本发明属于油脂加工工艺领域，具体为一种提高油脂水解率的方法
背景技术：
蓖麻油酸是油化工业中常用的原料，主要用来制备癸二酸和12-羟基硬脂酸。蓖麻油酸是蓖麻油的水解产物，在蓖麻油中，蓖麻酸的脂肪酸含量占90％以上，远高于其他油种的含量。
目前蓖麻油酸的主要制备方法为高温高压法和酶法水解。高温高压法虽然生产效率高，但是该方法条件严苛，在应用于蓖麻油水解的过程中会使得蓖麻油酸中的羟基与羧基发生酯化反应而形成聚酯，从而造成产物的颜色较深，而且还会降低后期制备12-羟基硬脂酸的得率。
相较于高温高压法，酶法水解蓖麻油可在温和的条件下获得高质量的产品，同时能够减少废水的产生，减小对环境的污染。但酶法水解也存在以下问题：在水解过程中普遍存在水解效率低的情况，无法达到90％以上；即使水解率能够达到90％，则加酶量会比较大，成本高，无法满足生产的需求。
例如，cn200710118466.1介绍了一种水解蓖麻油的方法，该方法采用组合脂肪酶(novozyme435、lipozymermim、lipozymetl)进行水解，控制反应温度在35-60℃，水油摩尔比为1-50，反应时间在10-30h，最后得率在90％左右。但是该方法在水解过程中添加的脂肪酶量较大，成本高，不适合工业化生产。
cn201080010073.9介绍了一种通过酯交换制备蓖麻油酸酯的方法。主要工艺步骤为在蓖麻油中添加短链醇，在脂肪酶的作用下通过醇解反应生成蓖麻油酸酯。
杨威等(“游离脂肪酶催化蓖麻油制备蓖麻油酸”，《生物技术进展》，2014(5):373-378)对影响游离脂肪酶ns81006催化蓖麻油水解过程的主要因素：温度、酶用量、水用量和搅拌速度进行了研究和优化，在油化后的条件下48h水解率达到94.8％。但是该方法反应时间过长，在实际生产过程中影响生产效率。
puthlims等(“enzymatichydrolysisofcastoroil:processintensificationstudies”，biochemicalengineeringjournal，2006，31(1):31-41)对酶法水解蓖麻油的各个因素：温度、时间、油水摩尔比、丙酮添加量、酶添加量等因素进行了考察。该文章报道中水解率都比较低，无法满足正常生产需求。
因此，本领域仍然需要一种酶法水解油脂的方法，采用该方法能在节约生产成本的情况下提高油脂的水解率，从而大大提高生产效率。
技术实现要素：
本文采用两种脂肪酶进行复配，充分发挥两种脂肪酶各自特性，在酶添加量很少的情况下能够在短时间内达到很高的水解率，提高生产效率，节约生产成本。
因此，本发明第一方面提供一种油脂水解方法，所述方法包括使用脂肪酶(a)，即源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶或源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶，与脂肪酶(b)，即偏甘油酯脂肪酶，进行油脂水解的步骤。
本发明第二方面提供一种提高油脂水解率的方法，所述方法包括使用脂肪酶(a)与脂肪酶(b)进行油脂水解的步骤，该脂肪酶(a)源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶或源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶，该脂肪酶(b)是偏甘油酯脂肪酶。
在一个或多个实施方案中，所述源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶是源自疏绵状嗜热丝孢菌(thermomyceslanguginosus)的脂肪酶。
在一个或多个实施方案中，所述源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶是lipozymetl。
在一个或多个实施方案中，所述源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶是源自米赫根毛霉(rhizomucormiehei)的脂肪酶。
在一个或多个实施方案中，所述源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶是lipozymermim。
在一个或多个实施方案中，所述偏甘油酯脂肪酶是源自青霉属(penicilliumsp.)的脂肪酶。
在一个或多个实施方案中，所述源自青霉属(penicilliumsp.)的脂肪酶是源自沙门柏干酪青霉(penicilliumcamemberti)的脂肪酶。
在一个或多个实施方案中，所述源自青霉属(penicilliumsp.)的脂肪酶是脂肪酶g50，即商品酶lipaseg"amano"50。
在一个或多个实施方案中，所述的脂肪酶(a)的添加量为油脂重量的0.2～5％，例如0.2～4％、0.2～3％、0.2～2％、0.2～1％、0.2～0.8％、0.2～0.6％、0.2～0.5％、0.5～5％、0.5～4％、0.5～3％、0.5～2.5％、0.5～2％、0.5～1.5％、0.5～1％、0.8～5％、0.8～4％、0.8～3％、1～5％、1～4％或1～3％。
在一个或多个实施方案中，所述的脂肪酶(b)的添加量为油脂重量的0.15～2.0％，例如0.15～1.5％、0.15～1.2％、0.15～1.0％、0.15～0.8％、0.15～0.6％、0.15～0.5％、0.15～0.3％、0.2～1.8％、0.2～1.5％、0.2～1.0％、0.2～0.8％、0.2～0.6％、0.2～0.5％、0.3～2.0％、0.3～1.5％、0.3～1.2％、0.3～1.0％、0.5～2.0％、0.5～1.8％、0.5～1.5％、0.5～1.2％、0.5～1.0％。
在一个或多个实施方案中，水解在水的存在下进行。
在一个或多个实施方案中，油脂与水的质量比为1：0.2～5，例如1：0.2～4，1：0.2～3，1：0.3～5，1：0.3～4，1：0.3～3，1：0.4～5，1：0.4～4，1：0.4～3等。
在一个或多个实施方案中，水解在35～55℃的温度下进行，例如在40～50℃的温度下进行。
在一个或多个实施方案中，所述油脂为植物油或动物油。
在一个或多个实施方案中，所述油脂为精炼油脂。
在一个或多个实施方案中，所述油脂选自：蓖麻油、稻米油、葵花籽油、棕榈油、棕榈仁油、花生油、菜籽油、棉籽油、红花籽油、紫苏籽油、茶籽油、棕榈果油、椰子油、油橄榄油、可可豆油、乌桕籽油、扁桃仁油、杏仁油、油桐籽油、橡胶籽油、玉米胚油、小麦胚油、芝麻籽油、亚麻籽油、月见草籽油、榛子油、胡桃油、葡萄籽油、玻璃苣籽油、沙棘籽油、番茄籽油、南瓜籽油、澳洲坚果油、可可脂、藻类油、牛脂、猪油、羊油、鸡脂、鱼油、海豹油、鲸油、海豚油和蚝油中的一种或两种以上的油脂的任意混合。
在一个或多个实施方案中，所述油脂是蓖麻油。
在一个或多个实施方案中，所述方法包括使用源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶与偏甘油酯脂肪酶进行油脂水解的步骤。
在一个或多个实施方案中，所述方法包括使用源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶与偏甘油酯脂肪酶进行油脂水解的步骤；优选地，在一个或多个实施方案中，源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶的用量为油脂重量的0.8～5％，例如0.8～4％、0.8～3％、1～5％、1～4％或1～3％；优选地，在一个或多个实施方案中，偏甘油酯脂肪酶的用量为油脂重量的0.15～2％，例如0.15～1％，0.3～2％，0.3～1.5％，0.3～1.2％或0.3～1.0％。
本发明第三方面提供偏甘油酯脂肪酶或其与以下脂肪酶的组合在油脂水解或提高油脂水解率中的应用：
脂肪酶(a)，即源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶或源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶；和
脂肪酶(b)，即偏甘油酯脂肪酶。
本发明第四方面提供一种脂肪酶组合物，该组合物含有：
脂肪酶(a)，即源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶或源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶；和
脂肪酶(b)，即偏甘油酯脂肪酶；
其中，所述组合物中源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶与所述偏甘油酯脂肪酶的重量比不为1。
在一个或多个实施方案中，所述组合物含有脂肪酶(a)和脂肪酶(b)：
脂肪酶(a)是源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶；和
脂肪酶(b)是偏甘油酯脂肪酶。
在一个或多个实施方案中，所述源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶是源自疏绵状嗜热丝孢菌(thermomyceslanguginosus)的脂肪酶。
在一个或多个实施方案中，所述源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶是lipozymetl。
在一个或多个实施方案中，所述源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶是源自米赫根毛霉(rhizomucormiehei)的脂肪酶。
在一个或多个实施方案中，所述源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶是lipozymermim。
在一个或多个实施方案中，所述偏甘油酯脂肪酶是源自青霉属(penicilliumsp.)的脂肪酶。
在一个或多个实施方案中，所述源自青霉属(penicilliumsp.)的脂肪酶是源自沙门柏干酪青霉(penicilliumcamemberti)的脂肪酶。
在一个或多个实施方案中，所述源自青霉属(penicilliumsp.)的脂肪酶是脂肪酶g50(lipaseg"amano"50)。
具体实施方式
脂肪酶
本文中，“偏甘油酯脂肪酶”是指对甘油三酯没有催化水解活力，优先对甘油二酯和/或甘油单酯具有催化水解活力的脂肪酶。偏甘油酯脂肪酶主要有两类：甘油单酯-甘油二酯脂肪酶和甘油单酯脂肪酶。本发明优选使用对甘油单酯和/或甘油二酯具有催化水解活力的偏甘油酯脂肪酶。可使用本领域周知的偏甘油酯脂肪酶，例如，可使用来自曲霉属(aspergillus)、青霉属(penicillium)和马拉色霉菌属(malassezia)的偏甘油酯脂肪酶。
在某些实施方案中，适用于本发明的偏甘油酯脂肪酶包括但不限于例如cn201410182887.0所公开的偏甘油酯脂肪酶，市售的偏甘油酯脂肪酶如脂肪酶g50(lipaseg"amano"50)，以及脂肪酶gh1(huangj,yangz,guanf等，anovelmono-anddiacylglycerollipasehighlyexpressedinpichiapastoris,anditsapplicationforfoodemulsifierpreparation，processbiochemistry，2013，48(12):1899-1904)、lipasesmg1(xut,lul,hous等，crystalstructureofamono-anddiacylglycerollipasefrommalasseziaglobosa,revealsanovellidconformationandinsightsintothesubstratespecificity，journalofstructuralbiology，2012，178(3):363-9)和脂肪酶repcmdl(tanzb,lijf,lixt等，auniquemono-anddiacylglycerollipasefrompenicilliumcyclopium:heterologousexpression,biochemicalcharacterizationandmolecularbasisforitssubstrateselectivity，plosone，2014，9(7):e102040)等。
用于本发明的方法或用途中时，偏甘油酯脂肪酶的用量通常为油脂重量的0.12～2.0％，例如0.15～2.0％、0.15～1.5％、0.15～1.2％、0.15～1.0％、0.15～0.8％、0.15～0.6％、0.15～0.5％、0.15～0.3％、0.2～1.8％、0.2～1.5％、0.2～1.0％、0.2～0.8％、0.2～0.6％、0.2～0.5％、0.3～2.0％、0.3～1.5％、0.3～1.2％、0.3～1.0％、0.5～2.0％、0.5～1.8％、0.5～1.5％、0.5～1.2％、0.5～1.0％等。
在某些实施方案中，本发明使用来自青霉属(penicilliumsp.)的偏甘油酯脂肪酶，尤其是来自沙门柏干酪青霉(penicilliumcamemberti)的偏甘油酯脂肪酶。例如，来自青霉属(penicilliumsp.)的偏甘油酯脂肪酶可以是脂肪酶g50，即lipaseg"amano"50。
本发明中，与偏甘油酯脂肪酶复配的另一种脂肪酶可以是源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶或源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶。在某些实施方案中，源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶是源自疏绵状嗜热丝孢菌(thermomyceslanguginosus)的脂肪酶，例如所述源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶是lipozymetlim或与lipozymetlim具有类似酶学性质的来源于嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶。
在某些实施方案中，源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶可以是源自米赫根毛霉(rhizomucormiehei)的脂肪酶，例如，所述源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶是lipozymermim或与lipozymermim具有类似的酶学性质的来源于根毛霉菌属的脂肪酶。
用于本发明的方法或用途中时，源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶或源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶的用量可以为油脂重量的0.15～5％，例如0.2～5％、0.2～4％、0.2～3％、0.2～2％、0.2～1％、0.2～0.8％、0.2～0.6％、0.2～0.5％、0.5～5％、0.5～4％、0.5～3％、0.5～2.5％、0.5～2％、0.5～1.5％、0.5～1％、0.8～5％、0.8～4％、0.8～3％、1～5％、1～4％或1～3％等。
在某些实施例中，本发明使用源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶，其用量可以为油脂重量的0.8～5％，例如0.8～4％、0.8～3％、1～5％、1～4％或1～3％。
在某些实施方案中，本发明使用偏甘油酯脂肪酶与源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶的组合。在这些实施方案中，偏甘油酯脂肪酶的用量可以为油脂重量的0.15～2.0％，例如0.15～1.5％、0.15～1.2％、0.15～1.0％、0.15～0.8％、0.15～0.6％、0.15～0.5％、0.15～0.3％、0.2～1.8％、0.2～1.5％、0.2～1.0％、0.2～0.8％、0.2～0.6％、0.2～0.5％、0.3～2.0％、0.3～1.5％、0.3～1.2％、0.3～1.0％、0.5～2.0％、0.5～1.8％、0.5～1.5％、0.5～1.2％或0.5～1.0％；源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶的用量可以为油脂重量的0.2～5％，例如0.2～4％、0.2～3％、0.2～2％、0.2～1％、0.2～0.8％、0.2～0.6％、0.2～0.5％、0.5～5％、0.5～4％、0.5～3％、0.5～2.5％、0.5～2％、0.5～1.5％、0.5～1％、0.8～5％、0.8～4％、0.8～3％、1～5％、1～4％或1～3％。
可使用上述所列的两种脂肪酶用量范围的任意组合来实施本发明。举例而言，偏甘油酯脂肪酶的用量可以是油脂重量的0.15～1.5％，如0.15～1.0％，与之配合使用的源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶的用量可以为油脂重量的0.2～5％、0.2～4％、0.2～3％、0.2～2％、0.2～1％、0.2～0.8％、0.2～0.6％、0.2～0.5％、0.5～5％、0.5～4％、0.5～3％、0.5～2.5％、0.5～2％、0.5～1.5％或0.5～1％；同样地，源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶的用量可以为油脂重量的0.2～5％，如0.2～2.0％，而与之配合使用的偏甘油酯脂肪酶的用量可以是油脂重量的0.15～2.0％，例如0.15～1.5％、0.15～1.2％、0.15～1.0％、0.15～0.8％、0.15～0.6％、0.15～0.5％、0.15～0.3％、0.2～1.8％、0.2～1.5％、0.2～1.0％、0.2～0.8％、0.2～0.6％、0.2～0.5％、0.3～2.0％、0.3～1.5％、0.3～1.2％、0.3～1.0％、0.5～2.0％、0.5～1.8％、0.5～1.5％、0.5～1.2％或0.5～1.0％。
在某些实施方案中，偏甘油酯脂肪酶的用量可以是油脂重量的0.15～1％，如0.15～0.6％、0.15～0.5％或0.15～0.3％，与之配合使用的源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶的用量可以为油脂重量的0.2～2％，如0.2～1％、0.2～0.8％、0.2～0.6％、0.2～0.5％、0.5～2％、0.5～1.5％或0.5～1％。
在某些实施方案中，本发明使用偏甘油酯脂肪酶与源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶的组合。在这些实施方案中，优选的是，偏甘油酯脂肪酶的用量为油脂重量的0.15～2％，例如0.15～1％、0.3～2％、0.3～1.5％、0.3～1.2％或0.3～1.0％；与之配合使用的源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶的用量可以是油脂重量的0.8～5％，例如0.8～4％、0.8～3％、1～5％、1～4％或1～3％。
通常，添加到油脂中的所有脂肪酶的总重量占油脂重量的百分比不超过7.0％，例如在0.35～7.0％之间，如0.35～6.0％、0.35～5.0％、0.35～4.0％、0.35～3.0％、0.35～2.0％、0.35～1.5％、0.35～1.0％、0.35～0.8％、0.35～0.5％、0.4～7.0％、0.4～6.0％、0.4～5.0％、0.4～4.0％、0.5～6.0％、0.5～5.0％、0.8～6.0％、0.8～5.0％、1.0～6.0％等的范围内。
在某些实施方案中，添加到油脂中的源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶或源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶的重量要高于添加到油脂中的偏甘油酯脂肪酶的重量。例如，在这些实施方案中，添加到油脂中的源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶或源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶的重量为添加到油脂中的偏甘油酯脂肪酶的重量的至少1.1倍，如1.1～33.3倍，例如1.1～30倍，1.1～25倍，1.1～20倍，1.1～15倍，1.1～10倍等。
在某些实施方案中，将源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶和本文所述的偏甘油酯脂肪酶添加到油脂中，前者的添加量是后者添加量的至少1.2倍，例如至少1.3倍，例如1.2～33.3倍，例如1.1～30倍，1.1～25倍，1.1～20倍，1.1～15倍，1.1～10倍，1.2～5倍，1.2～3倍等。在其它实施方案中，偏甘油酯脂肪酶的添加量是源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶添加量的至少1.1倍，例如，至少1.2倍，例如1.1～10倍，1.1～8倍，1.1～5倍，1.1～3倍，1.2～8倍等。
在其它实施方案中，将源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶和本文所述的偏甘油酯脂肪酶添加到油脂中，前者的添加量是后者添加量的至少1.5倍，例如至少2倍，例如2～33.3倍，例如1.5～30倍，1.5～25倍，1.5～20倍，1.5～15倍，1.5～10倍，3～10倍等。
应理解的是，在这些实施方案中，所添加的脂肪酶在满足所述倍数要求的同时，其用量也应落入本文前文所述的用量范围之内。
用于本发明的脂肪酶可以以本领域周知的各种形式使用。例如，所用脂肪酶可以为液体酶、粉末状酶、固体酶、固定化酶等一种或多种混合。
脂肪酶组合物
本发明也提供一种脂肪酶组合物，该组合物所含的脂肪酶为(a)源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶或源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶与(b)偏甘油酯脂肪酶。
通常，添加到油脂中的脂肪酶组合物所含的脂肪酶占油脂重量的百分比不超过7.0％，例如在0.35～7.0％之间，如0.35～6.0％、0.35～5.0％、0.35～4.0％、0.35～3.0％、0.35～2.0％、0.35～1.5％、0.35～1.0％、0.35～0.8％、0.35～0.5％、0.4～7.0％、0.4～6.0％、0.4～5.0％、0.4～4.0％、0.5～6.0％、0.5～5.0％、0.8～6.0％、0.8～5.0％、1.0～6.0％等的范围内。
本发明脂肪酶组合物中脂肪酶(a)的含量应足以使得在将该组合物以所含脂肪酶占油脂重量的百分比不超过7％的量添加到油脂中时所述脂肪酶(a)占油脂重量的0.2～5％，例如0.2～4％、0.2～3％、0.2～2％、0.2～1％、0.2～0.8％、0.2～0.6％、0.2～0.5％、0.5～5％、0.5～4％、0.5～3％、0.5～2.5％、0.5～2％、0.5～1.5％、0.5～1％、0.8～5％、0.8～4％、0.8～3％、1～5％、1～4％或1～3％等。
本发明脂肪酶组合物中脂肪酶(b)，即偏甘油酯脂肪酶的含量应足以使得在将该组合物以所含脂肪酶占油脂重量的百分比不超过7％的量添加到油脂中时该偏甘油酯脂肪酶占油脂重量的0.15～2.0％，例如0.15～1.5％、0.15～1.2％、0.15～1.0％、0.15～0.8％、0.15～0.6％、0.15～0.5％、0.15～0.3％、0.2～1.8％、0.2～1.5％、0.2～1.0％、0.2～0.8％、0.2～0.6％、0.2～0.5％、0.3～2.0％、0.3～1.5％、0.3～1.2％、0.3～1.0％、0.5～2.0％、0.5～1.8％、0.5～1.5％、0.5～1.2％或0.5～1.0％等。
在某些实施方案中，脂肪酶组合物中所述的脂肪酶(a)是源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶，其含量应足以使得在将该脂肪酶组合物以所含脂肪酶占油脂重量的百分比不超过7％的量添加到油脂中时源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶占油脂重量的0.2～5％，例如0.2～4％、0.2～3％、0.2～2％、0.2～1％、0.2～0.8％、0.2～0.6％、0.2～0.5％、0.5～5％、0.5～4％、0.5～3％、0.5～2.5％、0.5～2％、0.5～1.5％、0.5～1％、0.8～5％、0.8～4％、0.8～3％、1～5％、1～4％或1～3％等；脂肪酶(b)中所述的偏甘油酯脂肪酶在组合物中的含量应足以使得在将该脂肪酶组合物以所含脂肪酶占油脂重量的百分比不超过7％的量添加到油脂中时所说的偏甘油酯脂肪酶占油脂重量的0.15～2.0％，例如0.15～1.5％、0.15～1.2％、0.15～1.0％、0.15～0.8％、0.15～0.6％、0.15～0.5％、0.15～0.3％、0.2～1.8％、0.2～1.5％、0.2～1.0％、0.2～0.8％、0.2～0.6％、0.2～0.5％、0.3～2.0％、0.3～1.5％、0.3～1.2％、0.3～1.0％、0.5～2.0％、0.5～1.8％、0.5～1.5％、0.5～1.2％或0.5～1.0％
在另外一些实施方案中，本发明脂肪酶组合物中所述的脂肪酶(a)为源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶，该脂肪酶在组合物中的含量应足以使得在将该脂肪酶组合物以所含脂肪酶占油脂重量的百分比不超过7％的量添加到油脂中时所述源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶占油脂重量的0.8～5％，例如0.8～4％、0.8～3％、1～5％、1～4％或1～3％；脂肪酶(b)中所述的偏甘油酯脂肪酶在该脂肪酶组合物中的含量应足以使得在将该脂肪酶组合物以所含脂肪酶占油脂重量的百分比不超过7％的量添加到油脂中时所述的偏甘油酯脂肪酶占油脂重量的0.15～2％，例如0.15～1％，0.3～2％，0.3～1.5％、0.3～1.2％或0.3～1.0％。
在某些实施方案中，本发明脂肪酶组合物中源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶与本文所述的偏甘油酯脂肪酶的重量比不为1。在某些实施方案中，本发明脂肪酶组合物中源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶或源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶的重量要高于偏甘油酯脂肪酶的重量。例如，在这些实施例中，源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶或源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶与本文所述的偏甘油酯脂肪酶的重量比1.1～33.3：1，例如1.1～30：1，1.1～25：1，1.1～20：1，1.1～15：1，1.1～10：1等。
在某些实施方案中，本发明脂肪酶组合物含有源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶和本文所述的偏甘油酯脂肪酶，前者的重量是后者重量的至少1.2倍，例如至少1.3倍，例如1.2～33.3倍，例如1.1～30倍，1.1～25倍，1.1～20倍，1.1～15倍，1.1～10倍等。在其它实施方案中，偏甘油酯脂肪酶的重量是源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶重量的至少1.1倍，例如，至少1.2倍，例如1.1～10倍，1.1～8倍，1.1～5倍，1.1～3倍，1.2～8倍等。
在其它实施方案中，本发明脂肪酶组合物含有源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶和本文所述的偏甘油酯脂肪酶，前者的重量是后者重量的至少1.5倍，例如至少2倍，例如2～33.3倍，例如1.5～30倍，1.5～25倍，1.5～20倍，1.5～15倍，1.5～10倍等。
应理解的是，在这些实施方案中，脂肪酶组合物中的脂肪酶的重量在满足所述倍数要求的同时，其含量也应落入本文前文所述的含量范围之内。
本发明的脂肪酶组合物可以是本领域周知的各种脂肪酶组合物形式，包括但不限于液体组合物、固体组合物(如粉末组合物)，或者是固定化酶的形式。
水解方法
本发明的脂肪酶或其组合物可用于水解油脂，或可用于提高油脂的水解率。
适用于本发明方法和用途的油脂可以是本领域周知的各种油脂，包括植物油或动物油。优选的是，用于本发明的油脂在本发明的水解温度下为液态。油脂也可以是精炼油脂。举例而言，适用于本发明的油脂可选自：蓖麻油、稻米油、葵花籽油、棕榈油、棕榈仁油、花生油、菜籽油、棉籽油、红花籽油、紫苏籽油、茶籽油、棕榈果油、椰子油、油橄榄油、可可豆油、乌桕籽油、扁桃仁油、杏仁油、油桐籽油、橡胶籽油、玉米胚油、小麦胚油、芝麻籽油、亚麻籽油、月见草籽油、榛子油、胡桃油、葡萄籽油、玻璃苣籽油、沙棘籽油、番茄籽油、南瓜籽油、澳洲坚果油、可可脂、藻类油、牛脂、猪油、羊油、鸡脂、鱼油、海豹油、鲸油、海豚油和蚝油中的一种或两种以上的油脂的任意混合。在一个或多个实施方案中，所述油脂是蓖麻油。
水解时，先根据具体使用的酶、油脂等情况，将适量的水添加到油脂中。通常，油脂与水的质量比为1：0.2～5，例如1：0.2～4，1：0.2～3，1：0.3～5，1：0.3～4，1：0.3～3，1：0.4～5，1：0.4～4，1：0.4～3，1：0.6～3，1：0.6～2等。为取得最佳的水解效果，本领域技术人员可根据具体使用的油脂、酶的用量、反应的温度、反应的时间等等因素确定和调整油脂与水的质量比。
然后可将脂肪酶添加到油脂中。应理解，上述脂肪酶(a)和(b)可分别添加到油脂中，也可以混合物的形式添加，或者可将本发明的脂肪酶组合物添加到油脂中。脂肪酶的添加量如前文所述。添加后，使油脂、脂肪酶和水混合均匀。例如，可高速剪切，使其混合均匀。若脂肪酶以水溶液的方式添加到油脂中，优选的是，确保脂肪酸水溶液中的水与前文所述的额外添加的水的总量与油脂的质量比在上述范围之内。
水解反应通常可在35～55℃的温度下进行，例如可在40～50℃的温度下进行。因此，在将油脂、脂肪酶和水混匀后，将所得混合物的温度逐渐升温到35～55℃的范围内进行反应。通常，边搅拌边升温。反应过程中可持续搅拌。
对水解反应的时间并无特殊限制，可根据进行水解的油脂的量、所用的脂肪酶的种类及其用量等因素进行调整。或者，可在水解反应过程中取样分析样品酸价并计算水解率，当达到预期的水解率后，即可停止反应。
此外，可根据油脂种类适当调整各酶的用量，水的用量，水解的温度以及时间等，以达到最佳的水解率。在某些实施方案中，采用本发明方法，能够实现至少90％的水解率，优选至少92％的水解率，更优选至少95％的水解率，更优选至少97％的水解率，更优选至少98％的水解率。
因此，本发明水解油脂的方法或提高油脂水解率的方法包括使用(a)源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶或源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶与(b)偏甘油酯脂肪酶进行油脂水解的步骤。在某些实施方案中，所述方法包括混匀油脂、添加所述脂肪酶和水的混合物后升温至35～55℃，并在该温度下反应6小时，8小时，12小时，16小时，24小时，或更长时间，或这些数值组合的时间段，从而使油脂水解。
在某些实施方案中，采用本发明的方法能将油脂的水解率提高到90％以上。在某些实施方案中，采用本发明的方法能将油脂的水解率提高到92％以上。采用本发明的方法能将油脂的水解率提高到95％以上。采用本发明的方法能将油脂的水解率提高到97％以上，优选提高到98％以上。
在某些实施方案中，采用本发明的方法，控制油脂与水的质量比为1：0.6～3或1：0.6～2，所述源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶的添加量占油脂重量的0.2～2％，所述脂肪酶(b)的添加量占油脂重量的0.15～1％，反应适当时间后，能将油脂的水解率提高到95％或98％以上。
在某些实施方案中，采用本发明的方法，控制油脂与水的质量比为1：0.6～3或1：0.6～2，所述源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶的添加量占油脂重量的1～5％，所述脂肪酶(b)的添加量占油脂重量的0.15～1％，反应适当时间后，能将油脂的水解率提高到95％或98％以上。
应用
本发明还提供偏甘油酯脂肪酶在水解油脂中的应用，以及在制备用于水解油脂的脂肪酶组合物中的应用。还提供的是(a)源自嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶或源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶与(b)偏甘油酯脂肪酶在油脂水解中的应用，以及在制备用于水解油脂的脂肪酶组合物中的应用。所述嗜热真菌属(thermomycessp.)的脂肪酶或源自根毛霉菌属(rhizomucorsp.)的脂肪酶与偏甘油酯脂肪酶可如前文所述。
下文将以具体实施例的方式阐述本发明。应理解，这些实施例仅仅是阐述性的，并非用于限制本发明的范围。实施例中所用脂肪酶novozyme435、脂肪酶lipozymermim、脂肪酶lipozymetlim均为诺维信(中国)投资有限公司产品，脂肪酶g50为lipaseg"amano"50，是天野酶制品株式会社(amanoenzymeinc.)产品。实施例中所用蓖麻油是购自丰益精细化学(连云港)有限公司；椰子油购自嘉里特种油脂(上海)有限公司；鱼油购自巴斯夫(中国)有限公司，商品名称为dha鱼油；精炼大豆油购自上海嘉里粮油有限公司，其它常规化学品均购自国药化学试剂有限公司，为分析纯级。实施例中的百分比为重量百分比。脂肪酶tl是以水溶液形式添加，先将lipozymetlim溶解于水中形成常规浓度的水溶液。其他脂肪酶均以粉末形式添加。
实施例中，水解率按以下式子计算：
其中，av0指油脂原料酸价，对于蓖麻油，其为1.70mgkoh/g；avt指某时间间隔t取样酸价；sv指油脂原料皂化值，对于蓖麻油，其为182.01mgkoh/g。
对比实施例1
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入1.5g脂肪酶tl(lipozymetlim，占蓖麻油重量的5％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应6h后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价为116.69mgkoh/g，计算水解率为63.77％。
对比实施例2
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.6g脂肪酶g50(lipaseg"amano"50，占蓖麻油重量的2％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应6h后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价为53.06mgkoh/g，计算水解率为28.46％。
实施例1
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入1.5g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的5％)、0.6g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的2％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应6h后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价为177.25mgkoh/g，计算水解率为97.36％。
实施例2
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入1.5g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的5％)、0.45g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的1.5％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应8h后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价为173.61mgkoh/g，计算水解率为95.34％。
实施例3
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入1.5g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的5％)、0.3g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的1％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应8h后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价为169.95mgkoh/g，计算水解率为93.31％。
实施例4
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.3g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的1％)、0.12g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.4％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。6h酸价为169.09mgkoh/g，计算水解率为92.83％，24h酸价为173.40mgkoh/g，计算水解率为95.22％。
实施例5
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.24g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的0.8％)、0.12g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.4％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为173.47mgkoh/g，计算水解率为95.27％。
实施例6
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.06g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的0.2％)、0.045g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.15％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为178.04mgkoh/g，计算水解率为97.80％。
实施例7
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.09g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的0.3％)、0.06g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.2％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为180.15mgkoh/g，计算水解率为98.97％。
实施例8
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入12g去离子水，并加入0.06g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的0.2％)、0.06g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.2％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为172.89mgkoh/g，计算水解率为94.94％。
实施例9
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入18g去离子水，并加入0.06g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的0.2％)、0.06g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.2％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为173.12mgkoh/g，计算水解率为95.07％。
实施例10
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.9g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的3％)、0.3g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的1％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为181.00mgkoh/g，计算水解率为99.44％。
实施例11
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入3g去离子水，并加入0.06g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的0.2％)、0.045g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.15％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为131.20mgkoh/g，计算水解率为71.82％。
实施例12
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入150g去离子水，并加入0.06g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的0.2％)、0.045g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.15％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为160.64mgkoh/g，计算水解率为88.15％。
实施例13
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.3g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的1％)、0.3g脂肪酶novozyme435(占蓖麻油重量的1％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为133.17mgkoh/g，计算水解率为73.16％。
实施例14
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.15g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的0.5％)、0.3g脂肪酶novozyme435(占蓖麻油重量的1％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为148.70mgkoh/g，计算水解率为81.25％。
实施例15
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.15g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的0.5％)、0.15g脂肪酶novozyme435(占蓖麻油重量的0.5％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为143.35mgkoh/g，计算水解率为78.76％。
实施例16
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.15g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的0.5％)、0.15g脂肪酶novozyme435(占蓖麻油重量的0.5％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至35℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为157.15mgkoh/g，计算水解率为86.34％。
实施例17
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.15g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的0.2％)、0.15g脂肪酶novozyme435(占蓖麻油重量的0.2％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至55℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为160.71mgkoh/g，计算水解率为88.30％。
实施例18
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入1.5g脂肪酶rmim(lypozymermim，占蓖麻油重量的5％)、0.15g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.5％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为185.65mgkoh/g，计算水解率为99.39％。
实施例19
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.9g脂肪酶rmim(占蓖麻油重量的3％)、0.3g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的1％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为178.95mgkoh/g，计算水解率为98.32％。
实施例20
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.3g脂肪酶rmim(占蓖麻油重量的1％)、0.15g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.5％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为168.57mgkoh/g，计算水解率为92.55％。
实施例21
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.06g脂肪酶rmim(占蓖麻油重量的0.2％)、0.15g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.5％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为111.53mgkoh/g，计算水解率为60.91％。
实施例22
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入3g去离子水，并加入0.06g脂肪酶rmim(占蓖麻油重量的0.2％)、0.045g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.15％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为94.76mgkoh/g，计算水解率为52.06％。
实施例23
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入150g去离子水，并加入0.06g脂肪酶rmim(占蓖麻油重量的0.2％)、0.045g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.15％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为97.34mgkoh/g，计算水解率为53.48％。
实施例24
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.06g脂肪酶rmim(占蓖麻油重量的0.2％)、0.045g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.15％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为92.18mgkoh/g，计算水解率为50.65％。
实施例25
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.6g脂肪酶rmim(占蓖麻油重量的2％)、0.3g脂肪酶novozyme435(占蓖麻油重量的1％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为155.79mgkoh/g，计算水解率为85.59％。
实施例26
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入1.5g脂肪酶novozyme435(占蓖麻油重量的5％)、0.15g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.5％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为102.67mgkoh/g，计算水解率为56.00％。
实施例27
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.3g脂肪酶novozyme435(占蓖麻油重量的1％)、0.15g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.5％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为57.27mgkoh/g，计算水解率为30.82％。
实施例28
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.06g脂肪酶novozyme435(占蓖麻油重量的0.2％)、0.15g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.5％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为21.95mgkoh/g，计算水解率为11.23％。
实施例29
取30g椰子油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.06g脂肪酶tl(占椰子油重量的0.2％)、0.045g脂肪酶g50(占椰子油重量的0.15％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为209.58mgkoh/g，计算水解率为86.85％。
实施例30
取30g鱼油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.06g脂肪酶tl(占鱼油重量的0.2％)、0.045g脂肪酶g50(占鱼油重量的0.15％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为118.49mgkoh/g，计算水解率为56.47％。
实施例31
取30g精炼大豆油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.06g脂肪酶tl(占大豆油重量的0.2％)、0.045g脂肪酶g50(占大豆油重量的0.15％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为166.78mgkoh/g，计算水解率为95.29％。
实施例32
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.06g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的0.2％)、0.075g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.25％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为174.18mgkoh/g，计算水解率为96.23％。
实施例33
取30g猪油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.06g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的0.2％)、0.045g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.15％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为168.59mgkoh/g，计算水解率为86.46％。
实施例34
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.15g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的5％)、0.045g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.15％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为179.97mgkoh/g，计算水解率为98.87％。
实施例35
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.06g脂肪酶tl(占蓖麻油重量的0.2％)、0.6g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的2％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为154.43mgkoh/g，计算水解率为84.70％。
实施例36
取30g蓖麻油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.15g脂肪酶rmim(占蓖麻油重量的5％)、0.045g脂肪酶g50(占蓖麻油重量的0.15％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为178.16mgkoh/g，计算水解率为97.86％。
对比实施例3
取30g椰子油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.06g脂肪酶tl(占椰子油重量的0.2％)、0.045g脂肪酶435(占椰子油重量的0.15％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为149.44mgkoh/g，计算水解率为81.94％。
对比实施例4
取30g鱼油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.06g脂肪酶tl(占鱼油重量的0.2％)、0.045g脂肪酶435(占鱼油重量的0.15％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为107.81mgkoh/g，计算水解率为51.37％。
对比实施例5
取30g猪油于反应器中，然后加入60g去离子水，并加入0.06g脂肪酶tl(占猪油重量的0.2％)、0.045g脂肪酶435(占猪油重量的0.15％)，然后在15000rpm下剪切1min使底物完全混合，然后在搅拌状态下加热至45℃开始反应，反应结束后停止加热，取样在10000rpm下离心3min进行分离，取上层油相检测酸价。24h酸价为124.87mgkoh/g，计算水解率为68.31％。