一种含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基的制作方法

文档序号:12411420阅读:281来源:国知局

本发明属于体外细胞培养技术领域,具体涉及一种含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基。



背景技术:

随着哺乳动物细胞培养规模的扩大和生物药物需求的增长,优质细胞培养基的研发也日益重要。目前,细胞培养基配方需要添加某一范围内的添加剂,包括不确定的组分如胎牛血清(FCS)、几种动物衍生蛋白和/或牛源蛋白水解物。细胞培养基中,通常需要添加血清或血清衍生的物质,如白蛋白、转铁蛋白或胰岛素等,这些物质可能包含能污染细胞培养物及由此获得的生物制品的多余物质。此外,必须对人血清衍生添加物进行测试,检测所有已知的能通过血清传染的病毒包括肝炎和HIV。此外,牛血清及其衍生产品也有受到BSE(牛海绵状脑病,疯牛病)污染的风险。此外,所有血清衍生产品都可能被未知的成分污染。在细胞培养中血清或蛋白添加剂是来自于人或其它动物源的情况下,特别在细胞用于生产人用药物或疫苗情况下,存在许多问题(例如不同批次的组合物品质不同,以及被支原体、病毒或BSE污染的风险)。

甘草在《神农本草经》中列居上品,是历史最悠久、应用最广泛的中药之一,也是中医临床遣方用药中使用频率最高的一味中药,素有十方九草之说。甘草多糖是甘草一种重要的提取物,程安玮等认为甘草多糖能明显提高巨噬细胞的能量代谢水平(食品科学,2007,28(12):431-4)。甘草多糖可增强T细胞、B细胞、NK细胞及单核巨噬细胞对γ干扰素的合成和分泌,进而通过发挥广泛的免疫增强作用。

刘霞等研究认为甘草多糖具有促进淋巴细胞增殖作用(中国公共卫生,2004,20(5):572-3)。甘草多糖增加巨噬细胞的吞噬作用,诱导巨噬细胞分泌,增强细胞活性,诱导脾脏的分泌。由对正常小鼠巨噬细胞能量代谢水平及淋巴细胞体外增殖影响的实验表明,甘草多糖对小鼠巨噬细胞能量代谢及淋巴细胞的增殖有促进作用,体外增强作用随剂量增加而增加。

王忱等研究表明给予甘草多糖的小鼠的肿瘤明显小于对照组(临床肿瘤学杂志,2003,8(2))。王岳五等的实验也表明,甘草多糖具有一定的抗肿瘤活性,可以延长腹水瘤小鼠的生存期,抑制实体瘤的生长(南开大学学报,2000,33(4):46-8)。刘满红等研究表明,甘草多糖具有很强的清除羟自由基的能力(云南中医药杂志,2009,30(6):57-8)。聂小华等实验认为甘草多糖对淋巴细胞增殖有较好的促进作用。史玉荣等研究表明甘草多糖通过诱导小鼠—肉瘤凋亡来抑制肿瘤生长(现代仪器,2005,4(30-2))。

在已有的无血清培养基中,有些无法实现高密度培养过程;有些虽能很好地支持细胞生长,但可能导致细胞表达产物能力降低,甚至丧失;此外,商业无血清培养基的配方常属商业机密,且组分复杂、价格昂贵,既不利于特定细胞株培养技术的研究,也无法直接用于细胞培养过程的研究、开发和优化。



技术实现要素:

为解决上述现有技术中存在的问题,本发明提供一种含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基,其不包含任何添加的补充性动物源蛋白质和/或重组动物蛋白,添加有甘草多糖,本发明培养基能使细胞快速增殖并有效提高细胞表达能力。

本发明培养基是通过以下技术方案实现的:

一种含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基,包括以下成分及其浓度组成:甘草多糖45-150mg/L,葡萄糖10-20g/L,大豆水解物1.5~3g/L,腐胺0.5~15mg/L,精胺0.1~1.5mg/L,鸟氨酸0.045~1.35mg/L,丙酮酸钠65~75mg/L,谷氨酰胺0.3~0.75g/L,丙氨酸5~10mg/L,精氨酸0.15~0.25g/L,天冬酰胺7~12mg/L,天冬氨酸8~10mg/L,半胱氨酸25~45mg/L,胱氨酸30~55mg/L,谷氨酸6~18mg/L,甘氨酸20~45mg/L,组氨酸25~40mg/L,异亮氨酸50~100mg/L,亮氨酸55~150mg/L,赖氨酸80~185mg/L,苯丙氨酸50~70mg/L,脯氨酸20~30mg/L,丝氨酸35~50mg/L,苏氨酸60~80mg/L,色氨酸10~15mg/L,酪氨酸60~100mg/L,缬氨酸60~100mg/L,生物素0.005~0.01mg/L,维生素D 0.50~2.50mg/L,叶酸2.50~8mg/L,硫酸亚铁1.5~4.5mg/L,硝酸铁0.1~0.5mg/L,EDTA·2Na 1.5~10mg/L,乙醇胺3.5~8.5mg/L,甘油0.3~0.45mg/L,鱼肝油0.1~0.2mg/L,胆固醇0.065~0.15mg/L,亚油酸0.045~0.075mg/L,胸苷0.45~2.0mg/L,次黄嘌呤5~15mg/L,氢化可的松0.045~0.065mg/L,亚硒酸钠0.04~0.06mg/L,生育酚1.5~3.5mg/L,碳酸氢钠2.5~3g/L,氯化钙125~145mg/L,氯化镁45~65mg/L,硫酸镁45~65mg/L,氯化钾350~400mg/L,磷酸二氢钠65~100mg/L,氯化钠4.5~5g/L,磷酸氢二钠75~100mg/L,硫酸锌0.432~1.25mg/L和硫酸铜0.0025~0.0045mg/L。

优选地,含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基由以下成分及其浓度组成:甘草多糖85mg/L,葡萄糖15g/L,大豆水解物2.5g/L,腐胺10.5mg/L,精胺0.75mg/L,鸟氨酸0.75mg/L,丙酮酸钠72mg/L,谷氨酰胺0.45g/L,丙氨酸8.5mg/L,精氨酸0.17g/L,天冬酰胺9.5mg/L,天冬氨酸9.35mg/L,半胱氨酸33.5mg/L,胱氨酸46.87mg/L,谷氨酸15.5mg/L,甘氨酸40.25mg/L,组氨酸35mg/L,异亮氨酸87.5mg/L,亮氨酸95.5mg/L,赖氨酸135mg/L,苯丙氨酸65mg/L,脯氨酸27.5mg/L,丝氨酸45mg/L,苏氨酸77.6mg/L,色氨酸8.3mg/L,酪氨酸78mg/L,缬氨酸96.5mg/L,生物素0.0075mg/L,维生素D 0.135mg/L,叶酸5.5mg/L,硫酸亚铁3.23mg/L,硝酸铁0.45mg/L,EDTA·2Na8.5mg/L,乙醇胺4.75mg/L,甘油0.45mg/L,鱼肝油0.15mg/L,胆固醇0.13mg/L,亚油酸0.054mg/L,胸苷1.75mg/L,次黄嘌呤12.3mg/L,氢化可的松0.045mg/L,亚硒酸钠0.055mg/L,生育酚2.5mg/L,碳酸氢钠2.75g/L,氯化钙135mg/L,氯化镁55mg/L,硫酸镁50mg/L,氯化钾375mg/L,磷酸二氢钠85mg/L,氯化钠4.75g/L,磷酸氢二钠85mg/L,硫酸锌0.45mg/L和硫酸铜0.003mg/L。

上述组分及其浓度是发明人经大量试验筛选确定的。上述组分中,甘草糖对细胞生长、细胞活性有促进作用,大量实验研究表明,甘草多糖对细胞内多胺的生物合成具有促进作用,促进细胞的分化。腐胺,精胺,鸟氨酸是多胺类物质,影响细胞的生长与分化,如DNA的复制、转录及翻译等,通过控制腐胺的含量能够调节细胞的PH值。葡萄糖,氨基酸,维生素以及无机盐是细胞生长所需的基础营养物质。丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。硫酸亚铁、硝酸铁和EDTA·2Na作为转铁蛋白的替代物,促进胞内铁的运输。胸苷、次黄嘌呤为核酸类物质,在细胞内水解后,为细胞DNA复制,转录提供游离的核苷酸和ATP。氢化可的松是一种糖皮脂激素,能够增加细胞活率和抗体密度。乙醇胺能够有效清除自由基,提高抗氧化能力。鱼肝油、胆固醇和亚油酸属于脂类物质,脂类不仅储备能量,且是细胞生物膜的组成部分,在物质转运和信号转导中也发挥重要作用,培养基中添加脂类尤其是脂肪酸,以促进细胞增殖及蛋白表达。

优选地,所述甘草多糖由甘草提取得到,提取方法如下:

S1.将甘草粉碎,称取200-400g置1L烧杯中,加水500~800mL,30~37℃水浴中超声提取30~150min,过滤,收集滤液;

S2.向上述S1步骤所得滤渣中,再加水400~800mL,30~37℃水浴中再次超声提取30~150min,过滤,收集滤液;

S3.合并上述S1和S2两次滤液,旋转蒸发仪上减压浓缩至50~35mL,室温冷却后将浓缩液5000r/min离心10~15min,弃去杂质沉淀后,缓慢地加入5~6倍量95%乙醇,并不断用玻璃棒搅拌,使甘草多糖充分析出,静置24h后,7000r/min离心5~10min得甘草多糖沉淀;

S4.将上述S3甘草糖沉淀再用无水乙醇洗涤2~3次后,60℃下干燥,得甘草多糖。

优选地,所述含甘草多糖的无动物来源低蛋白细胞培养基的制备方法,包括以下步骤:

A.首先称取甘草多糖,葡萄糖,丙酮酸钠,大豆水解物,腐胺,精胺,鸟氨酸,柠檬酸铁,硫酸亚铁,硝酸铁,EDTA·2Na,谷氨酰胺,丙氨酸,精氨酸,天冬酰胺,天冬氨酸,半胱氨酸,胱氨酸,谷氨酸,甘氨酸,组氨酸,异亮氨酸,亮氨酸,赖氨酸,苯丙氨酸,脯氨酸,丝氨酸,苏氨酸,色氨酸,酪氨酸,缬氨酸,生物素,维生素D,叶酸,亚硒酸钠,生育酚,氯化钙,氯化镁,硫酸镁,氯化钾,磷酸二氢钠,氯化钠,磷酸氢二钠,硫酸锌,硫酸铜,胸苷和次黄嘌呤,溶于800mL超纯水中,搅拌均匀,得溶液I;

B.向上述溶液I中加入氢化可的松,乙醇胺,甘油,鱼肝油,胆固醇和亚油酸,搅拌均匀,得溶液II;

C.向溶液II中加入碳酸氢钠,搅拌均匀,得溶液III;

调节培养基PH至7.2~7.4,加超纯水定容至1L,用0.22μm的滤膜过滤,除菌,即得。

本发明培养基适用于淋巴细胞,本发明培养基各组分搭配合理,具有以下优点:

(1)本发明培养基是一种含甘草多糖的无动物来源的低蛋白细胞培养基,与传统的含血清培养基相比,本发明提供的培养基不含动物来源血清,批次间稳定无干扰,所含蛋白浓度低,有利于产物的分离纯化。

(2)本发明培养基中含有甘草多糖,甘草多糖对细胞生长、细胞活性有促进作用,促进胞内多胺的生物合成,与现有无动物来源低蛋白培养基相比,本发明培养基不仅能使细胞快速生长,并且能够提高细胞的表达能力。

附图说明

图1不同培养基中细胞生长曲线的测定

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明做进一步详细说明。

本发明中的各组分均为常规市售产品,均购于索莱宝生化试剂有限公司。本发明中,培养基A:本发明实施例1提供的含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基;培养基B:对比例1培养基;培养基C:美国Gibco公司的无血清培养基MSC SFM CTSTM

实施例1一种含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基

一种含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基,由以下成分及其浓度组成:

甘草多糖85mg/L,葡萄糖15g/L,大豆水解物2.5g/L,腐胺10.5mg/L,精胺0.75mg/L,鸟氨酸0.75mg/L,丙酮酸钠72mg/L,谷氨酰胺0.45g/L,丙氨酸8.5mg/L,精氨酸0.17g/L,天冬酰胺9.5mg/L,天冬氨酸9.35mg/L,半胱氨酸33.5mg/L,胱氨酸46.87mg/L,谷氨酸15.5mg/L,甘氨酸40.25mg/L,组氨酸35mg/L,异亮氨酸87.5mg/L,亮氨酸95.5mg/L,赖氨酸135mg/L,苯丙氨酸65mg/L,脯氨酸27.5mg/L,丝氨酸45mg/L,苏氨酸77.6mg/L,色氨酸8.3mg/L,酪氨酸78mg/L,缬氨酸96.5mg/L,生物素0.0075mg/L,维生素D 0.135mg/L,叶酸5.5mg/L,硫酸亚铁3.23mg/L,硝酸铁0.45mg/L,EDTA·2Na8.5mg/L,乙醇胺4.75mg/L,甘油0.45mg/L,鱼肝油0.15mg/L,胆固醇0.13mg/L,亚油酸0.054mg/L,胸苷1.75mg/L,次黄嘌呤12.3mg/L,氢化可的松0.045mg/L,亚硒酸钠0.055mg/L,生育酚2.5mg/L,碳酸氢钠2.75g/L,氯化钙135mg/L,氯化镁55mg/L,硫酸镁50mg/L,氯化钾375mg/L,磷酸二氢钠85mg/L,氯化钠4.75g/L,磷酸氢二钠85mg/L,硫酸锌0.45mg/L和硫酸铜0.003mg/L。

本发明甘草糖的提取方法,分为以下步骤:

S1.将甘草粉碎,称取400g置1L烧杯中,加水800mL,33℃水浴中超声提取150min,过滤,收集滤液;

S2.向上述S1步骤所得滤渣中,再加水800mL,36℃水浴中再次超声提取30min,过滤,收集滤液;

S3.合并上述S1和S2两次提滤液,旋转蒸发仪上减压浓缩至50~35mL,室温冷却后将浓缩液5000r/min离心15min,弃去杂质沉淀后,缓慢地加入6倍量95%乙醇,并不断用玻璃棒搅拌,使甘草多糖充分析出,静置24h后,7000r/min离心10min得甘草多糖沉淀;

S4.将上述S3甘草糖沉淀再用无水乙醇洗涤3次后,60℃下干燥,得甘草多糖。

含甘草多糖的无动物来源低蛋白细胞培养基的制备方法,包括以下步骤:

A.首先称取甘草多糖,葡萄糖,丙酮酸钠,大豆水解物,腐胺,精胺,鸟氨酸,柠檬酸铁,硫酸亚铁,硝酸铁,EDTA·2Na,谷氨酰胺,丙氨酸,精氨酸,天冬酰胺,天冬氨酸,半胱氨酸,胱氨酸,谷氨酸,甘氨酸,组氨酸,异亮氨酸,亮氨酸,赖氨酸,苯丙氨酸,脯氨酸,丝氨酸,苏氨酸,色氨酸,酪氨酸,缬氨酸,生物素,维生素D,叶酸,亚硒酸钠,生育酚,氯化钙,氯化镁,硫酸镁,氯化钾,磷酸二氢钠,氯化钠,磷酸氢二钠,硫酸锌,硫酸铜,胸苷和次黄嘌呤,溶于800mL超纯水中,搅拌均匀,得溶液I;

B.向上述溶液I中加入氢化可的松,乙醇胺,甘油,鱼肝油,胆固醇和亚油酸,搅拌均匀,得溶液II;

C.向溶液II中加入碳酸氢钠,搅拌均匀,得溶液III;

调节培养基PH至7.2~7.4,加超纯水定容至1L,用0.22μm的滤膜过滤,除菌,即得。

实施例2一种含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基

一种含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基,由以下成分及其浓度组成:

甘草多糖45mg/L,葡萄糖20g/L,大豆水解物3g/L,腐胺15mg/L,精胺1.5mg/L,鸟氨酸1.35mg/L,丙酮酸钠75mg/L,谷氨酰胺0.75g/L,丙氨酸10mg/L,精氨酸0.25g/L,天冬酰胺12mg/L,天冬氨酸10mg/L,半胱氨酸45mg/L,胱氨酸55mg/L,谷氨酸18mg/L,甘氨酸45mg/L,组氨酸40mg/L,异亮氨酸100mg/L,亮氨酸150mg/L,赖氨酸185mg/L,苯丙氨酸70mg/L,脯氨酸30mg/L,丝氨酸50mg/L,苏氨酸80mg/L,色氨酸15mg/L,酪氨酸100mg/L,缬氨酸100mg/L,生物素0.01mg/L,维生素D 2.50mg/L,叶酸8mg/L,硫酸亚铁4.5mg/L,硝酸铁0.5mg/L,EDTA·2Na 10mg/L,乙醇胺8.5mg/L,甘油0.45mg/L,鱼肝油0.2mg/L,胆固醇0.15mg/L,亚油酸0.075mg/L,胸苷2.0mg/L,次黄嘌呤15mg/L,氢化可的松0.065mg/L,亚硒酸钠0.06mg/L,生育酚3.5mg/L,碳酸氢钠3g/L,氯化钙145mg/L,氯化镁65mg/L,硫酸镁65mg/L,氯化钾400mg/L,磷酸二氢钠100mg/L,氯化钠5g/L,磷酸氢二钠100mg/L,硫酸锌1.25mg/L,硫酸铜0.0045mg/L。

本发明甘草多糖提取方法、培养基的制备方法与实施例1类似。

实施例3一种含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基

一种含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基,由以下成分及其浓度组成:

甘草多糖150mg/L,葡萄糖10g/L,大豆水解物1.5g/L,腐胺0.5mg/L,精胺0.1mg/L,鸟氨酸0.045mg/L,丙酮酸钠65mg/L,谷氨酰胺0.3g/L,丙氨酸5mg/L,精氨酸0.15g/L,天冬酰胺7mg/L,天冬氨酸8mg/L,半胱氨酸25mg/L,胱氨酸30mg/L,谷氨酸6mg/L,甘氨酸20mg/L,组氨酸25mg/L,异亮氨酸50mg/L,亮氨酸55mg/L,赖氨酸80mg/L,苯丙氨酸50mg/L,脯氨酸20mg/L,丝氨酸35mg/L,苏氨酸60mg/L,色氨酸10mg/L,酪氨酸60mg/L,缬氨酸60mg/L,生物素0.005mg/L,维生素D 0.50~2.50mg/L,叶酸2.50~8mg/L,硫酸亚铁1.5~4.5mg/L,硝酸铁0.1~0.5mg/L,EDTA·2Na 1.5~10mg/L,乙醇胺3.5~8.5mg/L,甘油0.3~0.45mg/L,鱼肝油0.1~0.2mg/L,胆固醇0.065~0.15mg/L,亚油酸0.045~0.075mg/L,胸苷0.45~2.0mg/L,次黄嘌呤5~15mg/L,氢化可的松0.045~0.065mg/L,亚硒酸钠0.04~0.06mg/L,生育酚1.5~3.5mg/L,碳酸氢钠2.5~3g/L,氯化钙125~145mg/L,氯化镁45~65mg/L,硫酸镁45~65mg/L,氯化钾350~400mg/L,磷酸二氢钠65~100mg/L,氯化钠4.5~5g/L,磷酸氢二钠75~100mg/L,硫酸锌0.432~1.25mg/L,硫酸铜0.0025~0.0045mg/L。

本发明甘草多糖提取方法、培养基的制备方法与实施例1类似。

对比例1一种含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基

一种含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基,由以下成分及其浓度组成:

乳糖85mg/L,葡萄糖15g/L,大豆水解物2.5g/L,腐胺10.5mg/L,精胺0.75mg/L,鸟氨酸0.75mg/L,丙酮酸钠72mg/L,谷氨酰胺0.45g/L,丙氨酸8.5mg/L,精氨酸0.17g/L,天冬酰胺9.5mg/L,天冬氨酸9.35mg/L,半胱氨酸33.5mg/L,胱氨酸46.87mg/L,谷氨酸15.5mg/L,甘氨酸40.25mg/L,组氨酸35mg/L,异亮氨酸87.5mg/L,亮氨酸95.5mg/L,赖氨酸135mg/L,苯丙氨酸65mg/L,脯氨酸27.5mg/L,丝氨酸45mg/L,苏氨酸77.6mg/L,色氨酸8.3mg/L,酪氨酸78mg/L,缬氨酸96.5mg/L,生物素0.0075mg/L,维生素D 0.135mg/L,叶酸5.5mg/L,硫酸亚铁3.23mg/L,硝酸铁0.45mg/L,EDTA·2Na8.5mg/L,乙醇胺4.75mg/L,甘油0.45mg/L,鱼肝油0.15mg/L,胆固醇0.13mg/L,亚油酸0.054mg/L,胸苷1.75mg/L,次黄嘌呤12.3mg/L,氢化可的松0.045mg/L,亚硒酸钠0.055mg/L,生育酚2.5mg/L,碳酸氢钠2.75g/L,氯化钙135mg/L,氯化镁55mg/L,硫酸镁50mg/L,氯化钾375mg/L,磷酸二氢钠85mg/L,氯化钠4.75g/L,磷酸氢二钠85mg/L,硫酸锌0.45mg/L和硫酸铜0.003mg/L。

与实施例1的区别在于,用甘露聚糖替换甘草多糖。

制备方法与实施例1类似。

试验例1细胞生长曲线的测定

将小鼠细胞进行细胞分离,分离步骤如下:

(1)将小鼠断颈处死,浸入乙醇中浸泡;

(2)在无菌操作台中小心剪开小鼠的腹部外皮,用大头针固定,再剪开小鼠的腹腔,用镊子取出小鼠的脾脏;

(3)在培养皿中放入小鼠脏器淋巴细胞分离液(使用前摇匀淋巴细胞分离液)。用镊子固定尼龙网,然后用注射器活塞轻轻研磨小鼠脾脏,使得分散的单细胞透过尼龙网进入淋巴细胞分离液中(每研磨一只脾脏花费的时间最好控制在之内,防止在研磨过程中液体挥发,使得密度与渗透压改变,影响分离效果);

(4)把悬有脾脏细胞的分离液立即转移到离心管中,离心前慢慢往分离液液面上分别覆盖一层大约1mL的A培养基或B培养基;

(5)1500r/min离心,离心结束后淋巴细胞会漂浮上来,在所覆盖层下面聚集;

(6)吸出淋巴细胞层,再加入离心。倾倒上清液,加入3-5mLPBS重悬,800r/min离心10min离心弃去上清,取一定体积的淋巴细胞悬液倍稀释20倍后进行淋巴细胞计数。最终用后分别用A培养基或B培养基将淋巴细胞悬液稀释成1x107个细胞/mL。

细胞生长曲线的测定:

将细胞悬液分别加入含A培养基、B培养基和C培养基的细胞培养瓶中,将细胞摇匀,在37℃,5%的CO2培养箱中培养,每隔24h取样,利用MTT法测定生长曲线,结果如图1所示。

由图1可知,本发明培养基与另两种培养基相比适应期更短,增值速度更高,培养效果更优;培养基B和培养基C第216h生长达到高峰,第264h开始衰亡,而培养基A第168h到达高峰,第360h才开始衰亡,可见,本发明培养基可以延迟MSCs进入衰亡期,延长细胞生长的周期。由此可知本发明实施例1提供的含甘草多糖的无动物来源低蛋白培养基有利于细胞的生长。

试验例2流式细胞术鉴定表面标志的表达水平

利用试验例1所得淋巴细胞悬液分别用A、B培养基37℃,5%的CO2培养箱中培养48h后收集。用PE标记的抗小鼠B220mAB染色,然后分别FITC标记的CD86、PerCP标记的抗小鼠CD80、FITC标记的CD40、APC标记的抗小鼠CD138染色。避光室温孵育,用洗漆两次。用缓冲液重悬细胞,采用流式细胞仪进行检测细胞表面标记的表达水平,具体结果如表1所示。

表1细胞表面标记蛋白荧光强度

注:与培养基B相比,*表示P<0.05,培养基A中CD86表达量差异显著;

##表示P<0.01,培养基A中CD80表达量差异极为显著;

&&表示P<0.01,培养基A中CD40表达量极为显著;

**表示P<0.01,培养基A中CD138表达量极为显著。

由表1可知,培养基A与培养基B相比,CD86表达量差异显著,CD80、CD40和CD138表达量差异极为显著,说明本发明提供的含一种含甘草多糖的无动物来源低蛋白的细胞培养基能够显著提高淋巴细胞的表达量。

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