专利名称：一种紫铆苷的提纯方法
技术领域：
本发明属于天然植物技术领域，涉及一种紫铆苷的提纯方法。
背景技术：
紫铆苷(Butrom)，又名紫矿春，分子式为C27H32O15，分子量为596. 54,mp. 190°C。紫铆苷是从豆科植物紫铆及/iea monospeerma (Lam.)Kuntze的花中分离得到的一种黄酮苷类化合物。紫铆花提取物紫铆苷和异紫铆苷在印度多用于治疗肝病。麦军利通过在氯仿和半乳糖胺引起的肝细胞损害的实验表明，紫铆花提取物显示有护肝作用，并证实可增强小鼠干细胞核的RNA合成，从而提高部分肝切除小鼠干细胞的再生率。麦军利分离紫铆苷是通过溶剂层析、TLC和HPLC分离，该方法制备量小，成本高，仅适用于实验室化学成分分析少量制备。
经检索，尚未发现适宜于大量制备紫铆苷的工业化方法的专利或文献报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种紫铆苷的提纯方法，成品紫铆苷含量高、生产成本低，可适用于工业化生产。本发明是通过如下技术方案实现的
(I)向紫铆花中加入6 12倍原料重量的5(Γ80%乙醇水溶液，搅拌均匀，采用超声提取，收集提取液；(2)将提取液加入至超滤膜系统除大分子多糖等杂质，得透过液；(3)将透过液加活性炭脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，乙醇水溶液洗脱，收集目标成分，减压浓缩，离心，将清液干燥，得粗提物；(4)以乙酸乙酯-正丁醇-水为溶剂系统，以上相为固定相，下相为流动相，将上述得到的粗提物应用高速逆流色谱法进行分离纯化，即得到高纯度的紫铆苷；
步骤(2)中所述超滤膜为中空超滤膜，材质为聚醚砜，截留分子量为2000-6000道尔
顿；
步骤(3)中所述聚酰胺树脂柱层析，先用3-4BV体积百分比为20-30%的乙醇水溶液洗脱，再用4-6BV体积百分比为65-85%的乙醇水溶液洗脱；
步骤(4)中所述溶剂系统乙酸乙酯-正丁醇-水的体积比为(4-8) :(2-3) : (5-10)。本发明的有益效果是采用超声提取，提取率高，耗时短，且避免目标产品的损失，是一种低耗能环保的提取方法；聚酰胺树脂吸附洗脱，提高了产品的纯度；采用高速逆流色谱法进行紫铆苷的分离纯化，与以往技术手段相比，具有分离能力强、分离时间短、样品损失小、广品质量闻等优点。
具体实施例方式 下面结合具体实施方式
对本发明进行进一步说明。实施例I :
取20kg紫铆花粉碎过20目筛，加入8倍量70%乙醇超声提取I小时，提取2次，合并提取液，再用5000道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤，透过液加I. 5%活性炭搅拌脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先用3BV20%乙醇洗脱，再用6BV85%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到24g粗提物。取乙酸乙酯、正丁醇、水按比例4:2:5混合，静置分层，两相分别超声脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相。将固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为820rpm，将流动相以3ml/min的流速泵入，分离柱的温度调至25°C。将150mg紫铆苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，检测波长为271nm，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到紫铆苷，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，紫铆苷的含量为98. 8%。实施例2
取20kg紫铆花粉碎过40目筛，加入6倍量80%乙醇超声提取I小时，提取2次，合并提取液，再用6000道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤，透过液加I. 5%活性炭搅拌脱色，脱色 液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先用4BV25%乙醇洗脱，再用5BV70%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到24g粗提物。取乙酸乙酯、正丁醇、水按比例4:2:10混合，静置分层，两相分别超声脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相。将固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为820rpm，将流动相以3ml/min的流速泵入，分离柱的温度调至25°C。将200mg紫铆苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，检测波长为271nm，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到紫铆苷，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，紫铆苷的含量为98. 6%。实施例3
取20kg紫铆花粉碎过20目筛，加入10倍量65%乙醇超声提取I小时，提取2次，合并提取液，再用3000道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤，透过液加I. 5%活性炭搅拌脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先用4BV20%乙醇洗脱，再用4BV65%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到24g粗提物。取乙酸乙酯、正丁醇、水按比例8:3:10混合，静置分层，两相分别超声脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相。将固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为820rpm，将流动相以3ml/min的流速泵入，分离柱的温度调至25°C。将200mg紫铆苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，检测波长为271nm，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到紫铆苷，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，紫铆苷的含量为99. 2 %。实施例4:
取20kg紫铆花粉碎过60目筛，加入12倍量50%乙醇超声提取I小时，提取2次，合并提取液，再用6000道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤，透过液加I. 5%活性炭搅拌脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先用3BV30%乙醇洗脱，再用5BV85%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到24g粗提物。取乙酸乙酯、正丁醇、水按比例8:2:5混合，静置分层，两相分别超声脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相。将固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为820rpm，将流动相以3ml/min的流速泵入，分离柱的温度调至25°C。将200mg紫铆苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，检测波长为271nm，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到紫铆苷，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，紫铆苷的含量为98. 1%。实施例5:
取20kg紫铆花粉碎过40目筛，加入6倍量50%乙醇超声提取I小时，提取2次，合并提取液，再用2000道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤，透过液加I. 5%活性炭搅拌脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先用4BV30%乙醇洗脱，再用4BV85%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到24g粗提物。取乙酸乙酯、正丁醇、水按比例6:3:8混合，静置分层，两相分别超声脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相。将固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流 色谱主机，调节分离柱转速为820rpm，将流动相以3ml/min的流速泵入，分离柱的温度调至25°C。将150mg紫铆苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，检测波长为271nm，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到紫铆苷，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，紫铆苷的含量为98. 2%。实施例6:
取20kg紫铆花粉碎过20目筛，加入9倍量75%乙醇超声提取I小时，提取2次，合并提取液，再用4000道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤，透过液加I. 5%活性炭搅拌脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先用3BV25%乙醇洗脱，再用6BV65%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到24g粗提物。取乙酸乙酯、正丁醇、水按比例5:3:9混合，静置分层，两相分别超声脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相。将固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为820rpm，将流动相以3ml/min的流速泵入，分离柱的温度调至25°C。将200mg紫铆苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，检测波长为271nm，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到紫铆苷，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，紫铆苷的含量为98. 5%。实施例7
取20kg紫铆花粉碎过40目筛，加入12倍量80%乙醇超声提取I小时，提取2次，合并提取液，再用2000道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤，透过液加I. 5%活性炭搅拌脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先用4BV20%乙醇洗脱，再用6BV75%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到24g粗提物。取乙酸乙酯、正丁醇、水按比例6:2:7混合，静置分层，两相分别超声脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相。将固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为820rpm，将流动相以3ml/min的流速泵入，分离柱的温度调至25°C。将200mg紫铆苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，检测波长为271nm，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到紫铆苷，经 HPLC检测、核磁共振进行结构确认，紫铆苷的含量为98. 9%。
权利要求
1.一种紫铆苷的提纯方法，其特征在于包括以下步骤(1)向紫铆花中加入6 12倍原料重量的5(Γ80%乙醇水溶液，搅拌均匀，采用超声提取，收集提取液；(2)将提取液加入至超滤膜系统除大分子多糖等杂质，得透过液；(3)将透过液加活性炭脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，乙醇水溶液洗脱，收集目标成分，减压浓缩，离心，将清液干燥，得粗提物；(4)以乙酸乙酯-正丁醇-水为溶剂系统，以上相为固定相，下相为流动相，将上述得到的粗提物应用高速逆流色谱法进行分离纯化，即得到高纯度的紫铆苷。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于步骤(2)中所述超滤膜为中空超滤膜，材质为聚醚砜，截留分子量为2000-6000道尔顿。
3.根据权利要求I所述的方法，其特征在于步骤(3)中所述聚酰胺树脂柱层析，先用3-4BV体积百分比为20-30%的乙醇水溶液洗脱，再用4-6BV体积百分比为65-85%的乙醇水溶液洗脱。
4.根据权利要求I所述的方法，其特征在于步骤(4)中所述溶剂系统乙酸乙酯-正丁醇-水的体积比为(4-8) :(2-3) : (5-10)。
全文摘要
本方法提供一种紫铆苷的提纯方法，其特征在于包含以下步骤(1)以紫铆花为原料，采用超声提取，收集提取液；(2)将提取液加入至超滤膜系统除大分子多糖等杂质，得透过液；(3)将透过液加活性炭脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，乙醇水溶液洗脱，收集目标成分，减压浓缩，离心，将清液干燥，得粗提物；(4)以乙酸乙酯-正丁醇-水为溶剂系统，以上相为固定相，下相为流动相，将上述得到的粗提物应用高速逆流色谱法进行分离纯化，即得到高纯度的紫铆苷。
文档编号C07H1/08GK102875618SQ20121036311
公开日2013年1月16日 申请日期2012年9月26日 优先权日2012年9月26日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司