6）优选地，所述步骤（4）的氯磺酸：吡啶比例为1:2。
优选地，所述步骤（5）的搅拌温度为60℃。