一种细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒的制作方法

本实用新型涉及一种试剂盒，具体涉及一种细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒，属于生物技术领域。

背景技术：

为了节约时间、方便使用，越来越多的实验步骤与检测方法被开发为试剂盒，但是传统的试剂盒为简单的单层包装盒，内部空间为封闭的单一结构，所有内容物被叠放于盒内。在使用过程中，技术人员很难准确迅速的获得所需组分，给实际操作带来不便，而且在产品运输过程中，里面各种组分容易出现相互碰撞而造成损坏，对运输条件要求较高。从培养细胞或组织中抽提细胞膜蛋白和细胞浆蛋白，抽提的膜蛋白不仅包括质膜上的膜蛋白，也包括线粒体膜、内质网膜和高尔基体膜等上的膜蛋白，操作过程复杂，因此，亟需提供一种相关的试剂盒。

技术实现要素：

本实用新型要解决的技术问题是克服现有的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒很难准确迅速的获得所需组分，给实际操作带来不便的缺陷，提供一种细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒。

为了解决上述技术问题，本实用新型提供了如下的技术方案：

本实用新型提供了一种细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒，包括盒体、铰链、盒盖、固定座、第一孔槽、装膜蛋白抽提试剂A的试管、标签、第二孔槽、装膜蛋白抽提试剂B的试管、说明书安放槽、细胞刮子、移液器和玻璃匀浆器，所述盒盖通过所述铰链连接所述盒体，所述盒体的底部设有所述固定座，所述固定座的顶部设有所述第一孔槽，所述第一孔槽的内部设置有所述装膜蛋白抽提试剂A的试管，所述第一孔槽的一侧设有所述第二孔槽，所述第二孔槽的内部设有所述装膜蛋白抽提试剂B的试管，所述第二孔槽的一侧设有所述说明书安放槽，所述说明书安放槽的一侧放置有所述玻璃匀浆器，所述玻璃匀浆器的边侧设有所述细胞刮子，所述细胞刮子的一侧设有所述移液器。

作为本实用新型的一种优选技术方案，所述盒盖的边侧连接卡扣，所述盒体的侧边设有与所述卡扣相对应的卡槽。

作为本实用新型的一种优选技术方案，所述装膜蛋白抽提试剂A的试管和所述装膜蛋白抽提试剂B的试管的顶端均粘贴有对应的所述标签，所述装膜蛋白抽提试剂A的试管和所述装膜蛋白抽提试剂B的试管的壳体上均设有刻度。

本实用新型所达到的有益效果是：该种细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒提供了一种比较简单、方便地从培养细胞或组织中抽提细胞膜蛋白和细胞浆蛋白的方法，抽提的膜蛋白不仅包括质膜上的膜蛋白，也包括线粒体膜、内质网膜和高尔基体膜等上的膜蛋白。通过匀浆适度破碎细胞，经低速离心去除细胞核和少数未破碎的细胞产生的沉淀，随后取上清高速离心获得细胞膜沉淀和含有细胞浆蛋白的上清，然后通过优化的膜蛋白抽提试剂从沉淀中抽提获取膜蛋白。约90分钟即可完成培养细胞或组织的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白的分离和抽提。本试剂盒按照本说明书的操作步骤可以抽提100个细胞或组织样品。

附图说明

附图用来提供对本实用新型的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本实用新型的实施例一起用于解释本实用新型，并不构成对本实用新型的限制。在附图中：

图1是本实用新型的结构示意图；

图中：1、盒体；2、铰链；3、盒盖；4、固定座；5、第一孔槽；6、装膜蛋白抽提试剂A的试管；7、标签；8、第二孔槽；9、装膜蛋白抽提试剂B的试管；10、说明书安放槽；11、细胞刮子；12、移液器；13、玻璃匀浆器。

具体实施方式

以下结合附图对本实用新型的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本实用新型，并不用于限定本实用新型。

实施例1

如图1所示，本实用新型提供一种细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒，包括盒体1、铰链2、盒盖3、固定座4、第一孔槽5、装膜蛋白抽提试剂A的试管6、标签7、第二孔槽8、装膜蛋白抽提试剂B的试管9、说明书安放槽10、细胞刮子11、移液器12和玻璃匀浆器13，盒盖3通过铰链2连接盒体1，盒体1的底部设有固定座4，固定座4的顶部设有第一孔槽5，第一孔槽5的内部设置有装膜蛋白抽提试剂A的试管6，第一孔槽5的一侧设有第二孔槽8，第二孔槽8的内部设有装膜蛋白抽提试剂B的试管9，第二孔槽8的一侧设有说明书安放槽10，说明书安放槽10的一侧放置玻璃匀浆器13，玻璃匀浆器13的边侧设有细胞刮子11，细胞刮子11的一侧设有所述移液器12。

盒盖3的边侧连接卡扣，盒体1的侧边设有与卡扣相对应的卡槽，使该试剂盒密封。

装膜蛋白抽提试剂A的试管6和装膜蛋白抽提试剂B的试管9的顶端均粘贴有对应的标签7，装膜蛋白抽提试剂A的试管6和装膜蛋白抽提试剂B的试管9的壳体上均设有刻度，便于操作人员准确提取。

具体原理：该种细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒，进行细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提操作时，首先需准备试剂，室温融解并混匀膜蛋白抽提试剂A和B，融解后立即置于冰浴上。取适量的膜蛋白抽提试剂A和B备用，在使用前数分钟内加入PMSF。再准备细胞或组织样品，对于贴壁细胞，培养约2000-5000万细胞，用PBS洗一遍，用细胞刮子11刮下细胞或用含有EDTA但不含胰酶的细胞消化液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器12吹打下细胞。离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。对于悬浮细胞，培养约2000-5000万细胞，直接离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。然后用适量冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞4℃，600g离心5分钟沉淀细胞。弃上清，随后4℃，600g离心1分钟，以沉淀离心管管壁上的残留液体并进一步沉淀细胞，尽最大努力吸尽残留液体。接着对细胞预处理，把1毫升临用前添加了PMSF的膜蛋白抽提试剂A加入至2000-5000万细胞中，轻轻并充分悬浮细胞，冰浴放置10-15分钟。对于组织，取约100毫克组织，用剪刀尽量小心剪切成细小的组织碎片。加入1毫升临用前添加了PMSF的膜蛋白抽提试剂A，轻轻悬浮组织碎片，冰浴放置10-15分钟。把细胞悬液或组织样品转移到冰浴预冷玻璃匀浆器13中，匀浆约30-50下，直到细胞破碎的程度大于70％。然后去除细胞核和未破碎的细胞，4℃，700g离心10分钟，小心收集上清液至一新的离心管中。沉淀细胞膜碎片，4℃，14000g离心30分钟，以沉淀细胞膜碎片。最后吸取上清即为细胞浆蛋白，可-70℃保存备用。抽提膜蛋白，4℃，14000g离心10秒，尽最大努力吸尽上清。加入膜蛋白抽提试剂B200微升最高速剧烈Vortex 5秒重悬沉淀，冰浴5-10分钟。重复前述步骤的vortex和冰浴孵育1-2次，以充分抽提膜蛋白。随后，4℃，14000g离心5分钟，收集上清即为细胞膜蛋白溶液。可-70℃保存备用。

最后应说明的是：以上所述仅为本实用新型的优选实施例而已，并不用于限制本实用新型，尽管参照前述实施例对本实用新型进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。