本发明涉及共轭亚油酸制备技术领域，具体为一种以葡萄籽油为原料制备高含量共轭亚油酸的方法。
背景技术：
1978年，M.W.Pariza在油煎汉堡中发现了一种抗突变物质-共轭亚油酸。随后，科学家们在研究中发现共轭亚油酸具有很多生理活性。在多种动物模型中，共轭亚油酸通过免疫激化作用可以防癌变，预防动脉粥样硬化，调控代谢，减少体内脂肪含量。研究发现，共轭亚油酸能减少致癌物质引起的皮肤癌、胃癌、乳腺癌、结肠癌和胸腺癌和胸癌培养的细胞。另外，共轭亚油酸能帮助调节或降低血液内葡萄糖的水平，防止糖尿病的发生。同时，共轭亚油酸可以影响血清中胆固醇的含量，降低有害的低密度脂蛋白胆固醇的含量，而不影响对健康有利的高密度脂蛋白胆固醇的含量。此外，共轭亚油酸还具有抗血栓的性质，能够抑制由花生四烯酸或者胶原质引起的血小板凝集，目前合成共轭亚油酸的方法大都是以富含亚油酸的植物油为原料，在碱催化下异构化得到的，存在反应温度高，反应时间长，产率不高，且分离提纯难等缺点。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种以葡萄籽油为原料制备高含量共轭亚油酸的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种以葡萄籽油为原料制备高含量共轭亚油酸的方法,包括以下步骤：
A、选取新鲜的葡萄籽并洗净晒干，之后放入高温灭菌箱中进行高温灭菌，灭菌温度为150℃-180℃，灭菌时间为20min-30min；
B、将步骤A高温灭菌后的葡萄籽放入压榨机中进行压榨，压榨机转速为200-500转/分，压榨温度为40℃-50℃，压榨时间为3min-8min，得到葡萄籽油半成品；
C、将步骤B得到的葡萄籽油半成品加入精滤机中进行三次过滤，一次过滤后去除滤渣，静置后进行二次过滤，过滤后进行低速搅拌，之后进行三次过滤，去除滤渣后得到葡萄籽成品精油；
D、将步骤C得到的葡萄籽油倒入反应釜中，并加入1/2培养液，之后将反应釜加热反应，加热温度为60℃-70℃，加热时间为120min-220min，之后冷却至常温，滤除表面清液，得到混合油；
E、在步骤D得到的混合油中再次加入1/2培养液，之后倒入搅拌釜中进行低速搅拌，搅拌釜转速为500-800转/分，搅拌时间为10min-20min；之后加入离心机中进行离心分离杂质；
F、在步骤E得到的混合油中加入萃取液，混合后倒入反应容器中，将反应容器迅速升温至120℃-150℃，恒温10min，之后缓慢冷却至55℃-60℃，恒温10min，之后再次升温至100℃-110℃，恒温5min,之后缓慢冷却至常温；
G、最后将步骤F得到的混合油加入旋转蒸发器中旋转蒸发10min-15min，蒸发温度为50℃，即得到共轭亚油酸。
优选的，所述步骤D中培养液组份按重量份数包括磷酸氢二钾3-5份、柠檬酸铵5-10份、硫酸锰3-6份、钼酸铵1-3份以及酵母浸粉3-8份。
优选的，所述步骤F中萃取液采用磷氧型酸性萃取剂P204、P507中的一种或羧酸类酸性萃取剂环烷酸、硬脂酸中的一种。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)本发明制备方法简单，制备成本低，制备时间短，制得的共轭亚油酸含量高、纯度高，可直接食用，患者长期服用后能够有效降低高血脂、高血糖，保健效果好。
(2)本发明的制备方法中采用两次加入培养液的方式，能够使葡萄籽油充分反应，提高了制备出的共轭亚油酸的含量。
(3)本发明中制备方法采用的萃取方法操作简单，采用高低温交叉反应，能够进一步提高萃取效率。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一：
本发明提供一种技术方案：一种以葡萄籽油为原料制备高含量共轭亚油酸的方法,包括以下步骤：
A、选取新鲜的葡萄籽并洗净晒干，之后放入高温灭菌箱中进行高温灭菌，灭菌温度为150℃，灭菌时间为20min；
B、将步骤A高温灭菌后的葡萄籽放入压榨机中进行压榨，压榨机转速为200转/分，压榨温度为40℃，压榨时间为3min，得到葡萄籽油半成品；
C、将步骤B得到的葡萄籽油半成品加入精滤机中进行三次过滤，一次过滤后去除滤渣，静置后进行二次过滤，过滤后进行低速搅拌，之后进行三次过滤，去除滤渣后得到葡萄籽成品精油；
D、将步骤C得到的葡萄籽油倒入反应釜中，并加入1/2培养液，之后将反应釜加热反应，加热温度为60℃，加热时间为120min，之后冷却至常温，滤除表面清液，得到混合油；
E、在步骤D得到的混合油中再次加入1/2培养液，之后倒入搅拌釜中进行低速搅拌，搅拌釜转速为500转/分，搅拌时间为10min；之后加入离心机中进行离心分离杂质；
F、在步骤E得到的混合油中加入萃取液，混合后倒入反应容器中，将反应容器迅速升温至120℃，恒温10min，之后缓慢冷却至55℃，恒温10min，之后再次升温至100℃，恒温5min,之后缓慢冷却至常温；
G、最后将步骤F得到的混合油加入旋转蒸发器中旋转蒸发10min，蒸发温度为50℃，即得到共轭亚油酸。
本实施例中，步骤D中培养液组份按重量份数包括磷酸氢二钾3份、柠檬酸铵5份、硫酸锰3份、钼酸铵1份以及酵母浸粉3份。
本实施例中，步骤F中萃取液采用磷氧型酸性萃取剂P204。
实施例二：
本发明提供一种技术方案：一种以葡萄籽油为原料制备高含量共轭亚油酸的方法,包括以下步骤：
A、选取新鲜的葡萄籽并洗净晒干，之后放入高温灭菌箱中进行高温灭菌，灭菌温度为180℃，灭菌时间为30min；
B、将步骤A高温灭菌后的葡萄籽放入压榨机中进行压榨，压榨机转速为500转/分，压榨温度为50℃，压榨时间为8min，得到葡萄籽油半成品；
C、将步骤B得到的葡萄籽油半成品加入精滤机中进行三次过滤，一次过滤后去除滤渣，静置后进行二次过滤，过滤后进行低速搅拌，之后进行三次过滤，去除滤渣后得到葡萄籽成品精油；
D、将步骤C得到的葡萄籽油倒入反应釜中，并加入1/2培养液，之后将反应釜加热反应，加热温度为70℃，加热时间为220min，之后冷却至常温，滤除表面清液，得到混合油；
E、在步骤D得到的混合油中再次加入1/2培养液，之后倒入搅拌釜中进行低速搅拌，搅拌釜转速为800转/分，搅拌时间为20min；之后加入离心机中进行离心分离杂质；
F、在步骤E得到的混合油中加入萃取液，混合后倒入反应容器中，将反应容器迅速升温至150℃，恒温10min，之后缓慢冷却至60℃，恒温10min，之后再次升温至110℃，恒温5min,之后缓慢冷却至常温；
G、最后将步骤F得到的混合油加入旋转蒸发器中旋转蒸发15min，蒸发温度为50℃，即得到共轭亚油酸。
本实施例中，步骤D中培养液组份按重量份数包括磷酸氢二钾5份、柠檬酸铵10份、硫酸锰6份、钼酸铵3份以及酵母浸粉8份。
本实施例中，步骤F中萃取液采用磷氧型酸性萃取剂P507。
实施例三：
本发明提供一种技术方案：一种以葡萄籽油为原料制备高含量共轭亚油酸的方法,包括以下步骤：
A、选取新鲜的葡萄籽并洗净晒干，之后放入高温灭菌箱中进行高温灭菌，灭菌温度为160℃，灭菌时间为22min；
B、将步骤A高温灭菌后的葡萄籽放入压榨机中进行压榨，压榨机转速为300转/分，压榨温度为42℃，压榨时间为4min，得到葡萄籽油半成品；
C、将步骤B得到的葡萄籽油半成品加入精滤机中进行三次过滤，一次过滤后去除滤渣，静置后进行二次过滤，过滤后进行低速搅拌，之后进行三次过滤，去除滤渣后得到葡萄籽成品精油；
D、将步骤C得到的葡萄籽油倒入反应釜中，并加入1/2培养液，之后将反应釜加热反应，加热温度为62℃，加热时间为140min，之后冷却至常温，滤除表面清液，得到混合油；
E、在步骤D得到的混合油中再次加入1/2培养液，之后倒入搅拌釜中进行低速搅拌，搅拌釜转速为600转/分，搅拌时间为12min；之后加入离心机中进行离心分离杂质；
F、在步骤E得到的混合油中加入萃取液，混合后倒入反应容器中，将反应容器迅速升温至130℃，恒温10min，之后缓慢冷却至55℃，恒温10min，之后再次升温至105℃，恒温5min,之后缓慢冷却至常温；
G、最后将步骤F得到的混合油加入旋转蒸发器中旋转蒸发11min，蒸发温度为50℃，即得到共轭亚油酸。
本实施例中，步骤D中培养液组份按重量份数包括磷酸氢二钾4份、柠檬酸铵6份、硫酸锰4份、钼酸铵2份以及酵母浸粉4份。
本实施例中，步骤F中萃取液采用羧酸类酸性萃取剂环烷酸。
实施例四：
本发明提供一种技术方案：一种以葡萄籽油为原料制备高含量共轭亚油酸的方法,包括以下步骤：
A、选取新鲜的葡萄籽并洗净晒干，之后放入高温灭菌箱中进行高温灭菌，灭菌温度为170℃，灭菌时间为28min；
B、将步骤A高温灭菌后的葡萄籽放入压榨机中进行压榨，压榨机转速为400转/分，压榨温度为50℃，压榨时间为7min，得到葡萄籽油半成品；
C、将步骤B得到的葡萄籽油半成品加入精滤机中进行三次过滤，一次过滤后去除滤渣，静置后进行二次过滤，过滤后进行低速搅拌，之后进行三次过滤，去除滤渣后得到葡萄籽成品精油；
D、将步骤C得到的葡萄籽油倒入反应釜中，并加入1/2培养液，之后将反应釜加热反应，加热温度为68℃，加热时间为200min，之后冷却至常温，滤除表面清液，得到混合油；
E、在步骤D得到的混合油中再次加入1/2培养液，之后倒入搅拌釜中进行低速搅拌，搅拌釜转速为700转/分，搅拌时间为18min；之后加入离心机中进行离心分离杂质；
F、在步骤E得到的混合油中加入萃取液，混合后倒入反应容器中，将反应容器迅速升温至140℃，恒温10min，之后缓慢冷却至58℃，恒温10min，之后再次升温至110℃，恒温5min,之后缓慢冷却至常温；
G、最后将步骤F得到的混合油加入旋转蒸发器中旋转蒸发12min，蒸发温度为50℃，即得到共轭亚油酸。
本实施例中，步骤D中培养液组份按重量份数包括磷酸氢二钾4份、柠檬酸铵7份、硫酸锰5份、钼酸铵2份以及酵母浸粉5份。
本实施例中，步骤F中萃取液采用羧酸类酸性萃取剂硬脂酸。
病例：
高血脂、高血糖患者黄某取实施例四制得的共轭亚油酸并溶于水，稀释后，于饭后1h饮用，服用45天后，血脂总胆固醇值降至2.5mmol/L。
高血脂、高血糖患者沈某取实施例四制得的共轭亚油酸并溶于水，稀释后，于饭后1h饮用，服用60天后，血脂总胆固醇值降至2mmol/L。
本发明制备方法简单，制备成本低，制备时间短，制得的共轭亚油酸含量高、纯度高，可直接食用，患者长期服用后能够有效降低高血脂、高血糖，保健效果好；本发明的制备方法中采用两次加入培养液的方式，能够使葡萄籽油充分反应，提高了制备出的共轭亚油酸的含量；本发明中制备方法采用的萃取方法操作简单，采用高低温交叉反应，能够进一步提高萃取效率。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。