一种含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基的制作方法

文档序号:12411420阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基,其特征在于,包括以下成分及其浓度:甘草多糖45-150mg/L,葡萄糖10-20g/L,大豆水解物1.5~3g/L,腐胺0.5~15mg/L,精胺0.1~1.5mg/L,鸟氨酸0.045~1.35mg/L,丙酮酸钠65~75mg/L,谷氨酰胺0.3~0.75g/L,丙氨酸5~10mg/L,精氨酸0.15~0.25g/L,天冬酰胺7~12mg/L,天冬氨酸8~10mg/L,半胱氨酸25~45mg/L,胱氨酸30~55mg/L,谷氨酸6~18mg/L,甘氨酸20~45mg/L,组氨酸25~40mg/L,异亮氨酸50~100mg/L,亮氨酸55~150mg/L,赖氨酸80~185mg/L,苯丙氨酸50~70mg/L,脯氨酸20~30mg/L,丝氨酸35~50mg/L,苏氨酸60~80mg/L,色氨酸10~15mg/L,酪氨酸60~100mg/L,缬氨酸60~100mg/L,生物素0.005~0.01mg/L,维生素D 0.50~2.50mg/L,叶酸2.50~8mg/L,硫酸亚铁1.5~4.5mg/L,硝酸铁0.1~0.5mg/L,EDTA·2Na 1.5~10mg/L,乙醇胺3.5~8.5mg/L,甘油0.3~0.45mg/L,鱼肝油0.1~0.2mg/L,胆固醇0.065~0.15mg/L,亚油酸0.045~0.075mg/L,胸苷0.45~2.0mg/L,次黄嘌呤5~15mg/L,氢化可的松0.045~0.065mg/L,亚硒酸钠0.04~0.06mg/L,生育酚1.5~3.5mg/L,碳酸氢钠2.5~3g/L,氯化钙125~145mg/L,氯化镁45~65mg/L,硫酸镁45~65mg/L,氯化钾350~400mg/L,磷酸二氢钠65~100mg/L,氯化钠4.5~5g/L,磷酸氢二钠75~100mg/L,硫酸锌0.432~1.25mg/L和硫酸铜0.0025~0.0045mg/L。

2.根据权利要求1所述含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基,其特征在于,由以下成分及其浓度组成:甘草多糖85mg/L,葡萄糖15g/L,大豆水解物2.5g/L,腐胺10.5mg/L,精胺0.75mg/L,鸟氨酸0.75mg/L,丙酮酸钠72mg/L,谷氨酰胺0.45g/L,丙氨酸8.5mg/L,精氨酸0.17g/L,天冬酰胺9.5mg/L,天冬氨酸9.35mg/L,半胱氨酸33.5mg/L,胱氨酸46.87mg/L,谷氨酸15.5mg/L,甘氨酸40.25mg/L,组氨酸35mg/L,异亮氨酸87.5mg/L,亮氨酸95.5mg/L,赖氨酸135mg/L,苯丙氨酸65mg/L,脯氨酸27.5mg/L,丝氨酸45mg/L,苏氨酸77.6mg/L,色氨酸8.3mg/L,酪氨酸78mg/L,缬氨酸96.5mg/L,生物素0.0075mg/L,维生素D0.135mg/L,叶酸5.5mg/L,硫酸亚铁3.23mg/L,硝酸铁0.45mg/L,EDTA·2Na8.5mg/L,乙醇胺4.75mg/L,甘油0.45mg/L,鱼肝油0.15mg/L,胆固醇0.13mg/L,亚油酸0.054mg/L,胸苷1.75mg/L,次黄嘌呤12.3mg/L,氢化可的松0.045mg/L,亚硒酸钠0.055mg/L,生育酚2.5mg/L,碳酸氢钠2.75g/L,氯化钙135mg/L,氯化镁55mg/L,硫酸镁50mg/L,氯化钾375mg/L,磷酸二氢钠85mg/L,氯化钠4.75g/L,磷酸氢二钠85mg/L,硫酸锌0.45mg/L和硫酸铜0.003mg/L。

3.根据权利要求1或2所述含甘草多糖的无动物来源低蛋白细胞培养基,其特征在于,所述甘草多糖由甘草提取得到,提取方法如下:

S1.将甘草粉碎,称取200-400g置1L烧杯中,加水500~800mL,30~37℃水浴中超声提取30~150min,过滤,收集滤液;

S2.向上述S1步骤所得滤渣中,再加水400~800mL,30~37℃水浴中再次超声提取30~150min,过滤,收集滤液;

S3.合并上述S1和S2两次滤液,旋转蒸发仪上减压浓缩至50~35mL,室温冷却后将浓缩液5000r/min离心10~15min,弃去杂质沉淀后,缓慢地加入5~6倍量95%乙醇,并不断用玻璃棒搅拌,使甘草多糖充分析出,静置24h后,7000r/min离心5~10min得甘草多糖沉淀;

S4.将上述S3甘草糖沉淀再用无水乙醇洗涤2~3次后,60℃下干燥,得甘草多糖。

4.根据权利要1-3任一所述含甘草多糖的无动物来源低蛋白细胞培养基的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

A.首先称取甘草多糖,葡萄糖,丙酮酸钠,大豆水解物,腐胺,精胺,鸟氨酸,柠檬酸铁,硫酸亚铁,硝酸铁,EDTA·2Na,谷氨酰胺,丙氨酸,精氨酸,天冬酰胺,天冬氨酸,半胱氨酸,胱氨酸,谷氨酸,甘氨酸,组氨酸,异亮氨酸,亮氨酸,赖氨酸,苯丙氨酸,脯氨酸,丝氨酸,苏氨酸,色氨酸,酪氨酸,缬氨酸,生物素,维生素D,叶酸,亚硒酸钠,生育酚,氯化钙,氯化镁,硫酸镁,氯化钾,磷酸二氢钠,氯化钠,磷酸氢二钠,硫酸锌,硫酸铜,胸苷和次黄嘌呤,溶于800mL超纯水中,搅拌均匀,得溶液I;

B.向上述溶液I中加入氢化可的松,乙醇胺,甘油,鱼肝油,胆固醇和亚油酸,搅拌均匀,得溶液II;

C.向溶液II中加入碳酸氢钠,搅拌均匀,得溶液III;

D.调节培养基PH至7.2~7.4,加超纯水定容至1L,用0.22μm的滤膜过滤,除菌,即得。

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