1.一种异紫花前胡内脂单体的分离纯化方法,其特征在于,以羌活根茎为原料,通过提取、萃取、大孔树脂富集解析、硅胶柱层析及制备型高效液相色谱法等步骤,分离得到高纯度的异紫花前胡苷,异紫花前胡苷酸水解得到异紫花前胡内脂单体。
2.根据权利要求1所述的一种异紫花前胡内脂单体的分离纯化方法,其特征在于,包括以下步骤:
A.提取
将羌活根茎粉碎成1~4mm的粗粉,然后按照每千克原料加入95%乙醇溶液6-10升,提取3~4次, 2~3小时/次,回收乙醇,合并提取液,为提取液Ⅰ;
B.萃取
将步骤A所得的提取液Ⅰ,加入等体积的乙酸乙酯,萃取3~4次,收集萃取下层水溶液,得提取液Ⅱ;然后回收萃取乙酸乙酯层,回收后的乙酸乙酯再利用;
C.大孔树脂富集解析
将步骤B所得的提取液Ⅱ,用已活化的大孔树脂柱富集,富集完成后,用去离子水洗、80%乙醇解析,所得解析液回收乙醇,得提取液Ⅲ;
D. 硅胶柱层析
将步骤C所得的提取液Ⅲ用纯甲醇溶液溶解,溶解液用60-80目硅胶拌样,然后干燥;将干燥后的拌样原料上利用硅胶层析柱分离,采用氯仿:甲醇(V/V)8:2洗脱并收集产品;收集产品段回收有机试剂后,所得浓缩液用甲醇重结晶,结晶固体干燥后,待下一步处理;
在洗脱过程中,进行TLC检测,确保收集产品是否完全;TLC点板条件为硅胶G薄层板;以氯仿-甲醇展开剂,两者体积比为8比2,在365nm的紫外灯下检视显蓝色荧光斑点;
E.制备型高效液相色谱分离
将步骤D所得的结晶固体,用流动相溶解,过滤,滤液采用填料为C18制备型高效液相色谱分离,收集目标产品段;收集产品同时通过填料同样为C18分析HPLC紫外检测,确认收集目标化合物制备溶液检测波长为330nm;
所述制备型高效液相色谱采用填料为C18的色谱柱,制备流动相组成为四氢呋喃-水,两者体积比为20比80;
F.异紫花前胡苷产品回收
将步骤E所得的异紫花前胡苷制备液,回收流动相,再用C18填料富集,90%甲醇溶液解析,所得解析液回收甲醇后,浓缩液有大量白色固体析出,过滤,干燥,即得高纯度的异紫花前胡苷固体;
G.酸水解
将步骤F所得的异紫花前胡苷固体,用甲醇溶液溶解后,再加入10%盐酸溶液,加热回流2-3h,水解完成后,加入NaOH溶液调pH值至中性,再在50℃下减压浓缩至无醇,后用乙酸乙酯萃取,有机相浓缩至干,即得异紫花前胡内脂单体。
3.根据权利要求1所述的一种异紫花前胡内脂单体的分离纯化方法,其特征在于,在步骤D中,硅胶柱填料为200~300目硅胶,流动相为乙酸乙酯-甲醇溶液,两者体积比为4比1。
4.根据权利要求1所述的一种异紫花前胡内脂单体的分离纯化方法,其特征在于,在步骤E中,色谱柱填料为C18填料,流动相为四氢呋喃-水,两者体积比为20比80,紫外检测波长为330nm。
5.根据权利要求1所述的一种异紫花前胡内脂单体的分离纯化方法,其特征在于,在进行酸水解前,通过填料为C18的HPLC检测,异紫花前胡苷纯度大于99%后,再进行酸水解,得到高纯度的异紫花前胡内脂。